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人MASP1 n端片段原核表达载体的构建及其表达

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第6期24卷 546-549页

作者：蔡学敏赵娜左大明张丽芸陈政良南方医科大学免疫学教研室广东广州510515

目的:在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶1(MASP1)n端片段。方法:采用PCR技术从含人MASP1cDnA的质粒pGEM-MASP1中扩增MASP1-n端基因片段,将其插入原核表达载体pGEX4T-1,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP1-n... 详细信息

目的:在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶1(MASP1)n端片段。方法:采用PCR技术从含人MASP1cDnA的质粒pGEM-MASP1中扩增MASP1-n端基因片段,将其插入原核表达载体pGEX4T-1,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP1-n端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与重组MBL-CLR、重组MBL的结合活性。结果:从pGEM-MASP1中扩增得到约860bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4900bp和860bp片段,测序结果与预期的完全一致。纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR、重组人MBL蛋白结合。结论:获得了表达人MASP1n端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP1n端片段/GST融合蛋白,为MASP1分子的进一步研究提供了条件。

关键词：甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1 n端片段原核表达

EB病毒gp85n端片段的原核表达与初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第2期23卷 110-112,116页

作者：涂向东吴玉水邱龙翔连云宗程烽兰风华朱忠勇南京军区福州总医院全军医学检验中心福建福州350025 解放军第175医院福建漳州363000 泉州市第一医院福建泉州362000

目的构建EB病毒基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85n端截短片段的抗原性。方法采用基因工程技术,以B95-8细胞(美洲绒猴外周血B淋巴细胞经EBV转化后的细胞系)[1]培养上清为模板,用PCR扩增E... 详细信息

目的构建EB病毒基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85n端截短片段的抗原性。方法采用基因工程技术,以B95-8细胞(美洲绒猴外周血B淋巴细胞经EBV转化后的细胞系)[1]培养上清为模板,用PCR扩增EB病毒的BXLF2基因n端片段。PCR产物经HindⅢ和XhoⅠ双酶切,插入原核表达载体pGEX-5T中,构建pGEX5T-85n重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21中诱导表达gp85n蛋白。纯化表达的蛋白用Westernblot鉴定,并免疫BALB/c小鼠。结果序列分析表明,插入片段的序列与GenBank登录的参考序列完全一致。重组表达的蛋白的相对分子质量(Mr)约为45000,同预期的大小相符。以纯化的可溶性重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测获得了高效价的抗血清,且抗gp85单克隆抗体(mAb)可识别所表达的gp85n抗原。Westernblot显示,该抗原可与小鼠免疫血清起特异性反应。结论表达并纯化的EB病毒截短的gp85n重组蛋白具有良好的抗原性,为下一步分析所产生抗体的生物学特性提供了条件。

关键词： EB病毒 gp85 n端片段表达免疫原性

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APP n端片段的神经营养作用

细胞生物学杂志 2001年第2期23卷 103-107页

作者：王蓉张景艳姬志娟杨芳盛树力张岱首都医科大学宣武医院北京脑老化研究实验室北京100053 北京医科大学精神卫生研究所北京100083

APP是β-淀粉样肽的前体蛋白,由695-770个氨基酸组成,其n端水解产物可分泌至细胞外环境。APP具有促进神经细胞生长作用,其中319-335肽段即APP17肽能提高动物的学习记忆能力,其他APP片段是否具有神经营养功能未见报道。本研究通过观察APP... 详细信息

APP是β-淀粉样肽的前体蛋白,由695-770个氨基酸组成,其n端水解产物可分泌至细胞外环境。APP具有促进神经细胞生长作用,其中319-335肽段即APP17肽能提高动物的学习记忆能力,其他APP片段是否具有神经营养功能未见报道。本研究通过观察APPn端片段对人神经母细胞瘤株SY5Y生长的影响以及对实验性糖尿病动物行为的影响,希望发现APP促进神经细胞生长的其他肽段。用化学合成APP n端多肽片段,以SY5Y细胞MTT代谢率、细胞计数、LDH漏出率和实验性糖尿病小鼠水迷宫试验结果为观察指标。结果APP64肽、29肽、11肽均有促进SY5Y细胞生长的作用,APP11肽可提高糖尿病动物水迷宫测试成绩。说明可溶性APP的n端可能具有神经营养作用,我们认为保持此作用的最短片段为APP11肽,此肽段的发现为进一步研究APP的构效关系奠定了基础。

关键词： APP n端片段神经营养作用

人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2n端片段的原核表达

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免疫学杂志 2007年第3期23卷 235-238页

作者：蔡学敏左大明赵娜张丽芸陈政良南方医科大学免疫学教研室广州510515

目的在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)n端片段。方法应用PCR技术从含人MASP2 cDnA的质粒pGEM-MASP2中扩增MASP2-n端基因片段,将其克隆至pGEX4T-1原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP2-n... 详细信息

目的在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)n端片段。方法应用PCR技术从含人MASP2 cDnA的质粒pGEM-MASP2中扩增MASP2-n端基因片段,将其克隆至pGEX4T-1原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP2-n端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与MBL-CLR结合的活性。结果从pGEM-MASP2中扩增得到约840 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4900 bp和840 bp片段,测序结果与预期的完全一致。纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr 60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR蛋白结合。结论获得了表达人MASP2 n端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP2n端片段/GST融合蛋白,为MASP2分子的进一步研究提供了条件。

关键词：甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 n端片段原核表达

葡萄球菌核酸酶R型n端片段:SnR141的晶体生长及初步晶体学分析

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科学通报 1997年第9期42卷 983-985页

作者：叶升万柱礼周波静国忠梁栋材中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室北京100101

葡萄球菌核酸酶(Snase A,EC3.***.4.7)由149个氨基酸残基组成(分子量16.807ku),不含巯基和二硫键,它水解DnA和RnA的磷酸酯键并释放出3’-磷酸单核苷酸和二核苷酸Snase A最初从金黄色葡萄球菌中得到,随后这个酶的基因被克隆并在若干表达体... 详细信息

葡萄球菌核酸酶(Snase A,EC3.***.4.7)由149个氨基酸残基组成(分子量16.807ku),不含巯基和二硫键,它水解DnA和RnA的磷酸酯键并释放出3’-磷酸单核苷酸和二核苷酸Snase A最初从金黄色葡萄球菌中得到,随后这个酶的基因被克隆并在若干表达体系中进行表达.它的晶体结构已在高分辨率测得,结构表明它唯一的色氨酸残基(W140)包埋在一个疏水环境中.Snase A一直作为研究酶学。

关键词：晶体生长葡萄球菌核酸酶 R型 n端片段晶体学

葡萄球菌核酸酶R型n端片段SnR141的1.9(?)分辨率晶体结构分析

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自然科学进展（国家重点实验室通讯） 1999年第7期9卷 595-601页

作者：杨喆叶升静国忠桂璐璐中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室北京100101

葡萄球菌核酸酶R型(SnaseR)是葡萄球菌核酸酶(SnaseA)的类似物。SnR141是R型核酸酶n端片段系列中的一个,已在***中高度表达和纯化,并且已用于新生肽链折叠的研究。采用悬滴气相扩散法,获得了适合X射线分析用的SnR141单晶体。晶体属于P4_... 详细信息

葡萄球菌核酸酶R型(SnaseR)是葡萄球菌核酸酶(SnaseA)的类似物。SnR141是R型核酸酶n端片段系列中的一个,已在***中高度表达和纯化,并且已用于新生肽链折叠的研究。采用悬滴气相扩散法,获得了适合X射线分析用的SnR141单晶体。晶体属于P4_1空间群,晶胞参数为α=b=48.2(?),c=63.8(?)。采用同晶差值Fourier技术,立体化学最小二乘方法和XPLOR程序并辅以电子密度图的人工拟合,测定并精化了SnR141的1.9(?)分辨率晶体结构。最终模型的R因子为19.8％,键长和键角与标准键长和键角的均方根偏差分别为0.016(?)和3.3°。晶体结构的结果表明,从SnaseRC端切除8个残基后,扰动了残基Tyr113的构象,妨碍了酶与底物的结合,使n端片段SnR141的生物酶活力下降为天然酶的80％。

关键词：葡萄糖菌核酸酶 R型 n端片段 X射线晶体结构

乙型脑炎病毒E蛋白n端片段在大肠杆菌中的表达

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动物医学进展 2003年第4期24卷 108-109页

作者：柳丽娟吴玉水马文煜宋建华黄庆生任君萍丁天兵福州市传染病医院检验科福建福州350025 西安第四军医大学微生物学教研室陕西西安710032

利用 PCR扩增乙型脑炎病毒 E蛋白基因 5′端片段 ,克隆入原核表达载体 p ET-2 8a,转化大肠杆菌 BL2 1 ( ED3 )。经 IPTG诱导表达后 ,SDS-PAGE分析表达产物。结果表明 ,所表达的E蛋白片段的分子量约为 3 .4万 ,表达量约占菌体总蛋白的 3... 详细信息

利用 PCR扩增乙型脑炎病毒 E蛋白基因 5′端片段 ,克隆入原核表达载体 p ET-2 8a,转化大肠杆菌 BL2 1 ( ED3 )。经 IPTG诱导表达后 ,SDS-PAGE分析表达产物。结果表明 ,所表达的E蛋白片段的分子量约为 3 .4万 ,表达量约占菌体总蛋白的 3 5%。 JEV E蛋白片段在大肠杆菌中的成功表达 ,为制备 JE实验室诊断抗原和分析

关键词：乙型脑炎病毒E蛋白 n端片段大肠杆菌基因表达实验室诊断抗原病毒性疾病

稳定性冠心病患者脑型利钠肽n端片段（nT-proBnP）与心血管事件及死亡率的关系

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美国医学会杂志（中文版） 2007年第4期26卷 207-207页

作者： Kirsten Bibbins-Domingo Reena Gupta Beeya na 纪璟峰（译）赵秀丽（校）

背景：明确心血管事件高危人群对最佳实施一、二级预防措施非常重要。目的：研究血浆脑型利钠肽n端片段（prohormone braintype natriuretic peptide，nT—proBnP）水平是否能独立于现有其他诊断性检查预测心血管事件和死亡。设计、地... 详细信息

背景：明确心血管事件高危人群对最佳实施一、二级预防措施非常重要。目的：研究血浆脑型利钠肽n端片段（prohormone braintype natriuretic peptide，nT—proBnP）水平是否能独立于现有其他诊断性检查预测心血管事件和死亡。设计、地点及参试者：HSS研究（Heart and Soul Study）于2000年-2002年入选987例来自加利福尼亚州的稳定性冠心病患者进行前瞻性队列研究，平均随访3．7年（范围，0．1—5．3年）。

关键词：心血管事件脑型利钠肽冠心病患者 n端片段死亡率稳定性 peptide 前瞻性队列研究

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人血管能抑素免疫兔抗血清制备及其特性测定

中山大学学报（自然科学版） 2003年第6期42卷 134-136页

作者：贺国安罗进贤李瑞芳张添元吴群悦中山大学基因工程教育部重点实验室广东广州510275

纯化的人血管能抑素包涵体进行SDS＿PAGE分离,切胶回收目的蛋白,与弗氏不完全佐剂充分乳化后,进行多点皮下注射免疫新西兰白兔,制备兔抗人血管能抑素抗血清,抗血清去除交叉反应抗体后,进行WesternBlotting分析抗血清与人血管能抑素及其... 详细信息

纯化的人血管能抑素包涵体进行SDS＿PAGE分离,切胶回收目的蛋白,与弗氏不完全佐剂充分乳化后,进行多点皮下注射免疫新西兰白兔,制备兔抗人血管能抑素抗血清,抗血清去除交叉反应抗体后,进行WesternBlotting分析抗血清与人血管能抑素及其n端和C端片段的抗原抗体反应特性。结果表明,经过4次加强免疫后,获得了高效价的兔抗人血管能抑素抗血清。抗血清去除交叉反应抗体后,WesternBlotting分析表明,它能与人血管能抑素发生特异的抗原抗体反应,同时还能与人血管能抑素的n端片段和C端片段发生特异性较弱的抗原抗体反应。证明制备的兔抗人血管能抑素抗血清能应用于人血管能抑素及其n端和C端片段免疫学研究中。

关键词：人血管能抑素 n端片段 C端片段抗血清兔免疫特性测定