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Moxibustion regulates T-regulatory/T-helper 17 cell balance by modulating the microrna-221/suppressor of cytokine signaling 3 axis in a mouse model of rheumatoid arthritis

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Journal of Integrative Medicine 2022年第5期20卷 453-462页

作者： Chuang Zhao Xiao-yan Li Zun-yuan Li Miao Li Zhi-dan Liu Department of Acupuncture Baoshan Branch of Shuguang HospitalShanghai University of Traditional Chinese MedicineShanghai 201999China Department of Acupuncture Baoshan Hospital of Integrated Traditional Chinese Medicine and Western MedicineShanghai 201999China

Objective Rheumatoid arthritis(RA)progression is associated with the balance of T-regulatory(Treg)and T-helper 17(Th17)cells,while the role of micrornas(miRs)in regulating Treg/Th17 cell balance has not been clarified.This study aimed to assess whether moxibustion could regulate Treg/Th17 cell balance by modulating the miR-221/suppressor of cytokine signaling 3(SOCS3)axis in the RA mouse model.Methods A mouse model of collagen-induced arthritis(CIA)was established in male DBA/1J mice.Twenty-two days after CIA induction,the mice received daily treatment with moxibustion for 12 times.Pathological scores were assessed according to the levels of synovial hyperplasia.The expression levels of cytokines interleukin(IL)-1β,IL-6,tumor necrosis factor-α(TNF-α),interferon-γ(IFN-γ),IL-17 and IL-10 were analyzed in serum by enzyme-linked immunosorbent assay.The cluster of differentiation 4(CD4+)splenocytes was analyzed by fluorescence-activated cell sorting.The expression levels of RA-related miRs and target genes were subsequently detected,and the target of miR-221 was confirmed by the dual-luciferase reporter assay.Results It was revealed that moxibustion treatment decreased the pathological scores and downregulated the expression levels of IL-1β,IL-6,TNF-α,IFN-γand IL-17,while upregulated the expression level of IL-10.The Treg/Th17 cell balance was regulated by moxibustion treatment.The expression level of miR-221 was suppressed by moxibustion treatment.Furthermore,SOCS3 was found as the direct target of miR-221,which mediated the function of moxibustion by regulating the Treg/Th17 cell balance.Conclusion Moxibustion therapy regulated the Treg/Th17 cell balance by modulating the miR-221/SOCS3 axis in the RA mouse model.

关键词： Rheumatoid arthritis Moxibustion microrna-221 Suppressor of cytokine signaling 3 T-regulatory/T-helper 17 cell balance

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Serum microrna-221 as a biomarker for diabetic retinopathy in patients associated with type 2 diabetes

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International Journal of Ophthalmology(English edition) 2018年第12期11卷 1889-1894页

作者： He-Nan Liu Xun Li Na Wu Meng-Meng Tong Shuo Chen Shan-Shan Zhu Wei Qian Xiao-Long Chen Department of Ophthalmology Shengjing Hospital China Medical University Department of Endocrinology Shengjing Hospital China Medical University Sino-Dutch Biomedical and Information Engineering School Northeastern University Department of Electrical and Computer Engineering College of Engineering University of Texas at El Paso

AIM: To investigate the candidate microrna(miRNA), miR-221 as a novel biomarker for diabetic retinopathy(DR) in patients associated with type 2 diabetes(T2D).METHODS: The subjects involved were divided into four groups: healthy control(HC), no diabetic retinopathy(NDR), non-proliferative diabetic retinopathy(NPDR) and proliferative diabetic retinopathy(PDR) group. Serum miR-221 was validated by real-time quantitative reversetranscription polymerase chain reaction(qRT-PCR). Also, serum angiotensin II(Ang II) and vascular endothelial growth factor(VEGF) were examined by enzyme-linked immunosorbent assay. In addition, receiver operating characteristic(ROC) curve was performed to explore the diagnostic accuracy of miR-221, Ang Ⅱ and VEGF for DR in patients with T2D. Spearman’s rank correlation coefficient was executed to estimate the correlations of serum miR-221 with metabolic parameters and serum markers in patients with T2D.RESULTS: Primarily, serum miR-221, Ang Ⅱ and VEGF were increased significantly in T2D patients compared to HC participant respectively, and progressive up-regulated in NDR, NPDR and PDR groups(P221 in serum was remarkably positively correlatedwith metabolic parameters such as glycated hemoglobin(r=0.310, P=0.002) and homeostasis model assessment for insulin resistance(r=0.413, P221(AUC, 0.894; 95%CI, 0.833-0.955; P221 is the most effective among them.CONCLUSION: Serum miR-221 as a potential biomarker could be related to not only occurrence but also progression for DR in patients with T2D. However, a prospective clinical trial is warranted.

关键词： microrna-221 biomarker diabetic retinopathy type 2 diabetes

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磁共振成像联合血清microrna-221对前列腺癌的诊断价值

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中国现代医学杂志 2023年第18期33卷 26-30页

作者：许品李锋张双纪大双马烨湖北文理学院附属医院(襄阳市中心医院)放射影像科湖北襄阳441021

目的探讨磁共振成像(MRI)结合血清microrna-221-221(miR-221)检测在前列腺癌诊断中的价值。方法回顾性分析2019年5月—2023年1月襄阳市中心医院收治的103例疑似前列腺癌患者的临床资料,将前列腺穿刺病理结果作为金标准。所有患者行磁共... 详细信息

目的探讨磁共振成像(MRI)结合血清microrna-221-221(miR-221)检测在前列腺癌诊断中的价值。方法回顾性分析2019年5月—2023年1月襄阳市中心医院收治的103例疑似前列腺癌患者的临床资料,将前列腺穿刺病理结果作为金标准。所有患者行磁共振弥散加权成像(MRI-DWI)、动态增强磁共振成像(MRI-DCE)及血清miR-221检测,分析MRI参数、miR-221诊断前列腺癌的价值。结果穿刺活检病理诊断结果显示,103例前列腺癌疑似患者中,73例诊断为前列腺癌。前列腺癌患者表现弥散系数(ADC)值低于非前列腺癌患者(P0.05)。前列腺癌患者miR-221相对表达量高于非前列腺癌患者(P221及3者联合诊断前列腺癌的敏感性分别为72.60%(95%CI:0.607,0.821)、69.86%(95%CI:0.578,0.798)、73.97%(95%CI:0.622,0.832)、82.19%(95%CI:0.711,0.898),特异性分别为80.00%(95%CI:0.609,0.916)、73.33%(95%CI:0.538,0.870)、70.00%(95%CI:0.504,0.846)、86.67%(95%CI:0.684,0.956),AUC分别为0.756(95%CI:0.651,0.860)、0.741(95%CI:0.633,0.848)、0.739(95%CI:0.631,0.846)、0.907(95%CI:0.842,0.972)。结论ADC、K_(trans)、miR-221联合诊断前列腺癌效能较高,3者联合诊断前列腺癌可提供更加精确可靠的量化参数。

关键词：前列腺癌磁共振成像 microrna-221 诊断

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microrna-221通过抑制CDKN1C/p57表达促进结肠癌细胞增殖

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南方医科大学学报 2011年第11期31卷 1885-1889页

作者：孙凯王伟雷尚通吴承堂李国新南方医科大学南方医院普通外科广东广州510515

目的探讨microrna-221(MIR221)对结肠癌细胞中CDKN1C/p57表达调控及细胞增殖的影响。方法常规培养人结肠癌Caco2细胞系,预先给予或不给予CDKN1C/p57干扰性小RNA(anti-p57-siRNA)处理,再以脂质体分别转染MIR221前体(pre-MIR221)或MIR221特异性抑制剂(anti-MIR221)寡核苷酸,应用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)检测Caco2细胞中MIR221表达状况,运用半定量RT-PCR及Western-blot分析CDKN1C/p57 mRNA及蛋白表达状况,并通过噻唑蓝(MTT)比色法观察细胞的增殖状态;构建pGL3-p57荧光素酶报告载体并与pre-MIR221或anti-MIR221共转染Caco2细胞,检测转染细胞中荧光素酶活性变化。结果 Caco2细胞转染pre-MIR221后,CDKN1C/p57蛋白表达水平下降,细胞增殖显著(P221可上调CDKN1C/p57蛋白表达继而抑制细胞增殖,且此种抑制作用可被anti-p57-siRNA逆转,说明此种抑制效应确由CDKN1C/p57所介导;在转染重组有CDKN1C/p57基因3'-UTR片段的荧光素酶报告载体的Caco2细胞中,共转染pre-MIR221后荧光素酶活性下降,而共转染anti-MIR221后荧光素酶活性增高,差异均具有统计学意义(P221可通过与CDKN1C/p57 mRNA 3'-UTR区域结合使结肠癌细胞中CDKN1C/p57蛋白表达下降而促进肿瘤增殖;anti-MIR221则可通过上调CDKN1C/p57蛋白表达继而抑制细胞增殖而发挥抗瘤效应。

关键词：结肠癌 microrna-221 CDKN1C/p57 增殖

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结直肠癌与毗邻癌旁组织中microrna-221与CDKN1C／p57的差异表达

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中华实验外科杂志 2011年第1期28卷 19-21页

作者：曾俊杰孙凯吴承堂雷尚通王伟南方医科大学南方医院普通外科广州510515

目的观察结直肠癌与毗邻癌旁组织中microrna-221（miR-221）与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p57（CDKN1C／p57）的差异表达。方法常规抽提结直肠癌及对照癌旁组织中总RNA及蛋白质，应用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测标本中miR-... 详细信息

目的观察结直肠癌与毗邻癌旁组织中microrna-221（miR-221）与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p57（CDKN1C／p57）的差异表达。方法常规抽提结直肠癌及对照癌旁组织中总RNA及蛋白质，应用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测标本中miR-221表达，以半定量逆转录（RT）-PCR和Westernblot分析CDKN1C／p57mRNA和蛋白表达。结果30例结直肠癌与癌旁组织相比，miR-221表达明显上调（2．041±1．401比0．806±0．341），差异有统计学意义（P〈0．01），半定量RT—PCR和Western blot分别证实其町能调节的靶目标CDKN1C／p57在mRNA水平结直肠癌和癌旁组织中表达差异无统计学意义（P〉0．05），而蛋白质水平在结直肠癌中表达明显下降（3．019±1．708比0．972±0．316，P〈0．01）。结论miR-221可能通过转录后基因沉默机制使CDKN1C／p57蛋白表达下降，从而促进结直肠癌的发生发展。

关键词：结直肠癌 microrna-221 CDKN1C/p57 实时荧光定量PCR

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X线辐射剂量对结直肠癌细胞中microrna-221和p57^(kip2)表达的影响

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肿瘤防治研究 2013年第10期40卷 921-924页

作者：孙凯张晓槟邓海军钟育波雷尚通区文弢吴承堂南方医科大学南方医院普通外科广州510515 南方医科大学附属佛山医院普外三科

目的探讨不同剂量X线辐射对人结直肠癌Caco2细胞系中microrna-221(miR-221)和p57kip2表达的影响。方法常规培养Caco2细胞系并分为5组,分别给予不同剂量X线(0、2、4、6和8 Gy)照射,24 h后提取细胞总RNA和蛋白质,应用real-time Q-PCR检测... 详细信息

目的探讨不同剂量X线辐射对人结直肠癌Caco2细胞系中microrna-221(miR-221)和p57kip2表达的影响。方法常规培养Caco2细胞系并分为5组,分别给予不同剂量X线(0、2、4、6和8 Gy)照射,24 h后提取细胞总RNA和蛋白质,应用real-time Q-PCR检测细胞中miR-221和p57kip2mRNA的表达水平,Western blot检测p57kip2蛋白的表达变化。结果 Caco2细胞系在不同照射剂量下,miR-221表达水平随着照射剂量的增加而增加,而p57kip2蛋白表达水平则随着照射剂量的增加而逐步降低,且呈剂量依赖效应,两者差异均具有统计学意义(P221/p57kip2调控通路,抑制miR-221表达可能会提高结直肠癌细胞的放射敏感度。

关键词：结直肠癌 microrna-221 p57^kip2 辐射剂量放射敏感度

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肺炎支原体肺炎患儿血清microrna-21和microrna-221水平变化及与炎症因子、T淋巴细胞亚群的相关性

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中国现代医学杂志 2021年第19期31卷 19-24页

作者：田伟梁淳宋亚娟邯郸市中心医院检验科河北邯郸056008

目的探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿血清microrna-21(miR-21)和microrna-221(miR-221)的水平变化及与炎症因子、T淋巴细胞亚群的关系。方法选取2017年1月—2019年1月邯郸市中心医院就诊的MPP患儿120例为研究对象(MPP组),另选取本院同期体... 详细信息

目的探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿血清microrna-21(miR-21)和microrna-221(miR-221)的水平变化及与炎症因子、T淋巴细胞亚群的关系。方法选取2017年1月—2019年1月邯郸市中心医院就诊的MPP患儿120例为研究对象(MPP组),另选取本院同期体检的健康儿童100例为对照组(CON组)。比较两组研究对象血清miR-21和miR-221的水平差异,并分析二者与患儿外周血中炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]和T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))之间的相关性。结果MPP组血清miR-21和miR-221水平高于CON组(P221与患者外周血CD3^(+)(r=-0.494和-0.656,P=0.037和0.014)、CD4^(+)(r=-0.621和-0.554,P=0.015和0.031)、CD8^(+)(r=-0.772和-0.476,P=0.003和0.043)、CD4^(+)/CD8^(+)(r=-0.545和-0.660,P=0.023和0.014)均呈负相关,而与TNF-α(r=0.787和0.619,P=0.000和0.015)、IL-6(r=0.530和0.598,P=0.035和0.029)、IL-8(r=0.665和0.614,P=0.012和0.017)均呈正相关。结论MPP患儿血清miR-21和miR-221水平升高,且与患儿T淋巴细胞亚群水平的降低、炎症因子水平的升高有一定的相关性,监测两者的水平变化有助于评估MPP患儿的免疫状态和炎症反应,并为合理制订治疗方案提供帮助。

关键词：肺炎支原体肺炎 microrna-21 microrna-221 T淋巴细胞亚群炎症因子

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microrna-221在结直肠癌中的表达及其对癌细胞迁移的影响

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中国现代医学杂志 2016年第4期26卷 58-63页

作者：王刚解寒冰河南省郑州人民医院急诊科河南郑州450003 河南省郑州人民医院普通外科河南郑州450003

目的研究上皮-间质转化(EMT)相关的微小RNA(micro RNA,以下简称miRNA)-221在结直肠癌患者中的表达水平,并探索其对结直肠癌细胞迁移水平的影响。方法选取该院40例结直肠癌患者为研究组,选取同期体检的40例健康人群为对照组。采用实时定... 详细信息

目的研究上皮-间质转化(EMT)相关的微小RNA(micro RNA,以下简称miRNA)-221在结直肠癌患者中的表达水平,并探索其对结直肠癌细胞迁移水平的影响。方法选取该院40例结直肠癌患者为研究组,选取同期体检的40例健康人群为对照组。采用实时定量RT-PCR法检测结直肠癌患者癌组织以及癌旁组织中mi RNA-221表达水平,同时对比结直肠癌患者及正常人血浆中miRNA-221表达水平。对结直肠细胞采用miRNA-221的mimic及inhibitor分别高、低表达miRNA-221后,采用transwell法分别检测细胞的侵袭水平以及EMT相关蛋白表达。结果 miRNA-221在直肠癌组织的表达水平显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P221在直肠癌患者血浆中的表达水平显著高于健康对照人群,差异有统计学意义(P221后,结直肠癌细胞迁移能力显著降低(均P221,结直肠癌细胞迁移能力显著增加,且细胞中EMT相关的上皮钙黏蛋白(E-cad)的表达水平增加。结论结直肠癌患者高表达的miRNA-221通过促进结直肠癌细胞的迁移水平来参与结直肠癌发生发展的进程。

关键词： microrna-221 结直肠癌上皮钙黏蛋白迁移

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多重放大技术用于microrna-221和肌红蛋白的检测研究

多重放大技术用于MicroRNA-221和肌红蛋白的检测研究

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作者：张华湖南大学

学位级别：硕士

生物标志物的检测已成为研究热点之一,然而,大多生物标志物以非常低的浓度存在,例如循环micrornas(miRNAs)在血液中仅以femtomolar甚至更低水平存在,因而有必要构建高灵敏度的生物传感器。鉴于单一的放大方法难以满足低浓度生物标志检... 详细信息

生物标志物的检测已成为研究热点之一,然而,大多生物标志物以非常低的浓度存在,例如循环micrornas(miRNAs)在血液中仅以femtomolar甚至更低水平存在,因而有必要构建高灵敏度的生物传感器。鉴于单一的放大方法难以满足低浓度生物标志检测的要求,多重放大技术的发展已成为趋势。本论文选择miRNA-221和肌红蛋白作为模式目标物,将催化发夹组装、超级三明治技术以及酶催化放大技术等相结合构建了高灵敏的生物传感器,并在此基础上,简化操作步骤以及检测设备,构建了便携式的生物传感器,具体如下:1、基于催化发夹组装(CHA)和超级三明治技术相结合的新型电化学传感器用于miRNA-221的检测研究。一方面,CHA可以实现目标miRNA-221循环利用,实现信号放大;另一方面,通过在电极表面形成的超级三明治结构可以负载多个辣根过氧化物酶(HRP)修饰的信号探针,进而实现电化学信号的放大。在等温双重放大技术作用下,可检测到低至0.6 pM(S/N=3)miRNA-221。此外,该传感器具有高选择性,能够将miRNA-221从同源miRNA中区分开来。更重要的是,该传感器能够用于细胞内提取的总RN A中miRN A-221的检测,其结果与qRT-PCR方法得到的结果基本一致,这意味着该电化学传感器有望应用于临床分析领域。并且该电化学传感器避免了纳米颗粒的引入,克服了纳米颗粒的局限性。2、便携式比色核酸适配体传感器用于肌红蛋白的检测研究。该传感器一方面基于超级三明治技术和HRP-DNA催化放大技术实现了信号的增强,另一方面,该比色核酸适配体传感器的整个过程可以直接在Ep管内完成,只需要简单的几步,操作简便。并且利用便携式光纤传感器作为检测器,不需要大型仪器设备和专业技术人员。该传感器可检测低至3 nM(S/N=3)的肌红蛋白,能够满足临床检测要求。由于光纤传感器的光源为调制光,可使该方法免受外界光的影响。该工作有望发展成为一种新型即时检测方法。

关键词：生物传感器信号放大 microrna-221 肌红蛋白

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microrna-221对结直肠癌中CDKN1C/p57表达的调控作用

MicroRNA-221对结直肠癌中CDKN1C/p57表达的调控作用

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作者：曾俊杰南方医科大学

学位级别：硕士

目的本研究选用实时荧光定量PCR (Real-time quantitative PCR)检测结直肠癌与毗邻癌旁组织中miRNA-221表达状况,并以CDKN1C/p57为进一步的研究对象,再以半定量RT-PCR和Western-blot分析CDKN1C/p57mRNA和翻译后蛋白的表达状况,探讨miRNA-221对结直肠癌中CDKN1C/p57表达的调控作用,并为结直肠癌发病机制和诊断治疗的研究提供新的思路。方法1、组织来源：34例结直肠癌及对照癌旁组织标本取自我院2008年9月至2009年5月间手术患者,均经术后病检证实。其中男性20例,女性14例;年龄32～74岁,平均(52.5±11.8)岁;结肠癌15例,直肠癌19例。癌旁组织取自距离癌肿5cm的肠黏膜,另切取距离癌肿10 cm以上肠黏膜作为正常对照。全部病例术前均未接受化疗或放疗。标本采集后迅速放至液氮中冷冻,-80℃保存。2、引物设计与合成：由GeneBank查找基因序列,使用软件Primer-Express2.0进行引物与探针的设计。内参照RNU6B上游引物为5’-CTC GCT TCG GCAGCA CA-3’,下游引物为5’-AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT-3’,扩增产物长96 bp;miRNA-221上游引物5’-CAG CAT ACA TGA TTC CTT GTG A-3’,下游引物为5’-CTT TGG TGT TTG AGA TGT TTG G-3’,扩增产物长73 bp。上述引物均由上海生工合成。3、半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测：以miRNA-221及其调节的靶目标细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子CDKN1C/p57作为进一步研究对象。取上述步骤提取的总RNA 3μg为模板,参照TaKaRa公司的RNA PCR Kit Ver3.0试剂盒说明书行RT-PCR检测。CDKN1C/p57引物序列(片段长度500bp)为：上游5’-CGT TCT TCT CGG GTG GA-3’,下游5’-CTG TAC TCA CTT GGCTCA-3’;内参照GAPDH引物序列(片段长度452 bp)为：上游5’-ACC ACA GTCCAT GCC ATC AC-3’,下游5’-TCC ACC ACC CTG TTG CTG TA-3’。PCR反应条件为：94℃2min;94℃30 s、55℃30 s、72℃1min,30个循环;72℃10 min。取PCR扩增产物10μL行1.5%琼脂糖凝胶电泳(含0.5 g/L溴化乙锭),用美国Pharmacia Master Image紫外凝胶成像系统进行CDKN1C/p57 mRNA表达水平的半定量分析。mRNA相对含量=目的基因条带积分吸光度值／内参照GAPDH基因条带积分吸光度值。4、Real-time Q-PCR检测标本中miRNA-221表达：常规Trizol试剂(Invitrogen公司)抽提总RNA,DEPC水溶解沉淀,核酸蛋白分析仪(Beckman Coulter, USA)测定RNA浓度,根据RNA在A260nm/A280nm≥1.8及甲醛变性凝胶电泳28S、18S RNA条带比值≥1.5鉴定RNA纯度及完整性。取总RNA 1μg加入无菌蒸馏水12μL,混匀后72℃孵育5 min以打开RNA二级结构,随后立即置于冰上,以防止RNA复性再次恢复二级结构;在另一去RNase的PCR管中配置以下反应液：dNTP mixture 2.0μL、Rnase抑制剂0.5μL、miRNA-221逆转录引物0.5μL、RNU6B逆转录引物0.5μL、5 x buffer 4.0μL、M-MLV逆转录酶0.5μL(Promega公司);配好后加入到刚才含总RNA的溶液中混匀,42℃孵育60 min,所得cDNA置于-20℃保存。构建miRNA-221和RNU6B的Real-timeQ-PCR反应体系：cDNA 5.0μL、Primers 1.0μL、SYBR Green荧光染料10μL、无菌蒸馏水8.0μL;反应条件：95℃变性10 min;95℃15 s、65℃30 s、72℃30s,共40个循环;循环结束后72℃延伸10 min,每个标本均作复管PCR反应,至少重复三次(试剂购自TOYOBO公司,PCR仪采用ABI PRISM(?)7300)。5、PCR产物的定量校正和判定分析：采用RNU6B作为内参照,用RNU6B的拷贝数作为校正基数,通过Light Cycler软件直接获得各样本中miRNA-221的Ct (cycle threshold)值,与同样本中RNU6B的Ct值相减,即获得该样本中miRNA-221的ΔCt值;由于以Real-time Q-PCR来检测RNA时,受到不同RNA样本存

关键词：结直肠癌 microrna-221 CDKN1C/p57 实时荧光定量PCR

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