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bta-mir-34b controls milk fat biosynthesis via the Akt/mTOR signaling pathway by targeting RAI14 in bovine mammary epithelial cells

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Journal of Animal Science and biotechnology 2021年第4期12卷 1598-1609页

作者： Yujuan Wang Xiaoyu Wang Meng Wang Li Zhang Linsen Zan Wucai Yang College of Animal Science and Technology Northwest A&F UniversityXianyang 712100ShaanxiChina

background:The biosynthesis of milk fat affects both the technological properties and organoleptic quality of milk and dairy ***(mirNAs)are endogenous small non-coding RNAs that inhibit the expression of their mRNA targets and are involved in downstream signaling pathways that control several biological processes,including milk fat ***-34b is a member of the mir-34 mirNA cluster,which is differentially expressed in the mammary gland tissue of dairy cows during lactation and dry *** studies have indicated mir-34b is a potential candidate gene that plays a decisive role in regulating milk fat synthesis;therefore,it is important to focus on mir-34b and investigate its regulatory effect on the biosynthesis of milk fat in bovine mammary epithelial cells(bMECs).Results:In this study,elevated mir-34b levels reduced milk fat synthesis,upregulated 1,999 genes,and downregulated 2,009 genes in ***,Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)analysis of differentially expressed genes suggested that mir-34b may play an inhibitory role in milk fat synthesis via the protein kinase b(Akt)/mammalian target of rapamycin(mTOR)signaling pathway by reducing phosphorylation ***,the mTOR activator MHY1485 rescued the inhibitory effect of ***,we demonstrated that retinoic acid-induced protein 14(RAI14)is a target of mir-34b via TargetScan and immunofluorescence ***14 mRNA and protein levels were significantly decreased by the mir-34b mimic and increased by the mir-34b ***,the reduction in RAI14 levels led to the inhibition of the Akt/mTOR signaling ***:Overall,our results identified a mir-34b-RAI14-Akt/mTOR regulatory network,while also providing a theoretical basis for the molecular breeding of dairy cows.

关键词： Akt/mTOR signaling pathway bovine mammary epithelial cells Milk fat mir-34b RAI14

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mir-34b在白血病细胞株表达和启动子区CpG岛甲基化状态及其临床意义

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中国实验血液学杂志 2015年第5期23卷 1235-1239页

作者：郭健欣周雅虹官瑞婷潘敬新张学亚钟金发福建医科大学附属第二医院血液内科福建泉州362000 福建医科大学附属第二医院血透室福建泉州362000 福建医科大学附属第二医院检验科福建泉州362000

目的:探讨mir-34b在白血病细胞株表达和启动子区CpG岛甲基化状态及其临床意义。方法:选择10例非血液系统疾病患儿作为对照组,收集对照组骨髓细胞标本,另选择HL-60和K562白血病细胞株,采用荧光定量PCR检测对照组骨髓细胞、HL-60和K562细... 详细信息

目的:探讨mir-34b在白血病细胞株表达和启动子区CpG岛甲基化状态及其临床意义。方法:选择10例非血液系统疾病患儿作为对照组,收集对照组骨髓细胞标本,另选择HL-60和K562白血病细胞株,采用荧光定量PCR检测对照组骨髓细胞、HL-60和K562细胞株的mir-34b相对表达量,并用甲基化特异性PCR检测各组mir-34b甲基化状态。用地西他滨处理HL-60和K562细胞株,用同样方法检测两种细胞株mir-34b相对表达量及甲基化状态。采用脂质体转染法将Has-mir-34b转染至K562细胞株,根据转染是否成功分为未转染组、阴性对照组和Has-mir-34b转染组,记录各组培养后不同时间细胞的增殖情况,并计算增殖抑制率。结果:对照组mir-34b相对表达量为(5.23±0.75),HL-60相对表达量为(0.05±0.01),K562相对表达量为(0.04±0.01),3组间比较差异具有统计学意义(F=44.812,P=0.000)。HL-60细胞株和K562细胞株分别在启动子区CpG岛存在甲基化状态,10例非血液系统疾病患儿骨髓细胞无甲基化现象。经过地西他滨处理后HL-60和K562细胞株mir-34b表达水平均显著增加(Pmir-34b转染组细胞增殖抑制率分别为24.8%、46.7%、33.6%和24.7%,细胞增殖率均显著低于未转染组和阴性对照组,组间比较差异均具有统计学意义(Pmir-34b启动子区CpG岛甲基化使其表达水平显著降低,这也是mir-34b对细胞株增殖抑制作用降低的原因;mir-34b也有可能是一种抑癌基因参与调控白血病的发生、发展。

关键词：白血病细胞株 mir-34b CpG岛甲基化细胞增殖

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mir-34b调控肠道病毒71型在人横纹肌肉瘤细胞中的复制及机制

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微生物学通报 2018年第12期45卷 2731-2737页

作者：杨倬田波中国疾病预防控制中心营养与健康所北京100050 中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室北京100101

【背景】研究发现microRNAs(mirNAs)可以参与调控病毒在宿主细胞内感染和复制的过程。【目的】研究mir-34b对肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)在宿主细胞内的复制及其可能机制。【方法】在人横纹肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma,RD)细胞中转染... 详细信息

【背景】研究发现microRNAs(mirNAs)可以参与调控病毒在宿主细胞内感染和复制的过程。【目的】研究mir-34b对肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)在宿主细胞内的复制及其可能机制。【方法】在人横纹肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma,RD)细胞中转染mir-34b mimics和Inhibitor,通过Western blot和Real-time PCR实验检验EV71病毒的复制和表达情况。随后利用双荧光素酶报告系统验证mir-34b与潜在靶点eIF4E的相互作用,并检测mir-34b对RD细胞中eIF4E mRNA表达水平的影响。【结果】mir-34b可以促进病毒在RD细胞中的复制和表达,而mir-34b抑制剂有抑制病毒复制的作用,细胞内mir-34b可以通过作用于靶基因eIF4E调控EV71在宿主细胞中的复制过程。【结论】揭示了mir-34b在EV71病毒复制过程中的调控作用及机制,研究EV71病毒与宿主mirNAs的相互作用机制为进一步阐明EV71病毒感染与复制机理奠定了基础。

关键词： mir-34b 肠道病毒71型人横纹肌肉瘤细胞病毒复制

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mir-34b表达调控及其在肿瘤发生中作用的研究进展

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肿瘤研究与临床 2014年第12期26卷 851-853页

作者：宋秀军李峰生(综述) 江其生(审校) 第二炮兵总医院核与辐射损伤实验室北京100088

mirNA是一种内源性的非编码小RNA,在转录后水平调控基因表达,具有高度保守性和组织特异性.其广泛参与调控细胞的生长、发育等许多复杂生命过程,在多种肿瘤的发病中起重要作用.mir-34b为新近发现并备受关注的mirNA之一,受p53及其启动子... 详细信息

mirNA是一种内源性的非编码小RNA,在转录后水平调控基因表达,具有高度保守性和组织特异性.其广泛参与调控细胞的生长、发育等许多复杂生命过程,在多种肿瘤的发病中起重要作用.mir-34b为新近发现并备受关注的mirNA之一,受p53及其启动子甲基化等因素的调节,并通过调控多种靶分子参与调节细胞的增殖与凋亡,对肿瘤的发生与调控起作用,在肿瘤的治疗与预后中有广阔的应用前景.文章就mir-34b及其与肿瘤关系的研究进展进行综述.

关键词：微小RNA mir-34b p53 甲基化肿瘤

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mir-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响

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中国老年学杂志 2017年第7期37卷 1668-1670页

作者：钟玲中航工业成都363医院四川成都610041

目的探讨mir-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响。方法选取初治原发性老年鼻咽癌患者83例,正常鼻咽黏膜组织40例作为对照组,培养人鼻咽癌CNE-2细胞株,根据转染物不同将细胞分为mir-34b转染组、阴性对照组和空白对照组... 详细信息

目的探讨mir-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响。方法选取初治原发性老年鼻咽癌患者83例,正常鼻咽黏膜组织40例作为对照组,培养人鼻咽癌CNE-2细胞株,根据转染物不同将细胞分为mir-34b转染组、阴性对照组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测老年鼻咽癌及对照组组织中mir-34b表达以及不同转染组细胞中mir-34b表达,MTT比色法检测不同转染组细胞增殖能力,检测细胞黏附能力,Transwell法检测不同转染组细胞侵袭能力。结果老年鼻咽癌组织中mir-34b相对表达量为(0.64±0.09),显著低于对照组的(0.94±0.12),差异有统计学意义(t=14.410,Pmir-34b在老年鼻咽癌组织中相对表达量与临床分期、T分期、N分期和淋巴结转移有关(Pmir-34b转染组细胞中mir-34b相对表达量为(0.85±0.10),显著高于阴性对照组和空白对照组,分别为(0.52±0.08)和(0.50±0.07),差异有统计学意义(F=243.329,Pmir-34b转染组细胞增殖能力显著降低(Pmir-34b转染组黏附细胞数显著高于阴性对照组和空白对照组,而侵袭细胞数显著低于阴性对照组和空白对照组(Pmir-34b在老年鼻咽癌组织中呈低表达,上调mir-34b表达可减少细胞增殖,增加细胞黏附能力,抑制细胞侵袭能力,有望成为提高鼻咽癌对放射治疗敏感性的目的基因。

关键词：鼻咽癌 mir-34b 细胞增殖侵袭能力

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mir-34b的表达与三阴性乳腺癌的临床特点及预后的关系

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中国现代医学杂志 2015年第1期25卷 26-29页

作者：王琼刘蓓贺玉娟刘玮冯俊明广州军区武汉总医院病理科湖北武汉430070 武汉科技大学附属天佑医院病理科湖北武汉430000

目的探讨mir-34b在三阴性乳腺癌中的表达及其与临床特征和预后的关系。方法选择43例三阴性乳腺癌患者,通过qRT-PCR方法定量检测mir-34b,并分析其与患者的临床特点和预后的相关性。结果 mir-34b在有淋巴结转移的三阴性乳腺癌中表达上调(P... 详细信息

目的探讨mir-34b在三阴性乳腺癌中的表达及其与临床特征和预后的关系。方法选择43例三阴性乳腺癌患者,通过qRT-PCR方法定量检测mir-34b,并分析其与患者的临床特点和预后的相关性。结果 mir-34b在有淋巴结转移的三阴性乳腺癌中表达上调(Pmir-34b与淋巴结转移相关(P0.05)。mir-34b的表达与总生存期呈负相关(Pmir-34b可能成为三阴性乳腺癌患者一种新的预后标记。

关键词：三阴性乳腺癌 mir-34b 预后

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mir-34b在儿童急性白血病中的表达及临床意义

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中华实用儿科临床杂志 2014年第15期29卷 1161-1165页

作者：曹岚王娜潘健古桂雄胡绍燕赵文理柴忆欢苏州大学附属儿童医院血液肿瘤科 215003

目的检测mir-34b在儿童急性白血病（AL）中的甲基化状态及表达情况,并探讨其临床意义.方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测mir-34b启动子区CpG岛在儿童AL中的甲基化状态,用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测mir-34b... 详细信息

目的检测mir-34b在儿童急性白血病（AL）中的甲基化状态及表达情况,并探讨其临床意义.方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测mir-34b启动子区CpG岛在儿童AL中的甲基化状态,用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测mir-34b的相对表达量并与正常对照组比较,分析其与临床指标间的关系.结果 8种白血病细胞株（U937、HL-60、MV4-11、M2R、K562、Raji、CCRF、DAMI）均出现甲基化现象,其甲基化阳性率为100％.儿童初诊急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿31例,其中24例出现甲基化现象,甲基化阳性率为77.42％（24/31例）,儿童初诊急性髓细胞白血病（AML）患儿19例,其中8例出现甲基化现象,甲基化阳性率为42.11％（8/19例）,23例正常对照患儿,无一例出现甲基化现象.mir-34b在正常对照组、白血病细胞株组、ALL组、AML组及混合谱系白血病基因重排阳性（MLL＋）组的相对表达量分别为5.22±1.15、0.03 ±0.03、1.65±0.69、0.18 ±0.06、0.64 ±0.34,ALL组（P＜0.05）、白血病细胞株组、AML组及MLL＋组（P均＜0.01）与正常对照组相比差异均有统计学意义.mir-34b的相对表达量与儿童初诊AML患儿的性别、年龄、初诊时白细胞（WbC）计数、染色体、融合基因、MLL基因重排及初诊时乳酸脱氢酶（LDH）水平差异均无统计学意义（P均＞0.05）.mir-34b的相对表达量与儿童初诊ALL患儿的性别、年龄、初诊时WbC计数、免疫分型、染色体、融合基因、MLL基因重排、TEL/AML1基因、危险度分层、第33天微小残留病（MRD）及初诊时LDH水平与mir-34b的相对表达量之间差异均无统计学意义（P均＞0.05）.但在泼尼松试验反应方面,敏感组与不敏感组之间差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 mir-34b在儿童AL表达量明显减低并受甲基化机制调控,提示mir-34b可能作为抑癌基因参与儿童AL的形成.mir-34b的表达量影响儿童初诊ALL早期治疗反应,提示其可能成为判定儿童初诊ALL危险度和不良预后的一个指标.

关键词：白血病, 急性 mir-34b DNA甲基化表达水平临床意义儿童

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mir-34b/VAMP2通路在铅暴露影响突触囊泡形成中的作用及机制研究

miR-34b/VAMP2通路在铅暴露影响突触囊泡形成中的作用及机制研究

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作者：康蓓佩第四军医大学

学位级别：硕士

铅是一种常见的环境污染物,长期处于低剂量的铅暴露环境下可以造成人体多个器官的功能异常,其中对神经系统的影响尤为明显。处在生长发育过程中的儿童是铅中毒的易感人群,铅在中枢神经系统中的异常蓄积可导致儿童学习、记忆能力明显下... 详细信息

铅是一种常见的环境污染物,长期处于低剂量的铅暴露环境下可以造成人体多个器官的功能异常,其中对神经系统的影响尤为明显。处在生长发育过程中的儿童是铅中毒的易感人群,铅在中枢神经系统中的异常蓄积可导致儿童学习、记忆能力明显下降、认知障碍和发育迟缓等一系列症状。许多研究都建立了发育期铅暴露的大鼠模型,并且都把研究重点集中在铅暴露对海马及相关的空间学习记忆的影响。学习记忆的神经生物学基础主要是通过突触可塑性所实现的,突触传递的改变在突触可塑性中至关重要,而神经传递主要通过突触胞吐发挥功能。可溶性NSF附着蛋白受体(SNARE)复合物是神经元胞吐过程重要的一部分,它主要参与调节突触前膜融合过程。突触小泡膜蛋白2(vesicle-associated membrane protein 2,VAMP2)是SNARE复合物的重要组成部分,分布于囊泡膜上,突触小体相关蛋白(synaptosomal associated protein of molecular mass 25k D,SNAP25)及突触融合相关蛋白(syntaxin)分布在突触前膜上,三者共同构成SNARE蛋白,在神经递质释放中发挥重要的作用。Micro RNA(mi RNA)是一类由内源基因编码的长约为22个核苷酸左右的小单链RNA家族,它通过与靶基因互补配对在转录后水平促进其降解或抑制翻译发挥作用。研究表明micro RNA在大脑中丰富表达,它可能参与维持正常脑神经功能和动态平衡,如学习记忆,神经元分化,突触可塑性和神经生成等功能。也有报道在神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病,帕金森氏病,共济失调,亨廷顿氏病和精神分裂症mi RNA也有差异性表达。本实验室利用micro RNA芯片技术发现发育期铅暴露可导致大鼠海马中mi R-34b等micro RNA表达谱发生变化,提示包括mi R-34b在内的micro RNA分子可能参与了铅神经毒性作用,但是其具体机制并不清楚。本研究是实验室前期工作的延续,以发育期大鼠、大鼠肾嗜铬细胞瘤PC12细胞和小鼠海马神经元HT22细胞为实验对象,研究铅暴露诱导mi R-34b表达的改变及其调节突触小泡膜蛋白VAMP2表达的作用,并探讨mi R-34b调节VAMP2表达在铅影响突触囊泡生成中的作用,研究结果将为阐明铅神经毒性的分子机制提供研究基础。目的:本研究通过建立发育期大鼠慢性铅暴露模型以及PC12细胞、HT22细胞铅暴露模型,研究铅暴露对mi R-34b及其潜在靶分子VAMP2表达的影响,探讨mi R-34b调节VAMP2表达的机制及其在铅影响突触囊泡生成中的作用,阐明mi R-34b/VAMP2通路在铅神经毒性中的作用,为揭示铅神经毒性的分子机制提供研究基础。方法:1.建立铅暴露的动物模型和细胞模型。①动物模型:21日龄雄性SD大鼠随机分为3组:对照组、100ppm铅暴露组和300ppm铅暴露组,每组12只,饮水染铅8周。②细胞模型:采用大鼠肾嗜铬细胞瘤PC12细胞和小鼠海马神经元HT22细胞,铅暴露浓度为0、5、10μmol/L。2.采用Morris水迷宫方法实验检测大鼠空间学习记忆能力。3.采用实时荧光定量q RT-PCR方法检测对mi R-34b和靶蛋白突触小泡膜蛋白vamp2 m RNA的表达水平;采用Western blot方法检测VAMP2蛋白的表达水平。4.采用荧光素酶报告基因系统检测mi R-34b对vamp2 m RNA 3’-UTR区稳定性的影响。5.通过在PC12细胞中转染mi R-34b inhibitor检测其对靶分子VAMP2 m RNA和蛋白表达的影响。6.采用免疫电镜技术观察发育期铅暴露对大鼠海马突触小泡膜蛋白VAMP2表达水平的影响。7.采用流式细胞计数方法检测铅暴露对PC12细胞VAMP2蛋白表达的影响。8.采用透射电镜技术检测发育期铅暴露对大鼠海马突触囊泡形成的影响。结果1.发育期铅暴露影响大鼠空间学习记忆能力利用原子吸收分光光度仪进行血铅浓度测定,结果显示铅暴露组大鼠血铅水平随着暴露时间及剂量增加显著升高。Morris水迷宫结果显示,铅暴露组与对照相比逃避潜伏期明显增加,差异具有统计学意义(p34b的表达实时荧光定量q RT-PCR检测显示,铅暴露组大鼠海马组织中mi R-34b表达量均高于对照组,差异具有统计学意义(P34b的表达,且表达水平随着染铅剂量的增加而升高(p34b调控突触小泡膜蛋白VAMP2的

关键词：铅 mir-34b VAMP2 突触囊泡神经毒性

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mir-34b在非小细胞肺癌中的表达及其在HGF-Met信号通路中的作用

MiR-34b在非小细胞肺癌中的表达及其在HGF-Met信号通路中的作用

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作者：王黎光山东大学

学位级别：硕士

microRNAs (mirNAs)是内源性非编码小RNA(大约21-25个核苷酸长度),来源于体内Pri-mirNAs和Pre-mirNAs。mirNAs通过不完全互补与靶标蛋白的3’端非编码区(3’untranslated region,3’UTR)结合,从而在转录后水平调节基因表达。mirNAs通过下调致癌基因或者抑癌基因mRNA水平发挥抑癌或者致癌的生物学作用。许多良恶性肿瘤中已相继发现mirNAs的基因位点及其表达模式,因此探索不同mirNAs的生物学功能具有重要的意义。 mirNAs在肿瘤的侵袭和转移过程中也发挥了重要的作用。例如,mir-155参与TGF-β介导上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)以及肿瘤细胞的侵袭和迁移。mir-21已于多种肿瘤中被证实可以增加侵袭和转移的程度,包括乳腺癌,结肠癌,以及胶质瘤。TWIST1作为转录因子可以激活mir-10b,而后者又参与了TWIST1介导的上皮间质转化过程。肿瘤的侵袭和转移是判断肿瘤预后的主要病理指标,而mirNAs可以作为新的判断预后指标以及为临床治疗提供新的作用靶点,因此研究不同mirNAs在肿瘤发生进展中的特定作用十分重要。研究目的：mirNAs作为内源性非编码小RNA,在肿瘤的发生进展中发挥着重要的作用。在肿瘤细胞中多数mirNAs表达降低,功能受到抑制,提示其可能起到抑制肿瘤作用。然而,mirNAs抑制肿瘤的具体机制尚不明确。我们的实验目的在于研究mir-34b在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中的作用以及作用机制。我们的研究发现肿瘤组织中相比邻近癌旁组织,mir-34b出现明显下降。体外功能实验证实mir-34b促进凋亡,抑制细胞增殖,从而发挥抑制肿瘤的作用。另外,我们还检测了mir-34b与靶标蛋白c-Met以及HGF/Met信号通路的相关性。研究方法：收集术后非小细胞肺癌与邻近的癌旁组织,并培养非小细胞肺癌细胞系A549与SPC-A-1.应用实时定量PCR技术检测非小细胞肺癌组织mir-34b的表达水平,并且分析其与临床病理参数之间的统计学意义。应用细胞转染技术获得mir-34b高表达细胞,并检测细胞凋亡与细胞增殖。运用免疫组织化学方法探索mir-34b表达与下游蛋白c-Met, p53以及Mdm2之间的相关性。对于mir-34b在非小细胞肺癌与邻近癌旁组织中的表达差异应用两样本t检验。应用Pearson卡方检验和Fisher精确检验来检验mir-34b表达水平与临床病理参数之间相关关系。应用等级相关检验来检验mir-34b表达水平与phospho-Met, p53(phospho S392)以及Mdm2相关关系。研究结果：mir-34b在非小细胞肺癌中低表达,并与淋巴结转移负相关(P=0.031). mir-34b通过诱导凋亡抑制肿瘤增殖。非小细胞肺癌中mir-34b表达与c-Met负相关(P=0.012)。结论：mir-34b影响肿瘤细胞的凋亡、增殖、转移,在肿瘤发展过程中发挥抑制肿瘤的作用;HGF-Met信号通路中p53磷酸化并增强转录活性,上调mir-34b,反馈抑制c-Met。由于p53信号通路参与细胞周期抑制与细胞凋亡,并于其中发挥重要作用,因此mir-34基因可能受到抑癌基因p53的调节,而p53可以通过mir34调节一系列的下游蛋白。另外,mir-34又可以反向作用于p53的mRNA,从而避免p53的连续激活。

关键词： mir-34b Met p53 淋巴结转移非小细胞肺癌

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mir-34b在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及临床意义的研究

MiR-34b在儿童急性白血病中的表达、甲基化调控及临床意义的研究

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作者：王娜苏州大学

学位级别：硕士

目的：研究mir-34b在儿童急性白血病中的表达及其启动子区CpG岛甲基化状态，探讨其临床意义。同时检测mir-34b对细胞增殖是否有影响，进一步了解其生物学功能。方法：8种白血病细胞株(U937，HL-60，MV4-11，M2R，K562，Raji，CCRF，DA... 详细信息

目的：研究mir-34b在儿童急性白血病中的表达及其启动子区CpG岛甲基化状态，探讨其临床意义。同时检测mir-34b对细胞增殖是否有影响，进一步了解其生物学功能。方法：8种白血病细胞株(U937，HL-60，MV4-11，M2R，K562，Raji，CCRF，DAMI)，儿童初诊急性白血病(AL)患儿骨髓标本87例，其中初诊急性淋巴细胞性白血病(ALL)患儿55例，初诊急性髓系白血病(AML)患儿32例，正常对照患儿43例。提取细胞株或其骨髓标本总RNA，并进行引物特异性逆转录成cDNA，运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对mir-34b进行检测，循环阈值(Ct值)比较法进行mirNA表达定量分析。统计分析白血病细胞株、初诊AL、ALL、AML及MLL各组患儿mir-34b表达是否有差异，并根据临床资料进行进一步分析，以探讨mir-34b在儿童初诊AL、ALL及AML的意义。同时提取细胞株或其骨髓标本DNA，进行重亚硫酸氢钠修饰基因组DNA，运用甲基化特异性PCR(MSP)检测mir-34b启动子区CpG岛甲基化状态，并通过甲基转移酶抑制剂(5-aza-2-dC)处理HL-60及K562进一步检测其甲基化状态，结合临床资料进一步统计分析儿童初诊AL、ALL及AML与其甲基化状态是否相关。采用脂质体转染hsa-mir-34b mimics到K562细胞，通过流式细胞仪检测转染效率，CCK-8法检测细胞增殖情况。结果： 1、mir-34b在正常对照、白血病细胞株、儿童初诊AL、ALL、AML及MLL+各组的相对表达量(x±s x)分别为5.22±1.15、0.03±0.03、1.18±0.47、1.65±0.69、0.18±0.06、0.64±0.34，与正常对照组相比，儿童初诊ALL组(Pmir-34b的相对表达量与儿童初诊ALL患儿泼尼松实验敏感与否相关(Pmir-34b启动子在8种白血病细胞株中均出现甲基化现象，甲基化阳性率为100%，本实验共检测50例儿童初诊AL患儿，其中31例初诊ALL患儿，19例初诊AML患儿，其甲基化阳性率分别为64%(32/50)、77.42%(24/31)和42.11%(8/19)，同时检测23例正常对照患儿，无一例出现甲基化现象。 4、5-aza-2-dC处理白血病细胞株HL-60及K562后，mir-34b的相对表达量均明显升高，分别为49.5倍和18.8倍，其甲基化条带均明显减弱。 5、结合临床资料(如性别、年龄、免疫分型、染色体、融合基因、泼尼松实验等)做了进一步分析，发现mir-34b的甲基化状态与儿童初诊AL患儿的免疫分型相关，淋系与髓系的mir-34b的甲基化状态之间具有统计学差异(Pmir-34b mimics到K562细胞后，流式细胞仪检测转染效率为61%，CCK-8法检测各组细胞增殖情况，发现转染hsa-mir-34b mimics组48h、72h、96h及120h均出现细胞增殖抑制作用(P均mir-34b在白血病细胞株、儿童初诊AL、ALL、AML及MLL+各组患儿中表达均明显减低，提示mir-34b可能作为新的抑癌基因参与儿童初诊AL、ALL及AML的形成，同时在MLL基因重排阳性儿童初诊AL的发病中可能起着重要作用，并影响其预后。 2、mir-34b的相对表达量与儿童初诊ALL患儿泼尼松实验敏感与否相关，提示其是否可以作为判定儿童初诊ALL危险度及预后的指标。 3、mir-34b启动子在白血病细胞株、儿童初诊AL、ALL及AML中均出现高度甲基化现象，提示mir-34b在白血病细胞株、儿童初诊AL、ALL及AML中均受甲基化机制调控，可能作为新的抑癌基因发挥作用。 4、5-aza-2-dC处理白血病细胞株HL-60及K562后，mir-34b的相对表达量明显升高，甲基化条带明显减弱，进一步证实mir-34b在白血病细胞株中受甲基化机制调控。 5、mir-34b的甲基化状态与儿童初诊AL患儿的免疫分型相关，提示mir-34b启动子在儿童初诊ALL患儿中甲基化频率高于儿童初诊AML患儿，mir-34b在儿童初诊ALL及AML中可能作为新的抑癌基因发挥作用。 6、mir-34b对白血病细胞增殖具有抑制作用，提示mir-34b在白血病发病中可能发挥抑癌基因作用。

关键词：白血病急性儿童 mir-34b 表达水平 CpG岛甲基化临床意义细胞增殖

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