检索结果-南通市图书馆

作者：曲婉莹黑龙江大学

学位级别：硕士

由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是具有急性、接触性强的一种肠道传染疾病,脱水严重、呕吐及水样腹泻作为该病的主要特征。受PED感染的仔猪的死亡率很高,... 详细信息

由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是具有急性、接触性强的一种肠道传染疾病,脱水严重、呕吐及水样腹泻作为该病的主要特征。受PED感染的仔猪的死亡率很高,导致养猪业遭受极大的经济损失。疫苗免疫是预防PED的主要方法。灭活疫苗具有高水平免疫、高稳定性、高保护率等优点,但PEDV灭活苗同样有很多缺陷,如抗原递呈及加工的有效性差、生物使用率差、免疫佐剂缺乏等。安全有效的疫苗佐剂的研制及开发对PEDV灭活苗的免疫效果的提高非常重要。由于壳聚糖衍生物的高水溶性、高生物相容性及低毒性等特点,本试验研究分别用n-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖(n-2-HACC)纳米粒以及n-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/n,O-羧甲基壳聚糖(n-2-HACC/CMC)纳米粒作为递送载体,包载模型抗原PEDV灭活病毒,研制PED新型灭活疫苗,并研究了该疫苗的相关性能和免疫效果。首先,本研究分别以课题组合成的天然可降解生物高分子材料n-2-HACC和n-2-HACC/CMC为原料,用课题组研制的能够控制纳米佐剂粒径大小的小型装置制备了两种纳米佐剂,并优化了其合成条件;然后,以PED灭活病毒为模型抗原,分别用以上纳米佐剂制备了两种灭活疫苗:一种是以n-2-HACC纳米粒为纳米佐剂制备的灭活疫苗(n-2-HACC/PEDV),另一种是以n-2-HACC/CMC纳米粒为纳米佐剂制备的灭活疫苗(n-2-HACC/CMC/PEDV);同时,本试验对以上两种PED灭活疫苗的免疫效果进行了评价,以筛选出最佳的疫苗佐剂组合;最后,我们以水相n-2-HACC、油相石油醚及液体石蜡、交联剂CMC,合成了包裹PED灭活病毒的纳米灭活疫苗(n-2-HACC/PEDV/CMC nPs),并评价了n-2-HACC/PEDV/CMC nPs的理化特性。试验结果表明:1)试制了控制纳米佐剂粒径大小的小型装置,实现了纳米粒子粒径的可控性;2)确定了n-2-HACC纳米粒的最佳合成工艺条件,即1mg/m L n-2-HACC溶液(3m L)、1.3mg/m Lβ-GP溶液(1m L)、2.3%(w/v)Span80、油水比为14(v/v),交联4min;3)确定了n-2-HACC/CMC纳米粒的最佳合成工艺条件,即1.7mg/m L n-2-HACC(3m L)、1.3mg/m L CMC(1m L)、3.0%(w/v)Span80、油水比为8(v/v)、交联4min;4)以PED灭活病毒为模型抗原,分别以纳米佐剂n-2-HACC纳米粒和n-2-HACC/CMC纳米粒为递送载体,制备PED灭活疫苗,结果表明,纳米佐剂n-2-HACC/CMC添加剂量为1%(w/v)时制备的n-2-HACC/CMC/PEDV免疫效果好于纳米佐剂n-2-HACC添加剂量为5%(w/v)时的n-2-HACC/PEDV,且与PEDV商品灭活苗比,两种纳米佐剂制备的PEDV灭活疫苗都达到了较长的免疫持续期;5)确定了n-2-HACC/PEDV/CMC nPs制备的最优工艺条件,即1.8mg/m Ln-2-HACC(3m L)、1.6mg/m L CMC(1m L)、3.0%(w/v)Span80、1.6m LPEDV、交联4min;6)n-2-HACC/PEDV/CMC nPs包裹的PEDV保持完整,具有较好的耐酸性、耐胆汁和肠溶性,可以进行口服给药,且缓释性能也较不错。

关键词：猪流行性腹泻 n-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖 n,O-羧甲基壳聚糖纳米佐剂纳米疫苗

新城疫n-2-HACC纳米疫苗的制备及其免疫学性质研究

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新城疫N-2-HACC纳米疫苗的制备及其免疫学性质研究

作者：陈刚黑龙江大学

学位级别：硕士

新城疫(newcastle Disease, nD)是由新城疫病毒(newcastle Disease Virus,nDV)引起的一种高度接触性传染病,nDV对黏膜有特殊的亲嗜性,特别是对呼吸道和消化道黏膜,黏膜成为抗nDV感染的第一道防线。因此,提高黏膜免疫系统的防御能力,可... 详细信息

新城疫(newcastle Disease, nD)是由新城疫病毒(newcastle Disease Virus,nDV)引起的一种高度接触性传染病,nDV对黏膜有特殊的亲嗜性,特别是对呼吸道和消化道黏膜,黏膜成为抗nDV感染的第一道防线。因此,提高黏膜免疫系统的防御能力,可有效阻止nDV的吸附和侵入。目前,nD的预防接种常用的疫苗是传统的弱毒活疫苗和灭活疫苗,但二者在实际应用中均具有一定的局限性,如何提高疫苗的免疫效果是疫苗免疫研究中迫切需要攻克的课题,疫苗剂型和递送方式的改造是提高疫苗免疫效果的方法之一。目前,正在发展的纳米粒黏膜免疫递送系统是解决上述问题的最有希望的途径之一。n-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖(n-2-hydroxypropyltrimethyl Ammonium Chloride Chitosan, n-2-HACC)具有永久的正电荷和生理环境下的水溶性,能有效地降低跨上皮细胞电阻,打开上皮细胞间紧密连接,提高亲水性大分子通过细胞旁路的转运,增加药物吸收率。本试验以n-2-HACC为载体,以DV La Sota为模型药物,采用离子交联法制备了载新城疫病毒n-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒(nDV/La Sota-n-2-HACC-nPs),并优化了nDV/La Sota-n-2-HACC-nPs的制备工艺,对纳米粒的理化特性、体外释放特性、储存稳定性及病毒含量等进行了较为系统的研究;通过细胞毒性试验和安全检验评价了nDV/La Sota-n-2-HACC-nPs黏膜免疫递送系统的安全性;通过滴鼻和口服途径接种nDV-n-2-HACC-nPs,并监测了nDV-n-2-HACC-nPs诱导的体液和细胞免疫反应;通过攻毒试验考察了其保护率。试验结果表明,采用本试验筛选出的工艺制备出的nDV/La Sota-n-2-HACC-nPs大小均一、形态规则、外形圆整、分散性好,平均粒径为(303.88±49.84)nm， Zeta电位为+(45.77±0.75)mV,包封率为(94.26±4.03)%(n=5),载药量为(54.06+7.37)%(n=5);体外释放试验结果表明,nDV/La Sota-n-2-HACC-nPs在体外具有较明显的缓慢释放特性;细胞毒性试验和安全检验结果表明,nDV/La Sota-n-2-HACC-nPs毒性较小,nDV/La Sota-n-2-HACC-nPs黏膜免疫递送系统具有较高的安全性;nDV/La Sota-n-2-HACC-nPs滴鼻和口服免疫后可刺激机体产生较强的细胞免疫、体液免疫和局部黏膜免疫,保护率优于常规新城疫活疫苗。另外,本试验还分离到了一株具有血凝性的病毒,该病毒的血凝活性能被LaSota株标准阳性血清所抑制,结合HA和HI试验结果,确定分离株为新城疫病毒株,命名为JL-DH/10株。对JL-DH/10株进行了鸡胚成纤维细胞(CEF)蚀斑纯化,测定1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.86;对JL-DH/10株F基因全长进行了克隆和序列分析,确定JL-DH/10株属于强毒株;利用Meg Align软件绘制了nDV的系统发育进化树,结果表明,JL-DH/10株为新城疫基因Ⅶ型强毒株。此外,本试验还制备了新城疫JL-DH/10株油乳剂灭活疫苗、新城疫La Sota株n-2-HACC纳米粒油乳剂灭活疫苗(nDV/Lo Sota-n-2HACC-nPs-IV)和新城疫JL-DH/10株n-2-HACC纳米粒油乳剂灭活疫苗(nDV/JL-DH/10-n-2-HACC-nPs-IV),并对制备的灭活疫苗进行了半成品和成品检验及SPF鸡免疫效果评价。试验结果表明,制备的新城疫灭活疫苗均为油包水型乳白色乳剂,黏度低、稳定性好,免疫持续期长于传统的灭活疫苗本试验成功地构建了新城疫病毒n-2-HACC纳米粒黏膜免疫递送系统,n-2-HACC纳米粒黏膜免疫递送系统可实现疫苗在体内的长效作用机制,从而延长疫苗免疫期,减少免疫次数,并达到保护抗原、简化接种程序、增加给药途径、提高药物在细胞内转运率、增强免疫效果的目的。本试验研究具有一定的科学意义和潜在的推广应用前景。

关键词：新城疫新城疫病毒分离与鉴定 n-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒黏膜免疫

阿莫西林n-2-HACC纳米分散体系及抑菌机理

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阿莫西林N-2-HACC纳米分散体系及抑菌机理

作者：韩金雨黑龙江大学

学位级别：硕士

近年来,由于抗生素大量使用或滥用导致的大气、土壤和水体污染已成为一种新型的生态环境污染。由于抗生素在机体内生物降解速度较慢,大量抗生素进入机体后主要以原形或代谢物的形式随粪、尿等排泄物排放到环境中,对人类健康造成严重威... 详细信息

近年来,由于抗生素大量使用或滥用导致的大气、土壤和水体污染已成为一种新型的生态环境污染。由于抗生素在机体内生物降解速度较慢,大量抗生素进入机体后主要以原形或代谢物的形式随粪、尿等排泄物排放到环境中,对人类健康造成严重威胁。新型纳米生物材料的出现,为获得高效、机体易于吸收且可迅速降解的新型兽用抗生素提供了可能。目前,以可降解生物纳米材料为药物递送载体,制成载药纳微米球,用于药物缓控释和定位输送,提高药物的转运效率和生物利用度、延长体内停留时间、降低污染的策略受到了广泛关注。本试验合成了具有广谱抑菌性的壳聚糖季铵盐n-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖（n-2-HACC）,以n-2-HACC为抗菌药物阿莫西林（AMX）递送载体,用聚电解质复合法制备载阿莫西林n-2-HACC纳米粒(n-2-HACC/羧甲基壳聚糖（CMC）/AMX nPs),并探讨了n-2-HACC/CMC/AMX nPs抑菌机理。试验结果表明:（1）成功合成了n-2-HACC,细胞毒性试验结果表明,n-2-HACC对293T细胞毒性小,说明n-2-HACC是安全的递送载体,具有良好的生物相容性;（2）确定了n-2-HACC/CMC/AMX nPs制备工艺,即n-2-HACC浓度为1.0mg/mL、CMC浓度为2.5mg/mL、阿莫西林浓度为0.5mg/mL;（3）制备的n-2-HACC/CMC/AMX nPs外形圆整、分散性好、表面光滑,平均粒径为319.5±67.0 nm,Zeta电位为+57.25±0.46 mV,包封率为88.84±0.52%,载药量为44.6±0.41%;（4）体外释放试验结果表明,n-2-HACC/CMC/AMX nPs具有明显的缓慢释药特性;（5）稳定性试验结果表明,n-2-HACC/CMC/AMX nPs可以在4℃、-20℃及室温条件下（20℃）长期保存;（6）小鼠体内试验结果表明,单次口服给药后n-2-HACC/CMC/AMX nPs在小鼠体内缓慢释放,与对照组相比吸收程度高,药物平均滞留时间（MRT）为6.81±0.48 h,药物半衰期(t1/2)为4.70±0.30 h,表观分布容积（Vz/F）为0.05±0.003mg/μg/mL,总清除率（Cl/F）为0.006±0.0002 mg/μg/mL/h,相对生物利用度为321.14±13.15%;（7）抑菌试验结果表明,n-2-HACC对大肠杆菌（Escherichia coli）、鲍氏不动杆菌（Acinetobacter baumannii）、肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）均有抑制作用,与阿莫西林联合使用时显著增强了对细菌的生长抑制;（8）抑菌机理试验结果表明,n-2-HACC/CMC/AMX nPs通过与细菌细胞膜上的蛋白相结合,破坏细菌细胞膜的完整性,影响细菌的正常生理活性,最终导致菌体破裂死亡。本试验研究对解决和推动兽用抗生素残留、生态环境污染和缓控释等关键技术,对促进兽用抗生素产品更新换代和产业技术进步具有重要的现实意义;同时,本项目在推动科学技术进步,保护生态环境,保障现代畜禽养殖业健康发展,改善人民物质文化生活及健康水平等都将起到重要作用,经济和社会效益十分巨大。

关键词： n-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖阿莫西林纳米分散体系抑菌活性抑菌机理

靶向灵菌红素壳聚糖季铵盐纳米粒的抗绒癌效果

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靶向灵菌红素壳聚糖季铵盐纳米粒的抗绒癌效果

作者：程国钢黑龙江大学

学位级别：硕士

水溶性壳聚糖衍生物是通过对天然碱性多糖壳聚糖进行改性得到的,它不但继承了壳聚糖安全无毒、可被生物体内多种酶降解等优良特性,同时也具有很好的水溶性,甚至具有双亲性,为成为药物递送载体提供了前提。灵菌红素(PG)是抗癌药物之一,... 详细信息

水溶性壳聚糖衍生物是通过对天然碱性多糖壳聚糖进行改性得到的,它不但继承了壳聚糖安全无毒、可被生物体内多种酶降解等优良特性,同时也具有很好的水溶性,甚至具有双亲性,为成为药物递送载体提供了前提。灵菌红素(PG)是抗癌药物之一,它具有抗细菌、抗真菌、抗疟疾、抗肿瘤和免疫抑制等生物活性。试验研究已表明,PG对多种癌细胞都具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,对正常细胞的毒副作用却非常小。多肽VAR2CSA可以特异性与胎盘滋养细胞表面的硫酸软骨素A(CSA)结合,也可以结合到增生较快的癌细胞表面,即可以开发为癌症治疗的“向导”。本试验合成了三种水溶性良好的壳聚糖衍生物,即n-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖(n-2-HACC)、多肽VAR2CSA-n-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖(CSA-n-2-HACC)和乱序多肽-n-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖(SCR-n-2-HACC),并以合成的壳聚糖衍生物为载体,以菌株HDZK-BYSB107灵菌红素为模型药物,采用聚电解质复合法制备载菌株HDZK-BYSB107灵菌红素纳米粒PG/CSA-n-2-HACC/CMC-nPs、PG/n-2-HACC/CMC-nPs、PG/SCR-n-2-HACC/CMC-nPs,通过考察纳米粒的形成条件和表面形态等对纳米粒粒径、粒径分布和表面电位的影响,确定纳米粒制备的最佳工艺;同时,对制备的纳米粒的生物安全性、体外释药性及动物体内药效进行评价。试验结果表明:1、成功制备了壳聚糖衍生物n-2-HACC、SCR-n-2-HACC和CSA-n-2-HACC,且细胞毒性分析结果表明,n-2-HACC、SCR-n-2-HACC和CSA-n-2-HACC与壳聚糖相似,均是安全无毒的壳聚糖衍生物;2、成功提纯和鉴定了菌株HDZK-BYSB107灵菌红素,且其细胞毒性试验结果表明,该PG对绒毛膜癌细胞系(JEG)有很强的杀伤作用,而对正常细胞人肾上皮细胞系(293T)副作用极小,未见明显生长抑制;3、核磁和体外细胞摄入试验结果表明,多肽VAR2CSA能够“接枝”到n-2-HACC上,并保持了很好的活性,且可以靶向JEG细胞;4、确定了PG/CSA-n-2-HACC/CMC-nPs制备的最佳工艺条件,即CSA-n-2-HACC浓度1.20mg/mL、CMC浓度0.6 mg/mL,菌株HDZK-BYSB107灵菌红素浓度0.6mg/m,制备的PG/CSA-n-2-HACC/CMC-nPs、PG/SCR-n-2-HACC/CMC-nPs、PG/n-2-HACC/CMC-nPs外形圆整、表面光滑、分散性好,粒径大小在200-400nm之间,平均粒径分别为(357.9±22.19)nm、(209.3.9±42.42)nm、(293.7±35.27)nm,Zeta电位分别为+(9.95±0.85)mV、+(9.48±1.2)mV、+(18.5±0.92)mV,包封率分别为(89.39±0.82)%、(75.19±0.96)%、(83.72±1.01)%,载药量分别为(43.28±1.11)%;(35.91±1.01)%;(38.54±1.51)%;5、体外释放试验结果表明,制备的纳米粒具有较为明显的缓慢释药特性,且在pH=5.3时,菌株HDZK-BYSB107灵菌红素的释放量高于pH=7.4时的释放量,可以很好的在血液中循环;6、储藏稳定性试验结果表明,纳米粒在4℃、-20℃避光放置三个月,外部形态、粒径都没有明显变化;7、体内药效检测结果表明,PG/CSA-n-2-HACC/CMC-nPs治疗效果最好、肿瘤最小、无副作用,说明多肽VAR2CSA可以特异性与JEG细胞结合,为绒癌的靶向治疗提供了思路。本研究成功构建了以壳聚糖衍生物为载体,菌株HDZK-BYSB107灵菌红素为模型药物的递送系统,保存了多肽VAR2CSA的完整性,实现了灵菌红素在体内长时间作用的目的,并达到了安全、高效、快速、低副作用的治疗目标;同时,本研究为绒毛膜癌的靶向治疗提供了思路,为菌株HDZK-BYSB107灵菌红素的临床应用提供了理论依据。

关键词： n-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖多肽VAR2CSA 纳米粒 Serratia lawsoniana subsp.nov. 灵菌红素靶向给药绒毛膜癌