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通络醒脑泡腾片经nampt/SIRT1/FOXO3途径改善SAMP8小鼠的学习记忆

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中成药 2017年第4期39卷 684-689页

作者：魏江平付文君陈欢郑航徐世军四川省中药资源系统研究与开发利用国家重点实验室培育基地四川成都611137 成都中医药大学药学院四川成都611137

目的考察通络醒脑泡腾片(川芎、当归和黄芩)对SAMP8小鼠学习记忆的影响,探究其改善认知功能作用机制。方法将SAMP8小鼠药物干预60 d,采用Morris水迷宫评价其认知变化,随后采用ELISA法和免疫组化法分别测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、... 详细信息

目的考察通络醒脑泡腾片(川芎、当归和黄芩)对SAMP8小鼠学习记忆的影响,探究其改善认知功能作用机制。方法将SAMP8小鼠药物干预60 d,采用Morris水迷宫评价其认知变化,随后采用ELISA法和免疫组化法分别测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、羰基化蛋白、NAD^+/NADH和海马尼克酰胺磷酸核糖转移酶(nampt)、沉默调节蛋白1(SIRT1)和叉头蛋白3(FOXO3)的表达。结果通络醒脑泡腾片能够缩短SAMP8小鼠在隐藏平台实验中第5天的逃避潜伏期和显著增加平台象限所占时间百分比,明显增加SAMP8小鼠在空间探索实验中进入目标象限次数;能够明显提升SAMP8小鼠脑组织SOD活力和NAD^+/NADH比值及降低羰基化蛋白浓度;能够显著上调SAMP8小鼠海马nampt和SIRT1的表达,下调FOXO3的蛋白表达。结论通络醒脑泡腾片提高SAMP8小鼠认知功能与其调节海马nampt/SIRT1/FOXO3途径有关。

关键词：通络醒脑泡腾片 SAMP8小鼠 nampt SIRT1 FOXO3

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nampt与消化系统肿瘤关系的研究进展

广东医学 2016年第3期37卷 451-454页

作者：雷焦姚克诚章园三峡大学人民医院、湖北省宜昌市第一人民医院普通外科 443000 三峡大学人民医院、湖北省宜昌市第一人民医院综合内科 443000

尼克酰胺磷酸核糖转移酶（nicotinamide phosphoribosyltransferase,nampt）最初称为前B细胞克隆增强因子（preB-cell colony-enhancing factor,PBEF）,是从激活的人外周血淋巴细胞的c DNA基因库中用简并寡核苷酸探针克隆出的一编码基因... 详细信息

尼克酰胺磷酸核糖转移酶（nicotinamide phosphoribosyltransferase,nampt）最初称为前B细胞克隆增强因子（preB-cell colony-enhancing factor,PBEF）,是从激活的人外周血淋巴细胞的c DNA基因库中用简并寡核苷酸探针克隆出的一编码基因,在干细胞因子和白细胞介素7辅助参与时能够使前B细胞更加顺利的分化与成熟[1]。

关键词：消化系统肿瘤 nampt nicotinamide 寡核苷酸探针细胞克隆尼克酰胺细胞分化编码基因口腔鳞状细胞癌白细胞介素

苯丙酸诺龙促进胰岛NIT-1细胞nampt表达和胰岛素分泌

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基础医学与临床 2014年第1期34卷 68-71页

作者：陈洁润吴雅婷冯乔沈旺冯乐平桂林医学院生物技术学院广西桂林541004

目的探讨雄性激素苯丙酸诺龙在氧化应激条件下对胰岛细胞的作用,为2型糖尿病治疗提供理论依据。方法将培养的NIT-1细胞按不同葡萄糖浓度(5.6、11.1、16.7和27.6 mmol/L)分为4组,分别用10μg/mL苯丙酸诺龙处理48 h,之后用流式细胞仪检测... 详细信息

目的探讨雄性激素苯丙酸诺龙在氧化应激条件下对胰岛细胞的作用,为2型糖尿病治疗提供理论依据。方法将培养的NIT-1细胞按不同葡萄糖浓度(5.6、11.1、16.7和27.6 mmol/L)分为4组,分别用10μg/mL苯丙酸诺龙处理48 h,之后用流式细胞仪检测细胞周期;用Western blot检测nampt和FOXO1蛋白表达和用放射免疫法测定细胞胰岛素分泌。结果用苯丙酸诺龙处理48 h后,1)低糖条件下细胞G0/G1期阻滞明显改善(Pnampt表达(Pnampt表达和抑制FOXO1密切相关。

关键词：胰岛NIT-1细胞苯丙酸诺龙 nampt FOXO1 细胞周期

过表达nampt载体的构建及其对骨关节炎大鼠细胞因子的影响

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福建医药杂志 2022年第1期44卷 118-119页

作者：康荣彬吴星李炜明厦门大学附属福州第二医院关节外科福州350007

目的探讨尼克酰胺磷酸核糖转移酶(nampt)在骨关节炎中的作用机制.方法构建nampt过表达载体并转染到骨关节炎大鼠模型体内,采用Real-Time PCR检测nampt过表达效率,Western blot检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α、TGF-β的表达.结... 详细信息

目的探讨尼克酰胺磷酸核糖转移酶(nampt)在骨关节炎中的作用机制.方法构建nampt过表达载体并转染到骨关节炎大鼠模型体内,采用Real-Time PCR检测nampt过表达效率,Western blot检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α、TGF-β的表达.结果nampt过表达组的mRNA相对表达量显著高于空载组及对照组(Pnampt过表达组的IL-1β、IL-6及TNF-α的蛋白相对表达量显著高于空载组及对照组(Pnampt可能通过干预炎症细胞因子的表达来干涉骨关节炎的病程发展,抑制nampt活性可能成为治疗骨关节炎的一种新方法.

关键词： nampt 炎症因子骨关节炎

绿茶多酚对肾皮质nampt/SIRT3表达氧化应激水平影响

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营养学报 2017年第1期39卷 81-85页

作者：衣卫杰杜密英宓伟练武石塔拉应晨江滨州医学院公共卫生与管理学院营养与食品卫生学教研室烟台264003 桂林旅游学院酒店管理系桂林5410063 华中科技大学同济医学院公共卫生学院营养与食品卫生学系武汉430030

目的探讨绿茶多酚(GTPs)对正常膳食大鼠肾皮质nampt/SIRT3表达量及氧化应激水平的影响。方法雄性Wistar大鼠(体质量160~180g)20只,经适应性喂养1w后,随机分为正常对照组(CN)和绿茶多酚干预组(GTPs),每组10只。对照组自由摄食标准饲料,... 详细信息

目的探讨绿茶多酚(GTPs)对正常膳食大鼠肾皮质nampt/SIRT3表达量及氧化应激水平的影响。方法雄性Wistar大鼠(体质量160~180g)20只,经适应性喂养1w后,随机分为正常对照组(CN)和绿茶多酚干预组(GTPs),每组10只。对照组自由摄食标准饲料,绿茶多酚干预组按照体质量和进食量将绿茶多酚[200mg/(kg·bw)]添加至饲料。18w末断头处死大鼠并收集肾脏组织及全血;采用试剂盒测定血清胆固醇、甘油三酯和血糖等指标;免疫组化方法检测肾皮质4-羟基壬烯酸(4-HNE)水平;采用Western-blotting方法测定nampt和SIRT3的蛋白表达水平。结果 GTPs组大鼠血低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和肾皮质4-HNE水平低于对照组(Pnampt和SIRT3蛋白表达水平高于对照组(Pnampt和SIRT3表达,进而降低氧化应激水平。

关键词：绿茶多酚肾脏 nampt SIRT3 氧化应激

nampt基因、PON家族基因甲基化及端粒长度与脑梗死发病相关性研究

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NAMPT基因、PON家族基因甲基化及端粒长度与脑梗死发病相关性研究

作者：肖健豪郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的脑梗死是神经内科最为常见的疾病,也是国内成年人第一大死因和致残因素,从多方面寻找其致病机制并找到合适的预测指标十分重要。神经病学中常见疾病如阿尔茨海默病、帕金森病以及脱髓鞘等疾病在遗传学角度的研究较多,而对于... 详细信息

背景和目的脑梗死是神经内科最为常见的疾病,也是国内成年人第一大死因和致残因素,从多方面寻找其致病机制并找到合适的预测指标十分重要。神经病学中常见疾病如阿尔茨海默病、帕金森病以及脱髓鞘等疾病在遗传学角度的研究较多,而对于脑梗死在这方面的研究相对较少。本研究选择的烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nicotinamide phosphoribosyl transferase,nampt）和对氧磷酶（Paraoxonase,PON）家族基因被认为与脑梗死的发病有着紧密的联系,而染色体末端的端粒长度的差异和心脑血管疾病发病风险同样存在着关联。本研究旨在从表观遗传学角度评估nampt基因、PON家族基因（PON1,PON2和PON3）启动子区DNA甲基化水平及染色体末端的DNA序列即端粒长度与脑梗死患者发病的相关性,并进一步探究其作为潜在生物学标志物的可能。方法使用病例对照的研究方法,选取152例脑梗死患者为病例组,152例性别、年龄匹配的健康人为对照组,采外周静脉血并从中提取基因组DNA,使用荧光定量甲基化特异性PCR（Quantitative methylation-specific PCR,q MSP）测定两组受试者的血液nampt、PON1、PON2、PON3基因甲基化水平及检测绝对端粒长度。以甲基化参考百分比来表示每个样本的甲基化水平（Methylation reference percentage,PMR:%）来表示,进一步综合分析与脑梗死的相关性。结果nampt基因在病例和对照组样本的甲基化率均很低（病例:24.59%vs对照19.69%,P=0.551）,两组甲基化水平值无明显差异,而PON2基因在病例和对照组中的甲基化率几乎为0。PON1甲基化水平（%）在病例组中显著高于对照组（Z=-3.898,P=0.0001）。PON3甲基化水平（%）在病例组中显著低于对照组（Z=-3.098,P=0.002）。性别亚组显示PON1和PON3两组的差异均在男性中更为显著（PON1,Z=-3.786,P=0.0002;PON3,Z=-2.709,P=0.007）。病例组患者的端粒长度显著低于对照组（Z=-11.843,P＜0.0001）,无明显性别差异。将PON1和PON3两者甲基化水平相对比,在病例和对照两组中均具有很显著的相关性（病例:r=0.418,P=0.0001;对照:r=0.3,P=0.0002）。然而,并没有发现PON1、PON3甲基化水平与端粒长度的相关性（病例:r=0.023,P=0.775;对照:r=-0.157,P=0.054）。回归分析提示PON3的甲基化水平升高是脑梗死的一个保护因素[OR（95%CI）=0.979（0.96-0.999）,P=0.035)],端粒长度同样是脑梗死发病的保护因素[OR（95%CI）=0.748（0.681-0.823）,β=-0.29,P＜0.0001]。用筛查诊断能力的ROC曲线,将PON3甲基化水平和端粒长度对脑梗死的诊断能力进行分析,提示PON3甲基化对脑梗死具有很低的诊断价值（AUC=0.605,95%CI=0.541-0.669,敏感度88.7%,特异度35.5%,Cut off=17.97,P=0.002）;端粒长度是预测脑梗死发病较好的一个指标（AUC=0.894,95%CI=0.851-0.937,敏感性84.7%,特异性93.4%,Cut off=0.0473,P＜0.0001）。结论nampt、PON2启动子区甲基化水平与脑梗死发病无关;PON1启动子区高甲基化和PON3低甲基化与男性脑梗死患者发病风险有关,较短的端粒长度与脑梗死发病风险相关,这与性别差异无关。PON1和PON3甲基化可能有相互影响的作用,而PON家族基因甲基化水平与端粒长度无显著相关性。PON3甲基化水平对脑梗死有较低的诊断价值,端粒长度可作为脑梗死潜在的诊断标志物。

关键词：脑梗死 DNA甲基化 nampt PON1 PON2 PON3 端粒长度诊断标志物

nampt基因工程化外泌体制备及其抗衰老作用初探

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NAMPT基因工程化外泌体制备及其抗衰老作用初探

作者：周琦琦扬州大学

学位级别：硕士

外泌体是直径在30-150nm间的纳米级囊泡,包含蛋白质、DNA、miRNA、lncRNA等多种生物分子,通过质膜融合或与表面受体结合方式参与细胞间的物质交换和信息交流,在多种疾病的发生发展过程中发挥关键作用。研究表明,间充质干细胞外泌体作为... 详细信息

外泌体是直径在30-150nm间的纳米级囊泡,包含蛋白质、DNA、miRNA、lncRNA等多种生物分子,通过质膜融合或与表面受体结合方式参与细胞间的物质交换和信息交流,在多种疾病的发生发展过程中发挥关键作用。研究表明,间充质干细胞外泌体作为新型的理想的无细胞治疗方法,通过基因修饰或化学方式包裹药物向特定部位运输,在人和动物相关疾病的诊断和治疗方面具有较高的应用价值。nampt是NAD+补救合成途径的限速酶,在细胞周期、细胞代谢、细胞衰老及DNA损伤修复等生理活动中发挥着重要作用。nampt在哺乳动物体内有两种存在形式:细胞内和细胞外nampt（inampt和enampt）。已有研究证实细胞外囊泡内enampt具有延缓衰老和延长小鼠寿命的作用。为研究过表达nampt基因脐带间充质干细胞外泌体（hUCMSC-Exos）能否增强抗衰老作用,本研究采用转基因技术改造外泌体,得到过表达nampt基因的hUCMSC-Exos,随后与人皮肤成纤维细胞共培养和饲喂秀丽隐杆线虫,研究其抗衰老作用,为外泌体修饰及nampt基因抗衰老研究提供依据。主要研究方法和结果如下:1.过表达nampt基因的hUCMSC-Exos构建及鉴定本研究通过转基因技术构建过表达nampt基因的hUCMSC-Exos。首先,构建过表达nampt基因的重组载体。然后通过慢病毒包装、感染、药筛,得到过表达nampt基因脐带间充质干细胞（hUCMSC）细胞系,并通过RT-PCR和Western blot进行鉴定。最后,收集细胞上清,提取外泌体并检测nampt蛋白的表达量。结果表明,脐带间充质干细胞内nampt mRNA和蛋白均高表达,且外泌体内nampt蛋白也高表达,这提示过表达nampt基因的hUCMSC-Exos构建成功。2.过表达nampt基因的hUCMSC-Exos对人皮肤成纤维细胞的衰老影响本研究通过过表达nampt基因的hUCMSC-Exos与人皮肤成纤维细胞共培养,从细胞生长曲线、β-半乳糖苷酶染色、细胞划痕试验、丙二醛含量检测及衰老相关基因P16和P21 mRNA和蛋白的含量检测等实验验证过表达nampt基因的hUCMSC-Exos对人皮肤成纤维细胞的抗衰老作用。结果表明,过表达nampt基因的hUCMSC-Exos不仅促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移,还增强了其抗氧化能力和降低了其衰老相关基因的表达量。3.过表达nampt基因的hUCMSC-Exos对秀丽隐杆线虫抗衰老的影响为进一步验证过表达nampt基因的hUCMSC-Exos的抗衰老作用,利用过表达nampt基因的hUCMSC-Exos饲喂秀丽隐杆线虫,从其寿命、身体摆动频率及其体内超氧化物歧化酶和活性氧自由基等试验进行验证。结果表明,过表达nampt基因的hUCMSC-Exos不仅延长秀丽隐杆线虫的寿命,还增强了其抗氧化能力和运动能力。综上,本研究构建了 nampt基因过表达的hUCMSC细胞系,获得过表达nampt基因的hUCMSC-Exos。通过与人皮肤共培养和饲喂秀丽隐杆线虫发现,过表达nampt基因的hUCMSC-Exos具有显著的抗衰老作用,有望成为一种新型的抗衰老制剂。

关键词： nampt hUCMSC-Exos 人皮肤成纤维细胞秀丽隐杆线虫抗衰老

调控nampt对糖尿病肾病肾小球细胞表达波形蛋白的影响

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基础医学与临床 2016年第11期36卷 1505-1510页

作者：陈叶王曼伊胡婷婷黄爽冯乔王平冯乐平桂林医学院公共卫生学院广西桂林541004 桂林医学院附属医院优生遗传科广西桂林541004 桂林医学院生物技术学院广西桂林541004

目的探讨肾小球细胞内源性nampt对波形蛋白(vimentin)表达的影响和作用机制。方法用C57/BL6糖尿病肾病(DN)小鼠肾脏组织经包埋、固定、切片,经免疫共聚焦技术分析内源性nampt和vimentin蛋白的表达和定位关系;在200 mmol/L葡萄糖(高糖)... 详细信息

目的探讨肾小球细胞内源性nampt对波形蛋白(vimentin)表达的影响和作用机制。方法用C57/BL6糖尿病肾病(DN)小鼠肾脏组织经包埋、固定、切片,经免疫共聚焦技术分析内源性nampt和vimentin蛋白的表达和定位关系;在200 mmol/L葡萄糖(高糖)培养肾小球膜HBZY-1细胞至第5 d时,分别用10μmol/L FK866和1 mmol/L NMN干预,通过免疫荧光和免疫印迹方法检测内源性nampt对NF-κB、Sirt1和vimentin表达;按高糖不同培养时间(24、48、72、96、120和144 h)分组,检测细胞nampt、NF-κB和Sirt1表达时间效应关系。结果 1)DN组小鼠肾小球明显萎缩,肾小球细胞内nampt、vimentin蛋白表达明显增加(Pnampt和NF-κB表达明显增加(Pnampt能够通过增强NF-κB和抑制Sirt1信号途径,影响肾小球内vimentin蛋白表达。

关键词：糖尿病肾病 nampt NF-κB 沉默子Sir2同源体1 波形蛋白

nampt/Visfatin对内皮祖细胞的调节作用

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NAMPT/Visfatin对内皮祖细胞的调节作用

作者：杜慧第二军医大学

学位级别：硕士

烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase, nampt)，又名内脏脂肪素(visfatin)，是一种由脂肪细胞分泌的细胞因子。nampt能够催化生成烟酰胺单核苷酸（Nicotinamide mononucleotide，NMN），NMN继而被烟酰胺单核苷酸腺嘌呤转移酶（Nicotinamide momonucleotide adenylyltransferase，Nmnat）转化为NAD+。nampt是NAD+合成第一步的限速酶。内皮祖细胞是内皮细胞的前体细胞，在胚胎或者成年机体缺血、创伤等病理状态下参与血管的生成，与缺血部位新生血管形成、重塑密切相关。国内外众多实验结果和临床证据表明，内皮祖细胞在缺血后血管新生的过程中发挥了极其重要的作用，循环系统中的内皮祖细胞数量可以预测心脑血管事件和糖尿病的发生[1-3]。注入外源内皮祖细胞可增加缺血心肌的血管新生，改善心肌梗死后的心室功能[4-5]。内皮祖细胞移植的开展为促进缺血性疾病局部血管新生、改善缺氧提供了新的手段，一经出现就受到了医学界的广泛关注，成为治疗严重缺血性疾病的手段之一，但移植后的内皮祖细胞靶向性较差导致内皮祖细胞利用率的低下，限制了内皮祖细胞的广泛应用。因此，发现内皮祖细胞在体内趋化的途径，增加内皮祖细胞在体内的归巢已成为目前研究的热点。然而，大量的研究证据也揭示了，在内皮祖细胞介导的血管新生和伤口愈合的过程中，还有其他内源性调节因子的参与[6-7]。众所周知， NAD+是生命体内200多种氧化还原反应的辅酶，是电子传递链和能量代谢过程中非常重要的一个辅因子，参与能量传递过程中的众多信号转导通路[8]。在细胞的很多生理过程中如Ca2+动员、基因稳定、凋亡、代谢、应激、老化等起着至关重要的作用。nampt是哺乳动物NAD+合成途径的限速酶，调节着细胞内总的NAD+水平和线粒体中的NAD+水平。大量研究表明，细胞内外均存在的nampt，在调节细胞存活、免疫应答、昼夜节律和代谢异常的过程中起到了关键作用[9-13]。此外，我们实验室在之前的工作中已经证实nampt在脑卒中中具有神经元保护作用。因此，我们推测nampt可能与缺血后内皮祖细胞的功能发挥有关。为此，我们设计了本论文中的一系列实验来验证这一设想。在整体动物水平，我们分别利用nampt的化学抑制剂FK866，以及过表达nampt的转基因动物，研究干预nampt对内皮祖细胞功能的影响。首先，我们通过对普通C57BL/6J小鼠实施右下肢股动脉结扎手术，造成下肢缺血模型，再腹腔注射FK866（nampt酶特异性抑制剂）数天，与手术组和假手术组相比，以骨髓中和外周血中内皮祖细胞的数量作为检测指标，验证nampt对内皮祖细胞的生成和其向外周血中的动员有无影响，并对结果进行统计分析。转基因动物我们采用了nampt过表达小鼠和nampt酶突变体过表达小鼠，通过对转基因小鼠实施右下肢股动脉结扎手术，造成下肢缺血模型，与野生型小鼠手术组相比，以骨髓中和外周血中内皮祖细胞的数量，缺血下肢血流量作为检测指标，验证nampt对内皮祖细胞的生成和其向外周血中的动员有无影响，并对结果进行统计分析。在细胞水平，我们利用免疫磁珠分选细胞的方法，从小鼠骨髓细胞中分离得到了内皮祖细胞，并加以体外培养，用FK866（nampt酶特异性抑制剂）孵育培养的内皮祖细胞，观察其增殖、分化、迁移能力及成管型性。此外，我们也采用同样的内皮祖细胞提取方法提取了nampt过表达小鼠和nampt酶突变体过表达小鼠骨髓中的内皮祖细胞，加以体外培养，观察并比较这两种内皮祖细胞增殖、分化、迁移能力和成管型性，研究nampt对内皮祖细胞增殖、分化、迁移和成管性等生物学功能的影响。动物实验结果显示，用FK866抑制nampt活性后，由于缺血引发的内皮祖细胞在骨髓中的生成和向外周血中的动员被抑制了。此外，转基因小鼠部分的实验结果显示，与野生型小鼠相比，nampt过表达小鼠血液和骨髓中的内皮祖细胞数量显著增加，而nampt酶突变体小鼠与野生型小鼠血液和骨髓中的内皮祖细胞数量基本接近，这些现象说明过表达nampt能够促进内皮祖细胞在骨髓中的生成和向外周血的动员。在细胞实验中我们也发现，用FK866抑制NAD+后，降低了内皮祖细胞的增殖、动员，破坏了内皮祖细胞的成管。而nampt过表达内皮祖细胞的增殖和迁移能力增强，小管形成增多。在nampt酶突变体过表达内皮祖细胞中，则没有观察到这些现象。本课题首次就nampt对内皮祖细胞功能的调节作用进行了研究，通过整体动物部分实验和细胞水平实验，互为佐证，探索nampt在内皮祖细胞功能发挥中所起的作用。所有这些结果表明NAD+，和NAD+合成的限速酶nampt，是缺血后内皮祖细胞调节的血管新生过程中所必需的。

关键词： nampt 内皮祖细胞血管新生缺血性疾病