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程序性死亡配体2(PD-L2)多克隆抗体在小鼠组织中的交叉反应性研究

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中国科学：生命科学 2013年第4期43卷 304-311页

作者：赵宇卞干兰于才勇刘芳芳刘玲郭虹敏郭俊鞠躬王键第四军医大学神经科学研究所西安710032 第四军医大学唐都医院神经内科西安710038

程序性死亡分子-1(programmed death1,PD-1,由pdcd1基因编码)和它的2个配体PD-L1和PD-L2组成一条重要的抑制性免疫信号通路来防御体外微生物和维持自身免疫耐受.与B7-CD28家族的其他分子不同的是,PD-L1和PD-L2的表达并不局限于免疫系统... 详细信息

程序性死亡分子-1(programmed death1,PD-1,由pdcd1基因编码)和它的2个配体PD-L1和PD-L2组成一条重要的抑制性免疫信号通路来防御体外微生物和维持自身免疫耐受.与B7-CD28家族的其他分子不同的是,PD-L1和PD-L2的表达并不局限于免疫系统.本研究发现,一种识别小鼠PD-L2(mPD-L2)胞外段的多克隆抗体(R&D Systems,MN,USA)可以和多种小鼠组织中的相应抗原结合,这些组织包括:垂体前叶和中间叶、嗅球、嗅上皮、舌上皮、角质上皮细胞、皮肤和胡须的毛囊.这一发现不同于以前关于mPD-L2分子组织定位的报道.然而,随后应用RT-PCR和Western印迹等方法,均未在上述组织中检测到PD-L2的转录本和蛋白,结果提示小鼠的PD-L2多克隆抗体可能与组织内其他抗原存在免疫交叉反应.小鼠发育研究显示,mPD-L2样的抗原最早表达在胚胎12.5天(E12.5)的嗅上皮中;胚胎期14.5天(E14.5)时,皮肤、舌以及皮肤和胡须的毛囊均可见mPD-L2样抗原的表达;从胚胎期18.5天(E18.5)开始,mPD-L2样抗原的分布模式与成年小鼠的分布模式基本一致.生物信息学分析和其他实验结果提示,与PD-L2多克隆抗体起交叉反应的候选蛋白可能是神经细胞黏附因子(ncam)和Hemicentin-1.结果表明,利用这种PD-L2多克隆抗体检测mPD-L2分子在中枢神经系统和上皮组织,如嗅上皮的表达时,对于染色结果的解释需要特别谨慎.此外,这种PD-L2多克隆抗体也可用于标记小鼠胚胎发育过程中的嗅上皮细胞.

关键词：交叉反应性 PD-L2 免疫反应性 ncam hemicentin-1

ncam首次在总台春晚超高清虚拟直播的应用介绍

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现代电视技术 2023年第3期 20-23页

作者：高勇中央广播电视总台

本文介绍ncam跟踪技术首次在2023年总台春晚超高清虚拟直播制作中应用的情况。对系统配置、级联、监看等部分进行了说明,对直播应急预案、虚拟空中机位等进行了分析。

关键词： ncam 春晚虚拟跟踪

Non-invasive investigation of inflammatory bowel disease

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World Journal of Gastroenterology 2001年第4期7卷 460-465页

作者： JA Tibble IBjarnason Department of Medicine GuysKings.St Thomass Medical SchoolBessemer RoadLondon SE5 9

The assessment of inflammatory activity in intestinal disease in man can be done using a variety of different techniques. These range from the use of non - invasive acute phase inflammatory markers measured in plasma such as C reactive protein (CRP) and the erythrocyte sedimentation rate (ESR) (both of which give an indirect assessment of disease activity) to the direct assessment of disease activity by intestinal biopsy performed during endoscopy in association with endoscopic scoring systems. Both radiology and endoscopy are conventional for the diagnosis of inflammatory bowel disease (IBD).However these techniques have severe limitations when it comes to assessing functional components of the disease such as activity and prognosis. Here we briefly review the value of two emerging intestinal function tests. Intestinal permeability, although ideally suited for diagnostic screening for small bowel Crohns disease, appears to give reliable predictive data for imminent relapse of small bowel Crohns disease and it can be used to assess responses to treatment. More significantly it is now clear that single stool assay of neutrophil specific proteins (calprotectin, lactoferrin) give the same quantitative data on intestinal inflammation as the 4 - day faecal excretion of 111lndium labelled white cells. Faecal calprotectin is shown to be increased in over 95% of patients with IBD and correlates with clinical disease activity. It reliably differentiates between patients with IBD and irritable bowel syndrome. More importantly, at a given faecal calprotectin concentration in patients with quiescent IBD,the test has a specificity and sensitivity in excess of 85% in predicting clinical relapse of disease. This suggests that relapse of IBD is closely related to the degree of intestinal inflammation and suggests that targeted treatment at an asymptomatic stage of the disease may be indicated.

关键词： inflammatory bowel diseases permeability ncam membrane glycoproteins

PSA及ncam表达差异COS-7细胞的建立及PSA对COS-7细胞迁移侵袭能力的影响

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中国药理学通报 2007年第12期23卷 1565-1570页

作者：程亚彬李静戴功耿美玉中国海洋大学医药学院分子药理室山东青岛266003

目的构建PSA与ncam表达差异的COS-7细胞,并检测PSA的表达对细胞粘附、迁移侵袭能力的影响,为今后进一步研究PSA介导的细胞迁移侵袭信号通路变化,阐明PSA对肿瘤转移影响的分子机制奠定基础。方法该文通过双转染质粒构建PSA与ncam表达差异... 详细信息

目的构建PSA与ncam表达差异的COS-7细胞,并检测PSA的表达对细胞粘附、迁移侵袭能力的影响,为今后进一步研究PSA介导的细胞迁移侵袭信号通路变化,阐明PSA对肿瘤转移影响的分子机制奠定基础。方法该文通过双转染质粒构建PSA与ncam表达差异的COS-7细胞株,利用流式细胞术及Western blot方法检验转染效率;采用MTT法检测PSA表达差异COS-7细胞的增殖;粘附分析法检测COS-7细胞对细胞外基质Fn的粘附能力;利用tran-swell小室比较PSA与ncam表达差异的COS-7细胞迁移、侵袭能力。结果PSA与ncam表达差异COS-7细胞构建成功,PSA可降低COS-7细胞与基底膜的粘附,增强其迁移及侵袭能力。结论该文所建立的PSA与ncam表达差异的COS-7细胞株可用于今后进行PSA对细胞迁移侵袭信号通路影响的机制研究。

关键词： PSA ncam COS-7 迁移侵袭肿瘤

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柿叶黄酮对淋巴细胞与神经元粘附作用的影响

中药材 2009年第5期32卷 740-744页

作者：贝伟剑徐安龙李楚源 Peter Cabot Siobhan Hermanussen 广东药学院中医药研究院广东广州510006 中山大学生命科学学院广东广州510275 广州白云山和记黄埔中药有限公司广东广州510515 School of Pharmacy The University of Queensland

目的:研究柿叶黄酮对淋巴细胞与神经元粘附作用的影响。方法:用体外细胞粘附评估的荧光分析方法检测淋巴细胞与神经元的粘附作用。结果:5 ～25μg/mL柿叶黄酮能抑制淋巴细胞与神经元的粘附,并能加强神经细胞粘附因子抗体(anti-ncam)对... 详细信息

目的:研究柿叶黄酮对淋巴细胞与神经元粘附作用的影响。方法:用体外细胞粘附评估的荧光分析方法检测淋巴细胞与神经元的粘附作用。结果:5 ～25μg/mL柿叶黄酮能抑制淋巴细胞与神经元的粘附,并能加强神经细胞粘附因子抗体(anti-ncam)对淋巴细胞和神经元粘附的抑制作用,还能拮抗细胞粘附因子ICAM-1对淋巴细胞与神经元粘附的激化作用;其抑制作用呈明显剂量依赖性。结论:柿叶黄酮能抑制淋巴细胞与神经细胞的粘附作用,有利于神经细胞炎症损伤的保护。

关键词：柿叶黄酮神经元淋巴细胞粘附 ICAM-1 ncam

NMDA受体显像剂^(99)Tc^m-ncam的制备和受体结合分析

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核化学与放射化学 2009年第2期31卷 98-103页

作者：颜成龙周杏琴曹国宪张建康钦晓峰徐希杰邹美芬江南大学医药学院江苏无锡214122 卫生部核医学重点实验室江苏省原子医学研究所江苏无锡214063

用99Tcm标记新的美金刚胺(memantine)衍生物N-[2-(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]-N-(2-巯基乙基)-3,5-二甲基金刚烷胺基乙酰胺(N2S2-memantine,简称ncam),并通过优化标记条件获得放射化学纯度达95%以上的标记化合物99Tcm-ncam。脂溶性实... 详细信息

用99Tcm标记新的美金刚胺(memantine)衍生物N-[2-(N-(2-巯基乙基))氨基乙酰基]-N-(2-巯基乙基)-3,5-二甲基金刚烷胺基乙酰胺(N2S2-memantine,简称ncam),并通过优化标记条件获得放射化学纯度达95%以上的标记化合物99Tcm-ncam。脂溶性实验测得其脂水分配系数lgP=1.90。放射性受体结合分析显示,其与N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体结合具有饱和性,根据受体B区理论编制的计算机程序求出NMDA受体结合参数最大结合容量Bmax=56.8μmol/g,平衡解离常数Kd=706.3 nmol/L,特异性NMDA受体拮抗剂能阻断其与NMDA受体的结合。结果显示99Tcm-ncam与NMDA受体结合具有中等程度的亲和力和结合特异性,具有较好的脂溶性,易透过血脑屏障,有可能成为一种新的NMDA受体显像剂。

关键词： ncam NMDA受体放射性受体结合分析显像剂

药物诱导大鼠隐睾模型比较及T3干预Flutamide诱导隐睾ncam表达研究

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药物诱导大鼠隐睾模型比较及T3干预Flutamide诱导隐睾NCAM表达研究

作者：马超重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：比较邻苯二酸二丁酯(DBP)、己烯雌酚(DES)、氟他胺(Flu)宫内诱导SD鼠隐睾模型的组织病理变化,选择与临床隐睾病理改变接近的模型。观察T3调控SD鼠隐睾生殖母细胞(Gonocyte, Go)发育及ncam表达。方法：①SD孕鼠,于受孕(gestational... 详细信息

目的：比较邻苯二酸二丁酯(DBP)、己烯雌酚(DES)、氟他胺(Flu)宫内诱导SD鼠隐睾模型的组织病理变化,选择与临床隐睾病理改变接近的模型。观察T3调控SD鼠隐睾生殖母细胞(Gonocyte, Go)发育及ncam表达。方法：①SD孕鼠,于受孕(gestational day GD)12-21d给予DES、Flu皮下注射,DBP灌胃,建立大鼠隐睾模型;收集50个临床隐睾活检组织。②免疫组化定性、定位检测睾丸ncam的表达。③T3 15μg·kg-1·d-1皮下注射Flu诱导PD1仔鼠,PD20隐睾鼠,观察干预后隐睾发生率、组织学改变,以及ncam在的表达。结果：①Flu诱导大鼠隐睾发生率为42.2%,睾丸位于腹股沟,尿道下裂发生率93.3%。睾丸体积、脏器系数明显小于正常对照组(P0.05),管腔中央可见大量的精子生成。④50个临床隐睾中,ncam表达分布模式有4种：(1)曲细精管内阴性表达、间质细胞阳性表达42%,为生理发育规律表达;(2)曲细精管内阳性表达、间质细胞阳性表达26%;(3)曲细精管内阳性表达、间质细胞阴性表达4%;(4)曲细精管内阴性表达、间质细胞阴性表达28%。⑤DES、DBP大鼠曲细精管ncam表达与正常组一致,PD1管腔内Go均有阳性表达,PD10管腔内Go迁移至基底膜,ncam表达明显减弱至消失。PD20、PD80隐睾及下降睾丸曲细精管内ncam阴性表达。Flu诱导PD10、PD20、PD80隐睾管腔ncam阳性表达。⑥T3 15μg·kg-1·d-1干预Flu诱导PD1仔鼠,成年后隐睾发生率为25%(4/16),较未干预组的隐睾发生率42.9%(12/28)降低,并可促进曲细精管管腔化,隐睾曲细精管内ncam阴性表达。⑦Flu诱导的PD13仔鼠睾丸ncam的mRNA表达均明显高于正常对照组(Pncam的mRNA表达明显低于非T3干预组(P0.05)。结论：①孕期宫内诱导隐睾模型中,Flu诱导的隐睾组织中存在ncam曲细精管阳性,Go残留,该模型更适宜于研究临床隐睾Go残留及发育障碍。②Flu仔鼠出生后早期T3干预,可以降低隐睾发生率;促进曲细精管管腔化,下调ncam表达。降低或消除隐睾曲细精管Go残存。

关键词：隐睾动物模型 ncam 三碘甲状腺原氨酸

狂犬病病毒受体ncam、P75和nAchR的原核表达、多克隆抗体的制备以及病毒感染对细胞受体的影响

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狂犬病病毒受体NCAM、P75和nAchR的原核表达、多克隆抗体的制备以...

作者：钟桃珍广西大学

学位级别：硕士

狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)是弹状病毒科狂犬病毒属的成员,具有高度的嗜神经性并且能引起致命的脑炎。目前没有有效的治疗方法,病死率几乎100%。狂犬病病毒编码五种蛋白,其中G蛋白在决定病毒的宿主范围、嗜神经毒力、病毒的免疫原性... 详细信息

狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)是弹状病毒科狂犬病毒属的成员,具有高度的嗜神经性并且能引起致命的脑炎。目前没有有效的治疗方法,病死率几乎100%。狂犬病病毒编码五种蛋白,其中G蛋白在决定病毒的宿主范围、嗜神经毒力、病毒的免疫原性及与宿主细胞表面受体分子的相互作用等方面起着重要的作用。病毒的细胞受体是病毒侵入靶细胞的门户,能与病毒特异性的结合,介导病毒入侵易感宿主细胞而启动其复制过程。RV在侵入神经肌肉接头时,位于突触后膜的nAchR和位于突触前膜的ncam起到重要的介导作用。神经营养素受体P75同样作为狂犬病病毒的一个受体,当病毒进入神经元细胞后,P75可与狂犬病病毒G蛋白结合从而使病毒进入细胞浆内进行逆向传递。本课题从感染Flury毒株1h的NA细胞中抽提总RNA,从总RNA中合成并克隆了NCA、P75和nAchR基因,将这些基因片段插入原核表达载体pET-32a(+)克隆位点,并成功构建了pET-ncam-711、pET-P75-513和pET-nAchR-525的重组原核表达质粒。将这些原核重组表达质粒分别转入原核表达宿主菌BL21(DE3)中,分别经过IPTG诱导而表达ncam-711、P75-513和nAchR-525三种重组蛋白。SDS-PAGE电泳分析发现,表达的三种重组蛋白ncam-711、P75-513和nAchR-525分别表达出52、45和47KD的融合蛋白,同时证实,ncam-711和nAchR-525主要以包涵体的形式表达,而P75-513则主要以可溶性蛋白的形式表达。分别经过Ni-NTA树脂纯化重组蛋白,以纯化的重组蛋白为抗原与弗氏佐剂乳化免疫小鼠,制备ncam、P75和nAchR多克隆抗体。由于自然状态下这三个受体在细胞表面的表达量很低,常规方法IFA和WB等的反应很弱,难以达到检测标准,因此分别构建了三个受体的真核表达质粒ncam-1818-3.0、P75-1284-myc和nAchR-1509-myc。转染BHK-21细胞,获得过表达ncam、P75和nAchR三个蛋白的BHK-21细胞。分别以正常的NA细胞以及真核表达质粒转染BHK-21细胞24h后收集的细胞和细胞蛋白为样品,用IFA和Western-blot方法检测细胞表面的受体蛋白与抗体的反应性。IFA结果表明,制备的ncam、P75和nAchR多克隆抗体分别与NA细胞上的三种受体结合都显示特异性荧光。Western-blot结果表明,制备的抗ncam和P75蛋白的两种多克隆抗体可与相应的细胞转染受体蛋白ncam和P75反应,而nAchR多克隆抗体可与NA细胞及转染BHK-21细胞上的nAchR结合,IFA可看到荧光,但用Western-blot的方法检测不到细胞表面的nAchR蛋白。应用制备的三种受体蛋白多抗用流式细胞术测定三种细胞NA、BHK-21和RAW264.7感染RC-HL株后,ncam、P75和nAchR三种受体蛋白的表达变化情况。结果显示,三种受体蛋白在NA细胞和BHK-21细胞中上调约2倍左右,但在RAW264.7细胞中的表达较接毒前上调更加显著,分别上调8、9和6.3倍。在此基础上用实时荧光定量PCR在mRNA水平上测定NA、BHK-21和RAW264.7细胞感染RV弱毒毒株RC-HL后ncam、P75和nAchR这三个受体的表达情况。结果表明,RC-HL感染24h后ncam、P75和nAchR三种基因的mRNA都有不同程度的上调。ncam、P75和nAchR的mRNA的表达相对于接毒前,NA细胞中分别上调79.3、28.2和8.7倍,BHK-21细胞中分别上调3.5、1.9和1.8倍和RAW264.7细胞中分别上调10.97、9.1和3.5倍。通过扩增三种受体基因并克隆构建原核表达载体后进行蛋白纯化,成功制备了三个受体的多克隆抗体;三种受体抗体与三种受体蛋白均有特异反应性;用制备得到的三种受体多抗检测三种细胞感染RV后,证实三种受体蛋白表达上调;RV感染后同样可以诱导这三种受体基因mRNA表达上调,与蛋白水平结果一致。表明在狂犬病病毒感染的过程中,这三种受体扮演着重要的角色。本研究以期从受体角度阐明病毒入侵机制提供一定的研究基础和参考数据。

关键词：狂犬病病毒 ncam P75 nAchR 多克隆抗体

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ncam基因与精神分裂症的连锁不平衡研究

NCAM基因与精神分裂症的连锁不平衡研究

作者：许钊上海交通大学

学位级别：硕士

遗传因素精神分裂症有很重要的影响,多年来为了寻找提高该病风险的DNA序列上的突变已付出了巨大的努力,然而该病的遗传方式非常复杂,并不符合简单的孟德尔遗传规律。精神分裂症的病因机制可能涉及多个相互作用的微效基因,未知的环境因... 详细信息

遗传因素精神分裂症有很重要的影响,多年来为了寻找提高该病风险的DNA序列上的突变已付出了巨大的努力,然而该病的遗传方式非常复杂,并不符合简单的孟德尔遗传规律。精神分裂症的病因机制可能涉及多个相互作用的微效基因,未知的环境因素可能也有一定的影响,再加上该疾病诊断上的不明确,这些都使得遗传分析至今还没有获得令人满意的结果。然而最近两年,随着人类全基因组测序的完成,单核苷酸多态标记鉴定和基因分型技术的飞速发展,以及全基因组扫描研究国际合作的开展,多个精神分裂症的染色体可能区域被许多独立的遗传研究所证实。本论文工作对一个新发现的的易感基因ncam进行了研究,ncam是一个多功能的跨膜蛋白在突触可塑性,神经发育和神经形成中都起关键性作用。最近报道了ncam基因在神经认知方面起了关键性作用,神经认知被广泛地认为是与精神分裂症高度相关。对于ncam基因,我们在中国汉族人群中采用的是病例-对照研究方法,包括288个精神分裂症患者和288个对照样品,分析了ncam基因的5个相关的SNP位点（rs1943620, rs1836796, rs1821693, rs686050, rs584427）。基因分型实验首先把样本在GeneAmp PCR system 9700上进行扩增反应,接下来的测序反应是在ABI PRISM 3100仪器上进行。等位基因频率和基因型频率在病例组和对照组之间,没有达到设定的显著性水平（α=0.05）。单倍型分析在在病例组和对照组之间也没有表现出显著差异（globalχ~2= 1.318, P=0.725,d.f.= 3）。

关键词：精神分裂症 ncam 多态性连锁不平衡分析病例-对照研究