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Clinical significance of serum miR-129-5p in patients with diabetes mellitus presenting macrovascular complications

World Journal of Diabetes 2021年第8期12卷 1282-1291页

作者： Xiao-Yun He Chun-Lin Ou Department of Pathology Xiangya HospitalCentral South UniversityChangsha 410008Hunan ProvinceChina Department of Endocrinology Affiliated Hospital of Guilin Medical UniversityGuilin 541001Guangxi Zhuang Autonomous RegionChina

BACKGROUND Diabetic macrovascular complications(DMCs)are the most common complications encountered during the course of diabetes mellitus(DM)with extremely high mortality rates.Therefore,there is an urgent need to identify specific and sensitive biomarkers for the early diagnosis of DMCs.AIM To investigate the expression and significance of serum miR-129-5p in patients with DM and macrovascular complications.METHODS Serum samples were collected from 36 healthy controls,58 patients with DM presenting no macrovascular complications,and 62 patients with DMCs.The expression of miR-129-5p was detected using quantitative real-time polymerase chain reaction.Pearson’s correlation assay was performed to analyze the correlation between serum miR-129-5p levels and clinical indicators.Receiver operator characteristic(ROC)analysis was conducted to analyze the diagnostic value of serum miR-129-5p in patients with DM or DMCs.RESULTS There was a 4.378-fold and 7.369-fold increase in serum miR-129-5p expression in the DM(5.346±0.405)and DMCs(8.998±0.631)groups,respectively(P<0.001),compared with the control group(1.221±0.090).In addition,the expression of serum miR-129-5p in patients with DMCs was higher than that in patients with DM,revealing a 1.683-fold increase(P<0.001).Additionally,serum miR-129-5p expression significantly correlated with smoking history,disease duration,and glycated hemoglobin(HbA1c)in patients with DMCs(P<0.001).The area under the ROC curve(AUC)of miR-129-5p as a serum marker was 0.964(95%confidence interval[CI]:0.930-0.997,P<0.001)in distinguishing between patients with DM and healthy controls,whereas the AUC of miR-129-5p as a serum marker was 0.979(95%CI:0.959-0.999,P<0.001)in distinguishing between patients with DMCs and healthy controls.CONCLUSION Elevated serum miR-129-5p expression levels correlate with the development of DMCs and can be utilized as a novel early diagnostic biomarker for DM combined with macrovascular complications.

关键词： Diabetes mellitus Diabetic macrovascular complications mircorna Diagnosis Therapy

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mir-301b-5p通过TXNIP/NLRP3轴调控wnt/β-catenin通路在大鼠先天性肛门直肠畸形中的研究

mir-301b-5p通过TXNIP/NLRP3轴调控wnt/β-catenin通路在大鼠先天...

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作者：沈苗苗中国医科大学

学位级别：硕士

目的:验证mir-301b-5p通过TXNIP/NLRP3轴调控wnt/β-catenin通路在大鼠先天性肛门直肠中的研究。研究方法:1.60只孕鼠随机分为正常组和ARM组,ARM组:1%125ml/kg ETU;正常组:等量生理盐水。GD14、GD15和GD16无菌条件下剖宫取胎,收集胎鼠... 详细信息

目的:验证mir-301b-5p通过TXNIP/NLRP3轴调控wnt/β-catenin通路在大鼠先天性肛门直肠中的研究。研究方法:1.60只孕鼠随机分为正常组和ARM组,ARM组:1%125ml/kg ETU;正常组:等量生理盐水。GD14、GD15和GD16无菌条件下剖宫取胎,收集胎鼠肛门直肠部位组织。2.Western blot、免疫组化检测TXNIP、NLRP3炎性小体在正常组和ARM组直肠末端的差异性表达。q RT-PCR和FISH检测对照组和ARM组mir-301b-5p的时空表达差异。3.在IEC-6中转染si-NC/TXNIP,Western Blot检测NLRP3炎性小体的表达变化,ELISA检测细胞上清液中IL-1β和IL-18的含量。4.在IEC-6中转染mir-NC/mimic,q RT-PCR和Western Blot分别检测TXNIP m RNA和蛋白的表达,进一步通过双荧光素酶检测mir-301b-5p与TXNIP之间的结合位点。5.在IEC-6中转染mir-NC/mimic,Western Blot检测NLRP3炎性小体的蛋白表达情况,ELISA检测细胞上清液中分泌的IL-1β和IL-18,cck-8检测过表达mir-301b-5p对细胞活力的影响。6.Western Blot检测过β-catenin在mir-301b-5p调控TXNIP/NLRP3中蛋白表达情况。7.所有的实验数据用均值±标准差表示,每组实验数据至少做三次生物学重复。使用SPSS 19.0和Prism 8.0软件进行统计学分析,p＜0.05表示有统计学差异。结果:与正常组胎鼠末端直肠相比,TXNIP和NLRP3炎性小体在ARM组的GD15和GD16蛋白表达明显上调。2.在GD15和GD16,对比正常组,ARM胎鼠的直肠末端的mir-301b-5p表达下调。3.与NC组相比,在IEC-6中敲低TXNIP抑制NLRP3活性,cleaved-caspase-1的蛋白表达量降低及IL-1β和IL-18含量减少。4.与NC组相比,过表达mir-301b-5p后TXNIP m RNA和蛋白表达量降低,进一步的双荧光素酶试验核实TXNIP是mir-301b-5p的直接靶标。5.与NC组相比,在IEC-6中过表达mir-301b-5p使NLRP3活性受抑制,NLRP3/cleaved-caspase-1的蛋白表达降低,细胞上清液中分泌的IL-1β和IL-18也减少,且过表达mir-301b-5p会减少细胞死亡,增强细胞活力。6.与NC组相比,过表达mir-301b-5p引起β-catenin蛋白表达量降低。结论:研究结果表明,mir-301b-5p通过TXNIP/NLRP3轴调控wnt/β-catenin通路参与ARM的病理过程。

关键词：先天性肛门直肠畸形 mircorna TXNIP NLRP3

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滚环扩增结合实时荧光PCR技术用于mircorna检测

滚环扩增结合实时荧光PCR技术用于mircoRNA检测

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作者：蔡迎清浙江工业大学

学位级别：硕士

目的:利用滚环扩增(Rolling Circle Amplification.RCA)技术信号放大的优点,结合实时荧光PCR(real-time PCR)技术,建立一种特异性好、灵敏度高的miR-200a-3p检测方法,并对本方法进行初步的应用研究。方法:(1)建立茎环引物RT-PCR检测miR-... 详细信息

目的:利用滚环扩增(Rolling Circle Amplification.RCA)技术信号放大的优点,结合实时荧光PCR(real-time PCR)技术,建立一种特异性好、灵敏度高的miR-200a-3p检测方法,并对本方法进行初步的应用研究。方法:(1)建立茎环引物RT-PCR检测miR-200a-3p的方法,并优化其反应条件。(2)建立RCA结合real-time PCR(RCA-PCR)技术检测miR-200a-3p的新方法,优化其反应条件,并进行方法学验证。(3)将建立的新方法与茎环引物RT-PCR方法在灵敏度、特异性和定量范围等方面进行比较。同时比较这两种方法在HepG2、Huh7、BEL7402、HT29、HL7702等细胞样品中的miR-200a-3p定量检测。结果:(1)成功建立了茎环引物RT-PCR检测miR-200a-3p的方法,并优化得到了最佳反应条件,在最佳反应条件下,对miR-200a-3p的灵敏度达到了8 pmol/L。(2)成功建立了RCA-PCR检测miR-200a-3p的新方法,优化得到了最佳反应条件,在最佳反应条件下,对miR-200a-3p的灵敏度达到了1 fmol/L。并在最佳反应条件下进行了方法学验证,结果显示本方法符合方法学验证要求。(3)茎环引物RT-PCR方法与本方法相比:?茎环引物RT-PCR检测方法的定量检测范围是10 nmol/L0 pmol/L,检测限是8 pmol/L,定量下限是10 pmol/L;?本方法的定量检测范围是1 nmol/L0 fmol/L,检测限是1 fmol/L,定量下限是10 fmol/L。综上,本方法在灵敏度、定量下限和定量范围方面要优于茎环引物RT-PCR方法。结论:本研究成功建立了茎环引物RT-PCR和RCA-PCR两种方法实现了对miR-200a-3p的定量检测。同时我们将这两种方法应用到实际样品的检测当中,结果表明RCA-PCR方法能成功实现对细胞样品中miR-200a-3p的定量检测,而茎环引物RT-PCR方法因为灵敏度原因仅能对miR-200a-3p进行相对定量检测。

关键词： mircorna miR-200a 滚环扩增实时荧光PCR 检测

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MicroRNA signature and function in retinal neovascularization

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World Journal of Biological Chemistry 2014年第1期5卷 1-11页

作者： Saloni Agrawal Brahim Chaqour Department of Cell Biology State University of New York (SUNY) Downstate Medical Center Department of Cell Biology and Ophthalmology and SUNY Eye Institute Downstate Medical Center

Ischemic retinopathies are clinically well-defined chronic microvascular complications characterized by gradually progressive alterations in the retinal microvasculature and a compensatory aberrant neovascularization of the eye. The subsequent metabolic deficiencies result in structural and functional alterations in the retina which is highly susceptible to injurious stimuli such as diabe-tes, trauma, hyperoxia, inflammation, aging and dys-plipidemia. Emerging evidence indicates that an effec-tive therapy may require targeting multiple components of the angiogenic pathway. Conceptually, mircorna(miRNA)-based therapy provides the rationale basis for an effective antiangiogenic treatment. miRNAs are an evolutionarily conserved family of short RNAs, each regulating the expression of multiple protein-coding genes. The activity of specific miRNAs is important for vascular cell signaling and blood vessel formation and function. Recently, important progress has been made in mapping the miRNA-gene target network andmiRNA-mediated gene expression control. Here wehighlight the latest findings on angiogenic and antian-giogenic miRNAs and their targets as well as potentiaimplications in ocular neovascular diseases. Emphasis isplaced on how specific vascular-enriched miRNAs regu-late cell responses to various cues by targeting severafactors, receptors and/or signaling molecules in orderto maintain either vascular function or dysfunction. Fur-ther improvement of our knowledge in not only miRNAspecificity, turnover, and transport but also how miRNAsequences and functions can be altered will enhancethe therapeutic utility of such molecules.

关键词： mircorna Angiogenesis Retinal neovascu-larization Vascular endothelial growth factor Ischemia Endothelial cell

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mircorna在直肠癌中的研究进展

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武警医学 2020年第8期31卷 730-732页

作者：杜哲明(综述) 邓莉(综述) 周育宏(审校) 武警江西总队医院外一科南昌330030 南昌市第三医院医务科 330006

直肠癌是全世界公认的致命恶性肿瘤之一,尽管死亡率在过去的10年中有所下降,但直肠癌仍是世界上由于癌症死亡的主要原因之一,每年有约100万新确诊病例~[1]。直肠癌不容易被早期诊断,这也是其高死亡率的原因。mircorna(miRNA)是一类非编... 详细信息

直肠癌是全世界公认的致命恶性肿瘤之一,尽管死亡率在过去的10年中有所下降,但直肠癌仍是世界上由于癌症死亡的主要原因之一,每年有约100万新确诊病例~[1]。直肠癌不容易被早期诊断,这也是其高死亡率的原因。mircorna(miRNA)是一类非编码RNA,具有转录后调控表达的能力,众多miRNA调节着数百个生长调节基因和通路的表达~[2].

关键词： mircorna 直肠癌研究进展

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IgA肾病的表观遗传学研究进展

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实用医院临床杂志 2022年第2期19卷 218-221页

作者：王秋霞(综述) 王蔚遵义医科大学贵州遵义563000 四川省医学科学院·四川省人民医院四川成都610072

IgA肾病(IgA Nephropathy,IgAN)是目前最常见的原发性肾小球肾炎,是一种多基因参与的免疫相关性疾病。然而目前GWAS研究中关于IgAN的遗传易感位点仅能解释4~7%的疾病遗传度。有研究发现了表观遗传学在IgAN中的作用。表观遗传学是指DNA... 详细信息

IgA肾病(IgA Nephropathy,IgAN)是目前最常见的原发性肾小球肾炎,是一种多基因参与的免疫相关性疾病。然而目前GWAS研究中关于IgAN的遗传易感位点仅能解释4~7%的疾病遗传度。有研究发现了表观遗传学在IgAN中的作用。表观遗传学是指DNA序列未发生变化,但生物体的表型发生了可遗传性的改变,其机制主要包括DNA甲基化、组蛋白甲基化、MicroRNA调控、染色质重塑等。本文就目前表观遗传学特别是DNA甲基化在IgA肾病中的研究进展做一综述。

关键词： IgA肾病表观遗传学 DNA甲基化组蛋白甲基化 mircorna

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MicroRNA在创伤性脑损伤的研究进展

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中国法医学杂志 2013年第6期28卷 484-487页

作者：孙婷怡刘良刘子龙华中科技大学同济医学院法医学系湖北武汉430030

MicroRNA是一类非编码小分子RNA,可调控人类基因组中20%-30%的基因,对细胞分化、增殖和凋亡起着重要调控作用。部分microRNA在哺乳动物中枢神经系统呈高水平表达,在神经元发育、突触发生和可塑性等过程中发挥关键作用,对认知功能亦有重... 详细信息

MicroRNA是一类非编码小分子RNA,可调控人类基因组中20%-30%的基因,对细胞分化、增殖和凋亡起着重要调控作用。部分microRNA在哺乳动物中枢神经系统呈高水平表达,在神经元发育、突触发生和可塑性等过程中发挥关键作用,对认知功能亦有重要影响。创伤性脑损伤所致认知障碍的鉴定是法医学领域的重点及难点问题,识别其相关的特异性microRNA及其靶基因、阐明相应的信号传导通路对明确颅脑损伤的诊断、鉴别、预后及判断致伤机制、推断死因等方面可能均具有重要价值,应是今后的研究重点。本文简介microRNA在中枢神经系统中的分布与功能,对microRNA在创伤性脑损伤中所发挥的作用以及法医学研究进展做了重点阐述。

关键词：法医临床学 mircorna 中枢神经系统创伤性脑损伤认知障碍

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C3H10T1/2成软骨分化过程中miR-19a与CCND1的表达及调控

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中山大学学报（医学科学版） 2015年第1期36卷 71-77页

作者：龚铭周治宇代学俊高蔓蔓罗嘉全黄胜李亮平邹学农中山大学附属第一医院脊柱外科∥骨科研究所广东广州510080 昆明市延安医院脊柱外科云南昆明650051

【目的】在间充质干细胞诱导成软骨分化过程中,探讨mi R-19a与细胞周期基因CCND1之间的关系,为揭示mi R-19a参与调控成软骨分化的可能机制提供基础。【方法】选取小鼠间充质干细胞C3H10T1/2为研究对象,运用离心沉淀法进行pellet细胞微... 详细信息

【目的】在间充质干细胞诱导成软骨分化过程中,探讨mi R-19a与细胞周期基因CCND1之间的关系,为揭示mi R-19a参与调控成软骨分化的可能机制提供基础。【方法】选取小鼠间充质干细胞C3H10T1/2为研究对象,运用离心沉淀法进行pellet细胞微球培养,用含有TGF-β3及2%FBS的高糖DMEM进行成软骨诱导并作为实验组,用含2%FBS的高糖DMEM培养(替换)导作为对照组。分别在1、2、3周进行定量PCR检测成软骨分化相关基因表达以及在第3周进行甲苯胺蓝染色。【结果】与对照组比较,细胞功能基因Bax与Klf-4表达均下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。成软骨分化关键启动因子SOX-9及相关基因aggrecan,collagen II,Collagen Xa1的表达均在2周时显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。通过互联网生物信息学预测CCND1可能是mi R-19a的靶基因;在成软骨分化过程中,mi R-19a表达逐渐上升(P<0.05),而CCND1的表达与对照组相比逐渐下降(P<0.05)。甲苯胺蓝染色pellet细胞微球呈蓝紫色,细胞核呈深蓝色,诱导组中细胞外基质含量明显增多。【结论】在C3H10T1/2成软骨分化过程中,mi R-19a参与维持细胞干性及增殖基因表达降低,分化能力得到增强;且mi R-19a参与该分化调控过程。

关键词： mircorna 间充质干细胞成软骨分化

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冠心病血瘀证表观遗传学研究进展

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中国中医基础医学杂志 2017年第9期23卷 1336-1339页

作者：陈光高嘉良刘咏梅王阶中国中医科学院广安门医院北京100053 北京中医药大学北京100029

从表观遗传学研究探讨冠心病血瘀证的证候实质,主要包括DNA甲基化修饰和非编码RNA调控两个方面。DNA甲基化的调控方式具有整体、可逆、间接的特点,而非编码RNA的调节方式具有广泛、多样、复杂的特点。总体而言,表观遗传学调控的时间特... 详细信息

从表观遗传学研究探讨冠心病血瘀证的证候实质,主要包括DNA甲基化修饰和非编码RNA调控两个方面。DNA甲基化的调控方式具有整体、可逆、间接的特点,而非编码RNA的调节方式具有广泛、多样、复杂的特点。总体而言,表观遗传学调控的时间特异性和组织特异性明显,调节方式相对间接,充分体现基因遗传与环境的相互作用,其中渗透着中医天人相应、整体观的思想,为研究中医证候实质与中药作用机制提供了合作平台。

关键词：冠心病血瘀证表观遗传学 DNA甲基化 mircorna 综述

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结肠癌组织中microRNA表达谱的变化

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安徽医科大学学报 2019年第3期54卷 348-353页

作者：郑俊俊毛玉娣汪朝靓殷实王华安徽医科大学第一附属医院肿瘤科合肥230022 安徽省立医院老年医学科合肥230001

目的研究结肠癌组织中微小RNA(miRNA)表达谱的变化。方法收集5例结肠癌和5例癌旁组织进行miRNA基因芯片检测,从中筛选出异常表达的miRNA。通过生物信息学分析的方法对差异性表达miRNA所调控的靶基因、富集的生物过程和信号通路进行分析... 详细信息

目的研究结肠癌组织中微小RNA(miRNA)表达谱的变化。方法收集5例结肠癌和5例癌旁组织进行miRNA基因芯片检测,从中筛选出异常表达的miRNA。通过生物信息学分析的方法对差异性表达miRNA所调控的靶基因、富集的生物过程和信号通路进行分析。结果通过Affymetrix miRNA4.0芯片检测,共筛选出73个差异性表达的miRNA,并对变化最明显的前13个上调及前13个下调的基因进行总结,其中包括hsa-miR-183-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-99a-5p等新的结肠癌相关基因。此外,生物信息学分析显示了差异性表达miRNA所调控的靶基因以及其所代表的生理意义,如蛋白质修饰过程、Wnt信号通路、癌症相关通路、翻译后蛋白质修饰、RAS信号通路、TP53转录调控等。结论检测结肠癌组织中miRNA表达谱的变化,对探讨结肠癌发病机制,寻找早期诊断和预后标志物,扩展治疗策略提供新的视野。

关键词：结肠癌 mircorna 异常表达基因表达谱靶基因

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