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mir-30b靶向CXCR4对子宫腺肌症模型小鼠子宫内膜间质细胞的影响及机制研究

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生殖医学杂志 2024年第10期33卷 1357-1363页

作者：许丹丹郑艳莉郭娟南通大学附属第二医院/南通市第一人民医院妇产科南通226000 盐城市第三人民医院妇产科盐城224000

目的探究mir-30b对子宫腺肌症(AM)模型小鼠子宫内膜间质细胞(ESCs)的影响,并进一步探究其可能的潜在调控机制。方法选取24只ICR雌性小鼠,制备AM动物模型,另选取4只ICR小鼠作为正常对照;HE染色观察造模小鼠子宫病理学变化;反转录荧光定量... 详细信息

目的探究mir-30b对子宫腺肌症(AM)模型小鼠子宫内膜间质细胞(ESCs)的影响,并进一步探究其可能的潜在调控机制。方法选取24只ICR雌性小鼠,制备AM动物模型,另选取4只ICR小鼠作为正常对照;HE染色观察造模小鼠子宫病理学变化;反转录荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测AM模型小鼠及正常小鼠子宫组织中mir-30b表达情况。分离并培养AM模型小鼠ESCs,随机分为对照组(Control组)、mir-30b过表达组(mir-30b组)和mir-30b过表达阴性对照组(mir-NC组);qRT-PCR检测各组细胞中mir-30b表达;MTT法、Transwells法和流式细胞术分别检测细胞增殖、迁移、凋亡能力;蛋白质印迹(Western blot)检测细胞中趋化因子受体4(CXCR4)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达;双荧光素酶报告验证mir-30b和CXCR4的靶向关系。结果24只小鼠中AM造模成功22只(91.67%)。与正常小鼠相比,AM模型小鼠子宫扭曲变形且明显粗壮,表面可见明显突出的腺肌病结节,子宫肌层发育紊乱,内膜间质受到浸润,内膜间质细胞侵入肌肉内层。mir-30b在AM模型小鼠子宫组织中显著低表达(Pmir-30b可以降低模型小鼠ESCs的增殖能力和侵袭能力、加速细胞凋亡(Pmir-30b可显著降低ESCs中VEGF、CXCR4蛋白表达水平(Pmir-30b直接靶向CXCR4。结论mir-30b可能通过直接靶向调控CXCR4表达,进而促进ESCs的增殖和侵袭,抑制细胞凋亡,参与AM发病。

关键词：子宫腺肌症 mir-30b 趋化因子受体4(CXCR4) 增殖侵袭凋亡

血清mir-21、mir-30b对乳腺癌患者术后曲妥珠单抗靶向治疗心脏毒性的预测价值

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中南医学科学杂志 2024年第1期52卷 12-15页

作者：冯晴罗志刚方吉四川省第三人民医院检验科四川成都610072

目的探讨血清mir-21、mir-30b对乳腺癌患者术后曲妥珠单抗靶向治疗心脏毒性的预测价值。方法选取乳腺癌曲妥珠单抗靶向治疗患者138例为观察组,根据是否发生化疗相关心脏毒性事件分为非心脏毒性组和心脏毒性组2个亚组;另外选取同期体检... 详细信息

目的探讨血清mir-21、mir-30b对乳腺癌患者术后曲妥珠单抗靶向治疗心脏毒性的预测价值。方法选取乳腺癌曲妥珠单抗靶向治疗患者138例为观察组,根据是否发生化疗相关心脏毒性事件分为非心脏毒性组和心脏毒性组2个亚组;另外选取同期体检健康女性150例为健康组。比较各组血清mir-21、mir-30b水平和临床资料。采用ROC评估血清mir-21、mir-30b对发生心脏毒性的预测价值,采用多因素Logistic回归分析发生心脏毒性的影响因素。结果观察组血清mir-21高于健康组,而mir-30b低于健康组;心脏毒性组血清mir-21和高血压占比高于非心脏毒性组,而mir-30b和左室射血分数(LVEF)低于非心脏毒性组(Pmir-21、mir-30b是乳腺癌术后化疗心脏毒性的影响因素(Pmir-21、mir-30b联合预测乳腺癌术后化疗心脏毒性的诊断效能高于mir-21、mir-30b单独预测(Pmir-21、mir-30b是乳腺癌术后化疗心脏毒性的影响因素,两者联合预测乳腺癌术后化疗心脏毒性的效能更高。

关键词： mir-21 mir-30b 乳腺癌曲妥珠单抗心脏毒性预测价值

心肌细胞特异性mir-30b转基因小鼠的建立及其功能研究

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生物化学与生物物理进展 2014年第6期41卷 575-582页

作者：范元元龙波刘昉周露玙王昆李培峰中国科学院动物研究所生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京100101

MicroRNAs(mirNAs)基因芯片结果显示,携带有MYH7基因突变的家族性肥厚性心肌病病人的心脏组织以及小鼠心力衰竭模型中mir-30b表达下调,提示mir-30b可能在心脏疾病发生发展过程中发挥了重要功能.为研究mir-30b在心脏组织中的功能,本实验... 详细信息

MicroRNAs(mirNAs)基因芯片结果显示,携带有MYH7基因突变的家族性肥厚性心肌病病人的心脏组织以及小鼠心力衰竭模型中mir-30b表达下调,提示mir-30b可能在心脏疾病发生发展过程中发挥了重要功能.为研究mir-30b在心脏组织中的功能,本实验室首先建立了在心肌细胞特异性启动子琢肌球蛋白重链(琢-MHC,5.5 kb)控制下过表达mir-30b的转基因小鼠.通过qRT-PCR方法,证实mir-30b表达水平在转基因小鼠心脏组织中明显升高(Pmir-30b转基因小鼠心重/体重比和左心室/体重比无明显变化,心肌组织结构未见异常.目前,关于mir-30b在心肌梗死中的功能及相关机制未见报道.本文通过冠状动脉左前降支结扎法建立心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)模型,以假手术组作为对照组.生化检测结果及TTC-Evans blue双染结果显示,I/R损伤后,与野生型小鼠相比,转基因小鼠LDH、CK-Mb和cTn玉浓度显著减小(Pmir-30b对缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用,该研究成果可能为预防和治疗心肌梗死提供新策略.

关键词： mir-30b 心脏转基因小鼠心肌梗死

mir-30b通过靶向CCL22调控人NK/T细胞淋巴瘤细胞株SNK-6和YTS顺铂耐受的研究

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中国实验血液学杂志 2019年第6期27卷 1838-1844页

作者：王健红刘芳段晓辉郝彩霞刘祥祥鲁英娟王哲梁蓉中国人民解放军空军军医大学西京医院血液内科

目的:探讨mir-30b对人NK/T细胞淋巴瘤(NKTCL)SNK-6和YTS细胞对顺铂耐受的调控及其作用机制。方法:培养正常NK细胞以及SNK-6和YTS细胞,应用real-time PCR法和Western blot分别检测mir-30b和巨噬细胞来源的趋化因子(CCL22)mRNA和蛋白的表... 详细信息

目的:探讨mir-30b对人NK/T细胞淋巴瘤(NKTCL)SNK-6和YTS细胞对顺铂耐受的调控及其作用机制。方法:培养正常NK细胞以及SNK-6和YTS细胞,应用real-time PCR法和Western blot分别检测mir-30b和巨噬细胞来源的趋化因子(CCL22)mRNA和蛋白的表达。以mir-30b过表达和mir-30b抑制剂分别转染SNK-6和YTS细胞,MTT法检测SNK-6和YTS细胞对顺铂耐受性的影响;caspase-3试剂盒检测caspase-3活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平。双荧光素酶报告基因检测mir-30b与CCL22的靶向关系。Western blot法检测CCL22表达,评估CCL22对细胞耐受性和caspase-3活性的影响。结果:与正常NK细胞相比,SNK-6和YTS细胞中mir-30b表达均显著降低(Pmir-30b过表达可降低细胞活性,顺铂耐受性显著降低(Pmir-30b抑制剂作用与mir-30b过表达作用相反。荧光素酶活性分析显示,mir-30b过表达显著降低荧光素酶报告基因的荧光强度,而结合位点突变后荧光素酶活性不变,表明CCL22是mir-30b的直接靶分子。此外,mir-30b过表达显著降低CCL22表达(Pmir-30b的作用,增加对顺铂的耐受性。结论:mir-30b可通过靶向CCL22抑制人NKTCL SNK-6和YTS细胞的顺铂耐受性。

关键词： mir-30b 顺铂耐受巨噬细胞来源的趋化因子 NK/T细胞淋巴瘤

mir-30b inhibits autophagy to alleviate hepatic ischemiareperfusion injury via decreasing the Atg12-Atg5 conjugate

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World Journal of Gastroenterology 2016年第18期22卷 4501-4514页

作者： Shi-Peng Li Jin-Dan He Zhen Wang Yao Yu Shu-Yu Fu Hai-Ming Zhang Jian-Jun Zhang Zhong-Yang Shen First Central Clinical College of Tianjin Medical University Tianjin 300192 China Oriental Organ Transplant Center of Tianjin First Central Hospital Tianjin 300192 China Laboratory of Immunology and Inflammation Tianjin Medical University Tianjin 300070 China Key Laboratory of Organ Transplantation of Tianjin Tianjin 300192 China

AIM: To explore the role and potential mechanism of mir-30 b regulation of autophagy in hepatic ischemiareperfusion injury(IRI).METHODS: An animal model of hepatic IRI was generated in C57bL/6 mice. For in vitro studies, AML12 cells were immersed in mineral oil for 1 h and then cultured in complete Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM)/F12 to simulate IRI. Mice and cells were transfected with mir-30 b agomir/mimics or antagomir/inhibitor to examine the effect of mir-30 b on autophagy to promote hepatic IRI. The expression of mir-30 b was measured by real-time polymerase chain reaction. Apoptotic cells were detected by terminal uridine nickend labeling(TUNEL) staining, and cell viability was detected by methylthiazole tetrazolium assay. The expression of light chain 3, autophagy-related gene(Atg)12, Atg5, P62, and caspase-3 were detected by western blotting ***: mir-30 b levels were significantly downregulated after hepatic IRI, and the numbers of autophagosomes were increased in response to IRI both in vivo and in vitro. These findings demonstrate that low levels of mir-30 b could promote hepatic IRI. Furthermore, we found that mir-30 b interacted with Atg12-Atg5 conjugate by binding to Atg12. Overexpression of mir-30 b diminished Atg12 and Atg12-Atg5 conjugate levels, which promoted autophagy in response to IR. In contrast, downregulation of mir-30 b was associated with increased Atg12-Atg5 conjugate levels and increased ***: mir-30 b inhibited autophagy to alleviate hepatic ischemia-reperfusion injury via decreasing the Atg12-Atg5 conjugate.

关键词： mir-30b Autophagy Atg12-Atg5 conjugate Hepatic ischemia-reperfusion injury

耳蜗毛细胞mir-30b对Dynamin基因靶向调控的研究

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四川大学学报（医学版） 2018年第3期49卷 347-351页

作者：李洋唐小林余菲李华君袁伟第三军医大学西南医院耳鼻喉科重庆400038

目的观察正常成年小鼠耳蜗毛细胞中mir-30b的表达,研究其对靶基因(Dynamin1,DNM1)的调控是否会影响内毛细胞中突触囊泡内吞关键蛋白Dynamin的表达。方法取正常成年C57小鼠耳蜗基底膜行原位杂交,观察耳蜗毛细胞中mir-30b的表达分布;构建... 详细信息

目的观察正常成年小鼠耳蜗毛细胞中mir-30b的表达,研究其对靶基因(Dynamin1,DNM1)的调控是否会影响内毛细胞中突触囊泡内吞关键蛋白Dynamin的表达。方法取正常成年C57小鼠耳蜗基底膜行原位杂交,观察耳蜗毛细胞中mir-30b的表达分布;构建荧光素酶报告基因载体,转染293T细胞,通过荧光素酶活性变化明确DNM1是否为mir-30b的靶基因;通过耳蜗圆窗显微注射过表达mir-30b的腺相关病毒(adenoassociated virus,AAV),14d后通过real time-PCR检测mir-30b和DNM1的mRNA表达,免疫印迹实验(Western blot)检测Dynamin蛋白表达。结果 mir-30b在小鼠耳蜗内、外毛细胞胞质和胞核均有表达;mir-30b可抑制DNM1载体的荧光表达(Pmir-30b后mir-30b的相对表达量增高,DNM1和Dynamin蛋白表达降低。结论 mir-30b在小鼠耳蜗内、外毛细胞均有表达;mir-30可以靶向下调DNM1基因从而抑制Dynamin蛋白表达。

关键词：毛细胞 mir-30b DNM1 Dynamin 原位杂交双荧光素酶报告基因腺相关病毒

mir-30b在高磷诱导的血管平滑肌细胞凋亡中的作用

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中国比较医学杂志 2022年第7期32卷 58-65页

作者：刘兰张东雪张胜雷白亚玲河北医科大学第四医院肾内科石家庄050011

目的观察微小RNA30b(microRNA 30b, mir-30b)在高磷诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)凋亡中的作用及机制。方法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,分为正常组和高磷组(给予10 mmol/Lβ-甘油磷酸盐刺激)。采用实时... 详细信息

目的观察微小RNA30b(microRNA 30b, mir-30b)在高磷诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)凋亡中的作用及机制。方法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,分为正常组和高磷组(给予10 mmol/Lβ-甘油磷酸盐刺激)。采用实时荧光定量PCR检测各组VSMCs mir-30b表达、Western blot法测定促凋亡基因bAX、抑凋亡基因bcl-2的表达情况,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况、采用流式细胞法检测各组细胞的凋亡情况。为进一步验证mir-30b对VSMCs凋亡的影响,给与转染mir-30b的抑制物inhibitor-30b和类似物mimic-30b,观察VSMCs增殖和凋亡情况以及bAX、bcl-2表达情况。结果 (1)高磷对VSMCs凋亡的影响:流式结果显示,高磷组VSMCs凋亡细胞显著增多(PbAX表达升高、bcl-2表达降低(Pmir-30b的表达显著下降(Pmir-30b对VSMCs凋亡的影响:转染inhibitor-30b后VSMCs凋亡细胞显著增多(Pbitor-30b后MTT显示细胞增殖减少(Pbitor-30b后,bAX表达升高、bcl-2表达降低(P30b后VSMCs凋亡细胞显著减少(P30b后,bAX表达降低、bcl-2表达升高(PmirNA-30b表达,进而促进凋亡基因bAX表达,降低抑凋亡基因bcl-2表达,导致VSMCs发生凋亡。

关键词：血管平滑肌细胞高磷凋亡 mir-30b bAX

mir-30b在三叉神经痛模型大鼠中的表达及作用

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安徽医科大学学报 2022年第7期57卷 1078-1083页

作者：胡婷婷何帆刘明政徐文华王元银安徽医科大学口腔医学院合肥230032 安徽医科大学附属口腔医院合肥230032 安徽省口腔疾病研究中心实验室合肥230032

目的探讨mir-30b在三叉神经痛(TN)模型大鼠三叉神经节(TG)中发挥的作用。方法采用眶下神经缩窄术(ION-CCI)构建大鼠TN模型。用Von Frey毛刷检测大鼠的机械痛阈。通过qRT-PCR及Western blot检测术侧TG内mir-30b和激活转录因子3(ATF3)表... 详细信息

目的探讨mir-30b在三叉神经痛(TN)模型大鼠三叉神经节(TG)中发挥的作用。方法采用眶下神经缩窄术(ION-CCI)构建大鼠TN模型。用Von Frey毛刷检测大鼠的机械痛阈。通过qRT-PCR及Western blot检测术侧TG内mir-30b和激活转录因子3(ATF3)表达变化。经眶下孔分别向ION-CCI大鼠的TG内定位注射mir-30b的类似物(agomir)和agomir的阴性对照(agomir NC),检测大鼠的机械痛阈及干预后ATF3表达的变化。结果ION-CCI组大鼠在术后第2~28天出现机械痛阈的降低(Pmir-30b表达降低,ATF3表达升高(Pmir-30b后,大鼠机械痛阈升高,TG中ATF3表达降低(Pmir-30b参与调控TN的发生、发展,mir-30b可能是TN潜在的治疗靶点。

关键词：三叉神经痛眶下神经缩窄术 mir-30b ATF3

mir-30b靶向beclin1参与慢性肾脏病血管钙化

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中国老年学杂志 2023年第8期43卷 1900-1904页

作者：马晓迎生玉平王娜张浩然徐海平孙福云杨星梦沧州市中心医院肾内科河北沧州061000

目的探究mir-30b在慢性肾脏病(CKD)大鼠血管钙化(VC)中的作用及mir-30b与自噬基因beclin1的靶向关系。方法将SD雄性大鼠随机分成对照组、模型组(CKD)、mir-30b组(CKD+mir-30b模拟物)和mir-30b阴性对照(NC)组(CKD+mir-30b NC)。使用全... 详细信息

目的探究mir-30b在慢性肾脏病(CKD)大鼠血管钙化(VC)中的作用及mir-30b与自噬基因beclin1的靶向关系。方法将SD雄性大鼠随机分成对照组、模型组(CKD)、mir-30b组(CKD+mir-30b模拟物)和mir-30b阴性对照(NC)组(CKD+mir-30b NC)。使用全自动生化分析仪检测血清中血尿素氮(bUN)、血钙(Ca)、血磷(P)、血肌酐(Scr)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织和肾主动脉组织的病理学变化;茜素红染色观察主动脉钙化结节情况;使用试剂盒检测血管壁钙含量及碱性磷酸酶(ALP)水平;反转录荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测主动脉mir-30b水平;Western印迹检测主动脉中beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白相对表达水平;透射电镜观察血管平滑肌细胞(VSMC)中自噬小体的变化;双荧光素酶测定mir-30b与beclin1的靶向关系。结果与对照组相比,模型组肾小球萎缩,间质增宽,肾小管扩张严重,炎性细胞浸润严重,血清中bUN、Ca、P、Scr水平、主动脉钙含量及ALP水平显著升高(Pmir-30b相对表达水平及beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著降低(Pmir-30b NC组相比,mir-30b组肾组织损伤明显减轻,血清中bUN、Ca、P、Scr水平、主动脉钙含量及ALP水平显著降低(Pbeclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著升高(Pmir-30b可通过靶向beclin1对CKD大鼠的血管钙化起到保护作用。

关键词： mir-30b 慢性肾脏病血管钙化自噬基因beclin1