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中国19个狂犬病病毒街毒分离株n基因的序列分析

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病毒学报 2002年第1期18卷 48-51页

作者：徐葛林 Li Ku 吴杰 C.A.De Mattos 郑新雄薛经刚胡巧玲刘锦彦朱家鸿 C.C.De Mattos J S.Smith 武汉生物制品研究所湖北武汉430060 美国疾病控制中心

测定了 30年来从不同动物中分离的 19个中国狂犬病病毒街毒株n基因的部分核酸序列 ,并对其核苷酸差异做了比较分析。可将中国狂犬病病毒街毒株分为 4个组群 ,各组间的同源性为 83 45 %～ 88 6 2 %。除广西地区分离的狂犬病病毒街毒株彼... 详细信息

测定了 30年来从不同动物中分离的 19个中国狂犬病病毒街毒株n基因的部分核酸序列 ,并对其核苷酸差异做了比较分析。可将中国狂犬病病毒街毒株分为 4个组群 ,各组间的同源性为 83 45 %～ 88 6 2 %。除广西地区分离的狂犬病病毒街毒株彼此差异较大外 ,其余街毒株的地理分布与其n基因核酸序列差异的距离是密切相关的 ,基本上可按其地理分布分为东。

关键词：狂犬病病毒街毒株 n基因核苷酸序列分析中国

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猪流行性腹泻病毒n基因的克隆及原核表达

东北农业大学学报 2011年第6期42卷 81-85,I0001页

作者：杨巍李广兴孟凡丹王鑫任晓峰东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

从患猪流行性腹泻的病猪粪便中分离了猪流行性腹泻病毒(PEDV)命名为HLJBY,将病毒在Vero细胞上传代,使之适应生长。将扩增的猪流行性腹泻病毒的n基因克隆到原核表达载体PET30a上,构建了重组表达质粒PET-30a-PEDV-n,并在37℃的条件下诱导... 详细信息

从患猪流行性腹泻的病猪粪便中分离了猪流行性腹泻病毒(PEDV)命名为HLJBY,将病毒在Vero细胞上传代,使之适应生长。将扩增的猪流行性腹泻病毒的n基因克隆到原核表达载体PET30a上,构建了重组表达质粒PET-30a-PEDV-n,并在37℃的条件下诱导表达,通过不同时间取样,经SDS-PAGE分析结果表明,该蛋白获得了高效的表达。将PEDV在Vero细胞上大量繁殖后经超离纯化,作为免疫原制备兔抗PEDV的多克隆抗体血清。Western-blot结果表明蛋白与多抗血清具有良好的免疫反应性。

关键词： PEDV n基因原核表达 n蛋白

猪流行性腹泻病毒HB2015分离株n基因表达及单克隆抗体的制备

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江苏农业学报 2018年第1期34卷 76-80页

作者：祁光宇刘斌赵兴绪甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046

根据已经发表的猪流行性腹泻病毒n基因序列(GenBank:KX016034.1),设计1对特异性引物(上、下游分别插入Bam HⅠ和XhoⅠ酶切位点),通过RT-PCR技术扩增n基因,在测序鉴定正确后经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,获... 详细信息

根据已经发表的猪流行性腹泻病毒n基因序列(GenBank:KX016034.1),设计1对特异性引物(上、下游分别插入Bam HⅠ和XhoⅠ酶切位点),通过RT-PCR技术扩增n基因,在测序鉴定正确后经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,获得重组表达质粒pET32a-n。表达的蛋白质经纯化后进行Western blotting鉴定分析。以表达的PEDV-n蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选及亚克隆,获2株PEDV-n特异性单克隆抗体。对获得的单抗进行Western blotting鉴定和间接免疫荧光试验(IFA)分析,结果显示2株单抗均能与PEDV-n蛋白特异性结合和识别。以上结果表明PEDV-n蛋白在大肠杆菌中成功表达,且成功制备了2株具有生物学活性的特异单抗,为建立PEDV金标试纸诊断方法奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 n基因原核表达单克隆抗体 IFA分析

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狂犬病毒分离株n基因的分析

华南农业大学学报 2009年第4期30卷 119-121页

作者：江飙刘晓慧陈晶孙招金郭霄峰华南农业大学兽医学院广东广州510642

运用RT-PCR和动物接种的方法从广东省东莞市正常犬只的唾液中分离获得1株狂犬病毒,编号为GD33.为了解析该毒株与兽用狂犬病弱毒疫苗的关系,对该分离株的n基因进行了克隆和测序,并将n基因的序列与GeneBank上已发表的狂犬病毒n基因核苷酸... 详细信息

运用RT-PCR和动物接种的方法从广东省东莞市正常犬只的唾液中分离获得1株狂犬病毒,编号为GD33.为了解析该毒株与兽用狂犬病弱毒疫苗的关系,对该分离株的n基因进行了克隆和测序,并将n基因的序列与GeneBank上已发表的狂犬病毒n基因核苷酸和推导的氨基酸序列进行比较.结果发现:该分离株仅能引起乳鼠发病,对6周龄成鼠无致病性,说明该毒株不是强毒.该分离株n基因与弱毒疫苗HEP-F lury n基因的相似性最高,达99.7%,并且同处系统发育树的最近分枝.因此,推测该分离株源自接种的弱毒疫苗.

关键词：狂犬病毒弱毒疫苗 n基因克隆序列分析

河南省部分地区猪流行性腹泻病毒ORF3和n基因的克隆及其遗传进化分析

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动物医学进展 2020年第2期41卷 23-28页

作者：张云飞袁一心崔新格李倩魏战勇河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南省动物性食品安全重点实验室河南郑州450002

为探究河南省猪流行性腹泻病毒部分毒株的遗传进化情况,采用RT-PCR对2017年2月至2018年1月在河南省部分地区猪场收集到的25份PEDV阳性病料进行ORF3和n基因的扩增,并对其进行克隆、序列比对及遗传进化分析。结果显示,PEDV毒株的ORF3基因... 详细信息

为探究河南省猪流行性腹泻病毒部分毒株的遗传进化情况,采用RT-PCR对2017年2月至2018年1月在河南省部分地区猪场收集到的25份PEDV阳性病料进行ORF3和n基因的扩增,并对其进行克隆、序列比对及遗传进化分析。结果显示,PEDV毒株的ORF3基因序列是由675个核苷酸组成的,与经典毒株CV777之间核苷酸及氨基酸同源性分别为95.2%~97.5%和95.1%~96.9%。n基因之间的核苷酸与氨基酸同源性分别为96.2%~100%和93.8%~99.8%;与经典毒株CV777核苷酸与氨基酸的同源性分别为94.7%~95.8%和93.2%~96.8%。河南部分地区PEDV流行毒株与经典毒株CV777不在同一分支,说明猪场暴发猪流行性腹泻与免疫接种疫苗后依旧难以控制的原因,可能与大多数PEDV河南流行株发生变异有关。

关键词：猪流行性腹泻病毒 ORF3基因 n基因遗传进化分析

鸡传染性支气管炎病毒SD03株n基因的克隆、序列分析及n蛋白理化性质分析

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中国畜牧兽医 2014年第12期41卷 67-73页

作者：邢婧珉陈冰李云霞付立辉张立霞李亚杰郁宏伟杨保收天津瑞普生物技术股份有限公司瑞普研究院生物制品研究中心天津300308 瑞普(天津)生物药业有限公司天津300300

试验旨在确定国内鸡肾型传染性支气管炎病毒(IBV)流行毒株核蛋白n与市场上现用疫苗株、近年国内外分离株的差异性。本研究利用自山东某鸡场病鸡肾脏组织分离获得、经PCR鉴定为IBV阳性的毒株(命名为SD03株),参考nCBI上部分IBV毒株n基因... 详细信息

试验旨在确定国内鸡肾型传染性支气管炎病毒(IBV)流行毒株核蛋白n与市场上现用疫苗株、近年国内外分离株的差异性。本研究利用自山东某鸡场病鸡肾脏组织分离获得、经PCR鉴定为IBV阳性的毒株(命名为SD03株),参考nCBI上部分IBV毒株n基因的保守区域设计引物,进行RT-PCR扩增,构建重组pMD18-T-n/DH5α菌,测序获得n基因序列。与参考株进行了核苷酸及氨基酸同源性分析,结合DnAStar软件与http://***/网站对该基因编码的蛋白进行理化性质分析。结果显示,SD03株为IBV肾型毒株,与LDT3、partridge/GD/S14/2003毒株(肾型)核苷酸及氨基酸同源性均在99.0%以上。与其他国内外肾型经典毒株Ma5、W93、Gray、Holte株氨基酸同源性为90.0%~94.6%,与国内外呼吸型疫苗株H120、H52、M41氨基酸同源性为89.7%~91.0%。本研究深入分析了当前流行株SD03株n蛋白的理化特性,为n蛋白亚单位疫苗在不同系统中表达及蛋白纯化提供了理论依据,为中国现阶段IBV的防控奠定了一定的理论基础。

关键词：传染性支气管炎病毒 RT-PCR n基因 n蛋白同源性系统发生树 n蛋白理化性质

陕西省部分地区猪流行性腹泻病毒S、M和n基因的遗传变异分析

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动物医学进展 2016年第11期37卷 25-30页

作者：庞文静何亚鹏付明哲许信刚郭抗抗张琪西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

为了解陕西省部分地区猪流行性腹泻病毒（PEDV）的遗传和变异情况,采集陕西省部分地区规模化猪场的5份疑似PEDV感染的猪小肠内容物,进行PEDV S、M和n基因的RT-PCR扩增,并对扩增产物进行序列测定和遗传变异分析。结果表明,5份病料均能扩... 详细信息

为了解陕西省部分地区猪流行性腹泻病毒（PEDV）的遗传和变异情况,采集陕西省部分地区规模化猪场的5份疑似PEDV感染的猪小肠内容物,进行PEDV S、M和n基因的RT-PCR扩增,并对扩增产物进行序列测定和遗传变异分析。结果表明,5份病料均能扩增出PEDV S、M和n基因,5株病毒分别命名为SXSL、SX-BJ、SX-YL、SX-Wn和SX-HZ株。序列分析表明,5株毒株之间的S、M和n基因核苷酸序列的同源性分别为96.7%～99.8%、98.4%～100%和97.2%～99.9%;氨基酸序列的同源性分别为97.4%～99.9%、98.2%～100%和98.2%～100%。该5株病毒与中国疫苗株CV777的S、M和n基因核苷酸序列的同源性分别为93.9%～99.8%、98.1%～100%和95.3%～99.9%,氨基酸序列的同源性为93.6%～99.9%、96.2%～100%和98.2%～100%。遗传进化分析结果显示,5个陕西分离株的S基因与中国疫苗株CV777亲缘关系较远,与近年来中国株、日本株以及韩国株亲缘关系较近。SX-SL株、SX-BJ株和SX-YL株的M和n基因与中国疫苗株CV777亲缘关系较近,且与中国株CHGD-01亲缘关系密切。SX-Wn株和SX-HZ株的M和n基因与中国疫苗株CV777亲缘关系较远。该5株病毒的S基因以及SX-Wn株和SX-HZ株的M基因和n基因变异程度较大,而SX-SL株、SX-BJ株和SX-YL株三个流行株均与中国株CHGD-01亲缘关系密切,并且与近年在陕西省流行的PEDV也不完全相同。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S基因 M基因 n基因序列分析

恒河猴源犬瘟热病毒n、F基因的克隆与序列分析

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中国兽医杂志 2017年第2期53卷 26-28页

作者：邱薇王文博胡挺松余静郭平郑颖张富强范泉水中国人民解放军成都军区疾病预防控制中心云南昆明650118

为了进一步明确引起恒河猴类麻疹综合征的病原体及其来源,对恒河猴源犬瘟热病毒的n、F全基因进行了克隆和序列分析。得到全长1 572 bp的n基因和2 080 bp的F基因,测序后分别与不同CDV毒株的n、F基因核苷酸和氨基酸序列进行分析,n基因核苷... 详细信息

为了进一步明确引起恒河猴类麻疹综合征的病原体及其来源,对恒河猴源犬瘟热病毒的n、F全基因进行了克隆和序列分析。得到全长1 572 bp的n基因和2 080 bp的F基因,测序后分别与不同CDV毒株的n、F基因核苷酸和氨基酸序列进行分析,n基因核苷酸(氨基酸)与CDV疫苗株Onderstepoort、vaccine x、标准野毒株A75-17同源性分别为93.6%(96.9%)、97.3%(99.0%)和97.3%(99.0%);F基因核苷酸(氨基酸)与上述毒株同源性分别为91.0%(97.8%)、94.9%(98.6%)和94.4%(97.9%)。n、F基因的系统发育分析表明,恒河猴CDV毒株与黑龙江狐狸毒株(CDV-FOX-HLJnM)遗传关系较近,与其他分离株遗传关系相对较远。本研究从分子水平上证明了引起恒河猴发病的病原体为一株CDV野毒株,而非疫苗株。

关键词：恒河猴犬瘟热病毒 n基因 F基因序列分析

猪流行性腹泻病毒的RT-PCR鉴定及其M、n和E基因的序列分析

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西北农业学报 2012年第9期21卷 24-28页

作者：张红垒董洁梁亚冰许信刚童德文西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

对引起仔猪严重腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)进行RT-PCR检测,并对PEDV部分基因进行克隆和序列分析。从陕西省某发生严重仔猪腹泻的养猪场采集肠道内容物,利用RT-PCR技术成功检测到PEDV感染。克隆检测... 详细信息

对引起仔猪严重腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)进行RT-PCR检测,并对PEDV部分基因进行克隆和序列分析。从陕西省某发生严重仔猪腹泻的养猪场采集肠道内容物,利用RT-PCR技术成功检测到PEDV感染。克隆检测到的PEDV M、n和E基因片段,并将该基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与其他不同来源的PEDV毒株进行比较分析。结果表明,克隆的M、n和E基因与其他已经发表的PEDV毒株核苷酸的同源性分别为96.3%～99.9%、95.2%～99.5%和96.1%～96.9%,氨基酸同源性分别为95.6%～99.6%、96.1%～99.5%和96.1%～98.7%;系统进化树结果表明,试验检测的PEDV与国内分离株的PEDV株亲缘关系更近。可见:陕西省养殖场存在猪流行性腹泻病毒感染,其M、n和E基因变异不大。

关键词：猪流行性腹泻病毒 RT-PCR鉴定 M基因 n基因 E基因序列分析