检索结果-南通市图书馆

Cellular & Molecular Immunology 2021年第2期18卷 452-460页

作者： Amir Boufenzer Kevin Carrasco Lucie Jolly Benjamin Brustolin Elisa Di-Pillo Marc Derive Sébastien Gibot INOTREM Vandœuvre-lès-NancyNancyFrance UMR-S 1116 Défaillance Cardiovasculaire Aigue et ChroniqueVandœuvre-lès-NancyNancyFrance CHRU Nancy Hôpital CentralService de Réanimation MédicaleNancyFrance

During sepsis,neutrophil activation induces endothelial cell(EC)dysfunction partly through neutrophil extracellular trap(NET)release.The triggering receptor expressed on myeloid cell-1(TREM-1)is an orphan immune receptor that amplifies the inflammatory response mediated by Toll-like receptor-4(TLR4)engagement.Although the key role of TLR4 signaling in NETosis is known,the role of TREM-1 in this process has not yet been investigated.Here,we report that TREM-1 potentiates NET release by human and murine neutrophils and is a component of the NET structure.In contrast,pharmacologic inhibition or genetic ablation of TREM-1 decreased NETosis in vitro and during experimental septic shock in vivo.Moreover,isolated NETs were able to activate ECs and impair vascular reactivity,and these deleterious effects were dampened by TREM-1 inhibition.TREM-1 may,therefore,constitute a new therapeutic target to prevent NETosis and associated endothelial dysfunction.

关键词： TREM-1 NETs sepsis endothelial cell activation vascular dysfunction LR12

NETs作为类风湿性关节炎并发动脉粥样硬化的桥梁及中医药的干预作用

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中药药理与临床 2023年

作者：李月兴陈波洋陈帅赵玲婕晏一平陈云志贵州中医药大学

流行病学数据表明，心血管并发症困扰着近半数类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis， RA)患者，是RA患者的主要死亡原因。这可能与RA同动脉粥样硬化具有相似的病理特征，致使该病患者动脉粥样硬化发生率增加有关。中性粒细胞胞外诱捕... 详细信息

流行病学数据表明，心血管并发症困扰着近半数类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis， RA)患者，是RA患者的主要死亡原因。这可能与RA同动脉粥样硬化具有相似的病理特征，致使该病患者动脉粥样硬化发生率增加有关。中性粒细胞胞外诱捕网作为一把双刃剑，一方面能捕获病原体限制疾病发展，一方面也可成为致病因素加重病情，其介导的炎症反应是RA、动脉粥样硬化、血栓等疾病的共同特点。研究表明，中医药可通过多种途径对动脉粥样硬化产生积极作用，相关中药通过调控中性粒细胞胞外诱捕网治疗RA也收效甚佳。对此，笔者提出猜想，中医药或可通过干预中性粒细胞胞外诱捕网改善RA并发动脉粥样硬化。

关键词： NETs 动脉粥样硬化类风湿性关节炎中医药

Verification of Hypertorus Communication Grids by Infinite Petri NETs and Process Algebra

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

IEEE/CAA Journal of Automatica Sinica 2019年第3期6卷 733-742页

作者： Dmitry A.Zaitsev Tatiana R.Shmeleva Jan Friso Groote IEEE the Vistula University the A.S. Popov Odessa National Academy of Telecommunications the Eindhoven University of Technology

A model of a hypertorus communication grid has been constructed in the form of an infinite Petri net. A grid cell represents either a packet switching device or a bioplast cell. A parametric expression is obtained to allow a finite specification of an infinite Petri net. To prove properties of an ideal communication protocol, we derive an infinite Diophantine system of equations from it, which is subsequently solved. Then we present the programs htgen and ht-mcrl2-gen, developed in the C language, which generate Petri net and process algebra models of a hypertorus with a given number of dimensions and grid size. These are the inputs for the respective modeling tools Tina and mCRL2, which provide model visualization, step simulation, state space generation and reduction, and structural analysis techniques. Benchmarks to compare the two approaches are obtained. An ad-hoc induction-like technique on invariants,obtained for a series of generated models, allows the calculation of a solution of the Diophantine system in a parametric form.It is proven that the basic solutions of the infinite system have been found and that the infinite Petri net is bounded and conservative. Some remarks regarding liveness and liveness enforcing techniques are also presented.

关键词： Computing grid conservativeness deadlock hypertorus infinite Petri NETs process algebra systems biology

APE患者住院时长的影响因素分析及NETs在APE中的作用研究

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

APE患者住院时长的影响因素分析及NETs在APE中的作用研究

作者：肖梨花中南大学

学位级别：硕士

【研究目的】探讨影响急性肺栓塞患者住院时间的影响因素以及中性粒细胞胞外诱捕网在急性肺栓塞发病机制中的作用。【研究方法】本研究包括两部分:第一部分:连续性收集2017年1月—2022年1月于中南大学湘雅二医院住院的145例急性肺栓塞... 详细信息

【研究目的】探讨影响急性肺栓塞患者住院时间的影响因素以及中性粒细胞胞外诱捕网在急性肺栓塞发病机制中的作用。【研究方法】本研究包括两部分:第一部分:连续性收集2017年1月—2022年1月于中南大学湘雅二医院住院的145例急性肺栓塞患者临床资料,根据纳入和排除标准最终纳入99例患者进行分析。以患者住院时间的中位时间为截点将研究对象分为两组:住院日NETs标志物cf DNA、CitH3、MPO及CXCL12表达水平。解剖分离大鼠肺组织,使用4%多聚甲醛固定肺组织,制成石蜡切片行HE染色,观察大鼠肺组织的病理改变,评估病理损伤严重程度。【研究结果】第一部分:(1)单因素分析提示入院D二聚体水平、血清白蛋白、INR、血清NT-pro BNP、危险分层、饮酒史以及使用华法林治疗与急性肺栓塞患者住院时间相关。(2)二元回归分析表明,入院D二聚体水平、危险分层及饮酒史是影响急性肺栓塞患者住院时间的独立危险因素,高水平D二聚体组较低水平D二聚体组住院时长增加(OR值2.87(95%CI:1.05-7.84)),高危组较中低危组住院时间延长(OR值4.64(95%CI:1.18-18.33)),饮酒患者住院时长大于11天风险增加2.78倍(OR值3.7895%CI:1.18-12.14))。(3)ROC曲线分析显示当入院D二聚体>4.43ug/ml时,评估住院时间延长的敏感性为57.8%,特异性为79.6%;D二聚体联合危险分层评估住院日长短的ROC曲线下面积为0.773(95%CI:0678-0.868);危险分层、饮酒史与D二聚体三者联合预测住院时间的ROC曲线下面积为0.787(95%CI:0698-0.877),大于两者组合。第二部分:(1)大鼠APE模型血浆中NETs标志物cf-DNA、CitH3、MPO水平升高;(2)大鼠APE模型血浆中CXCL12水平升高;与NETs标志物cf-DNA、CitH3、MPO呈正相关;(3)使用CXCL12阻断剂AMD3100后,NETs标志物cf-DNA、CitH3、MPO水平下降,肺栓塞大鼠肺组织的病理改变减轻。【结论】第一部分:(1)D二聚体水平、血清白蛋白、INR、血清NT-pro BNP、危险分层、饮酒史以及使用华法林治疗与急性肺栓塞患者住院时间的长短相关。(2)入院D二聚体水平、危险分层及饮酒史是影响急性肺栓塞患者住院时间的独立危险因素。(3)D二聚体对急性肺栓塞患者住院时间长短具有一定预测价值。第二部分:(1)急性肺栓塞大鼠血浆中NETs的相关标志物cf-DNA、CitH3、MPO表达增加;(2)CXCL12在急性肺栓塞大鼠血浆中表达增加,使用CXCL12阻断剂AMD3100可减少NETs标志物cf-DNA、CitH3、MPO的生成,减轻急性肺栓塞病理损伤严重程度。图5幅,表5个,参考文献65篇

关键词：急性肺栓塞住院时间 D二聚体 NETs CXCL12

基于生物信息学分析内皮细胞中NETs相关基因在动脉粥样硬化进展中的作用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基于生物信息学分析内皮细胞中NETs相关基因在动脉粥样硬化进展中...

作者：杜高辉华中科技大学

学位级别：硕士

目的:内皮功能障碍是动脉粥样硬化病变(AS)早期的标志性事件,是这一慢性血管炎症性疾病的罪魁祸首之一。中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)起始于血流紊乱和壁剪切应力强的部位,可以直接激活和损伤内皮细胞。因此,迫切需要寻找NETs损伤内皮细... 详细信息

目的:内皮功能障碍是动脉粥样硬化病变(AS)早期的标志性事件,是这一慢性血管炎症性疾病的罪魁祸首之一。中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)起始于血流紊乱和壁剪切应力强的部位,可以直接激活和损伤内皮细胞。因此,迫切需要寻找NETs损伤内皮细胞的靶点,以改善内皮功能,延缓动脉粥样硬化的发展。方法:使用生物信息学方法,对NETs处理后内皮细胞转录组数据集GSE179828进行分析,得到NETs相关的差异基因(NET＿DEGs)。分析人类颈动脉斑块单细胞数据集GSE159677,对其进行降维和分群,得到对照组和斑块组内皮细胞的差异基因,并与NET＿DEGs求交集,得到NETs在内皮细胞中的差异基因(EC＿NET＿DEGs)。使用加权基因共表达网络的方法,对人类动脉粥样硬化颈动脉斑块GSE28829构建共表达网络并寻找与AS最相关的基因模块,筛选出与EC＿NET＿DEGs共有的重叠基因(WGCNA＿DEGs)。使用Network Analyst构建重叠基因-转录因子和重叠基因-mi RNA共表达网络。随后使用LASSO回归和SVM-RFE筛选出重叠基因中的特征基因。使用数据集GSE43292验证特征基因的诊断效能和表达情况。建立动脉粥样硬化小鼠模型,取心脏进行免疫组织化学染色,检测ICAM1、LFNG等基因在早晚期斑块中的表达情况。使用Gene MANIA数据库和STRING数据库预测相互作用的基因和蛋白,使用Cytoscape软件构建特征基因的共表达网络。最后,利用CIBERSORT分析动脉粥样硬化的免疫浸润情况和特征基因与免疫细胞的相关性。结果:通过分析NETs处理后内皮细胞的转录组数据,筛选出191个NET＿DEGs。通过分析人类颈动脉斑块单细胞数据集,分群,从内皮细胞中筛选出865个差异基因,并与体外NETs处理后内皮细胞的差异基因取交集,筛选出53个EC＿NET＿DEGs。通过对人类斑块芯片数据集GSE28829进行WGCNA分析共鉴定出了26个基因共表达模块,其实蓝色模块与AS有着最为显著的相关性。提取蓝色模块相关基因与EC＿NET＿DEGs的共有基因,即18个WGCNA＿DEGs。转录因子-差异基因互作网络,micro RNA-差异基因互作网络鉴定出NFKB1、RELA、hsa-mir-155-7p和hsa-mir-16-5p为较为重要的转录因子和micro RNA。对WGCNA＿DEGs进行LASSO回归和SVM-RFE算法分析,并将筛选出的特征基因取交集,共得到三个特征基因,分别为ICAM1、EDN1、LFNG。在GSE43292中进行基因诊断效能和表达量的验证,保留ICAM1和LFNG进行下一步的分析。在小鼠动脉粥样硬化硬化模型中,与早期动脉粥样硬化斑块相比,晚期动脉粥样硬化斑块ICAM1和LFNG表达上升。构建ICAM-1和LFNG的共表达网络,预测ICAM-1/NOTCH1和LFNG/NOTCH1轴可能在动脉粥样硬化中发挥重要作用。免疫浸润分析得出,LFNG和ICAM1与记忆B细胞和M0巨噬细胞呈正相关。而LFNG和ICAM1与CD8T细胞、初始B细胞、激活的NK细胞和单核细胞呈负相关。结论:本研究鉴定了NETs与内皮细胞在动脉粥样硬化中的特征基因,以及NETs在动脉粥样硬化中密切相关的转录因子和micro RNA。ICAM-1和LFNG在NETs刺激内皮细胞加重动脉粥样硬化发挥重要作用,并与NOTCH信号通路以及动脉粥样硬化中免疫细胞密切相关,有助于进一步了解动脉粥样硬化的机制,提供潜在的治疗靶点。

关键词：动脉粥样硬化生物信息学中性粒细胞 NETs 内皮细胞 NOTCH

Tubastatin A通过降低NETs形成改善CLP诱导脓毒症的器官损伤

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Tubastatin A通过降低NETs形成改善CLP诱导脓毒症的器官损伤

作者：崔颖中国医科大学

学位级别：硕士

目的:脓毒症是一种严重的临床疾病,可以导致多器官功能衰竭和死亡。研究发现,组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的抑制剂Tubastatin A(Tub A)可以显著提高致死性盲肠结扎和穿刺(CLP)诱导的脓毒症小鼠的存活率,减轻肝、肺损伤,然而机制尚不明确... 详细信息

目的:脓毒症是一种严重的临床疾病,可以导致多器官功能衰竭和死亡。研究发现,组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的抑制剂Tubastatin A(Tub A)可以显著提高致死性盲肠结扎和穿刺(CLP)诱导的脓毒症小鼠的存活率,减轻肝、肺损伤,然而机制尚不明确。中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)能够直接捕获并杀死病原体,防止病原体在血液循环中播散。然而当炎症等诱因持续存在时,过多形成的NETs反而会引起组织损伤。最新研究提出,NETs与脓毒症微循环障碍密切相关。因此,本研究通过构建小鼠CLP腹腔感染脓毒症模型观察Tub A对脓毒症小鼠重要器官(肝脏、肾脏、肺)损伤以及NETs形成的影响,同时评估Tub A对脓毒症小鼠肾脏微循环血栓形成的影响。研究方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为3组,每组5只,具体分组如下:⑴Sham组:开腹,省略CLP,DMSO腹腔注射;⑵CLP组:CLP,DMSO腹腔注射;⑶CLP+Tub A组:CLP,Tub A腹腔注射(Tub A溶于DMSO),均在术后1小时给药。术后24小时通过摘眼球方式采集全血,分离上清用来检测器官损伤标志物ALT、BUN。用Pico Green?染料定量检测上清中cf-DNA水平。通过HE染色观察小鼠重要器官(肝脏、肾脏、肺)组织学病理学改变。通过免疫荧光技术观察肾脏中NETs的形成。通过免疫组化技术评估肾脏微循环中NETs以及凝血酶的形成情况。结果:与Sham组相比,CLP组小鼠术后出现精神萎靡、毛发竖立、行动迟缓等全身炎症反应。与CLP组相比,CLP+Tub A组小鼠活动虽有所减少,但生存状态明显改善。光镜下观察,Sham组小鼠肝、肺、肾组织形态结构完整。与Sham组相比,CLP组小鼠则出现多器官损伤表现,可见肝脏细胞出血、坏死、炎症细胞浸润;肺间质充血、实变以及肾小球和肾小管损伤、萎缩。与CLP组相比,CLP+Tub A组小鼠肝、肺、肾组织损伤及炎症细胞浸润减轻,病理损伤评分下降(4.58±0.19vs 3.30±0.22,4.58±0.29 vs 3.50±0.21,3.50±0.22 vs 2.06±0.21,pNETs样结构。CLP组肾脏中可见典型的NETs结构,大量且弥漫性分布。与CLP组相比,CLP+Tub A组小鼠肾脏内NETs形成减少(1.373±0.137 vs 0.780±0.114,pNETs及凝血酶几乎未见表达,CLP组NETs和凝血酶阳性区域广泛且弥散分布,与CD31阳性区域重合。与CLP组相比,CLP+Tub A组肾脏微循环中NETs的形成降低(3.712±0.099 vs3.043±0.058,pNETs,减少微血栓形成,改善微循环障碍,从而缓解脓毒症器官损伤。

关键词：脓毒症 Tubastatin A 中性粒细胞 NETs 器官损伤微循环

（前）肾素受体通过调控焦亡-NETs环路对糖尿病心肌病心肌损伤的影响

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

（前）肾素受体通过调控焦亡-NETs环路对糖尿病心肌病心肌损伤的...

作者：虎毛毛山东大学

学位级别：硕士

研究背景糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)作为糖尿病最常见的心血管并发症之一,是指不伴随高血压和冠状动脉等心血管疾病下心脏的结构和功能受到损伤。临床上主要表现为心脏扩大、心肌舒张及收缩功能下降,是糖尿病患者心衰... 详细信息

研究背景糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)作为糖尿病最常见的心血管并发症之一,是指不伴随高血压和冠状动脉等心血管疾病下心脏的结构和功能受到损伤。临床上主要表现为心脏扩大、心肌舒张及收缩功能下降,是糖尿病患者心衰及猝死的重要原因。研究表明,(前)肾素受体[(pro)renin receptor,PRR]是肾素的特异性受体,作为RAS系统的重要组分,是糖尿病发病及其导致终末器官损害的关键因素。焦亡,作为一种伴随炎症级联反应的新型细胞死亡方式,也参与DCM病理过程。此外,Netosis,中性粒细胞抵御外界刺激的形式,可由焦亡炎症分子激活,依旧参与了 DCM病理过程。但关于DCM的现有研究中,尚未有研究探讨PRR是否参与DCM中心肌细胞焦亡以及PRR是否通过影响Netosis的产生及调控焦亡-Netosis环路影响DCM心肌细胞焦亡,故探讨PRR对DCM心肌细胞焦亡的影响及其机制,可能对于治疗DCM提供新的靶点和思路。研究目的1.通过构建糖尿病心肌病大鼠模型,观察DCM心肌组织中PRR、caspase-1、IL-1β、IL-18等焦亡相关分子的表达情况;2.通过构建过表达PRR的腺病毒载体,观察PRR过表达对DCM心肌组织中caspase-1、IL-1β、IL-18等焦亡相关分子表达水平、DCM心功能的影响;3.通过提取原代心肌细胞,构建过表达PRR的腺病毒载体,观察原代心肌细胞中PRR与caspase-1、IL-1β、IL-18等焦亡相关分子的表达情况,并收集细胞上清液刺激中性粒细胞,观察PRR过表达对高糖刺激下的中性粒细胞NETs的影响。接着阻断焦亡通路,观察PRR过表达对NETs形成的影响;4.通过中性粒细胞强刺激剂PMA刺激中性粒细胞产生NETs,提取NETs与原代心肌细胞孵育,观察NETs对心肌细胞焦亡的影响。研究方法1.PRR过表达腺病毒载体构建:于Genbank基因库中查询大鼠PRR基因序列(Gene ID:302526),并授权上海吉玛公司构建PRR基因过表达载体[由腺病毒(adenovirus)包被],同时构建空病毒载体Ad-EGFP作为基因过表达的对照。2.DCM大鼠模型构建:适应性喂养60只8周龄的Wistar大鼠。一周后,随机分为4组:对照组、DCM组、Ad-EGFP组、Ad-PRR组,其中DCM组、Ad-EGFP 组、Ad-PRR 组禁食过夜后,于腹腔内注射高剂量链脲佐菌素(STZ)(60mg/kg)。1周后,若测得血糖>11.1mmol/L,且伴有多饮、多尿、多食等典型糖尿病症状,则判定为糖尿病模型造模成功。继续喂养12周后,行超声检查各组大鼠心功能,当出现心腔扩大,且伴有收缩功能减弱则视为DCM造模成功。随后,DCM组、Ad-EGFP组、Ad-PRR组分别经尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、Ad-EGFP(1 × 109fu/100μL,PBS 溶解)、Ad-PRR(1 × 109fu/100μL,PBS溶解)。病毒注射2周后,每组随机选取大鼠数量的一半检测病毒转染效率。病毒注射4周后,将各组大鼠麻醉后行超声检测心功能,并取材以备后续实验。3.分别于造模前、后测量大鼠体重、血糖。4.心功能检测:慢病毒注射4周后使用VEVO770成像系统检测各组大鼠心功能。检测前使用3%水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉大鼠,并剔除毛发以暴露胸部。5.采用免疫组织化学染色法观察心肌组织中PRR、TGF-β、胶原Ⅰ,胶原Ⅲ等纤维化蛋白的表达量。6.采用HE染色法观察心肌组织结构变化。7.采用免疫组织化学染色法观察心肌组织中caspase-1、IL-1β、IL-18等焦亡蛋白的表达量。8.原代心肌细胞提取:取0～3日龄乳鼠心脏,并用预冷的PBS冲洗,剪碎,两步法消化后,过滤留取上清液,以1000rpm、25℃离心10 min。使用差速贴壁法留取较纯的心肌细胞,再用心肌细胞培养液悬浮。悬浮后接种至六孔板。9.原代心肌细胞干预:将原代心肌细胞分为正常组、高糖组、AD-EGFP组、AD-PRR组,其中,Ad-PRR组及Ad-EGFP组在分别转染Ad-PRR、Ad-EGFP后,同高糖组一起给予高糖刺激,观察PRR过表达对caspase-1、IL-1β、IL-18等焦亡相关蛋白的影响。10.应用免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织及心肌细胞中PRR、caspase-1、IL-1β、IL-18等分子的蛋白表达水平。11.中性粒细胞提取:提取大鼠外周新鲜抗凝全血,分别加入试剂A,B,离心机4℃ 700g离心30min。离心结束后可见试管中出现明显的双层白色细胞层,其中上层细胞为单核细胞层,下层细胞为中性粒细胞层。用吸管小心吸取中性粒细胞层于离心管中,清洗再离心以纯化。12.NETs激发:应用PMA刺激中性粒细胞激发NETs,并提取纯化NETs刺激原代心肌细胞,检测其焦亡相关蛋白的

关键词：糖尿病心肌病 PRR 焦亡 NETs

季铵消毒剂扰乱呼吸道菌群稳态引发肺损伤的机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

季铵消毒剂扰乱呼吸道菌群稳态引发肺损伤的机制研究

作者：刘彤彤山西大学

学位级别：硕士

自2019年新型冠状病毒(COVID-19)健康危机爆发以来,消毒剂的使用量急剧增加,随之而来的环境富集与生态风险逐渐被人们关注。其中,季铵消毒剂(QAC)作为对抗SARS-Co V-2病毒的优选试剂,被各国政府提倡使用,由此季铵消毒剂成为使用量最大... 详细信息

自2019年新型冠状病毒(COVID-19)健康危机爆发以来,消毒剂的使用量急剧增加,随之而来的环境富集与生态风险逐渐被人们关注。其中,季铵消毒剂(QAC)作为对抗SARS-Co V-2病毒的优选试剂,被各国政府提倡使用,由此季铵消毒剂成为使用量最大的消毒剂之一。目前,环境中已检测到高浓度的QAC含量,其中室内住宅粉尘颗粒上QAC浓度可达531μg/g。流行病学研究表明,QAC吸入与各种肺部疾病存在相关性,这提示我们季铵消毒剂可能通过影响免疫防御系统来促进肺部疾病的发生发展。此外,呼吸道微生物具有复杂多样的特点,微生物作为人体健康的看门人,与肺部疾病的发生发展也密切相关。然而,目前缺乏QAC暴露的动物实验模型来支撑QAC对肺部免疫系统的影响及其与肺部微生物互作机制的相关研究。为此,本研究通过建立苯扎氯胺(BAC)动物暴露模型,分析暴露期间肺部微生态的动态变化,以及宿主的免疫应答反应,深入探讨微生物组与气道炎症内型之间的复杂关系,探究揭示QAC暴露引发小鼠肺部损伤的分子毒理机制。本研究用C57BL/6小鼠建立了BAC暴露模型,暴露组进行全身动态吸入暴露,对照组吸入新鲜空气,在暴露1天、3天、7天和14天时麻醉小鼠,提取肺泡灌洗液并收集组织样本。暴露后小鼠体重有下降趋势,脏体比也受到了影响。H&E病理染色显示,BAC暴露后小鼠肺部出现炎性浸润、气管壁增厚与肺泡间距增大,且具有时间依赖性;脾部边缘区缺失与红白髓界限模糊;Masson染色显示肺部有纤维化发展趋势。通过实时定量RT-PCR检测得出,暴露后肺脏和脾脏IL-1β、TNF-α、CXCL2、GM-CSF、LTB4、IL-8炎性与趋化因子m RNA表达量升高,说明中性粒细胞在损伤组织聚集激活了免疫反应,并引发系统炎性。随后对中性粒细胞效应机制进行探究,发现暴露后MPO、NE、PAD4 m RNA表达量升高,揭示了中性粒细胞通过释放NETs对BAC暴露做出免疫应答。本研究对小鼠肺部微生物进行16S r RNA测序,结果显示BAC暴露扰乱了小鼠肺部微生态,物种丰富度与多样性随时间暴露而下降,物种组成在门水平与属水平上存在差异,厚壁菌门与变形菌门在暴露后相对丰度升高。此外,病原菌生物量在暴露后增多,与炎性、趋化因子具有显著相关性,同时各类因子也会对微生物组产生影响。说明BAC暴露后增加了致病菌定植风险,刺激宿主发生免疫反应,反过来改变了微生物生长条件,进一步扰乱微生态,促进了肺部疾病的发生与发展。在对微生物表型预测与功能预测后发现,革兰氏阴性、好氧型与兼性厌氧菌表型增加,生物膜生成、迁移能力和细菌毒素分泌能力升高,说明BAC暴露后使小鼠肺部微生态由健康转变为致病性。此外,通过建立微生物共现网络分析,发现BAC暴露后肺部微生物结构稳定性下降,对于环境变化的抵御能力变弱,增加了健康风险。本研究通过BAC暴露引起免疫应答与微生物变化的联合分析,揭示消毒剂暴露诱导肺部微生物组成和结构动态变化,触发了宿主肺部和系统的免疫应答与炎症反应,研究结果为消毒剂合理安全使用提供科学数据。

关键词：季铵消毒剂肺部微生物中性粒细胞 NETs 免疫应答

PAD4催化组蛋白瓜氨酸化对核小体结构的影响

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

PAD4催化组蛋白瓜氨酸化对核小体结构的影响

作者：尹思文河南大学

学位级别：硕士

中性粒细胞是机体防御体外微生物入侵的主要参与者之一,在先天免疫反应中起着重要作用。研究发现中性粒细胞可通过释放中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil Extracellular Traps,NETs)参与清除入侵的病原体及外来微生物。关于NETs形成的具... 详细信息

中性粒细胞是机体防御体外微生物入侵的主要参与者之一,在先天免疫反应中起着重要作用。研究发现中性粒细胞可通过释放中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil Extracellular Traps,NETs)参与清除入侵的病原体及外来微生物。关于NETs形成的具体机制目前仍存在争议,近年的研究认为PAD4催化的组蛋白瓜氨酸化对NETs的形成是至关重要的。大量研究指出NETs在炎症损伤、血栓形成甚至肿瘤转移中发挥着“双刃剑”的作用,越来越多的研究致力于消除NETs在疾病进程中的负面影响。染色质结构的解析是阐明染色质动力学在基因表达的表观遗传调控中的作用的关键。天然的染色质纤维在核内或从核中分离出来的结构是一个规则的螺旋状核小体多聚体,直径约30 nm,每11 nm约堆积6-7个核小体。核小体可以线性地排列在带有弯曲连接物DNA的螺线管型螺旋中,或者以来回之字形排列在由相对直的DNA连接物连接的两个起始堆叠的核小体中。然而,核小体核心颗粒(NCP)在串珠式核小体阵列中如何相互作用形成紧缩型30 nm染色质纤维的具体调节机制仍未研究清楚。PAD4(肽酰基精氨酸脱亚胺酶4),最先发现于HL-60细胞中,是一种Ca依赖的蛋白修饰酶,在2004年Wang等人详细阐明了PAD4的催化机理,可将肽酰精氨酸残基转变为肽酰瓜氨酸残基。组蛋白H3的N端非DNA结合区具有多个精氨酸残基暴露,PAD4可通过催化组蛋白H3的精氨酸瓜氨酸化修饰使得染色质解聚促进NETs产生。通过PAD4介导中性粒细胞组蛋白瓜氨酸化,使染色质解聚,从而促进NETs的形成。本研究在原核表达系统中表达组蛋白,仅使用一个原核表达载体同时表达组蛋白H2A、H2B、H3和H4。在组蛋白H2A和H4的N端依次加入His6-Tag和Thrombin蛋白酶切位点。鉴于组蛋白H2A-H2B和H3-H4之间的相互作用特性,使用镍柱亲和纯化一次便可得到四种组蛋白,在组蛋白纯化后使用Thrombin蛋白酶切除His-Tag。将Widom601序列合成于p UC57载体,通过PCR扩增获得197 bp的组装DNA序列。将纯化后His-Tag切除的四种组蛋白与组装DNA混合于2 M的Na Cl溶液中,4℃低温环境下,通过盐密度梯度透析方法,逐级将Na Cl溶液的浓度降低至0.2 M,在体外组装核小体。使用native-PAGE电泳和EMSA检测组装核小体,核小体DNA较游离的DNA具有明显的迁移滞后性,显示在体外成功组装核小体。使用原核表达载体p Cold I表达PAD4蛋白,并检测酶活性,在体外将PAD4与组蛋白共孵育使组蛋白瓜氨酸化。通过盐密度梯度透析方法体外组装瓜氨酸化核小体,使用原子力显微镜(AFM)对瓜氨酸化核小体和非瓜氨酸化核小体形态结构进行表征,瓜氨酸化核小体结构松散,致密性降低。荧光共振能量转移(FRET)和荧光热漂移(FTS)分别检测不同盐离子浓度和不同温度条件下两种核小体的稳定性,荧光共振能量转移结果表明瓜氨酸化核小体较非瓜氨酸化核小体特定位点DNA的线性距离上更长,可影响染色质丝致密度降低;荧光热漂移实验结果表明瓜氨酸化组蛋白八聚体稳定性更低;以上实验表明瓜氨酸化核小体致密性降低,更容易解聚。提取PAD4的4T1细胞系中染色质,并在体外与PAD4共孵育制备瓜氨酸化染色质,使用透射电镜检测瓜氨酸化染色质和非瓜氨酸化染色质的形态结构,结果表明瓜氨酸化后核小体堆积程度低,染色质结构更加松散。综上所述,PAD4将核小体中组蛋白瓜氨酸化导致组蛋白八聚体稳定性降低,核小体堆积程度降低,从而使染色质结构松散导致染色质解聚,使中性粒细胞释放解聚的染色质形成网状染色质丝,即形成NETs。因此,PAD4催化的组蛋白瓜氨酸化对NETs形成至关重要。

关键词： PAD4 中性粒细胞 NETs 组蛋白核小体瓜氨酸化

A hazard analysis via an improved timed colored petri net with time–space coupling safety constraint

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Chinese Journal of Aeronautics 2016年第4期29卷 1027-1041页

作者： Li Zelin Wang Shihai Zhao Tingdi Liu Bin Science and Technology on Reliability and Environmental Engineering Laboratory School of Reliability and Systems Engineering Beihang University

Petri NETs are graphical and mathematical tools that are applicable to many systems for modeling, simulation, and analysis. With the emergence of the concept of partitioning in time and space domains proposed in avionics application standard software interface(ARINC 653), it has become difficult to analyze time–space coupling hazards resulting from resource partitioning using classical or advanced Petri NETs. In this paper, we propose a time–space coupling safety constraint and an improved timed colored Petri net with imposed time–space coupling safety constraints(TCCP-NET) to fill this requirement gap. Time–space coupling hazard analysis is conducted in three steps: specification modeling, simulation execution, and results analysis. A TCCP-NET is employed to model and analyze integrated modular avionics(IMA), a real-time, safety-critical system. The analysis results are used to verify whether there exist time–space coupling hazards at runtime. The method we propose demonstrates superior modeling of safety-critical real-time systems as it can specify resource allocations in both time and space domains. TCCP-NETs can effectively detect underlying time–space coupling hazards.

关键词： Petri NETs Real-time systems Resource allocation System modeling Time–space coupling safety constant