检索结果-南通市图书馆

作者：张羽佳中南大学

学位级别：硕士

背景:nalcn(Naleak channel,non-selective)是一种非选择性的阳离子泄露通道。这种通道广泛地在神经元中表达,影响静息膜电位。人类nalcn相关基因的突变与癌症、肌张力低下、智力障碍和发育畸形等疾病密切相关。NCA-1和NCA-2是nalcn在... 详细信息

背景:nalcn(Naleak channel,non-selective)是一种非选择性的阳离子泄露通道。这种通道广泛地在神经元中表达,影响静息膜电位。人类nalcn相关基因的突变与癌症、肌张力低下、智力障碍和发育畸形等疾病密切相关。NCA-1和NCA-2是nalcn在秀丽线虫中功能简并的同系物,UNC-79和UNC-80是NCA通道复合体的保守调控亚基。我们发现野生型秀丽线虫对于植物应激激素水杨酸甲酯(Me Sa)存在明显的逃避反应。针对这个表型,通过EMS诱变筛选和SNP(单核苷酸多态性)定位,鉴定了多个unc-79和unc-80的功能缺失突变。随后我们对unc-80(lf)的运动缺陷表型进行EMS诱变筛选,得到unc-80(lf)突变的抑制子DGK-1。DGK-1是人类二酰基甘油激酶DGKθ在线虫中的同源物,可以将第二信使二酰基甘油(1,2-diacylglycerol,DAG)磷酸化形成磷脂酸(phosphatidic acid,PA)。而DAG主要来源于EGL-8(人类PLCB4同系物)催化的PIP2(磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸)的水解反应,此外DAG可以结合UNC-13(人类UNC13同系物)来调节突触囊泡的释放。目的:了解dgk-1、egl-8、unc-13和nalcn相关基因如何通过遗传相互作用影响线虫的运动行为。方法:1.测试突变体的运动表型,验证前期实验结果。2.构建标记dgk-1与unc-79表达位置的转基因荧光线虫品系。3.将UNC-79::GFP转基因导入unc-80(lf),dgk-1(lf)和unc-80(lf);dgk-1(lf)突变体中,探究dgk-1突变对UNC-79亚细胞定位的影响。4.构建egl-8(lf),unc-13(lf)与unc-80(lf)和dgk-1(lf)的双突变体或三突变体,对其进行表型分析。结果:***-1(lf);nalcn(lf)突变体的运动能力较nalcn(lf)突变体的运动能力显著增强。***-79与dgk-1在线虫头部、腹神经索、尾部的一些神经元中存在共定位。3.在线虫神经环处,UNC-79::GFP在dgk-1(lf)突变体中的表达略强于在unc-80(lf)和unc-80(lf);dgk-1(lf)突变体中的表达。***-80(lf)和dgk-1(lf)相关突变体中胆碱能和GABA能运动神经元的数目都没有变化。***-1启动子驱动dgk-1c DNA在中间神经元中表达可以挽救dgk-1(lf)对unc-80(lf)突变表型的抑制。egl-8(lf);unc-80(lf)突变体的运动能力强于unc-80(lf)突变体,egl-8(lf);unc-80(lf);dgk-1(lf)三突变体的运动能力较egl-8(lf);unc-80(lf)和unc-80(lf);dgk-1(lf)双突变体的运动能力更强。***-13的功能缺失突变和过表达都没有抑制unc-80(lf)的运动缺陷表型。结论:***-1和unc-79可能在线虫神经元中存在共定位。***-1可能在中间神经元中表达影响线虫的运动。***-8(lf)可以部分抑制unc-80(lf)的运动缺陷;并且dgk-1(lf)和egl-8(lf)对unc-80(lf)运动缺陷的抑制有叠加效应。图19幅,表11个,参考文献78篇

关键词：秀丽线虫 dgk-1 nalcn unc-80 运动 egl-8 unc-13

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海马DG区nalcn参与小鼠认知功能的调控

海马DG区NALCN参与小鼠认知功能的调控

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作者：耿晓媛郑州大学

学位级别：硕士

目的:通过病毒注射的方法敲降海马DG区nalcn的表达,评价海马DG区nalcn是否参与认知功能及情绪的调控。方法:将48只成年雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(CTL组)和实验组(KO组),每组各24只。1.首先通过免疫荧光染色(nalcn与Neu N共标记)验... 详细信息

目的:通过病毒注射的方法敲降海马DG区nalcn的表达,评价海马DG区nalcn是否参与认知功能及情绪的调控。方法:将48只成年雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(CTL组)和实验组(KO组),每组各24只。1.首先通过免疫荧光染色(nalcn与Neu N共标记)验证WT组小鼠海马DG区是否有nalcn表达;***组和KO组小鼠分别于海马DG区注射等量且滴度一致的敲低nalcn表达的腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)及对照AAV。***注射21天后开始行为学实验,依次进行Y迷宫、三箱社交、旷场、高架十字迷宫、悬尾实验、强迫游泳实验,评估敲降海马DG区nalcn表达后对小鼠空间记忆、社交能力、社交记忆、运动能力以及焦虑抑郁情绪的影响。4.行为学测试结束后,利用免疫荧光技术验证病毒注射位置是否准确,利用RT-PCR和western blot技术验证海马DG区nalcn的敲除率。结果:1.免疫荧光证实nalcn在小鼠海马DG区广泛表达。2.与CTL组相比,KO组小鼠在Y迷宫实验中进入新臂次数和新臂停留时间明显缩短(Pnalcn表达可能导致小鼠的空间记忆能力下降。3.在三箱社交实验中,第一部分社交能力测试,两组小鼠进入stranger 1小鼠所在侧室的时间及与stranger 1小鼠的互动时间没有差异;但第二部分社交偏好测试,CTL组小鼠在stranger 2小鼠所在侧室的探索时间及与stranger 2小鼠的互动时间明显多于在stranger 1小鼠所在侧室的探索时间及与stranger 1小鼠的互动时间(Pnalcn不影响小鼠的社交能力,但可能导致小鼠的社交记忆功能出现下降。4.与CTL组相比,KO组小鼠在旷场实验中的运动路程及平均速度无明显统计学差异。提示敲降海马DG区nalcn表达可能不影响小鼠的运动能力。5.与CTL组相比,KO组小鼠在旷场实验中探索中央区的时间没有统计学差异;高架十字迷宫实验中,KO组小鼠进入开臂和在开臂的探索时间、进入闭臂和在闭臂的停留时间没有明显的差异。这表明敲降海马DG区nalcn表达可能不影响小鼠的焦虑样情绪。6.与CTL组相比,在悬尾实验、强迫游泳实验中,KO组小鼠在强迫游泳实验和悬尾实验中的不动时间没有明显的差异。这提示敲降海马DG区nalcn表达可能不影响小鼠的抑郁样情绪。7.免疫荧光证实小鼠海马DG区病毒注射位置准确。8.与CTL组相比,nalcn在KO组小鼠海马DG区的表达显著下降(Pnalcn离子通道参与小鼠认知功能的调控,敲降海马DG区nalcn离子通道的表达会导致小鼠出现空间记忆和社交记忆障碍,但不会导致小鼠出现焦虑、抑郁等情绪异常。

关键词： DG区 nalcn 认知功能空间记忆社交记忆

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Sodium Leak Channel in Glutamatergic Neurons of the Lateral Parabrachial Nucleus Helps to Maintain Respiratory Frequency Under Sevoflurane Anesthesia

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Neuroscience Bulletin 2024年第8期40卷 1127-1140页

作者： Lin Wu Donghang Zhang Yujie Wu Jin Liu Jingyao Jiang Cheng Zhou Department of Anesthesiology West China HospitalSichuan UniversityChengdu 610041China Laboratory of Anesthesia and Critical Care Medicine National-Local Joint Engineering Research Centre of Translational Medicine of AnesthesiologyWest China HospitalSichuan UniversityChengdu 610041China

The lateral parabrachial nucleus(PBL)is implicated in the regulation of respiratory *** leak channel(nalcn)mutations disrupt the respiratory rhythm and influence anesthetic sensitivity in both rodents and ***,we investigated whether the nalcn in PBL glutamatergic neurons maintains respiratory function under general *** results showed that chemogenetic activation of PBL glutamatergic neurons increased the respiratory frequency(RF)in mice;whereas chemogenetic inhibition suppressed *** knockdown in PBL glutamatergic neurons but not GABAergic neurons significantly reduced RF under physiological conditions and caused more respiratory suppression under sevoflurane *** knockdown in PBL glutamatergic neurons did not further exacerbate the respiratory suppression induced by propofol or *** sevoflurane anesthesia,painful stimuli rapidly increased the RF,which was not affected by nalcn knockdown in PBL glutamatergic *** study suggested that the nalcn is a key ion channel in PBL glutamatergic neurons that maintains respiratory frequency under volatile anesthetic sevoflurane but not intravenous anesthetic propofol.

关键词： Glutamatergic neurons Lateral parabrachial nucleus nalcn Respiration General anesthesia

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