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MicroRNA-21靶调控ncm460细胞ROCK1基因上调occludin表达

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中国病理生理杂志 2018年第4期34卷 729-734页

作者：李超刘敏刘志华中山大学附属第六医院结直肠外科广东省胃肠病学研究所广东广州510655

目的:探讨微小RNA-21(micro RNA-21,miR-21)对人正常结肠上皮细胞系ncm460中紧密连接相关蛋白——闭合蛋白(occludin)表达的影响,并分析其可能的靶基因。方法:利用miR-21过表达慢病毒建立miR-21过表达ncm460细胞系,q PCR检测miR-21表达... 详细信息

目的:探讨微小RNA-21(micro RNA-21,miR-21)对人正常结肠上皮细胞系ncm460中紧密连接相关蛋白——闭合蛋白(occludin)表达的影响,并分析其可能的靶基因。方法:利用miR-21过表达慢病毒建立miR-21过表达ncm460细胞系,q PCR检测miR-21表达水平,Western blot检测occludin表达情况。生物信息学方法预测miR-21的靶基因,根据评分和文献检索选择相应靶基因ROCK1进行进一步研究,利用miR-21 mimic和inhibitor转染ncm460细胞,同时检测miR-21以及ROCK1的表达水平;采用双萤光素酶报告基因实验验证ROCK1是miR-21的靶基因。结果:在ncm460细胞中过表达miR-21后可上调紧密连接相关蛋白occludin的表达。生物信息学分析预测ROCK1可能为miR-21的靶基因。在ncm460细胞中过表达miR-21可下调ROCK1的m RNA和蛋白水平,抑制miR-21可上调ROCK1的m RNA和蛋白水平。萤光素酶报告基因验证ROCK1为miR-21的靶基因。结论:在ncm460细胞中,miR-21能上调肠屏障功能相关蛋白occludin的表达。ROCK1是miR-21的靶基因,miR-21可能通过靶调控ROCK1促进occludin的表达。

关键词：微小RNA-21 ncm460细胞紧密连接闭合蛋白 ROCK1基因

基于NF-κB信号通路探讨湿生扁蕾乙酸乙酯提取物对ncm460细胞凋亡的影响

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中成药 2024年第10期46卷 3255-3262页

作者：柳娜王嘉鸣徐婕景明甘肃中医药大学药学院甘肃兰州730000

目的探讨湿生扁蕾乙酸乙酯提取物对人正常结肠上皮细胞ncm460凋亡的影响。方法采用10 g/mL脂多糖(LPS)诱导ncm460细胞建立炎症模型,给予湿生扁蕾乙酸乙酯提取物(50、100、200 g/mL)干预24 h,采用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,ELISA法检测... 详细信息

目的探讨湿生扁蕾乙酸乙酯提取物对人正常结肠上皮细胞ncm460凋亡的影响。方法采用10 g/mL脂多糖(LPS)诱导ncm460细胞建立炎症模型,给予湿生扁蕾乙酸乙酯提取物(50、100、200 g/mL)干预24 h,采用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,ELISA法检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6水平,TUNEL染色技术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9及NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB、p-NF-κB、IKKα/β、p-IKKα/β、IκBα、p-IκBα蛋白表达,免疫荧光技术观察NF-κB在细胞核中的表达。结果与对照组比较,LPS处理ncm460细胞24 h后细胞存活率降低(P细胞凋亡加重(P细胞中IL-1β、IL-6水平升高(P细胞存活率升高(P细胞凋亡减轻(Pncm460细胞凋亡。

关键词：湿生扁蕾乙酸乙酯提取物炎症性肠病 ncm460细胞脂多糖凋亡 NF-κB信号通路

谷氨酰胺体外抑制脂多糖诱导的ncm460细胞线粒体途径凋亡作用的研究

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胃肠病学和肝病学杂志 2019年第10期28卷 1144-1147页

作者：陈鹏张文斌王瑶焦方舟陈倩龚作炯武汉大学人民医院感染科

目的探讨谷氨酰胺对小鼠ncm460细胞线粒体凋亡的影响及其机制。方法对数生长期ncm460细胞分为正常组、脂多糖组、谷氨酰胺组,脂多糖组予以加5 μg/ml的脂多糖,谷氨酰胺组予以加5 μg/ml的脂多糖和12 mmol/L的谷氨酰胺。CO 2培养箱培养2... 详细信息

目的探讨谷氨酰胺对小鼠ncm460细胞线粒体凋亡的影响及其机制。方法对数生长期ncm460细胞分为正常组、脂多糖组、谷氨酰胺组,脂多糖组予以加5 μg/ml的脂多糖,谷氨酰胺组予以加5 μg/ml的脂多糖和12 mmol/L的谷氨酰胺。CO 2培养箱培养24 h后,收集各组细胞,采用Western blotting检测各组细胞Bcl2、Bax及Cyt-c蛋白的表达量,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。结果 Western blotting检测脂多糖组细胞中Bax、Cyt-c蛋白的表达均明显升高( P 均细胞仪检测三组细胞的凋亡率,显示脂多糖组细胞出现大量凋亡,其早期凋亡率及晚期凋亡率均明显高于正常组,差异有统计学意义( P 细胞的凋亡较脂多糖组减轻,其早期凋亡率及晚期凋亡率均低于脂多糖组,差异有统计学意义( P ncm460细胞凋亡,可能是通过抑制ncm460细胞线粒体凋亡途径来实现其保护作用。

关键词：谷氨酰胺脂多糖 ncm460细胞线粒体凋亡途径

丁酸通过下调HMGB1抑制高糖诱导下结肠上皮细胞ncm460的异常增殖

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新医学 2018年第4期49卷 234-240页

作者：王思仪黎洁瑶于涛许稷豪陈其奎夏忠胜中山大学孙逸仙纪念医院消化科广州510120

目的观察丁酸对高葡萄糖诱导下结肠上皮细胞ncm460增殖的影响,探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)通路在其中的作用。方法用33 mmol/L D-葡萄糖诱导正常人结肠细胞系ncm460,并予4 mmol/L丁酸干预,通过实时荧光定量... 详细信息

目的观察丁酸对高葡萄糖诱导下结肠上皮细胞ncm460增殖的影响,探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)通路在其中的作用。方法用33 mmol/L D-葡萄糖诱导正常人结肠细胞系ncm460,并予4 mmol/L丁酸干预,通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法、细胞免疫荧光及ELISA检测细胞HMGB1和RAGE的表达情况。测定增殖细胞核抗原(PCNA)表达量和细胞增殖的情况。过表达及下调ncm460的HMGB1,观察HMGB1对细胞表达RAGE及增殖的调控作用。结果高糖诱导下,ncm460细胞增殖能力增高,HMGB1和RAGE的表达升高,细胞上清中HMGB1的含量亦增加(P均ncm460细胞异常增殖受抑制且HMGB1和RAGE的表达下降(P均ncm460存在增殖异常,HMGB1和RAGE表达增加。丁酸通过下调HMGB1/RAGE通路,抑制高糖诱导下ncm460的异常增殖。

关键词：丁酸高糖 ncm460细胞增殖高迁移率族蛋白B1

山姜素调节Nrf2通路对高糖诱导的结肠细胞ncm460异常增殖的影响研究

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河北医药 2024年第14期46卷 2085-2090页

作者：江聪杨保伟田甜李夏红海南省海口市中医医院肛肠科 570100 海南省海口市中医医院肿瘤科 570100

目的研究山姜素对高糖诱导的结肠细胞ncm460异常增殖的影响及对Nrf2通路的调节作用。方法结肠细胞ncm460分为正常对照组、高糖模型组、山姜素低、中、高剂量组及阳性对照组,高糖模型组加入终浓度为33 mmol/L的葡萄糖,山姜素各剂量组... 详细信息

目的研究山姜素对高糖诱导的结肠细胞ncm460异常增殖的影响及对Nrf2通路的调节作用。方法结肠细胞ncm460分为正常对照组、高糖模型组、山姜素低、中、高剂量组及阳性对照组,高糖模型组加入终浓度为33 mmol/L的葡萄糖,山姜素各剂量组加入终浓度为33 mmol/L的葡萄糖,同时分别加入终浓度为25、50、100μmol/L的山姜素,阳性对照组加入终浓度为33 mmol/L的葡萄糖的同时加入4μmol/L的富马酸二甲酯,培养72 h,CCK-8试剂盒测定ncm460细胞增殖率,使用试剂盒测定ncm460细胞活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平及ncm460细胞上清液白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-8、IL-6、IL-12水平,原位末端标记法(TUNEL)染色法测定ncm460细胞凋亡率,碘化丙啶(PI)染色法测定ncm460细胞周期分布,实时定量聚合酶链式反应(RTq-PCR)ncm460细胞Nrf2、HO-1 mRNA水平,免疫印迹法(Western blot)测定ncm460细胞Nrf2、HO-1蛋白水平。结果与正常对照组比较,高糖模型组ncm460细胞增殖率,ROS、MDA水平,ncm460细胞上清液IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-12水平,ncm460细胞S及G2期比例显著升高(Pncm460细胞SOD、CAT水平,ncm460细胞凋亡率及G1期比例,ncm460细胞Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白水平显著降低(Pncm460细胞增殖率,ROS、MDA水平,ncm460细胞上清液IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-6、IL-12水平,ncm460细胞S及G2期比例显著降低(Pncm460细胞SOD、CAT水平,ncm460细胞凋亡率及G1期比例,ncm460细胞Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白水平显著升高(Pncm460细胞炎症水平,修复ncm460细胞氧化应激损伤,抑制高糖诱导的ncm460细胞的异常增殖并促进其凋亡,其机制可能与调节Nrf2/HO-1通路有关。

关键词：山姜素 Nrf2通路 ncm460细胞异常增殖

基于Notch信号探讨岩藻多糖对人结肠上皮细胞炎症损伤的保护作用

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基于Notch信号探讨岩藻多糖对人结肠上皮细胞炎症损伤的保护作用

作者：林媛青岛大学

学位级别：硕士

目的炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)是一种特发性的肠道炎症性疾病,常累及回肠、结肠及直肠。目前普遍认为肠黏膜屏障的损伤是IBD患者肠道中较为常见的病理学改变,致病机制复杂,其主要原因为肠道上皮细胞的分化异常。现有... 详细信息

目的炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)是一种特发性的肠道炎症性疾病,常累及回肠、结肠及直肠。目前普遍认为肠黏膜屏障的损伤是IBD患者肠道中较为常见的病理学改变,致病机制复杂,其主要原因为肠道上皮细胞的分化异常。现有研究结果表明,Notch信号通路在肠道上皮细胞的分化过程中发挥主要调节作用。岩藻多糖是一种主要来源于褐藻的硫酸盐碳水化合物,研究显示其具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用。本研究结合生物信息学分析方法,基于Notch信号通路,探讨岩藻多糖(Fucoidan,FUC)对人正常结肠上皮细胞(ncm460)炎症损伤的保护作用。方法1.生物信息学分析从Gene Expression Omnibus(GEO)数据库中下载GSE55651数据集的原始数据,利用R语言对数据进行预处理后筛选出差异表达基因。利用DAVID数据库和蛋白互作网络分析,筛选出关键的靶基因。2.建立细胞炎症损伤模型、细胞处理及分组体外培养ncm460细胞株,细胞分组如下:(1)空白组:仅添加完全培养基,不含细胞;(2)对照组:使用完全培养基培养细胞;(3)LPS诱导组:在体外培养的细胞中加入脂多糖(LPS,1mg/L)进行干预,构建炎性损伤的细胞模型;(4)LPS+低、中、高剂量岩藻多糖组:采用LPS干预细胞构建细胞炎症损伤模型后,分别用低、中、高(50、100、200μg/L)浓度岩藻多糖完全培养基孵育细胞;3.检测方法采用CCK8法检测各组ncm460细胞的相对存活率;酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)测定各组细胞培养液中炎性因子IL-6及TNF-α水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞IL-6、TNF-α、Notch-1、Hes-1及Math-1 mRNA的表达水平;4.统计学处理采用SPSS 20.0软件进行统计学分析,实验数据以均数±标准差((?)±s)形式表示,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,以P细胞因子与细胞因子受体相互作用等。通过PPI网络分析,发现了4个关键基因:IL-6、STST1、IL-1b和IRF7。结合其他相关文献报道后,最终从此4个关键基因中选取进行后续实验的差异基因为IL-6。***8实验结果提示:LPS干预能显著抑制ncm460细胞的增殖,其细胞存活率明显低于对照组(P细胞增殖,FUC处理后细胞的相对存活率显著高于LPS诱导组(Pncm460细胞分泌炎性因子IL-6及TNF-α,LPS组细胞培养液中炎性因子水平显著高于对照组(P细胞经过各剂量FUC处理后,培养液中的IL-6及TNF-α水平与LPS诱导组相比均显著降低(P细胞中Notch-1、Hes-1、IL-6、TNF-αmRNA的表达水平显著升高(P细胞中Notch-1、Hes-1、IL-6、TNF-αmRNA的表达水平显著降低(P细胞炎症损伤,降低炎症反应程度,提高细胞相对存活率。***对LPS诱导的细胞炎症损伤的保护作用,可能与Notch-1信号通路有关。

关键词：炎症性肠病 ncm460细胞岩藻多糖炎症损伤白细胞介素-6

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MC-LR致肠细胞毒性的初步研究

自然科学 2019年第3期7卷 186-191页

作者： Kamegniboukem Robert 文聪郑水林 Yawmassey Isaac 曹灵慧中南大学湘雅公共卫生学院湖南长沙

随着工农业的发展,越来越多含氮磷的污水排放至淡水河流湖泊当中,导致水体富营养化,进而导致蓝藻爆发。藻毒素是蓝藻细菌代谢的次级产物,是水体中含量最多、危害最大的一类藻毒素。藻毒素是一种环状7肽毒素,目前已经被报道的有100多种... 详细信息

随着工农业的发展,越来越多含氮磷的污水排放至淡水河流湖泊当中,导致水体富营养化,进而导致蓝藻爆发。藻毒素是蓝藻细菌代谢的次级产物,是水体中含量最多、危害最大的一类藻毒素。藻毒素是一种环状7肽毒素,目前已经被报道的有100多种异构体,其中微囊藻毒素-LR (Microcystin-LR, MC-LR)是分布最广泛、毒性最强的一种。本研究利用正常结直肠上皮细胞ncm460及结直肠癌细胞HT29为模型初步探究了MC-LR致肠毒性。我们通过对肠道细胞不同剂量(0 µM、5 µM及10 µM) MC-LR染毒,结果表明在处理的两个剂量组中,细胞数量及形态均无变化;利用荧光探针DCFH-DA法检测活性氧,结果表明不管是ncm460细胞还是HT29细胞,在染毒之后活性氧水平都显著增加(5 µM, HT29, p = 0.03, ncm460, p = 0.0003;10 µM, HT29, p = 0.003, ncm460, p = 0.02),并且呈剂量依赖效应;通过彗星实验,初步探讨了MC-LR对肠道细胞的毒性机制。研究结果表明,在5 µM和10 µM剂量组中,出现明显的DNA拖尾现象,且5 µM剂量组拖尾现象的发生明显低于10 µM剂量组,说明DNA损伤与MC-LR浓度存在剂量依赖关系。因此,本研究结果初步证明了MC-LR能致肠细胞毒性,为进一步了解微囊藻毒素致肠毒性的研究,以及预防、诊断和治疗微囊藻毒素引起的肠道疾病提供一定的参考。

关键词：藻毒素 ncm460细胞 HT29细胞 ROS含量测定彗星实验

结直肠癌肿瘤细胞ELTD1基因表达水平及蛋白定位研究

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中国卫生检验杂志 2015年第4期25卷 541-543,547页

作者：钟智强吴书玲骆丰黄飞燕孙明洪浙江中医药大学附属第一医院检验科浙江杭州310006

目的研究ELTD1基因在人结直肠正常上皮细胞和肿瘤细胞之间的表达差异,明确其表达蛋白的细胞定位。方法分别抽提对数生长期的人结直肠癌Lo Vo细胞株和正常上皮细胞ncm460细胞株的总RNA,RT-PCR半定量技术扩增靶基因ELTD1和内参基因B2M(β... 详细信息

目的研究ELTD1基因在人结直肠正常上皮细胞和肿瘤细胞之间的表达差异,明确其表达蛋白的细胞定位。方法分别抽提对数生长期的人结直肠癌Lo Vo细胞株和正常上皮细胞ncm460细胞株的总RNA,RT-PCR半定量技术扩增靶基因ELTD1和内参基因B2M(β2微球蛋白)的mRNA,利用ELTD1/B2M光密度比值来表示细胞ELTD1 mRNA的相对表达量;Western blot法检测2种细胞株靶蛋白ELTD1和内参蛋白GAPDH,利用ELTD1/GAPDH比值来表示ELTD1蛋白的相对表达量;间接免疫荧光技术检测Lo Vo细胞ELTD1蛋白的细胞定位。结果 Lo Vo细胞和ncm460细胞的ELTD1/B2M灰度比值分别为0.83±0.07和0.11±0.04,ELTD1/GAPDH灰度比值分别是0.74±0.1和0.12±0.04,差异有统计学意义(P细胞膜。结论 ELTD1基因在正常上皮ncm460细胞极低表达,而在人结直肠癌Lo Vo细胞株高表达,ELTD1蛋白定位于细胞膜,ELTD1是一种有助于结直肠癌的早期诊断、靶向治疗、疗效判断及预后的潜在生物标志分子。

关键词：表皮生长因子蛛毒素受体7次跨膜结构域蛋白1 LoVo细胞 ncm460细胞结直肠癌逆转录聚合酶链反应免疫荧光蛋白免疫印迹

前动力蛋白2在炎症相关性结直肠肿瘤动物模型中的表达

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中华实验外科杂志 2017年第7期34卷 1149-1151页

作者：汪昕杨俊段栩飞黄茂华卞红强杨虎朱旭华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院(武汉市妇幼保健院)普外科武汉430016 武汉大学人民医院胃肠外Ⅱ科 430060

目的通过构建体内及体外炎症模型，证明前动力蛋白2（PK2）在溃疡性结肠炎中的作用。方法构建促癌剂甲基偶氮甲烷（AOM）／促炎剂葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的炎症相关性结直肠肿瘤模型，在疾病的不同发展阶段，采用实时定量聚合酶链反应... 详细信息

目的通过构建体内及体外炎症模型，证明前动力蛋白2（PK2）在溃疡性结肠炎中的作用。方法构建促癌剂甲基偶氮甲烷（AOM）／促炎剂葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的炎症相关性结直肠肿瘤模型，在疾病的不同发展阶段，采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）方法检测PK2mRNA表达情况，Western blot法检测其蛋白水平表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测结肠组织匀浆中蛋白表达；脂多糖（LPS）诱导ncm460细胞株激活炎症信号通路，分别从mRNA及蛋白水平检测细胞中PK2的表达。结果在AOM／DSS诱导的炎症相关性结直肠肿瘤模型中，PK2mRNA及蛋白水平随疾病的进展逐步增加；在LPS诱导的细胞炎症模型中，PK2mRNA及蛋白水平均增加[PK2 mRNA升高约3．42倍，P=0．013；PK2蛋白的表达升高约2．10倍，（78．2±5．2）pg/ml比（163．8±8．4）pg／ml；P=0．029]。结论PK2随着炎症的进展表达水平升高，PK2／前动力蛋白受体1（PKR1）信号通路可能在溃疡性结肠炎的发病中发挥重要功能。

关键词：前动力蛋白2 溃疡性结肠炎 ncm460细胞