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Glucocorticoid receptor regulates expression of microrna-22 and downstream signaling pathway in apoptosis of pancreatic acinar cells

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World Journal of Gastroenterology 2018年第45期24卷 5120-5130页

作者： Qiang Fu Chuan-Jiang Liu Xu Zhang Zhen-Sheng Zhai Yu-Zhu Wang Ming-Xing Hu Xian-Ling Xu Hong-Wei Zhang Tao Qin Department of Hepatobiliary and Pancreatic Surgery People’s Hospital of Zhengzhou University (Henan Provincial People’s Hospital) School of Medicine Zhengzhou University

AIM To elucidate the underlying mechanism that microrna-22(miR-22) promotes the apoptosis of rat pancreatic acinar cells(AR42 J) and the elements that regulate the expression of *** One hundred nanomoles per liter of caerulein(Cae)was administrated to induce the apoptosis of AR42 J cells and the apoptosis rate was detected by flow cytometry analysis. An amylase assay kit was used to measure the amylase expression level in the supernatant. Quantitative real-time PCR(qRT-PCR)was adopted to measure miR-22 expression. We used online tools to predict the potential transcription promoter of miR-22 and the binding sites, which was further identified by using luciferase reporter analysis,chromatin immunoprecipitation(ChIP) and ChIPqP CR assays. Then, a mimic of miR-22, Nr3 c1 plasmid encoding the glucocorticoid receptor(GR), and siNr3 c1 were used to transfect AR42 J cells, *** mRNA expression of miR-22, Nr3 c1, and Erb-b2 receptor tyrosine kinase 3(ErbB3) was confirmed by qRT-PCR and the apoptosis rate of AR42 J cells was detected by flow cytometry analysis. Western blot was used to detect the expression of ErbB3, GR, PI3 k, PI3 kp85α, Akt, p-Akt, Bad, Bax, Bcl-xl, Bcl-2, and cleaved *** After inducing apoptosis of AR42 J cells in vitro, the expression of miR-22 was significantly increased by2.20 ± 0.26 and 4.19 ± 0.54 times, respectively, at3 h and 6 h in comparison with the control *** revealed by qRT-PCR assay, the expression of miR-22 was 78.25 ± 6.61 times higher in the miR-22 mimic group relative to the miRNA control group,accompanied with an obviously increased acinar cell apoptosis rate(32.53 ± 1.15 vs 18.07 ± 0.89, P =0.0006). The upregulation of miR-22 could suppress its target gene, ErbB3, and the phosphorylation of PI3 k and Akt. Furthermore, we predicted the potential transcription promoter of miR-22 and the binding sites using online tools. Luciferase reporter analysis and sitedirected mutagenesis indicated that the b

关键词： microrna-22 Apoptosis Pancreatic acinar cells Erb-b2 receptor tyrosine kinase 3 Glucocorticoid receptor

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Circular RNA circ ASK1 acts as a microrna-22 sponge to attenuate intimal hyperplasia by regulating TET2

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中国药理学与毒理学杂志 2019年第10期 802-803页

作者： XIA Luo-xing ZENG Zhi QIN Jing-hong LI Kang TANG Wai-ho Institute of Pediatrics Guangzhou Women and Children's Medical Centre Guangzhou Medical University

OBJECTIVE Circular RNA expression aberration has been identified in various human diseases. In this study, we investigated whether circ ASK1 could act as competing endogenous mi R-22 to regulate intimal hyperplasia. METHODS Quantitative polymerase chain reactions(q PCR) and fluorescent in situ hybridization(FISH) were conducted to detect circular ASK1(circ ASK1)expression in smooth muscle cells, mouse femoral artery and human arterial specimens. The q PCR assays, Western blotting assays, CCK-8 assays and Ed U(5-ethynyl-2′-deoxyuridine) incorporation assays were conducted to detect the functional roles of circ ASK1 in vascular smooth muscle cell function in vitro. Elastic Van Gienson and immunofluorescent assays were conducted to detect the role of circ ASK1 in intimal hyperplasia in vivo. Bioinformatics analysis, luciferase activity assays, RNA pulldown assays, and in vitro studies were conducted to reveal the mechanism of circ ASK1 on inhibiting intimal hyperplasia. RESULTS PDGF stimulation could reduce circ ASK1 expression in human(HASMC) and mouse aortic smooth muscle cells(MASMC). Moreover, circ ASK1 expression was significantly down-regulated in wireinjured femoral arteries and diseased arterial specimens were characterized by presence of SMC-rich atherosclerotic lesions. Up-regulation of circ ASK1 promoted differentiation and inhibited proliferation of mouse aortic smooth muscle cells(MASMC) in vitro. circ ASK1 overexpression in vivo alleviated intimal hyperplasia, as shown by promoting differentiation of smooth muscle *** ASK1 acted as an endogenous mi R-22 sponge to sequester and inhibit mi R-22 activity, which led to increased Tet2 expression. Knockdown of mi R-22 mimicked the effect of circ ASK1 overexpression on MASMC phenotypes in vivo and in vitro. CONCLUSION Our results reveal an important role for a novel circ ASK1/mi R-22/Tet2 axis in regulation of intimal hyperplasia. Overexpression of circ ASK1 promoted differentiation and inhibit proliferat

关键词： circular RNA circASK1 microrna-22 vascular smooth muscle cell TET2 intimal hyperplasia

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microrna-22在特发性肺动脉高压发病机制中的作用

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中华急诊医学杂志 2012年第1期21卷 57-60页

作者：郑超刘群黄峥嵘唐蓉郑武扬张紫冠李德隆曾志鹏厦门大学附属第一医院呼吸科厦门361003 厦门大学附属第一医院心内科厦门361003

目的研究血浆microrna．22（miR一22）在特发性肺动脉高压（IPAH）诊断中的价值及发病机制中的作用。方法应用real-timePCR方法检测IPAH患者及匹配健康人血浆miR-22表达水平，结合生物信息学方法分析miR-22靶基因MYCBP，并采用eGFP报告... 详细信息

目的研究血浆microrna．22（miR一22）在特发性肺动脉高压（IPAH）诊断中的价值及发病机制中的作用。方法应用real-timePCR方法检测IPAH患者及匹配健康人血浆miR-22表达水平，结合生物信息学方法分析miR-22靶基因MYCBP，并采用eGFP报告基因对靶基因进行实验验证。结果IPAH患者血浆miR-22表达水平明显降低（P〈0．01），ROC曲线下面积（AUC）为0．744；生物信息学分析及eGFP报告基因验证，MYCBP是miR-22的靶基因之一。结论血浆miR-22在IPAH患者表达明显下调，可作为IPAH诊断分子标志物，miR-22通过靶基因MYCBP激活c—Myc信号通路，促进细胞增殖相关基因转录，是导致IPAH患者肺动脉中膜平滑肌增殖及肺血管重构的可能机制之一。

关键词：特发性肺动脉高压 microrna-22 分子标志物 Myc结合蛋白

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microrna-22和microrna-1825在幼年系统性红斑狼疮诊断和鉴别诊断中的作用

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中华实用儿科临床杂志 2015年第9期30卷 667-671页

作者：孙娟吴凤岐鲁杰何峰刘哲伟北京大学首都儿科研究所教学医院分子免疫室 100020

目的探索microrna（miR）-22和miR-1825在幼年系统性红斑狼疮（JSLE）诊断及鉴别诊断中的应用价值。方法选取2013年6月至2014年5月首都儿科研究所附属儿童医院收治的JSLE患儿为研究组，选取同期收治的全身型幼年特发性关节炎（sJIA）、... 详细信息

目的探索microrna（miR）-22和miR-1825在幼年系统性红斑狼疮（JSLE）诊断及鉴别诊断中的应用价值。方法选取2013年6月至2014年5月首都儿科研究所附属儿童医院收治的JSLE患儿为研究组，选取同期收治的全身型幼年特发性关节炎（sJIA）、肾病综合征（Ns）、川崎病（KD）、过敏性紫癜（HSP）患儿为病例对照组，选取健康体检儿童为健康对照组。采用实时荧光定量-PCR方法检测研究组患者、病例对照组患者和健康对照组儿童血浆中miR-22和miR-1825表达水平，分析3组间miR-22和miR-1825表达水平的差异。受试者工作特征曲线（ROC曲线）评价miR-22和miR-1825作为诊断指标的灵敏度和特异度。用Targetscan、PicTar、miranda3个数据库预测miR-22和miR-1825靶基因，使用基因本体（GO）分析预测靶基因的分子功能、参与的生物学过程，京都基因与基因组百科全书通路（KEGG通路）分析预测靶基因参与的相关免疫学通路。结果研究组JSLE患儿血浆miR-22和miR-1825表达水平均低于健康儿童，差异均有统计学意义（t=-3．076、-9．054，P〈0．01、0．0001），亦低于病例对照组sJIA、NS、KD、HSP患儿表达水平（t=-4．410、-4．477、-4．494、-2．971，P均〈0．0001；t=-9．043、-6．045、-10．416、-8．712，P均〈0．0001），病例对照组患儿血浆miR-22和miR-1825miRNA的表达水平与健康对照组儿童比较差异均无统计学意义（P均〉0．05）。miR-22健康对照组和研究组ROC曲线下面积为0．777，miR-1825健康对照组和研究组ROC曲线下面积为1．000。miR-22：JSLE患儿与sJIA、NS、KD、HSP患儿ROC曲线下面积为0．731～1．000；miR-1825：JSLE患儿与sJIA、NS、KD、HSP患儿ROC曲线下面积为0．939～1．000。JSLE患儿外周血miR-22的表达水平与补体C3具有相关性（r=0．493，P=0．027）。结论血浆中miR-22和miR-1825表达水平对JSLE的诊断和鉴别诊断具有-定参考价值，miR-22可在一定程度上反映疾病活动性。

关键词：幼年系统性红斑狼疮 microrna-22 microrna-1825 诊断鉴别诊断

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Over-Expression of microrna-22 Protects Cardiomyocytes from Ischemic Injury

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World Journal of Cardiovascular Diseases 2019年第10期9卷 737-745页

作者： Lin Ling Zicheng Ling Shaohua Gu Department of Cardiology The First Affiliated Hospital of Soochow University Suzhou China Shanghai University of Traditional Chinese Medicine Shanghai China Department of Nephrology The Third People’s Hospital of Kunshan Suzhou China

Objective: To investigate the protection effect of over-expressed microrna- 22 on ischemic cardiomyocyte.?Methods: Cardiomyocytes cultured in hypoxia and ischemia condition were transfected with recombinant adenovirus vector containing microrna-22 plus a recombinant green fluorescent protein (GFP). Transduction efficiency and expression of microrna-22 were assessed. The expression of downstream PTEN protein expression was detected. After successful transduction, cell activities including viability, nuclei proliferation and cell apoptosis were assessed. We used CCK-8 assay to assess cell activities, EdU assay to assess nuclei proliferation and Caspase-3/LDH assay to assess cell apoptosis. Results: microrna-22 was transfected successfully using adeno-virus. The expression of microrna-22 was significantly?increased. The transduction efficiency reached more than 95%. Over-expression?of microrna-22 incardiomyocytes down regulated PTEN protein level.?Over- expression of microrna-22 increased cell activities, DNA proliferation and decreased cell apoptosis. Conclusion: Over-expression of microrna-22 pro- tected cardiomyocytes from ischemic injury.

关键词： microrna-22 Cardiomyocyte Cell Activities

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1,25-(OH)_2D_3抑制人卵巢癌细胞SKOV-3增殖与调控microrna-22的表达有关

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营养学报 2014年第1期36卷 35-39页

作者：高四海张鹤美贺金奖张增利童建李冰燕苏州大学公共卫生学院卫生毒理学教研室苏州215123

目的通过观察1,25-(OH)2D3对SKOV-3细胞增殖和microrna-22和microrna-21表达的影响,探讨micrornas在1,25-(OH)2D3抗肿瘤增殖中的作用。方法以不同浓度1,25-(OH)2D3(10-9、10-8、10-7mol/L)处理SKOV-3细胞,CCK-8法检测细胞增殖率,real time RT-PCR分析microrna-22和microrna-21的表达,流式细胞仪分析细胞周期,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 1,25-(OH)2D3对SKOV-3细胞增殖有明显的抑制作用,并且存在着时间剂量依赖关系(Pmicrorna-22的表达水平(Pmicrorna-21的表达。细胞周期分析显示,1,25-(OH)2D3可以诱导SKOV-3细胞阻滞于G0/G1,浓度越高阻滞越明显(Pmicrorna-22,促进细胞凋亡,调节细胞周期,抑制细胞增殖,从而到达抑制肿瘤的作用。[营养学报,2014,36(1):35-39]

关键词： 1,25-(OH)2D3 SKOV-3细胞 microrna-22 microrna-21

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高表达microrna-22对缺氧心肌细胞的保护作用及机制

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中国动脉硬化杂志 2017年第10期25卷 997-1001页

作者：凌琳凌子成顾少华苏州大学附属第一医院心血管内科江苏省苏州市215006 扬州大学医学院江苏省扬州市225000 昆山市第三人民医院江苏省昆山市215300

目的观察高表达microrna-22对体外培养的缺氧心肌细胞的保护作用及机制。方法用携带microrna-22的腺病毒载体和空载体转染体外缺氧条件下培养的原代心肌细胞,检测高表达microrna-22后心肌细胞生物学特性的改变。采用MTT检测细胞活力,Ed... 详细信息

目的观察高表达microrna-22对体外培养的缺氧心肌细胞的保护作用及机制。方法用携带microrna-22的腺病毒载体和空载体转染体外缺氧条件下培养的原代心肌细胞,检测高表达microrna-22后心肌细胞生物学特性的改变。采用MTT检测细胞活力,EdU检测细胞DNA合成能力,Caspase-3检测细胞凋亡情况。结果表达microrna-22的腺病毒载体成功转染原代心肌细胞,流式细胞仪检测绿色荧光蛋白阳性细胞比例>95%,高表达microrna-22从蛋白水平显著下调PTEN表达。与空载腺病毒组相比,高表达microrna-22组细胞核增殖明显增加,细胞生长更快,细胞活力增加,细胞凋亡减少。结论体外高表达microrna-22能保护缺氧条件下的心肌细胞。

关键词： microrna-22 心肌细胞:细胞特性

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microrna-22抑制SIRT1表达对调控软骨细胞衰老的影响

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武警医学 2023年第3期34卷 206-209,213页

作者：颜世举董文静李志锐赵燕鹏韩涛魏均强王俊良林峰解放军总医院海南医院骨科三亚572013 解放军总医院海南医院老年医学科三亚572013 解放军总医院第四医学中心骨科北京100048

目的研究microrna-22在骨关节炎中对软骨细胞衰老的影响。方法原代培养人骨关节炎软骨细胞;软骨细胞转染microrna-22模拟物、抑制物,通过MTT实验检测microrna-22对于软骨细胞增殖活性的影响,通过半乳糖苷酶染色实验检测microrna-22对于... 详细信息

目的研究microrna-22在骨关节炎中对软骨细胞衰老的影响。方法原代培养人骨关节炎软骨细胞;软骨细胞转染microrna-22模拟物、抑制物,通过MTT实验检测microrna-22对于软骨细胞增殖活性的影响,通过半乳糖苷酶染色实验检测microrna-22对于软骨细胞衰老的影响,通过Western blot检测microrna-22对于靶基因SIRT1,以及细胞衰老标志物P16蛋白表达的影响。结果(1)与对照组软骨细胞相比,转染microrna-22模拟物可显著抑制软骨细胞增殖速率,转染microrna-22抑制物可促进软骨细胞增殖(Pmicrorna-22模拟物可显著增加半乳糖苷酶染色阳性软骨细胞比例,促进软骨细胞衰老,转染microrna-22抑制物可降低半乳糖苷酶染色阳性软骨细胞比例,减缓软骨细胞衰老(Pmicrorna-22模拟物可显著抑制SIRT1蛋白表达水平,同时促进P16蛋白表达,转染microrna-22抑制物可促进SIRT1蛋白表达,抑制P16蛋白表达水平(Pmicrorna-22可抑制软骨细胞增殖,并通过抑制SIRT1蛋白表达、促进P16蛋白表达,促进软骨细胞衰老,从而在骨性关节炎的发生与进展中扮演了重要角色。

关键词： microrna-22 衰老骨关节炎 SIRT1 P16 软骨细胞

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microrna-22与肝癌细胞侵袭的相关性

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医学新知 2018年第3期28卷 248-250,272页

作者：胡巍汪付兵武汉大学中南医院检验科湖北武汉430071

目的探讨microrna-22（miR-22）对肝癌细胞侵袭的表达量的变化及意义.方法通过培养不同迁移和侵袭能力肝癌细胞系MHCC97L和HCCLM9细胞以及正常肝细胞系LO2细胞,比较miR-22表达量的差异.选取miR-22表达量相对较低的肝癌细胞系HCCLM9,... 详细信息

目的探讨microrna-22（miR-22）对肝癌细胞侵袭的表达量的变化及意义.方法通过培养不同迁移和侵袭能力肝癌细胞系MHCC97L和HCCLM9细胞以及正常肝细胞系LO2细胞,比较miR-22表达量的差异.选取miR-22表达量相对较低的肝癌细胞系HCCLM9,向其转染miR-22抑制剂（inhibitor）和模拟物（mimics）,对比转染前后HCCLM9细胞系迁移能力的改变.采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测miR-22的表达量.采用划痕实验检测细胞迁移能力的改变.结果与正常肝细胞系LO2细胞相比较,肝癌细胞系内miR-22表达量显著降低（P〈0.05）;且具有高侵袭能力的HCCLM9细胞相比低侵袭能力的MHCC97L细胞的miR-22表达量更低（P〈0.05）.向高侵袭能力的HCCLM9细胞转染miR-22 inhibitor后,细胞内miR-22表达量显著下降（P〈0.001）,细胞迁移能力显著增强（P〈0.001）;而转染miR-22 mimics之后,细胞内miR-22表达量显著升高（P〈0.001）,细胞迁移能力则显著减弱（P〈0.001）.结论 miR-22可抑制肝癌细胞迁移和侵袭能力,进而抑制肝癌的转移.

关键词： microrna-22 肝癌侵袭细胞迁移

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microrna-22对调控软骨细胞自噬的影响及其在骨关节炎发病中的作用机制

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武警医学 2022年第11期33卷 982-986页

目的探讨microrna-22对软骨细胞自噬的影响及其在骨关节炎(OA)发病中作用机制。方法原代培养人健康、OA软骨细胞,荧光定量PCR检测microrna-22在健康、OA软骨细胞中的表达水平;Western blot检测健康、OA软骨细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、... 详细信息

目的探讨microrna-22对软骨细胞自噬的影响及其在骨关节炎(OA)发病中作用机制。方法原代培养人健康、OA软骨细胞,荧光定量PCR检测microrna-22在健康、OA软骨细胞中的表达水平;Western blot检测健康、OA软骨细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、Ⅰ的表达水平;软骨细胞转染microrna-22模拟物、抑制物,平板克隆形成实验检测microrna-22对软骨细胞活性的影响,Western blot检测软骨细胞自噬相关蛋白LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ及Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)的表达水平。结果荧光定量PCR检测结果显示,OA软骨细胞(14例)中microrna-22表达含量(2.50±0.39)显著增高(P22模拟物组细胞克隆形成数量(75.67±11.36)降低,软骨细胞转染miR-22抑制物组(128.5±9.95)增高,差异有统计学意义(P22模拟物组软骨细胞中LC3B-Ⅱ含量降低(1.50±0.20),LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值降低(1.45±0.13),Ⅱ型胶原CollagenⅡ的表达水平降低(0.51±0.09);miR-22抑制物组软骨细胞中LC3B-Ⅱ含量增高(2.36±0.19),LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值增高(2.30±0.08),同时Ⅱ型胶原CollagenⅡ的表达水平增高(1.31±0.03),以上差异均有统计学意义(Pmicrorna-22抑制软骨细胞自噬,从而促进骨性关节炎的发生与进展。

关键词： microrna-22 自噬骨关节炎软骨细胞

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