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circPTPN4 regulates myogenesis via the miR-499-3p/NAMPT axis

Journal of Animal Science and Biotechnology 2022年第3期13卷 682-696页

作者： Bolin Cai Manting Ma Zhen Zhou Shaofen Kong Jing Zhang Xiquan Zhang Qinghua Nie State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropical Agro-Bioresources Lingnan Guangdong Laboratory of AgricultureCollege of Animal ScienceSouth China Agricultural UniversityGuangzhou 510642GuangdongChina Guangdong Provincial Key Lab of Agro-Animal Genomics and Molecular Breeding and Key Laboratory of Chicken GeneticsBreeding and ReproductionMinistry of AgricultureGuangzhou 510642GuangdongChina

Background:Circular RNAs(circ RNAs)are a novel class of endogenous nc RNA,which widely exist in the transcriptomes of different species and tissues.Recent studies indicate important roles for circ RNAs in the regulation of gene expression by acting as competing endogenous RNAs(ce RNAs).However,the specific role of circ RNAs in myogenesis is still poorly understood.In this study,we attempted to systematically identify the circ RNAs involved in myogenesis and analyze the biological functions of circ RNAs in chicken skeletal muscle development.Results:In total,532 circ RNAs were identified as being differentially expressed between pectoralis major(PEM)and soleus(SOL)in 7-week-old Xinghua chicken.Among them,a novel circ RNA(novel_circ_002621),generated by PTPN4 gene,was named circ PTPN4 and identified.circ PTPN4 is highly expressed in skeletal muscle,and its expression level is upregulated during myoblast differentiation.circ PTPN4 facilitates the proliferation and differentiation of myoblast.Moreover,circ PTPN4 suppresses mitochondria biogenesis and activates fast-twitch muscle phenotype.Mechanistically,circ PTPN4 can function as a ce RNA to regulate NAMPT expression by sponging mi R-499-3p,thus participating in AMPK signaling.Conclusions:circ PTPN4 functions as a ce RNA to regulate NAMPT expression by sponging mi R-499-3p,thus promoting the proliferation and differentiation of myoblast,as well as activating fast-twitch muscle phenotype.

关键词： Chicken Circ PTPN4 Circular RNA MiR-499-3p Myogenesis NAMPT The transformation of myofiber

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NAMPT-targeting PROTAC promotes antitumor immunity via suppressing myeloid-derived suppressor cell expansion

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Acta Pharmaceutica Sinica B 2022年第6期12卷 2859-2868页

作者： Ying Wu Congying Pu Yixian Fu Guoqiang Dong Min Huang Chunquan Sheng School of Pharmacy Second Military Medical UniversityShanghai 200433China State Key Laboratory of Drug Research Shanghai Institute of Materia MedicaChinese Academy of SciencesUniversity of Chinese Academy of SciencesShanghai 201203China

Nicotinamide phosphoribosyl transferase(NAMPT) is considered as a promising target for cancer therapy given its critical engagement in cancer metabolism and inflammation.However,therapeutic benefit of NAMPT enzymatic inhibitors appears very limited,likely due to the failure to intervene nonenzymatic functions of NAMPT.Herein,we show that NAMPT dampens antitumor immunity by promoting the expansion of tumor infiltrating myeloid derived suppressive cells(MDSCs) via a mechanism independent of its enzymatic activity.Using proteolysis-targeting chimera(PROTAC) technology,PROTAC A7 is identified as a potent and selective degrader of NAMPT,which degrades intracellular NAMPT(iNAMPT) via the ubiquitin-proteasome system,and in turn decreases the secretion of extracellular NAMPT(eNAMPT),the major player of the non-enzymatic activity of NAMPT.In vivo,PROTAC A7 efficiently degrades NAMPT,inhibits tumor infiltrating MDSCs,and boosts antitumor efficacy.Of note,the anticancer activity of PROTAC A7 is superior to NAMPT enzymatic inhibitors that fail to achieve the same impact on MDSCs.Together,our findings uncover the new role of enzymatically-independent function of NAMPT in remodeling the immunosuppressive tumor microenvironment,and reports the first NAMPT PROTAC A7 that is able to block the pro-tumor function of both iNAMPT and eNAMPT,pointing out a new direction for the development of NAMPT-targeted therapies.

关键词： NAMPT Non-enzymatic function eNAMPT Cancer MDSC PROTAC Tumor immunity Immunotherapy

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NAMPT和NAPRT在黑素瘤中的表达及意义

NAMPT和NAPRT在黑素瘤中的表达及意义

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作者：付一南新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:初步探讨烟酰胺磷酸核糖基转移酶（NAMPT）和烟酸酯磷酸核糖基转移酶（NAPRT）在皮肤恶性黑色素瘤中的表达情况,以及其与临床病理资料之间的关系。方法:蛋白水平上,本研究通过选取2018年10月至2021年10月间于新疆医科大学第一附属... 详细信息

目的:初步探讨烟酰胺磷酸核糖基转移酶（NAMPT）和烟酸酯磷酸核糖基转移酶（NAPRT）在皮肤恶性黑色素瘤中的表达情况,以及其与临床病理资料之间的关系。方法:蛋白水平上,本研究通过选取2018年10月至2021年10月间于新疆医科大学第一附属医院皮肤科接受手术切除治疗,且术后病理报告确诊的皮肤恶性黑色素瘤患者的肿瘤组织石蜡标本60例为实验组,以对应的瘤旁组织作为实验对照组。通过免疫组织化学检测法,检测实验组和对照组中NAMPT和NAPRT蛋白的阳性表达率,然后通过分析患者的临床病理资料,揭示二者之间的相关性。转录水平上,通过对同期接受手术治疗的3组皮肤黑色素瘤新鲜肿瘤组织标本及对应瘤旁组织标本进行二代高通量转录组测序,定量分析NAMPT和NAPRT的m RNA表达水平在肿瘤组和瘤旁组中的差异。同时通过生物信息学技术分析差异基因在黑色素瘤肿瘤组和瘤旁组中所涉及到的生物学过程、通路富集分析等。从转录组和蛋白两个水平对NAMPT和NAPRT在皮肤黑色素瘤中的意义进行初探。结果:免疫组化结果所示,NAMPT和NAPRT在皮肤黑色素瘤肿瘤组织及瘤旁组织中均有表达。NAMPT在皮肤黑色素瘤肿瘤组织中的表达水平高于其在瘤旁组织中的表达水平（P＜0.05）。NAPRT在皮肤黑色素瘤肿瘤组织中的表达水平高于瘤旁组织（P＜0.05）。NAPRT的蛋白的阳性表达与皮肤黑色素瘤的最大直径有显著差异（P＜0.05）。而NAMPT的蛋白水平与皮肤黑色素瘤患者的性别、年龄、发病部位、溃疡、侵袭性等均无显著差异（P＞0.05）。NAMPT和NAPRT在皮肤黑色素瘤中的表达呈正相关（r=0.187,P＜0.05）。转录组测序结果显示,NAMPT的转录表达水平在皮肤黑色素瘤肿瘤组中高于瘤旁组中的表达水平。NAPRT的转录水平在皮肤黑色素瘤的肿瘤组中与瘤旁组中的表达水平不一致。结果表明,NAMPT在基因转录和蛋白表达方面具有一致性,但在NAPRT中,其基因转录和蛋白的表达却存在差异。生物信息学分析显示转录组测序结果里黑色素瘤肿瘤组和瘤旁组差异基因GO功能的BP富集主要为:免疫系统过程、防御反应等。CC富集主要为:DNA包装复合物。MF的富集方式是:与CXCR3的趋化因子受体结合。KEGG通路富集结果主要富集于自噬通路和有丝分裂等通路。结论:NAMPT和NAPRT在皮肤黑色素瘤中的表达水平异常与皮肤黑色素瘤的发生发展密切相关,提示其均参与了皮肤黑色素瘤的发生发展,为黑色素瘤的诊治提供新的线索。

关键词： NAMPT NAPRT 皮肤黑色素瘤转录组学免疫组化

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NAMPT对ERK1/2的调控在病理性心肌肥大中的作用研究

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中国药理学通报 2021年第4期37卷 490-497页

作者：陈建杏王盼霞胡粤怀路静刘培庆中山大学药学院广东广州510006

目的研究烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)调控细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)在病理性心肌肥大中的作用和机制。方法采用苯肾上腺素(PE)刺激原代心肌细胞24 h,在细胞水平上建立心肌细胞肥大模型;SD大鼠连续3周皮下注射ISO,或进行腹主动脉结... 详细信息

目的研究烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)调控细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)在病理性心肌肥大中的作用和机制。方法采用苯肾上腺素(PE)刺激原代心肌细胞24 h,在细胞水平上建立心肌细胞肥大模型;SD大鼠连续3周皮下注射ISO,或进行腹主动脉结扎(AAC)8周诱导心肌肥大或心衰模型。采用Western blot检测蛋白变化;RT-qPCR检测mRNA变化;采用质粒瞬时转染过表达NAMPT;而加入干扰RNA降低其表达,或使用FK866来抑制其酶活性。结果在细胞水平成功建立心肌肥大模型,在整体动物水平成功诱导心肌肥大和心衰模型,均发现NAMPT的mRNA和蛋白表达水平上调;过表达NAMPT可缓解PE导致的NAD^(+)含量降低、ERK1/2磷酸化水平增加及心肌细胞肥大反应;敲低NAMPT或抑制其酶活性则显示相反的效应。结论NAMPT可能通过上调NAD^(+)并抑制ERK1/2磷酸化,从而发挥抗心肌肥大的作用。

关键词： PE ISO 心肌肥大 NAMPT NAD+ ERK1/2磷酸化

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基于NAMPT干预单核细胞的极化调控研究清络饮治疗佐剂性关节炎大鼠的原理

基于NAMPT干预单核细胞的极化调控研究清络饮治疗佐剂性关节炎大...

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作者：王雯皖南医学院

学位级别：硕士

目的:在类风湿性关节炎(RA)中,NAMPT可以调节细胞的代谢和免疫应答,从而影响RA的发病与治疗。清络饮(QLY)是李济仁教授治疗痹病的经验方,前期研究表明长期上调NAMPT会加重炎症性关节炎,而单核细胞也在RA中具有多方面作用。因此本文主要... 详细信息

目的:在类风湿性关节炎(RA)中,NAMPT可以调节细胞的代谢和免疫应答,从而影响RA的发病与治疗。清络饮(QLY)是李济仁教授治疗痹病的经验方,前期研究表明长期上调NAMPT会加重炎症性关节炎,而单核细胞也在RA中具有多方面作用。因此本文主要探讨清络饮(QLY)经NAMPT干预单核细胞极化对佐剂性关节炎大鼠模型的影响。方法:取18只雄性健康SD大鼠,将其随机平均分配为正常组(Normal)、模型组(AIA)和清络饮组(QLY),每组均分为6只。在大鼠左后肢脚垫皮内注射0.1 m L完全弗氏佐剂诱导SD大鼠发生关节炎,建立佐剂性关节炎大鼠模型。在成功造模后就开始对三组大鼠进行灌胃,QLY组接受相应剂量的治疗药物,而Normal组与AIA组接受同等剂量的生理盐水,接连进行灌胃30日。期间观察大鼠一般情况;麻醉并处死大鼠后,大鼠踝关节的组织形态学通过苏木精伊红染色法(HE)进行观察,大鼠脾脏组织中的i NOS和Arg-1表达通过免疫组化法(IHC)观察。大鼠血清中IL-1β和TNF-α表达水平,脾组织中GM-CSF和Arg-1的表达水平通过酶联免疫吸附法(ELISA)观察。流式细胞术分析大鼠外周血CD4IFN-γ及CD68CD86的表达。体外实验:1.体外分离培养外周血单个核细胞(PBMC),给予LPS((1μg/m L))和10%QLY含药血清刺激,通过ELISA法检测IL-1β、IL-6、IL-10、Arg-1的表达和NAD的表达,WB法检测i NOS和Arg-1的蛋白表达;2.体外分离培养正常大鼠脾淋巴细胞,分别给予LPS(1μg/m L)、10%QLY含药血清和FK866(100 nmol/L)的刺激,通过流式细胞术检测CD4IFN-γ及CD68CD86的表达,并用ELISA法检测上清液中IL-1β、TNF-α、IFN-γ的表达和NAD的表达;3.体外培养单核细胞,分别给予NAMPT的抑制剂FK866(100 nmol/L)和NMN(5 mg/m L)刺激,运用ELISA法检测IL-1β和IL-10的表达,WB法检测Arg-1、i NOS和NAMPT的蛋白表达;4.分离培养正常成纤维样滑膜细胞,并与正常单核细胞和受10%AIA大鼠血清刺激的单核细胞共培养,WB法检测MMP3和p65的蛋白表达;5.在4的基础上,叠加10%QLY含药血清刺激,再次通过WB法检测MMP3和p65蛋白表达;6.将单核细胞与FLS细胞共培养,分别给予单核细胞LPS(1μg/m L)、FK866(100 nmol/L)、10%QLY含药血清和10%QLY含药血清+NMN(5 mg/m L)刺激,运用ELISA法检测FLS细胞上清液IL-1β、IL-6和IL-10的表达、WB法检测FLS细胞NAMPT、MMP3、JNK和p65的蛋白表达。结果:1、体内实验表明:与Normal组相比,AIA模型组的SD大鼠体重出现减轻,足爪关节肿胀明显,免疫器官胸腺和脾脏组织肿大,炎症评分升高;大鼠关节的HE染色结果表明:同Normal组相比,AIA组大鼠的关节被广泛炎性浸润,软骨和软骨下骨都受到了严重的侵蚀,并且出现血管翳现象;病理组化结果表明:AIA组大鼠的脾组织中i NOS的表达较Normal组升高,Arg-1的表达下调;ELISA结果显示:AIA模型组的血清中IL-1β、TNF-α表达水平较Normal组有所升高;AIA组大鼠脾脏中GM-CSF表达水平也升高、而Arg-1表达降低;外周血中AIA组大鼠的M1巨噬细胞和Th1细胞比例升高;同AIA组比较,经QLY治疗后,大鼠体重、胸腺和脾脏组织形态逐渐恢复正常,足爪关节肿胀减轻,关节炎评分降低,HE染色表明骨关节未出现大量滑膜浸润,脾组织中i NOS出现低表达,Arg-1则出现相反趋势,血清中IL-1β、TNF-α和脾脏中GM-CSF表达下调,脾脏中Arg-1表达增加,外周血中CD4IFN-γ和CD68CD86比例降低。2、体外实验:ELISA结果表明,同正常组PBMC相比,经LPS刺激后的PBMC中IL-1β、IL-6、GM-CSF和NAD显著升高,IL-10、Arg-1明显降低,经10%QLY含药血清治疗后炎症细胞因子和NAD降低,抑炎细胞因子升高;WB法呈现出相同的结果;同Normal组相比,给予LPS刺激后的脾淋巴细胞中CD4IFN-γ和CD68CD86细胞比例增加,经10%QLY含药血清和NAMPT抑制剂FK866刺激后,CD4IFN-γ和CD68CD86细胞比例明显降低,ELISA结果表明,同Normal组相比,LPS组脾淋巴细胞上清液中IL-1β、TNF-α、IFN-γ表达增高,NAD的表达也增加,QLY组和FK866组的IL-1β、TNF-α、IFN-γ表达下调,NAD的表达也出现降低,;ELISA法检测发现,同Normal组相比,经LPS刺激的单核细胞IL-1β表达升高,IL-10表达降低,

关键词：清络饮类风湿性关节炎 NAMPT 单核细胞 FK866

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烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）在慢性乙型肝炎和肝癌中的免疫调节作用

烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）在慢性乙型肝炎和肝癌中的免疫调...

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作者：常晴山东大学

学位级别：硕士

研究背景慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染引起的慢性进展性疾病。根据特定的生化、血清学和病毒学特征,CHB感染的自然病程被分为5个阶段:免疫耐受期(immune tolerant,IT)、免疫激活... 详细信息

研究背景慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染引起的慢性进展性疾病。根据特定的生化、血清学和病毒学特征,CHB感染的自然病程被分为5个阶段:免疫耐受期(immune tolerant,IT)、免疫激活期(immune active,IA)、免疫控制期、乙型肝炎病毒e抗原阴性慢性肝炎期及功能性治愈。CHB感染状态和疾病进程取决于病毒复制与宿主免疫调控之间的相互作用,持续高载量病毒抗原刺激会导致淋巴细胞亚群功能衰竭,进而引起机体抗病毒功能的缺陷和持续的病毒感染。乙型肝炎与肝癌的发病密切相关,是肝癌发生的高危因素,80%以上的肝癌患者合并患有乙肝。肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的肝癌类型,居全球癌症死亡率的第2位。大部分肝癌患者初诊时已处于中晚期,失去了手术机会。近年来,以免疫抑制检查点抑制剂(immune checkpoint blockade,ICB)为代表的免疫疗法为实体肿瘤的治疗提供了新的思路。免疫细胞在增殖、分化及执行效应功能的过程中会发生代谢重编程,其中,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)代谢是决定NK细胞和T细胞激活或效应功能的关键因素。激活的NK细胞和T细胞NAD代谢增强,提示NAD代谢在免疫调节中发挥重要作用。烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyl transferase,NAMPT)是 NAD 挽救合成途径中的限速酶,其可通过影响NAD表达调控细胞代谢。近期研究报道,NAMPT可通过调节有氧糖酵解促进HBV复制和肝细胞增殖,并可将肿瘤浸润性T淋巴细胞的免疫抑制表型转变为免疫激活表型。然而,NAMPT在CHB及HCC中的表达特征及其是否影响免疫调控尚不明确。第一部分:NAMPT通过调节免疫细胞功能增强抗病毒免疫研究目的本研究旨在通过单细胞测序技术、生物信息学分析及流式细胞术(flow cytometry,FCM)探讨NAMPT在CHB患者抗病毒免疫中的调控作用。研究方法1.单细胞数据集的下载和下游分析从GEO数据库中下载CHB单细胞数据集GSE182159并导入R软件(version 4.0.2)分析,通过Seurat包质控过滤,筛选含有600-10,000个基因且线粒体基因不超过10%的高质量细胞,使用FindVariableFeatures函数进行数据降维并提取主成分,使用Seurat包中的FindClusters函数进行聚类分析。基于既往文献报道和人工核查对细胞亚群进行注释,使用RunUAMP对不同感染病程和感染来源的细胞分群结果进行可视化。2.各组特征基因的鉴定及GSVA通路富集分析使用FindAllMarkers函数分别提取健康对照(healthy control,HC)、IT期、IA期及功能性治愈的各组特征基因。对处理后的单细胞RNA测序(single cell RNA-seq,scRNA-seq)数据应用AUCell,并使用 AUC软件包中的AUCellalcAUC函数计算每个细胞的通路富集评分。3.基于NAD代谢的共识聚类分析和单样本基因集富集分析下载GSE83148数据集并对数据进行归一化处理,提取NAD代谢相关基因的表达值。使用ConsensusClusterPlus包和k-means算法,根据NAD代谢相关基因的表达对样本进行聚类分群。同时,以NAMPT表达的中位数为截断值,将样本分为高、低表达组,利用单样本基因集富集分析(single sample gene set enrichment analysis,ssGSEA)比较聚类分群之间、NAMPT高表达组和低表达组之间免疫细胞浸润丰度的差异。4.NAMPT表达水平的检测及其与临床指标相关性分析收集65例初诊为CHB的患者外周血样本,通过FCM检测不同病程CHB患者免疫细胞中NAMPT的表达水平。收集CHB患者临床信息,分析免疫细胞中NAMPT表达与临床指标的相关性。5.NAMPT表达与功能性细胞因子分泌的关联性分析根据 NAMPT 的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)将NAMPT 分为 NAMPT-high MFI 和 NAMPT-low MFI 两组,比较两组中 CD8+T细胞、CD4+T细胞、CD56bright NK细胞、CD56dim NK细胞和NKT细胞功能性细胞因子表达情况。6.体外细胞实验的验证提取并培养外周血单个核细胞,在不同浓度的β-烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)刺激下,检测 CD8+T 细胞、CD4+T细胞、NK细胞和NKT细胞分泌功能性细胞因子的能力。研究结果1.外周血和肝内各细胞亚群的

关键词：单细胞测序慢性乙型肝炎 NAD代谢 NAMPT 细胞因子肝细胞癌生物信息学免疫浸润肿瘤免疫微环境

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烟酰胺磷酸核糖转移酶在扩张型心肌病中的表达及机制初探

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四川大学学报（医学版） 2018年第1期49卷 48-53页

作者：窦青瑜周斌彭瑛张奎代小惠宋雅平饶莉四川大学华西医院老年医学中心成都610041 四川大学华西第二医院分子与转化实验室成都610041 四川大学华西医院心内科成都610041 四川大学华西基础与法医学院法医系成都610041

目的探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase,NAMPT)在扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)中的表达及其与DCM发生发展的关系。方法收集2010~2013年期间经四川大学华西医院确诊的131例中国汉族DCM患者外周血,随机选择在四川大学华西医院体检中心体检的中国汉族健康人137例作为对照组。利用ELISA和Real time-PCR检测DCM组及对照组各样本NAMPT血浆蛋白及细胞内NAMPT mRNA表达水平。同时构建细胞内NAMPT过表达及空质粒转染大鼠心肌细胞系H9C2细胞,通过WST-1、细胞周期及流式细胞术检测NAMPT对H9C2细胞增殖、H2O2诱导氧化应激前后细胞凋亡的影响。结果DCM组血浆细胞外NAMPT蛋白水平高于对照组(PNAMPT蛋白水平差异有统计学意义(P均NAMPT mRNA水平低于对照组(PNAMPT过表达质粒后H9C2细胞增殖能力较空质粒组显著增强,S期比例增加。直接转染或转染后用H2O2诱导氧化应激前后,NAMPT过表达组H9C2存活细胞比例高于空质粒组,晚期凋亡及坏死细胞比例降低。结论细胞外NAMPT血浆蛋白水平的高表达与外周血细胞内NAMPT mRNA水平的低表达是DCM的生物学特征之一。细胞内NAMPT降低可能是DCM发病机制中的重要因素。

关键词： NAMPT DCM H9C2 凋亡增殖

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miR-146a impedes the anti-aging effect of AMPK via NAMPT suppression and NAD^(+)/SIRT inactivation

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Signal Transduction and Targeted Therapy 2022年第4期7卷 1181-1193页

作者： Hui Gong Honghan Chen Peng Xiao Ning Huang Xiaojuan Han Jian Zhang Yu Yang Tiepeng Li Tingting Zhao Haoran Tai Weitong Xu Gongchang Zhang Chuhui Gong Ming Yang Xiaoqiang Tang Hengyi Xiao The Lab of Aging Research National Clinical Research Center for GeriatricsState Key Laboratory of BiotherapyWest China HospitalSichuan University1 Keyuan 4 RoadGaopeng AvenueChengdu 610093China Key Laboratory of Birth Defects and Related Diseases of Women and Children of MOE State Key Laboratory of BiotherapyWest China Second University HospitalSichuan UniversityChengdu 610041China

Nicotinamide adenine dinucleotide(NAD^(+))is indispensable for the anti-aging activity of the sirtuin(SIRT)family enzymes.AMPactivated protein kinase(AMPK)upregulates NAD^(+)synthesis and SIRT activity in a nicotinamide phosphoribosyltransferase(NAMPT)-dependent manner.However,the molecular mechanisms that affect AMPK-driven NAMPT expression and NAD^(+)/SIRT activation remain unclear.In this study,we tried to identify senescence-associated microRNAs(miRNAs)that negatively regulate the cascade linking AMPK and NAMPT expression.miRNA-screening experiments showed that the expression of miR-146a increased in senescent cells but decreased following AMPK activation.Additionally,miR-146a overexpression weakened the metforminmediated upregulation of NAMPT expression,NAD^(+)synthesis,SIRT activity,and senescence protection,whereas treatment with the miR-146a inhibitor reversed this effect.Importantly,these findings were observed both in vitro and in vivo.Mechanistically,miR146a directly targeted the 3′-UTR of NAMPT mRNA to reduce the expression of NAMPT.AMPK activators metformin and 5-aminoimidazole-4-carboxamide(AICAR)hindered miR-146a expression at the transcriptional level by promoting IκB kinase(IKK)phosphorylation to attenuate nuclear factor-kappaB(NF-κB)activity.These findings identified a novel cascade that negatively regulates the NAD^(+)/SIRT pathway by suppressing miR-146a-mediated NAMPT downregulation.Furthermore,our results showed that miR-146a impedes the anti-aging effect of AMPK.This mutual inhibitory relationship between miR-146a and AMPK enriches our understanding of the molecular connections between AMPK and SIRT and provides new insight into miRNA-mediated NAD^(+)/SIRT regulation and an intervention point for the prevention of aging and age-related diseases.

关键词： miR NAMPT prevention

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NAMPT在延缓平滑肌细胞衰老和表型转化中对腹主动脉瘤的保护作用

NAMPT在延缓平滑肌细胞衰老和表型转化中对腹主动脉瘤的保护作用

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作者：杨航真华南理工大学

学位级别：硕士

目的:腹主动脉瘤(Abdominal aortic aneurysms,AAA)是一种与机体衰老密切相关的血管重症。血管衰老和血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化在瘤体发展过程中发挥着重要的作用。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide ... 详细信息

目的:腹主动脉瘤(Abdominal aortic aneurysms,AAA)是一种与机体衰老密切相关的血管重症。血管衰老和血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化在瘤体发展过程中发挥着重要的作用。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)与机体衰老密切相关,在多种与衰老相关的疾病中扮演着重要角色。烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nicotinamide phosphoribosyltransferase,NAMPT)是NAD补救合成途径的限速酶,通过调节NAD合成的水平影响机体衰老。NAMPT可通过NAD影响VSMC活力,调控细胞衰老。但NAMPT在AAA中发挥怎样的作用尚未有见报道。因此,本研究旨在验证AAA来源的组织和细胞中存在衰老和细胞表型转化现象,研究激动NAMPT能否影响VSMC的衰老和表型转化,为临床干预AAA的发生发展提供新的治疗靶点和理论依据。方法:(1)外科手术获取AAA来源和供体来源的主动脉组织,通过SA-β-gal染色、HE染色、Masson染色和免疫荧光组织化学染色研究二者病理区别。通过免疫荧光技术鉴定组织贴壁法获取的VSMC。利用SA-β-gal染色、卡巴胆碱试验、Western Blot检测两种不同来源的细胞衰老蛋白p21、p16及细胞收缩表型相关蛋白:α-平滑肌肌动蛋白(Alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、钙调节蛋白(Calponin)的表达水平。同时在血管紧张素Ⅱ(Angiotensin,AngⅡ)体外诱导的AAA细胞模型中进一步验证该结果。(2)通过ELISA、免疫组织化学和Western Blot实验研究人体血清、细胞和组织中NAMPT水平的差异。利用Western Blot、SA-β-gal染色、NAD含量检测等手段研究在AngⅡ诱导的细胞中加入NAMPT激动剂P7C3后各组细胞中收缩表型相关蛋白和衰老相关蛋白的表达水平及NAD含量变化。(3)在AAA小鼠中腹腔注射P7C3,28天后对各组小鼠进行腹部B超检查主动脉的扩张情况。HE染色、SA-β-gal染色比较各组小鼠主动脉的病理和衰老情况;利用NAD含量检测比较各组小鼠血清中NAD的水平差异。(4)通过Western Blot研究AAA-VSMC及AngⅡ组细胞中SIRT1、肌钙蛋白(Myocardin,MYOCD)及血清应答因子(Serum response factor,SRF)的表达水平变化。Western Blot法、SA-β-gal染色和NAD含量检测研究加入SIRT1抑制剂EX527后各组细胞内衰老相关蛋白、收缩表型相关蛋白及NAD含量的变化。(5)Western Blot法、SA-β-gal染色法和NAD含量检测研究在AAA-VSMC中加入P7C3后各组收缩表型相关蛋白和衰老相关蛋白的表达水平及NAD含量变化。结果:(1)AAA来源的组织中出现衰老和细胞表型转化的现象。另一方面,在AAA来源的细胞和体外Ang II诱导的模型中均存在细胞SA-β-gal阳性率上升、收缩能力下降、衰老及收缩相关蛋白p21、p16、α-SMA、Calponin表达水平下调的现象。(2)相较于CTRL组,AAA患者来源的血清和组织中NAMPT含量降低,细胞中NAD和NAMPT水平下降。在AngⅡ诱导的细胞模型中进一步验证了该结果。在AngⅡ诱导的细胞中加入P7C3后,细胞内NAD水平上调,SA-β-gal蓝色阳性率下降、衰老及收缩相关蛋白的表达水平升高。(3)在AAA模型鼠中注射P7C3后,小鼠主动脉扩张程度弱于AAA组,血管老化现象减轻,小鼠体内NAD水平上升。(4)NAD是SIRT1的唯一底物,SIRT1可调节VSMC的衰老和表型转化;MYOCD、SRF是VSMC收缩表型的调节因子。AAA和AngⅡ处理后的细胞中,SIRT1、MYOCD及SRF的表达水平较CTRL组下降。SIRT1抑制剂EX527处理经P7C3干预的AngⅡ组细胞后,相较于P7C3处理后,细胞衰老且细胞收缩相关蛋白的表达量降低。(5)在AAA-VSMC中加入P7C3可恢复细胞衰老现象,下调衰老相关蛋白p21、p16的表达,细胞内收缩因子α-SMA、Calponin蛋白表达水平上升。结论:激动NAMPT可增加NAD的含量,调节SIRT1的表达,从而影响MYOCD-SRF-CAr G三元复合物的功能,维持VSMC的收缩表型,改善VSMC的衰老,进而延缓AAA的发生发展。

关键词：腹主动脉瘤血管平滑肌细胞 NAMPT 衰老表型转化

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通络醒脑泡腾片经NAMPT/SIRT1/FOXO3途径改善SAMP8小鼠的学习记忆

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中成药 2017年第4期39卷 684-689页

作者：魏江平付文君陈欢郑航徐世军四川省中药资源系统研究与开发利用国家重点实验室培育基地四川成都611137 成都中医药大学药学院四川成都611137

目的考察通络醒脑泡腾片(川芎、当归和黄芩)对SAMP8小鼠学习记忆的影响,探究其改善认知功能作用机制。方法将SAMP8小鼠药物干预60 d,采用Morris水迷宫评价其认知变化,随后采用ELISA法和免疫组化法分别测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、... 详细信息

目的考察通络醒脑泡腾片(川芎、当归和黄芩)对SAMP8小鼠学习记忆的影响,探究其改善认知功能作用机制。方法将SAMP8小鼠药物干预60 d,采用Morris水迷宫评价其认知变化,随后采用ELISA法和免疫组化法分别测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、羰基化蛋白、NAD^+/NADH和海马尼克酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)、沉默调节蛋白1(SIRT1)和叉头蛋白3(FOXO3)的表达。结果通络醒脑泡腾片能够缩短SAMP8小鼠在隐藏平台实验中第5天的逃避潜伏期和显著增加平台象限所占时间百分比,明显增加SAMP8小鼠在空间探索实验中进入目标象限次数;能够明显提升SAMP8小鼠脑组织SOD活力和NAD^+/NADH比值及降低羰基化蛋白浓度;能够显著上调SAMP8小鼠海马NAMPT和SIRT1的表达,下调FOXO3的蛋白表达。结论通络醒脑泡腾片提高SAMP8小鼠认知功能与其调节海马NAMPT/SIRT1/FOXO3途径有关。

关键词：通络醒脑泡腾片 SAMP8小鼠 NAMPT SIRT1 FOXO3

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