检索结果-南通市图书馆

作者：王希峰山东大学

学位级别：硕士

目的苯并呋咱（benzofurazan）类衍生剂是一类已广泛应用于生物样品测定的衍生剂,能与氨基酸、多肽及部分蛋白质发生衍生反应,生成的衍生物可用紫外或荧光检测器进行检测。本文通过研究苯并呋咱类衍生剂4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并恶二... 详细信息

目的苯并呋咱（benzofurazan）类衍生剂是一类已广泛应用于生物样品测定的衍生剂,能与氨基酸、多肽及部分蛋白质发生衍生反应,生成的衍生物可用紫外或荧光检测器进行检测。本文通过研究苯并呋咱类衍生剂4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑（4-fluoro-7-nitrobenzofurazan,nbd-f）的光谱学特性及量子产率,优化了nbd-f与待测物衍生反应条件,建立一种简便、快速、灵敏的高效液相色谱测定保健食品或生物样品中牛磺酸、谷胱甘肽、氨基葡萄糖盐酸盐的方法。方法与结果使用分光光度计测定了nbd-f及其衍生产物的紫外可见吸收光谱、荧光光谱性质和量子产率,发现nbd-f在碱性条件下,可激发波长为370nm,475nm,发射波长为540nm处产生较强的荧光。在0.1-100μmol/L浓度范围时,荧光强度与浓度存在线性关系。以罗丹明B为参比,测得nbd-f在激发波长475nm处荧光量子产率为0.86。 nbd-f柱前衍生高效液相色谱紫外检测器测定保健食品中牛磺酸含量,荧光检测器测定人、大鼠血浆中和大鼠肝、脑组织中牛磺酸含量。色谱条件为：色谱柱Diamonsil C18柱（5μm,250 x4.6 mm）;流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液（0.02mol/L, pH 6.0）（16：84,v/v）;柱温25℃;流速1.0 ml/min;紫外检测波长λ=470 nm;荧光检测器λex=475nm,λem=536nm;进样量10μL。结果荧光检测牛磺酸线性范围为0.1μmol/L-30.0μmol/L,r=0.9995,最低检测限（S/N=3）0.010μmol/L,日内和日间变异分别为5.3%,7.7%。将此方法用于测定生物样品中牛磺酸含量测定正常男女血浆中牛磺酸含量分别为37.8±5.1,38.1±5.5μmol/L,正常大鼠血浆中牛磺酸含量为263±24μmol/L,正常大鼠肝、脑中牛磺酸含量分别为1.3±0.2,1.9±0.1μmol/g。柱前衍生高效液相色谱测定生物样品中谷胱甘肽的含量,使用乙腈-0.02mol/L磷酸盐溶液（23：77,v/v）为流动相,柱温25℃;流速1.0 mL/min;荧光检测：λex=475 nm,λem=542 nm;进样量10μL。荧光检测谷胱甘肽线性范围为0.1μmol/L-10.0μmol/L,r=0.9988日内和日间变异分别为6.3%,6.9%。将此方法用于测定生物样品中谷胱甘肽含量,测定正常男女血浆中牛谷胱甘肽含量分别为4.70±0.92,4.72±0.94μmol/L,测定正常组和肝性脑病组大鼠血浆中谷胱甘肽值分别为5.70±1.01,3.42±0.54μmol/L,正常大鼠肝、脑中谷胱甘肽含量分别为5.46±0.62,0.63±0.10μmol/g。柱前衍生高效液相色谱法测定保健食品中氨基葡萄糖盐酸盐的含量,色谱条件为：DiamonsilC18 250x4.6mm,5μm;流动相：乙腈-0.02mol/L KH2PO4 （0.05%TfA,pH 4.0）=32：68（v/v）,柱温：35℃,流速：1.0 ml/min,检测波长：466nm,进样体积10μL。线性范围是1.0-500 mg/L,相关系数为0.9995,最低检测限（S/N=3）为0.20mg/L,样品的回收率为95.6%-103.7%,相对标准偏差为2.5%-7.7%。结论本文研究了苯并呋咱类衍生剂nbd-f光谱学特性,优化了nbd-f与牛磺酸、谷胱甘肽、氨基葡萄糖盐酸盐衍生反应的条件,并对衍生产物的吸收光谱、稳定性等特征进行考查。结果表明nbd-f是一种较强的荧光标记物,能与含胺基化合物在碱性条件下发生衍生化反应,衍生反应条件简单,反应时间短,衍生产物的稳定好,可用高效液相色谱紫外检测器或荧光检测器测定,干扰峰少,灵敏度高。此方法可以用于测定食品和生物样品中牛磺酸、谷胱甘肽、氨基葡萄糖盐酸盐含量。

关键词： nbd-f 牛磺酸谷胱甘肽氨基葡萄糖盐酸盐 HPLC

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Sensitive Spectrofluorimetric Method of Analysis for Gabapentin in Pure and Pharmaceutical Preparations

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Chinese Journal of Chemistry 2011年第3期29卷 562-566页

作者： Ulu, Sevgi Tatar Kel, Elif Department of Analytical Chemistry Faculty of Pharmacy Istanbul University 34416 Istanbul Turkey

Highly sensitive spectrofluorimetric method was developed and validated for the determination of gabapentin in pure and pharmaceutical preparations. The method was based on nucleophilic substitution reaction of gabapentin with 4-fluoro-7-nitrobenzofurazan （nbd-f） in an alkaline medium （pH 9.5） to form a highly fluorescent derivative that was measured at 521 nm after excitation at 458 rim. The factors affecting the reaction was carefully studied and optimized. The method was successfully validated for linearity, limit of detection, limit of quantification, accuracy, precision, robustness and specificity. Under the optimized conditions, linear relationship with good correlation coefficient （0.9998） was found between the relative fluorescence intensity and gabapentin concentration in the range of 10--100 ng·mL^-1. The limit of detection and limit of quantification were 0.43 and 1.30 ng·mL ^-1, respectively. The proposed method was successfully applied to the determination of gabapentin in its pharmaceutical capsules. The results obtained by the proposed method were comparable with those obtained by the official method. Statistical comparison by t- and f- tests revealed that there was no significant difference between the results of the two methods with respect to mean values and standard deviations at the 95% confidence level.

关键词： gabapentin nbd-f spectrofluorimetric method derivatization determination

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食品中生物胺的毛细管电色谱-激光诱导荧光检测联用分析

食品中生物胺的毛细管电色谱-激光诱导荧光检测联用分析

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第二十届全国色谱学术报告会及仪器展览会

作者：蔡晓蓉宋云萍吴晓苹食品安全分析与检测技术教育部/福建省重点实验室

＜正＞生物胺是一类弱碱性低分子量的含氮有机化合物,通常在食品腐坏和发酵过程中产生[1]。生物胺是有机体内的正常活性成分,但摄入过量生物胺尤其是组胺、酪胺及脂肪胺等多种毒性生物胺,不仅影响食品品质,引发不良生理反应,而且将产生... 详细信息

＜正＞生物胺是一类弱碱性低分子量的含氮有机化合物,通常在食品腐坏和发酵过程中产生[1]。生物胺是有机体内的正常活性成分,但摄入过量生物胺尤其是组胺、酪胺及脂肪胺等多种毒性生物胺,不仅影响食品品质,引发不良生理反应,而且将产生协同效应增强毒性,损伤神经、心血管系统甚

关键词：激光诱导荧光检测 nbd-f 毛细管电色谱生物胺

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五种内源性氨基酸类神经递质的二维液相色谱方法学研究

五种内源性氨基酸类神经递质的二维液相色谱方法学研究

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作者：赵雪娇湖南农业大学

学位级别：硕士

氨基酸类神经递质(AANTs)在动物体内经过一系列的合成、转化与消逝等过程,同生物胺类、肽类和其他类的神经递质相互作用,共同维持着动物体内兴奋性的动态平衡。鉴于这些神经递质在机体内的含量变化会影响其在生物基质中的相对平衡,而这... 详细信息

氨基酸类神经递质(AANTs)在动物体内经过一系列的合成、转化与消逝等过程,同生物胺类、肽类和其他类的神经递质相互作用,共同维持着动物体内兴奋性的动态平衡。鉴于这些神经递质在机体内的含量变化会影响其在生物基质中的相对平衡,而这种相对平衡又决定着神经元的兴奋性水平,可见测定神经递质的含量变化与脑部生理功能和病理变化息息相关,因此,有必要建立神经递质检测方法分析生物样品中的含量。目前,常用内源性AANTs主要包括谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)、牛磺酸(Tau)和γ-氨基丁酸(GABA),且大多采用高效液相色谱(HPLC)耦合荧光、质谱、紫外检测系统,其次是毛细管电泳(CE)和气相色谱(GC)等分析方法,各有优缺点。因此,本论文使用二维液相色谱(2D-LC)建立一个同时检测5种内源性AANTs的方法,为临床应用与各种生物样品中氨基酸(AA)含量测定建立基础。本试验首次开展了2D-LC-UV系统同时测定动物血液和脑组织中Asp、Glu、Gly、Tau和GABA的方法研究。样品采集后先经有机沉淀、离心,再用4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑(4-fluoro-7-nitrobenzofurazan;nbd-f)将AANTs标记在相应的荧光衍生物上。设计了100μL AANTs/样品上清液、350μL四硼酸钾缓冲溶液(10 mmol/L)和50μL nbd-f(10 mmol/L)工作溶液的衍生体系进行衍生反应。通过大体积进样使反应产物在萃取柱(一维色谱柱:SNCB 50 mm*4.6 mm*5μm柱)上进行初次分离、部分除杂和目标富集,并自动转入分析柱(二维色谱柱:SBR3 200 mm*4.6 mm*5μm柱)实现目标成分的在线提取和完全分离。流经分析柱的水相是0.02 mol/L磷酸二氢钠和磷酸氢二钠缓冲液(p H=6.8～6.9),有机相是甲醇-乙腈(3:1,v/v);流经萃取柱的流动相是甲醇和0.02 mol/L磷酸二氢钠和磷酸氢二钠缓冲溶液(p H=6.8～6.9)(15:85,v/v)。在上述条件下进行方法学验证和含量测定之后,通过灌胃给药方式设计急性毒性试验,对大鼠进行单次给药,使用2D-LC-UV方法研究了钩吻素己对AANTs的药物影响。结果显示,该方法表现出良好的选择性,分析物校准曲线的相关系数>0.99。日内、日间的精密度≤16.03,日内、日间准确度在70.59～116.20%之间,实现了5种AANTs的快速检测和稳定性定量,证明了替代稀释法的可行性。此外,建立的方法已成功应用于大鼠血清和猪血浆、大鼠和猪的全脑及脑分区(海马、皮层、纹状体、小脑、脑干和下丘脑)等生物样品的分析。表明大鼠与猪脑分区之间存在一定的部位差异和种属差异,钩吻素己对AANTs的含量变化与雌雄差异和分布部位有关,指向脊髓可能与钩吻素己的毒性机制具有相关性。该方法负载能力强,分辨率高,峰形好,且不受其他内源性物质的影响。有望为神经科学的药理学、药学和临床研究中AANTs的测定提供适用性,同时也为钩吻在神经药物的研究提供方法学研究。

关键词：二维液相色谱 nbd-f 内源性氨基酸类神经递质钩吻素己

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