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重组人粒细胞刺激因子的n端氨基酸序列异质性分析

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药物分析杂志 2018年第11期38卷 1887-1892页

作者：韩春梅刘兰杨靖清陶磊范文红史新昌饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:分析重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)的n端异质性。方法:采用反相超高效液相色谱法分离rhG-CSF中n端不一致的各组分;色谱条件:采用Waters BEH 300 C4(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,以0.1%三氟乙酸水溶液(A)-0.1%三氟乙酸乙腈溶液(B... 详细信息

目的:分析重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)的n端异质性。方法:采用反相超高效液相色谱法分离rhG-CSF中n端不一致的各组分;色谱条件:采用Waters BEH 300 C4(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,以0.1%三氟乙酸水溶液(A)-0.1%三氟乙酸乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL·min^(-1)。分别收集各组分并冷冻干燥,采用n端测序仪测定各组分的n端氨基酸序列;液质联用测定rhG-CSF的相对分子质量,对n端测序结果进行验证质谱仪采用Waters公司Xevo G2-S质谱仪,正离子电喷雾离子源,毛细管电压3.0 kV,锥孔电压40 V,去溶剂气体温度350℃,去溶剂气体流速800 L·h^(-1),扫描范围(m/z)500～3 000。结果:色谱分离得到3个组分;n端氨基酸序列测定结果显示,3个组分分别为rhG-CSF主成分及2个n端异质性相关蛋白;质谱相对分子质量测定结果与n端测序结果一致。结论:应用色谱法及质谱法可对rhG-CSF中的n端异质性相关蛋白进行分析检测,检测结果可为国产rhG-CSF制品的质量控制和标准提升提供参考和数据支持。

关键词：重组人粒细胞刺激因子 n端异质性相关蛋白 n端氨基酸序列反相超高效液相色谱质谱

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圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化和特性

生物化学与生物物理学报 1999年第6期31卷 664-668页

作者：邬敏辰王曙黄伟达孙崇荣复旦大学生物化学系!上海200433

圆弧青霉突变株ＰＧ３７发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质５２００ｕ的碱性脂肪酶，纯化倍数１６．５，得率３３．２％，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）... 详细信息

圆弧青霉突变株ＰＧ３７发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质５２００ｕ的碱性脂肪酶，纯化倍数１６．５，得率３３．２％，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）上均呈现单一蛋白质条带。ＳＤＳＰＡＧＥ和凝胶过滤分别测得酶的分子量为２７．５ｋＤ和２９ｋＤ，表明该酶以单体形式存在。Ｎ末端１０个氨基酸的序列测定结果为ＡＴＡＤＡＡＡＦＰＤ，与已知的碱性脂肪酶的Ｎ末端序列没有同源性。酶学特性研究结果表明，该酶的最适作用温度为２５ ℃，在３０ ℃以下稳定，４０ ℃处理２０ｍｉｎ仅残留３０％酶活性；ｐＨ稳定范围在６．５～１０．５，最适ｐＨ为１０．０。低浓度的碱性蛋白酶对ＰＧ３７碱性脂肪酶活性的影响较小，可同时添加在洗涤剂中。

关键词：圆弧青霉碱性脂肪酶纯化与特性 n端氨基酸序列

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豇豆几丁质酶的诱导与纯化

园艺学报 2000年第5期27卷 351-355页

作者：陈崇顺朱雪峰郁志芳南京农业大学园艺系南京210095 南京农业大学食品科技学院南京210095

用不同浓度的西瓜枯萎病菌的细胞壁碎片及孢子混合液处理‘早熟二号’豇豆幼苗 ,诱导几丁质酶。结果表明 ,以浓度为 0 .2 5mg/mL诱导 4d的效果最好。植株不同部位表现相同诱导活力的试验结果提示 ,西瓜枯萎病菌诱导液对‘早熟二号’豇... 详细信息

用不同浓度的西瓜枯萎病菌的细胞壁碎片及孢子混合液处理‘早熟二号’豇豆幼苗 ,诱导几丁质酶。结果表明 ,以浓度为 0 .2 5mg/mL诱导 4d的效果最好。植株不同部位表现相同诱导活力的试验结果提示 ,西瓜枯萎病菌诱导液对‘早熟二号’豇豆几丁质酶的诱导是系统性的。经热变性 (6 0℃ ,30min)、硫酸铵沉淀 (6 0 %饱和度 ,4℃ )、亲和层析 (以再生的脱乙酰几丁质为层析介质 )纯化程序后 ,豇豆几丁质酶被纯化至均一程度 ,经SDS -PAGE电泳显示单一条带 ;n端氨基酸残基分析结果为EQCGS。

关键词：豇豆几丁质酶诱导纯化 n端氨基酸序列

蜡状芽孢杆菌Bc-05菌株纤溶酶的酶学性质

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河北大学学报（自然科学版） 2008年第3期28卷 305-311页

作者：袁洪水张爱莲辛欣郭晓军胖铁良朱宝成河北农业大学生命科学学院河北保定071001 河北大学生命科学学院河北保定071002 河北省保定市卫生监督所河北保定071000

对蜡状芽孢杆菌Bc-05菌株的发酵上清液经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析所获得的纤溶酶进行性质研究.结果表明:经纤维蛋白平板法检测该酶有直接水解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用,最适作用温度37℃,最适pH... 详细信息

对蜡状芽孢杆菌Bc-05菌株的发酵上清液经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析所获得的纤溶酶进行性质研究.结果表明:经纤维蛋白平板法检测该酶有直接水解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用,最适作用温度37℃,最适pH=8.0,在pH=8.0条件下25℃和37℃放置24 h酶活力仍保持77.52%和78.96%,该酶体外对兔血凝块有明显的溶解作用;Ca2+,Mn2+离子对该酶具有激活作用,而Cu2+,Fe3+完全抑制其纤溶活性,PMSF,EDTA和DTT对该酶有抑制作用,说明活性中心含有二硫键、金属离子和丝氨酸;测其n端10个氨基酸序列为nH2-Val-Thr-Pro-Thr-Asn-Ala-Val-Asn-Thr-Gly,与其他生物来源的纤溶酶相比较没有同源性.

关键词：蜡状芽孢杆菌纤溶酶酶学性质 n端氨基酸序列