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SHEEC食管癌细胞中ngal基因的功能

生物化学与生物物理学报 2003年第3期35卷 247-254页

作者：李恩民许丽艳蔡唯佳熊华淇沈忠英曾毅汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室汕头大学医学院肿瘤病理研究室中国预防医学科学院病毒学研究所汕头515031 汕头515031 北京100052

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,ngal)是脂质运载蛋白(lipocalin)家族的一个新成员 ,可能是人类的一种新的癌基因 ,但是在肿瘤中的功能不清楚。以往研究发现ngal基因在SHEEC食管癌细胞... 详细信息

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,ngal)是脂质运载蛋白(lipocalin)家族的一个新成员 ,可能是人类的一种新的癌基因 ,但是在肿瘤中的功能不清楚。以往研究发现ngal基因在SHEEC食管癌细胞中显著过表达 ,表明该细胞是一种用来揭示ngal基因在肿瘤中功能的良好模型。采用反义封闭技术 ,同时结合裸鼠成瘤实验等研究了反义封闭ngal基因转录对SHEEC食管癌细胞的浸润和分裂增殖等行为的影响。结果发现 ,反义封闭ngal基因转录不但可以有效地降低SHEEC细胞分泌的基质金属蛋白酶 9和基质金属蛋白酶 2的活性 ,而与此同时裸鼠成瘤细胞的浸润行为也相应地受到了明显抑制 ,然而SHEEC细胞端粒的长度、拓扑异构酶II的含量以及细胞增殖指数等未发生明显变化。表明ngal基因在食管癌细胞SHEEC中的功能可能主要是通过明胶酶在促进肿瘤细胞的浸润中发挥作用 ,而可能与肿瘤细胞分裂增殖的相关性不明显

关键词： ngal基因食管癌细胞肿瘤细胞浸润明胶酶裸鼠成瘤实验

反义封闭ngal基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架的影响

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生物化学与生物物理进展 2004年第5期31卷 409-415页

作者：林珏龙许丽艳李恩民蔡唯佳牛永东方昆阳熊华淇沈忠英曾毅汕头大学医学院中心实验室汕头515031 汕头大学医学院肿瘤病理研究室汕头515031 汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室汕头515031 中国预防医学科学院病毒学研究所北京100052

为了研究反义封闭ngal基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响 ,以不同长度ngal基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞 ,通过G4 18筛选 ,建立一系列旨在封闭SHEEC食管癌细胞N... 详细信息

为了研究反义封闭ngal基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响 ,以不同长度ngal基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞 ,通过G4 18筛选 ,建立一系列旨在封闭SHEEC食管癌细胞ngal基因表达的亚细胞克隆 .在细胞内F 肌动蛋白 (F actin)及DNA荧光双标记基础上 ,通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜扫描术等技术手段检测封闭反义ngal基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞中F actin和DNA含量、F actin形态结构以及肿瘤细胞生物学行为的变化特征 .结果显示 ,反义封闭ngal基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞F actin的含量明显降低 ,与永生化食管上皮细胞SHEE相近 ,但细胞分裂增殖指数未见明显变化 .表明反义封闭ngal基因表达对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架有明显影响 ,而对SHEEC食管癌细胞的分裂增殖影响不明显 .激光共聚焦显微镜扫描观测显示 ,反义封闭ngal基因表达可使SHEEC食管癌细胞F actin分布均匀 ,F actin小体减少 ,细胞间连接重新建立 ,结构较紧密 ,主要形态结构特征与SHEE细胞趋于一致 .提示反义封闭ngal基因表达可对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架F actin产生明显影响 ,推测癌细胞的微丝骨架F

关键词：微丝骨架 F-肌动蛋白 ngal基因 SHEEC细胞细胞周期

沉默ngal基因对肺癌细胞迁移及侵袭的影响

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中国肺癌杂志 2015年第4期18卷 187-192页

作者：唐健李捷李少军李璟波于长海尉承泽军事医学科学院附属医院北京100071 解放军总医院第一附属医院胸心外科北京100048 解放军总医院胸外科北京100853

背景与目的检测ngal在肺癌组织的表达,观察小干扰RNA(si RNA)沉默ngal基因表达对肺癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法应用免疫组织化学检测肺癌组织中ngal表达。通过RNAi技术干扰ngal后,运用定量PCR、Western blot技术,观察干扰ngal基... 详细信息

背景与目的检测ngal在肺癌组织的表达,观察小干扰RNA(si RNA)沉默ngal基因表达对肺癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法应用免疫组织化学检测肺癌组织中ngal表达。通过RNAi技术干扰ngal后,运用定量PCR、Western blot技术,观察干扰ngal基因效率。干扰ngal后,MTT检测细胞增殖、Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力,细胞划痕愈合能力,免疫荧光及Western blot方法检测上皮细胞-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关的蛋白E-cadherin及Vimentin的表达情况。结果肺癌中ngal阳性率高于癌旁组织(Pngal-si RNA转染组,癌细胞中ngal基因及蛋白水平表达都受到明显的抑制。ngal-si RNA转染组细胞增殖能力,迁移及侵袭能力相对于对照组都降低,差异具有统计学意义(Pngal,E-cadherin的表达升高,Vimentin的表达水平降低。干扰ngal,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低。结论 ngal在肺癌组织高表达,且在肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移及EMT过程中起着重要作用。ngal可能是肺癌浸润和转移的一个重要参考指标,可为肺癌治疗提供潜在的靶点。

关键词：肺肿瘤 ngal基因迁移侵袭上皮细胞-间质细胞转化

ngal基因在肺鳞癌和肺腺癌组织中的表达及意义

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NGAL基因在肺鳞癌和肺腺癌组织中的表达及意义

作者：张金蛟南昌大学

学位级别：硕士

目的:研究ngal基因在肺鳞癌和肺腺癌病理组织中的表达水平及临床意义,初步验证其作为肺癌血清标志物与判断临床方面的应用价值。方法:1、运用荧光定量PCR技术对肺腺癌、肺鳞癌及癌旁组织中ngal基因的表达情况进行检测和分析。2、采用免... 详细信息

目的:研究ngal基因在肺鳞癌和肺腺癌病理组织中的表达水平及临床意义,初步验证其作为肺癌血清标志物与判断临床方面的应用价值。方法:1、运用荧光定量PCR技术对肺腺癌、肺鳞癌及癌旁组织中ngal基因的表达情况进行检测和分析。2、采用免疫组化技术对55例肺鳞癌、63例肺腺癌及相应的118例癌旁组织中ngal基因的表达情况进行检测,研究ngal与非小细胞肺癌中不同病理类型的关系和其在肿瘤中的表达情况与临床资料的联系。3、使用ELISA(酶联免疫吸附试验)测定98例非小细胞肺癌病人的外周血中ngal手术前后的含量,并与80例体检健康者进行比较。分析ngal在肺癌患者外周血血清中的变化及其与临床病理参数的相关性,初步判断血清ngal的诊断价值。结果:1.在荧光定量PCR实验中ngal基因扩增曲线平滑,各曲线均可见典型的对数扩增前期、对数扩增期和平台期,根据公式2-△△CT定义癌旁肺组织表达量为1,结果表明ngal在肺腺癌组织中的相对表达量为10.265±1.271,在肺鳞癌组织中的相对表达量为4.934±1.736,表达明显高于癌旁肺组织。2.在免疫组化实验中NAGL在肺鳞癌组织中阳性表达率54.54%(30/55),癌旁对照中的阳性表达率只有3.63%(2/55),NAGL在肺腺癌组织中阳性表达率77.77%(49/63),其癌旁对照组织中阳性表达率只有4.76%(3/63)。在伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌组织中ngal的表达阳性率为84.1%(58/69),而在没有淋巴结转移中的阳性率为53.0%(36/49),差异显著(Pngal在Ⅲ期(TNM分期)非小细胞肺癌组织为93.0%(40/43)显著高于Ⅰ/Ⅱ期(TNM分期)非小细胞肺癌组织中表达率58.6%(44/75)(Pngal表达水平显著高于健康对照组,差异有统计学意义。ngal的表达与患者年龄、性别无关,而与肺癌具体的病理类型、TNM分期、淋巴结转移情况密切相关,手术后ngal水平与术前相比较,差异也有统计学意义。结论:1、肺鳞癌和肺腺癌组织中mRNA和蛋白质水平都存在ngal基因的高表达。2、肺腺癌和肺鳞癌组织中ngal基因的表达存在较大的差别,肺腺癌组织中的阳性表达率显著高于肺鳞癌。3、肺鳞癌和肺腺癌患者术前的外周血清中ngal的含量较正常人明显升高,手术后迅速降低,提示ngal可以用为血清肿瘤标记物,作为肺癌筛查和观察治疗疗效的指标。

关键词： ngal基因肺鳞癌肺腺癌

ngal基因沉默对人卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响

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NGAL基因沉默对人卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响

作者：刘荣锦州医科大学

学位级别：硕士

目的探讨人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,ngal）基因沉默对人卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响。方法构建针对ngal基因的si RNA真核表达载体,转染入A2780细胞中,实验分为3组:空白对照组（... 详细信息

目的探讨人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,ngal）基因沉默对人卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响。方法构建针对ngal基因的si RNA真核表达载体,转染入A2780细胞中,实验分为3组:空白对照组（Control）、转染ngal-si RNA沉默组（ngal-si RNA）和转染阴性对照组（NC-ngal）。免疫荧光检测ngal在A2780细胞及IOSE80正常卵巢细胞的表达情况,通过RNA技术沉默ngal后,运用q RT-PCR及Western blot检测沉默ngal基因效率。CCK-8法检测细胞活力,TUNEL染色及流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测NF-κB、Caspase-3蛋白表达。结果ngal在A2780细胞呈高水平表达。ngal-si RNA组ngal基因及蛋白水平表达都受到明显的抑制（P＜0.01）。与Control组相比,ngal-si RNA组细胞凋亡率及Caspase-3蛋白表达明显增加,细胞活力及NF-κB蛋白表达明显下降（P＜0.01）,而NC-ngal组各项指标与Control组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论沉默人卵巢癌细胞株A2780中ngal基因的表达,可抑制细胞的生长,并促进细胞的凋亡,其机制与上调Caspase-3蛋白表达,下调NF-κB蛋白表达有关。

关键词：卵巢癌基因沉默 ngal基因凋亡

食管癌细胞SHEEC中ngal基因5'-UTR和3'-UTR的克隆与鉴定

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癌症 2003年第2期22卷 143-147页

作者：李恩民许丽艳熊华淇蔡唯佳吴炳礼张灿张永发林艳沈忠英汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室汕头大学医学院肿瘤病理研究室广东汕头515031

背景与目的:ngal(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin)基因是lipocalin家族的一个新成员。以往我们曾研究发现ngal基因在TPA诱导永生化食管上皮细胞SHEE向食管癌细胞SHEEC恶性转化的过程中显著过表达,但表达调控机制不清楚。本... 详细信息

背景与目的:ngal(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin)基因是lipocalin家族的一个新成员。以往我们曾研究发现ngal基因在TPA诱导永生化食管上皮细胞SHEE向食管癌细胞SHEEC恶性转化的过程中显著过表达,但表达调控机制不清楚。本研究拟从SHEEC细胞中克隆ngal基因的5'-UTR和3'-UTR(untranslatedregion)并进一步明确其结构特征。方法:采用RACE方法从SHEEC细胞中克隆ngal基因的5'-UTR和3'-UTR;在测序基础上进行BLAST分析鉴定。结果:结合以往的实验结果,从SHEEC细胞中克隆了ngal基因的69bp5'-UTR和147bp3'-UTR,而且序列分析未发现突变。结论:SHEEC细胞中的ngal基因具备完整的5'-UTR和3'-UTR结构。

关键词：食管肿瘤 ngal基因基因过表达转录非翻译区 RACE法克隆

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ngal基因在肺癌中的表达及功能研究

NGAL基因在肺癌中的表达及功能研究

作者：唐健中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

【研究背景】肺癌,又称原发性支气管肺癌,是发病率和死亡率最高的的恶性肿瘤之一。发病率在中国呈上升和年轻化趋势,其死亡率居各类肿瘤的第一位。按照病理分型为小细胞肺癌和非小细胞肺癌,其中小细胞肺癌占肺癌总数的25%,非小细胞肺癌... 详细信息

【研究背景】肺癌,又称原发性支气管肺癌,是发病率和死亡率最高的的恶性肿瘤之一。发病率在中国呈上升和年轻化趋势,其死亡率居各类肿瘤的第一位。按照病理分型为小细胞肺癌和非小细胞肺癌,其中小细胞肺癌占肺癌总数的25%,非小细胞肺癌占肺癌总数的75%,非小细胞肺癌又可分为鳞癌、腺癌、大细胞癌、腺鳞癌等类型。小细胞肺癌是一种生长迅速、早期即有淋巴结及远处转移的侵袭性疾病,对放化疗敏感,约三分之一的小细胞肺癌为局限期,化放疗可获得80%左右的客观响应率,三分之二表现为扩展期,预后很差,中位生存期为10个月。非小细胞肺癌的标准治疗包括手术、放疗、化疗等综合治疗,系统性治疗是非小细胞肺癌的多模态疗法的一个基本元素。但绝大多数非小细胞肺癌就诊时表现为局部晚期且治愈率低,由于肺癌早期没有明显的症状,难以觉察,就医时肺癌细胞已向其他器官发生转移,发展成为难以医治的恶性肿瘤。肺癌死亡率高的主要原因就是肿瘤细胞的浸润和转移,而这一过程是由不同阶段、不同的多个基因参与和调控的,包括了一系列病理生理反应过程。因此,研究肺癌的病因、发病机制具有重要的临床意义。中性粒细胞明胶酶相关蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,ngal)是lipocalin家族的一员。ngal可以在许多类型的疾病中都呈现异常表达,在癌症中研究较多的是ngal能与基质金属蛋白酶形成复合物而起作用。近年来越来越多的研究表明,一些转移能力较强的肿瘤细胞中,ngal蛋白表达升高,参与了癌细胞的增殖、侵袭、浸润,且与癌症的分化有关,对于ngal在肺癌中所扮演的角色及其可能的的调控机制至今研究地并不完全清楚。因此,我们在肺癌组织上检测其表达情况,明确其表达与肺癌的关系,在此基础上进一步在人肺腺癌细胞系A549中深入研究了ngal基因功能及可能的表达调控机制,这对于阐明ngal基因在肿瘤中的表达作用及调控机制有一定价值。通过以上研究可能有助于明确ngal是否是肺癌浸润和转移的一个重要参考指标以及其是否可能成为肺癌治疗潜在的靶点。【研究目的】本研究主要观察ngal在临床肺癌组织及其癌旁组织中的表达情况,分析ngal是否在癌组织表达有所变化。同时通过体外细胞Si RNA干扰实验,观察沉默ngal基因对肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,对肺癌细胞上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)形态转换及对MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响。【研究方法】应用免疫组织化学检测临床标本肺癌及癌旁组织中ngal的表达情况。通过RNAi技术干扰ngal后,运用定量PCR、Western-blot技术,观察干扰ngal基因效率。干扰ngal后,MTT检测细胞增殖、Transwell实验及细胞划痕实验检测细胞迁移和侵袭能力,用Western blot及免疫荧光技术检测EMT相关的蛋白E-Cadherin及Vimentin的表达情况。用Western blot方法检测干扰ngal后MMP-2和MMP-9蛋白的表达变化。【结果】对临床标本组织化学检测结果发现ngal在癌旁中表达率为13.3%(4/30),而在肺癌组织中ngal的阳性信号主要定位于胞质,其阳性表达率为76.32%(58/76),显著高于癌旁组织中ngal的表达水平(Pngal-si RNA转染组,癌细胞中ngal基因及蛋白水平表达都受到明显的抑制。ngal-si RNA转染组细胞增殖能力24、48小时细胞存活率为64.92%、56.58%;抑制率分别为35.08%、43.42%,与对照组比较有显著差异。迁移、侵袭能力比对照组都有显著降低,差异具有统计学意义(Pngal,E-cadherin的表达显著升高,Vimentin的表达水平降低。干扰ngal,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低。【结论】ngal在肺癌组织较癌旁组织高表达。干扰ngal基因后,肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移受到明显的抑制。干扰ngal后,EMT的标志物Vimentin表达降低,E-Cadherin表达升高,ngal对肺癌细胞的EMT转换过程中起着重要作用。另外沉默ngal能够抑制MMP-2、MMP-9蛋白的表达,抑制肺癌细胞的侵袭。因此,ngal可能是肺癌浸润和转移的一个重要参考指标,可为肺癌治疗提供潜在的靶点。

关键词：肺癌 ngal基因迁移侵袭上皮-间充质转化

抑制宫颈癌中ngal基因的表达对癌细胞增殖及凋亡的影响和机制研究

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中国妇产科临床杂志 2018年第1期19卷 20-22页

作者：归倩张立会重庆市妇幼保健院妇产科 400021 吉林大学第二医院

目的探讨抑制宫颈癌中中性粒细胞相关载脂蛋白（ngal）基因的表达对癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法 RT-PCR检测ngal基因在宫颈癌组织中的mRNA表达;人宫颈癌HeLa细胞分为空白组、阴性对照组和ngal转染组,转染48 h后,Western blotin... 详细信息

目的探讨抑制宫颈癌中中性粒细胞相关载脂蛋白（ngal）基因的表达对癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法 RT-PCR检测ngal基因在宫颈癌组织中的mRNA表达;人宫颈癌HeLa细胞分为空白组、阴性对照组和ngal转染组,转染48 h后,Western bloting检测各组细胞中ngal、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Cleaved caspase3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、β-连环蛋白（β-catenin）、细胞周期素D1（Cyclin D1）蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡情况。结果宫颈癌组织中ngal的mRNA表达显著高于癌旁组织（P〈0.01）;ngal转染组ngal的蛋白表达显著降低;ngal转染组细胞存活率及Bcl-2、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达均显著低于空白组（P〈0.01）;细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于空白组（P〈0.01）。结论抑制宫颈癌中ngal基因的表达可显著降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。

关键词：宫颈癌 ngal基因增殖凋亡 Wnt/β-catenin信号通路

食管癌细胞ngal基因-416～+84区段存在TPA反应元件

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肿瘤防治研究 2005年第12期32卷 741-744页

作者：许丽艳李恩民蔡唯佳牛永东袁华敏常静霞沈忠英曾毅北京工业大学生命科学与生物工程学院病毒与药理研究室 100022 汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室汕头大学医学院肿瘤病理研究室

目的本文旨在对ngal基因启动子区及其附近是否存在TPA反应元件进行研究。方法(1)采用PCR法从食管癌细胞中克隆ngal基因5′侧翼区416～+84片段,然后分别插入质粒pGLB和pGLE,构建pGLB416和pGLE416荧光素酶报告基因表达载体;(2)将pGLB416和... 详细信息

目的本文旨在对ngal基因启动子区及其附近是否存在TPA反应元件进行研究。方法(1)采用PCR法从食管癌细胞中克隆ngal基因5′侧翼区416～+84片段,然后分别插入质粒pGLB和pGLE,构建pGLB416和pGLE416荧光素酶报告基因表达载体;(2)将pGLB416和pGLE416分别同pRLTK共转染食管癌细胞EC109;(3)用TPA刺激转染的EC109,检测细胞相对荧光素酶活力,通过相对荧光素酶活力变化判定ngal基因5′侧翼416～+84区是否存在TPA反应元件,同时进行生物信息学分析。结果无论是pGLB416还是pGLE416,与pRLTK共转染食管癌细胞EC109后,用TPA刺激,与其相应的空载体相比,转染细胞荧光素酶活力均极显著升高(t检验,Pngal基因5′侧翼416～+84区段至少存在4个潜在的TPA反应元件。结论食管癌细胞ngal基因5′侧翼416～+84区段存在着TPA反应元件。

关键词： ngal基因食管癌细胞基因表达调控 TPA反应元件