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C末端缺失nR2B亚单位表达载体的构建及其在nMdA受体装配研究中的应用

浙江大学学报（医学版） 2003年第6期32卷 480-485页

作者：杨巍罗建红高英黄曼郑婵颖浙江大学医学院神经生物学教研室浙江杭州310006

目的 :研究 nMdA受体 nR2 B亚单位细胞内 C末端 ,在 nR1- 1a/ nR2 B亚型 nMdA受体装配和表面表达中的作用。方法 :构建 C末端不同缺失和 GFP标记的 nR2 B亚单位表达载体 ,单独转染或与 nR1亚单位共转染到 HEK2 93细胞 ,用抗 GFP多克隆... 详细信息

目的 :研究 nMdA受体 nR2 B亚单位细胞内 C末端 ,在 nR1- 1a/ nR2 B亚型 nMdA受体装配和表面表达中的作用。方法 :构建 C末端不同缺失和 GFP标记的 nR2 B亚单位表达载体 ,单独转染或与 nR1亚单位共转染到 HEK2 93细胞 ,用抗 GFP多克隆抗体和 Cy3荧光素交联的二抗作活细胞表面受体染色。结果 :成功构建了 8个 C末端不同缺失的 GFP- nR2 B表达质粒 (GFP- nR2 BΔ1～Δ 8)。将 GFP- nR1- 1a,GFP- nR2 B及 GFP- nR2 BΔ 1～Δ 8分别单独转染 HEK2 93细胞 ,不能获得达细胞膜表面的表达。而将这些质粒分别与 nR1- 1a共转染 2 93细胞 ,发现 GFP - nR2 B及 C末端部分缺失的 GFP- nR2 BΔ1～Δ6 ,均能与 nR1- 1a一起表达于细胞膜表面 ,而仅留有 PdZ结合基序的 GFP- nR2 BΔ7和 C末端全长缺失的 GFP- nR2 BΔ8,则不能与 nR1- 1a一起表达于细胞膜表面。结论 :nR1- 1a与 nR2 B的共表达和装配 ,是形成 nR1- 1a/ nR2 B亚型 nMdA受体并表达于细胞表面的必要条件。nR2 B与 nR1- 1a装配时 ,nR2 B对 nR1- 1a C1盒中内质网滞留基序的遮蔽和阻滞作用 ,并不依赖于 nR2 B C末端某一特定的区域 ,相反可能仅要求有一定长度的 nR2 B C末端。

关键词：受体 n—甲基—d—天冬氨酸/分析 nR2B亚单位膜表面表达内质网滞留

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nMdA受体nR2A亚单位C末端突变体在HEK293细胞的共表达研究

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浙江大学学报（医学版） 2003年第6期32卷 475-479页

作者：郑婵颖罗建红傅婷杨巍沈海清浙江大学医学院神经生物学教研室浙江杭州310006

目的 :研究 n-甲基 - d-天冬氨酸 (nMdA)受体 nR2 A亚单位的细胞内羧基端在受体装配和表面表达中的作用。方法 :构建 n末端 GFP标记、C末端不同区域缺失的 nR2 A亚单位表达载体 GFP- nR2 AΔ C1～ GFP- nR2 AΔC5 ,其 C末端缺失区依次... 详细信息

目的 :研究 n-甲基 - d-天冬氨酸 (nMdA)受体 nR2 A亚单位的细胞内羧基端在受体装配和表面表达中的作用。方法 :构建 n末端 GFP标记、C末端不同区域缺失的 nR2 A亚单位表达载体 GFP- nR2 AΔ C1～ GFP- nR2 AΔC5 ,其 C末端缺失区依次分别为 897L - 10 17S、10 2 4 d- 114 2 P、114 9d- 1347G、135 4S- 14 6 4V和 897L - 14 6 4V。将它们单独转染或与 nR1亚单位共转染到 HEK2 93细胞 ,用抗 GFP多克隆抗体和 Cy3荧光素交联的二抗作活细胞表面受体染色。结果 :成功构建了 5个 C末端不同区域缺失的 GFP- nR2 A表达质粒 GFP- nR2 AΔC1～ GFP- nR2 AΔC5。将这些载体分别单独转染 HEK2 93细胞 ,均不能获得达细胞膜表面表达。而将这些质粒分别与 nR1- 1a共转染 HEK2 93细胞 ,发现它们均能与 nR1- 1a表达于细胞膜表面。结论 :nR1- 1a与 nR2 A的共表达是形成nR1- 1a/ nR2 A亚型 nMdA受体并获得细胞表面表达的必要条件。nR2 A C末端 897L下游并未找到直接与 nR1- 1a C1盒中内质网滞留基序相互作用的某一特定区域 ,也不含有决定 nR2 A亚单位本身细胞内滞留的区域。

关键词：受体 n—甲基—d—天冬氨酸/分析 nR2A亚单位内质网滞留表面表达

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