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nadh-细胞色素b5还原酶缺陷与隐性先天性高铁血红蛋白血症

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中国优生与遗传杂志 2008年第11期16卷 5-7,46页

作者：庄岳鹏兰风华第二军医大学福州总院临床学院实验科福州350025 解放军第180医院泉州362000

nadh-细胞色素b5还原酶(简称b5R),是一种在体内广泛分布,具有重要生理功能的氧化还原酶类。b5R基因突变可导致b5R酶活性的降低,而b5R缺陷将导致隐性先天性高铁血红蛋白血症(RCM)。本文就b5R研究的某些进展及与RCM的关系作一介绍。

关键词： nadh-细胞色素b5还原酶隐性先天性高铁血红蛋白血症

nadh-细胞色素b5还原酶突变型的原核表达及产物纯化

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福州总医院学报 2008年第1期15卷 32-33,21页

作者：郑德柱兰风华黄梁浒吴玉水谢飞程烽朱忠勇福州总医院全军检验医学研究所

遗传性高铁血红蛋白血症（RCM）是一种常染色体隐性遗传性疾病。通常是由患者的nadh-细胞色素b5还原酶（b5R）缺陷所致。近年来通过对该病的患者进行生物化学、免疫学及分子生物学研究。共发现6种新的突变基因型（R57Q，L72P、C203Y、R... 详细信息

遗传性高铁血红蛋白血症（RCM）是一种常染色体隐性遗传性疾病。通常是由患者的nadh-细胞色素b5还原酶（b5R）缺陷所致。近年来通过对该病的患者进行生物化学、免疫学及分子生物学研究。共发现6种新的突变基因型（R57Q，L72P、C203Y、R60H、M176T和P264L）。为了探讨b5R基因突变引起RCM的分子病理机制，研究突变型b5R蛋白结构和功能的关系，我们构建了野生型pGST-b5R和突变型pGST—b5RL72P表达载体，并在大肠杆菌中表达，获得了纯化的GST—b5R和GST—b5RL72P蛋白，为研究该突变对b5R酶的影响打下了基础。

关键词： nadh-细胞色素b5还原酶产物纯化突变型原核表达常染色体隐性遗传性疾病遗传性高铁血红蛋白血症分子病理机制分子生物学

RNA干扰法建立人nadh-细胞色素b5还原酶缺陷的细胞表型

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中华医学遗传学杂志 2008年第4期25卷 400-405页

作者：庄岳鹏王水良兰风华第二军医大学福州总院临床学院实验科福州350025 解放军第180医院中心实验室

目的探索经载体介导的RNA干扰法建立人nadh-细胞色素b5还原酶（EC1．6．2．2，nadh-cytochrome b5 reductase，65R）缺陷细胞系的可行性。方法设计并构建b5R的两种小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）表达载体，脂质体转染法瞬... 详细信息

目的探索经载体介导的RNA干扰法建立人nadh-细胞色素b5还原酶（EC1．6．2．2，nadh-cytochrome b5 reductase，65R）缺陷细胞系的可行性。方法设计并构建b5R的两种小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）表达载体，脂质体转染法瞬时转染bEL-7402细胞，半定量逆转录-PCR分析重组载体的干扰效应；G418筛选两种表达载体稳定转染的bEL-7402细胞，并通过稳定转染的细胞克隆在b5R mRNA水平，酶活性，酶含量等方面干扰效果的鉴定，获得b5R缺陷的细胞克隆；噻唑蓝法测定b5R缺陷细胞的生长曲线。结果获得两个靶向b5R基因的siRNA重组表达载体pSib5R-1和pSib5R-2，其中pSig5R-2瞬时转染对bEL-7402细胞b5RmRNA的抑制率达68．3％。获得18个稳定转染的细胞克隆，pSib5R-2转染的克隆中有两个克隆b5RmRNA抑制率达48．2％和56．2％，酶活性抑制率为54．6％和63．5％，酶含量也有明显降低。b5R酶缺陷没有改变细胞的生长速度。结论b5R基因的表达可被载体介导的RNA干扰有效抑制，成功建立了b5R缺陷的细胞表型，为进一步研究b5R基因的功能以及探讨Ⅱ型隐性先天性高缺血红蛋白症的发生机制提供了实验依据和材料。

关键词： nadh-细胞色素b5还原酶隐性先天性高铁血红蛋白血症 RNA干扰小干扰RNA

烟粉虱NADPH-细胞色素P450还原酶与nadh-细胞色素b5还原酶基因的克隆及表达量分析

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烟粉虱NADPH-细胞色素P450还原酶与NADH-细胞色素b5还原酶基因的...

作者：易胜湖南农业大学

学位级别：硕士

烟粉虱bemisia tabaci (Gennadius)属同翅目(半翅目),粉虱科,粉虱亚科,小粉虱属,是一种危害多种农业系统的农业害虫。自二十世纪八十年代以来,大量杀虫剂用于防治烟粉虱,频繁且不合理的使用杀虫剂,导致该害虫对多种杀虫剂产生抗性。烟... 详细信息

烟粉虱bemisia tabaci (Gennadius)属同翅目(半翅目),粉虱科,粉虱亚科,小粉虱属,是一种危害多种农业系统的农业害虫。自二十世纪八十年代以来,大量杀虫剂用于防治烟粉虱,频繁且不合理的使用杀虫剂,导致该害虫对多种杀虫剂产生抗性。烟粉虱对杀虫剂抗性产生机制主要是增强解毒酶活性和靶标不敏感性(target insensitivity)。细胞色素P450系统在烟粉虱对相关杀虫剂抗性中起重要作用。NADPH-细胞色素P450还原酶(EC1.***.2.4, NADPH-cytochrome P450reduetase, CPR)和nadh-细胞色素b5还原酶(EC.1.***.6.2, nadh-cytochrome b5reduetase, CbR)都是细胞色素P450氧化还原酶系的重要组成部分,在细胞色素P450介导的氧化还原反应中起着电子传递链的作用。本文采用反转录库策略得到烟粉虱CPR的全长cDNA序列与RACE策略得到CbR的全长cDNA序列,探索了CPR和CbR基因在烟粉虱不同身体部位、不同发育阶段及不同抗性品系的表达量差异,以期为深入研究细胞色素P450酶系在烟粉虱抗性形成及烟粉虱的生长发育过程中的作用提供一定的理论基础。1.烟粉虱CPR和CbR基因的克隆与分析采用RT-PCRNRACE技术克隆出烟粉虱CPR和CbR基因的全长:cDNA序列。CPR基因CDS全长2037bp,编码678个氨基酸残基,具有CPR蛋白的典型结构域。CbR-A cDNA全长1871bp,5’端和3’端非编码区长度分别为75bp和785bp,编码区长1011bp,编码336个氨基酸残基;CbR-b cDNA全长1913bp,5’端和3’端非编码区分别为186bp和785bp,编码区长942bp,编码313个氨基酸残基。2.烟粉虱CPR和CbR基因不同发育阶段及不同组织的表达量差异烟粉虱不同发育阶段CPR和CbR基因表达分析结果表明：在烟粉虱的整个发育阶段CPR和CbR基因都有表达;在卵期,表达量显著低于其他龄期的表达量;雄雌之间CPR和CbR基因的表达量没有显著性差异。烟粉虱头部、胸部、腹部的CPR和CbR基因表达量的分析表明在胸部的表达量明显高于其他的组织中表达量。3.烟粉虱CPR和CbR基因不同抗性品系的表达量差异在烟粉虱中抗性、敏感种群中,CPR基因无显著性差异,表明CPR基因可能与抗性无关。CbR基因在敏感种群与抗联苯菊酯种群的表达水平差异都达到了显著性差异;同时,在敏感种群与其他杀虫剂抗性种群表达差异并未达到显著性差异,这表明抗联苯菊酯种群抗性可能与CbR基因功能有关。

关键词：烟粉虱 NADPH-细胞色素P450还原酶 nadh-细胞色素b5还原酶表达量抗性

siRNA表达载体介导靶向nadh-细胞色素b5还原酶基因的RNA干扰实验研究

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中国优生与遗传杂志 2008年第3期16卷 27-32页

作者：庄岳鹏王水良兰风华第二军医大学福州总院临床学院实验科

目的探索经载体介导的RNA干扰抑制人nadh-细胞色素b5还原酶(b5R)基因表达的可行性。方法应用网络在线软件设计并合成两条针对b5R mRNA的RNA干扰的DNA模板片段,分别将其克隆至经过改建、带有neo基因的pSilencer1.0-U6载体上,构建成siRNA... 详细信息

目的探索经载体介导的RNA干扰抑制人nadh-细胞色素b5还原酶(b5R)基因表达的可行性。方法应用网络在线软件设计并合成两条针对b5R mRNA的RNA干扰的DNA模板片段,分别将其克隆至经过改建、带有neo基因的pSilencer1.0-U6载体上,构建成siRNA真核表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入人肺成纤维细胞和bEL-7402肝癌细胞株。通过半定量RT-PCR和荧光定量RT-PCR分析,检测所构建的重组siRNA真核表达载体对b5R基因表达的干扰效应。结果获得两个能在细胞内生成靶向b5R基因siRNA的重组载体pSib5R-1和pSib5R-2;其中pSib5R-2对成纤维细胞b5RmRNA的抑制率达81·7%,对bEL-7402细胞b5RmRNA的抑制率达60%。结论两种细胞b5R基因的表达均可被载体介导的RNA干扰有效抑制;成功构建了针对b5R基因的siRNA表达载体,为建立稳定表达siRNA的、b5R酶缺陷的细胞模型提供了实验基础。

关键词： nadh-细胞色素b5还原酶隐性先天性高铁血红蛋白血症 RNA干扰小干扰RNA

抗人红细胞nadh－细胞色素b5还原酶单克隆抗体的建立

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细胞与分子免疫学杂志 1995年第Z1期 61-64+125页

作者：兰风华唐玉钗黄长晖朱忠勇王瑶南京军区福州总医院全军医学检验中心第二军医大学

以重组人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠；通过常规方法将小鼠脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选及有限稀释法克隆化，选出６株阳性克隆。其中两株分泌ＩｇＧ，其余均分泌ＩｇＭ。免... 详细信息

以重组人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠；通过常规方法将小鼠脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选及有限稀释法克隆化，选出６株阳性克隆。其中两株分泌ＩｇＧ，其余均分泌ＩｇＭ。免疫印迹分析表明，两株ＩｇＧ单克隆抗体对人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶有较高的特异性和亲和力。这一研究为开展对人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶的研究和遗传性高铁血红蛋白血症的免疫诊断奠定了基础。

关键词： nadh-细胞色素b5还原酶单克隆抗体遗传性高铁血红蛋白血症 ELISA 免疫印迹

nadh-细胞色素b_5还原酶在甲状腺过氧化氢生物合成中的作用

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生理学报 2002年第4期54卷 349-353页

作者：黄国良张更朱进伟高妍福建医科大学协和医院福建省内分泌研究所福州350001 福建医科大学基础医学院福州350004 北京大学第一医院内分泌科北京100034

应用高香草酸荧光分析技术及nadh-高铁氰化钾还原酶法,对正常和Graves病甲状腺过氧化氢（H2O2）和nadh-细胞色素b5还原酶（b5R）进行测定,发现Graves病甲状腺b5R活性和H2O2水平均明显高于正常,而H2O2酶活性在Graves病和正常甲状腺间无... 详细信息

应用高香草酸荧光分析技术及nadh-高铁氰化钾还原酶法,对正常和Graves病甲状腺过氧化氢（H2O2）和nadh-细胞色素b5还原酶（b5R）进行测定,发现Graves病甲状腺b5R活性和H2O2水平均明显高于正常,而H2O2酶活性在Graves病和正常甲状腺间无显著差异。加b5R抑制剂对氯汞苯甲酸抑制b5R活性,Graves病和正常甲状腺b5R活性降低近85％,同时H2O2降低近50％,蛋白结合碘形成减少近52％。b5R活性和H2O2水平两者呈显著正相关关系。以上结果表明,b5R参与甲状腺内H2O2的生物合成,是甲状腺内产生H2O2的重要酶系。

关键词： nadh-细胞色素b5还原酶过氧化氢生物合成作用突眼性甲状腺肿

nadh─细胞色素b_5还原酶在甲状腺过氧化氢生物合成中的作用

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基础医学与临床 2000年第6期20卷 562-564页

作者：黄国良高妍福建医科大学附属协和医院福建省内分泌研究所 350001 北京医科大学第一医院内分泌科北京100034

应用高香草酸荧光分析技术及nadh─高铁氰化钾还原酶法对正常和Graves病甲状腺过氧化氢(H2O2)和nadh─细胞色素b5还原酶(b5R)进行测定，发现Graves病甲状腺b5R活性和H2O2水平均明显高于正常, 而H2O2酶活性在Graves病和正常甲状腺间无... 详细信息

应用高香草酸荧光分析技术及nadh─高铁氰化钾还原酶法对正常和Graves病甲状腺过氧化氢(H2O2)和nadh─细胞色素b5还原酶(b5R)进行测定，发现Graves病甲状腺b5R活性和H2O2水平均明显高于正常, 而H2O2酶活性在Graves病和正常甲状腺间无显著差异。加b5R 抑制剂对氯汞苯甲酸后，Graves病和正常甲状腺b5R活性降低近85%，同时H2O2降低50％。b5R活性和H2O2水平两者呈显著正相关关系。以上结果表明b5R参与甲状腺内H2O2的生物合成,是甲状腺内H2O2生成的重要酶系。

关键词： nadh-细胞色素b5还原酶过氧化氢 Graves病

nadh-细胞色素b_5还原酶与散发性甲状腺肿的关系

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中国地方病学杂志 2000年第4期19卷 301-302页

作者：黄国良林芬高妍福建医科大学附属协和医院福建福州350001 北京医科大学第一医院内分泌科北京100034

目的　探讨 nadh-细胞色素 b5 还原酶 (b5 R)在散发性甲状腺肿发病中作用。方法　应用荧光分析等技术测定甲状腺 b5 R活性和 H2 O2 浓度 ,用 b5 R抑制剂观察 b5 R活性变化对 H2 O2 浓度和蛋白结合碘 (PbI)形成影响。结果　甲状腺 H2 O2... 详细信息

目的　探讨 nadh-细胞色素 b5 还原酶 (b5 R)在散发性甲状腺肿发病中作用。方法　应用荧光分析等技术测定甲状腺 b5 R活性和 H2 O2 浓度 ,用 b5 R抑制剂观察 b5 R活性变化对 H2 O2 浓度和蛋白结合碘 (PbI)形成影响。结果　甲状腺 H2 O2 浓度和 PbI形成随 b5 R活性降低而减少 ,抑制 b5 R活性可抑制 H2 O2 和 PbI的形成。H2 O2 酶可明显减少 PbI形成 ,而葡萄糖和葡萄糖氧化酶系统可增加 PbI形成。结论　 b5 R参与甲状腺 H2 O2 生成 ,b5 R活性缺乏在散发性甲状腺肿发病中可能起重要作用。

关键词： nadh-细胞色素b5还原酶甲状腺肿过氧化氢