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FOXO1-mir-506 axis promotes chemosensitivity to temozolomide and suppresses invasiveness in glioblastoma through a feedback loop of FOXO1/mir-506/ETS1/FOXO1

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Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology) 2023年第8期24卷 698-710页

作者： Chao CHEN Yu’e LIU Hongxiang WANG Xu ZHANG Yufeng SHI Juxiang CHEN Department of Neurosurgery Changhai HospitalSecond Military Medical UniversityShanghai 200433China Tongji University Cancer Center Shanghai Tenth People’s Hospital of Tongji UniversitySchool of MedicineTongji UniversityShanghai 200092China

To explore the role of forkhead box protein O1(FOXO1)in the progression of glioblastoma multiforme(GBM)and related drug resistance,we deciphered the roles of FOXO1 and mir-506 in proliferation,apoptosis,migration,invasion,autophagy,and temozolomide(TMZ)sensitivity in the U251 cell line using in vitro and in vivo *** viability was tested by a cell counting kit-8(CCK8)kit;migration and invasion were checked by the scratching assay;apoptosis was evaluated by terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick-end labeling(TUNEL)staining and flow *** construction of plasmids and dual-luciferase reporter experiment were carried out to find the interaction site between FOXO1 and *** was done to check the protein level in tumors after the in vivo *** found that the FOXO1-mir-506 axis suppresses GBM cell invasion and migration and promotes GBM chemosensitivity to TMZ,which was mediated by ***1 upregulates mir-506 by binding to its promoter to enhance transcriptional ***-506 could downregulate E26 transformation-specific 1(ETS1)expression by targeting its 3'-untranslated region(UTR).Interestingly,ETS1 promoted FOXO1 translocation from the nucleus to the cytosol and further suppressed the FOXO1-mir-506 axis in GBM ***,both mir-506 inhibition and ETS1 overexpression could rescue FOXO1 overactivation-mediated TMZ chemosensitivity in mouse *** study demonstrated a negative feedback loop of FOXO1/mir-506/ETS1/FOXO1 in GBM in regulating invasiveness and ***,the above axis might be a promising therapeutic target for GBM.

关键词： Glioblastoma Forkhead box protein O1(FOXO1) mir-506 E26 transformation specific-1(ETS1) Chemosensitivity

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mir-506对胃癌细胞增殖和转移的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2016年第5期36卷 613-618页

作者：林子龙周全任佳李建芳俞焙秦苏丽萍徐岷涓刘炳亚上海交通大学系统生物医学研究院系统生物医学教育部重点实验室上海200240 上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所上海市胃肿瘤重点实验室上海200025

目的探讨mi R-506对胃癌细胞增殖和转移的抑制作用。方法采用实时荧光定量PCR检测5株胃癌细胞系(MKN-45、SGC-7901、BGC-823、NCI-N87和AGS)中mi R-506的表达量,以永生化的正常胃黏膜上皮细胞GES-1为对照。通过脂质体转染的方法在SGC-7... 详细信息

目的探讨mi R-506对胃癌细胞增殖和转移的抑制作用。方法采用实时荧光定量PCR检测5株胃癌细胞系(MKN-45、SGC-7901、BGC-823、NCI-N87和AGS)中mi R-506的表达量,以永生化的正常胃黏膜上皮细胞GES-1为对照。通过脂质体转染的方法在SGC-7901细胞系中瞬时转染mi R-506和anti-mir-506上调和下调mi R-506表达,通过CCK-8实验观察细胞增殖能力改变,通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞运动迁移和侵袭能力的变化。结果 mir-506在各胃癌细胞中的表达量相对于正常胃黏膜上皮细胞GES-1显著降低(P506可显著抑制SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭能力,与阴性对照的差异有统计学意义(P506表达则可促进增殖、迁移和侵袭能力(P506明显降低,上调mi R-506可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,下调则逆转上述过程。

关键词： mir-506 胃癌增殖迁移侵袭

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mir-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用

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上海交通大学学报（医学版） 2012年第6期32卷 699-705页

作者：梁永俊周佽想宇小婷赵倩上海交通大学医学院中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所上海交通大学基础医学院病理生理学教研室上海200025

目的探讨mir-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用。方法采用实时荧光定量PCR检测8株乳腺癌细胞系(MCF7、BT474、SK-BR-3、MDA-MB-453、MDA-MB-468、HCC1937、BT549和MDA-MB-231)中mir-506的表达量,以... 详细信息

目的探讨mir-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用。方法采用实时荧光定量PCR检测8株乳腺癌细胞系(MCF7、BT474、SK-BR-3、MDA-MB-453、MDA-MB-468、HCC1937、BT549和MDA-MB-231)中mir-506的表达量,以正常乳腺上皮细胞MCF10A为对照。通过脂质体转染的方法在MDA-MB-231和BT549细胞系中瞬时过表达mir-506模拟物(设阴性对照),通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞运动能力的变化;观察MDA-MB-231和BT549细胞系转染mir-506前后细胞形态学变化;Western blotting法检测E-cadherin、Vimentin和Slug蛋白表达的变化。荧光素酶报告基因分析实验检测MDA-MB-231细胞中mir-506过表达对野生型荧光素酶活性的影响。结果 mir-506在各乳腺癌细胞中的表达量相对于正常乳腺上皮细胞MCF10A显著降低(Pmir-506过表达显著抑制MDA-MB-231和BT549细胞的迁移和侵袭能力,与阴性对照的差异有统计学意义(Pmir-506 48 h后发生明显的形态学改变;Western blotting结果显示mir-506过表达在MDA-MB-231和BT549细胞中均上调E-cadherin的表达,下调Vimentin的表达。Western blotting检测结果显示MDA-MB-231细胞转染mir-506后Slug蛋白水平明显低于阴性对照;荧光素酶报告基因分析结果显示mir-506过表达显著抑制野生型荧光素酶的活性。结论在乳腺癌中,mir-506可以通过靶向转录因子Slug诱导细胞发生上皮间充质转化,进而抑制细胞的侵袭和转移能力,这是mir-506参与乳腺癌发生和发展的可能途径之一。

关键词： mir-506 乳腺癌上皮间充质转化 Slug

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血清mir-922及mir-506对儿童急性淋巴细胞白血病诊断及预后判断的价值

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中国当代儿科杂志 2021年第10期23卷 1021-1026页

作者：朱奕月吴日暖李霞陈祥碧三亚市妇幼保健院儿科海南三亚572000 三亚市人民医院儿科海南三亚572000

目的探讨血清mir-922及mir-506表达水平对儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)诊断及预后判断的价值。方法前瞻性选取132例ALL患儿(ALL组)和80例健康儿童(健康对照组)纳入本研究,采用实时荧光定量PCR技术检测ALL... 详细信息

目的探讨血清mir-922及mir-506表达水平对儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)诊断及预后判断的价值。方法前瞻性选取132例ALL患儿(ALL组)和80例健康儿童(健康对照组)纳入本研究,采用实时荧光定量PCR技术检测ALL组和健康对照组血清mir-922及mir-506表达水平。绘制受试者工作特征曲线分析mir-922及mir-506对儿童ALL的诊断价值。应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用多因素COX回归模型分析影响ALL患儿预后不良的因素。结果ALL组血清mir-922及mir-506表达水平均明显高于健康对照组(Pmir-922及mir-506诊断儿童ALL的最佳截断值分别为1.46、2.17。mir-922高表达组(≥1.46)及mir-506高表达组(≥2.17)的淋巴结肿大、白细胞计数≥50×10^(9)/L、中高危险度分层、MLL基因重排、染色体核型异常的发生率均明显高于mir-922及mir-506低表达组(Pmir-922及mir-506高表达与ALL患儿生存期短有关(Pmir-922≥1.46及mir-506≥2.17可提示ALL患儿预后不良(Pmir-922及mir-506表达水平对儿童ALL诊断及预后判断均有较好的价值。

关键词：急性淋巴细胞白血病 mir-922 mir-506 诊断价值预后儿童

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mir-506靶向HOXA13对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

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药物生物技术 2021年第4期28卷 351-356页

作者：黄妙铭胡金成毛志强何锦添东莞市人民医院耳鼻喉科广东东莞523059

探讨mir-506靶向HOXA13对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。通过实时荧光定量PCR(RTq PCR)检测鼻咽上皮细胞NP69以及鼻咽癌细胞系CNE-1,CNE-2,HNE-1,C666-1中mir-506以及HOXA13 mRNA表达水平,选择CNE-1细胞用于后续实验,通过脂质体200... 详细信息

探讨mir-506靶向HOXA13对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。通过实时荧光定量PCR(RTq PCR)检测鼻咽上皮细胞NP69以及鼻咽癌细胞系CNE-1,CNE-2,HNE-1,C666-1中mir-506以及HOXA13 mRNA表达水平,选择CNE-1细胞用于后续实验,通过脂质体2000将mir-506 mimic、mimic-NC、siRNA-HOXA13、siRNANC转染CNE-1细胞,分为mir-506 mimic组、mimic-NC组、si-HOXA13组、si-NC组,对照组细胞不处理。通过RTq PCR检测各组细胞转染效率,CCK8检测各组细胞增殖情况,Transwell和划痕实验检测各组细胞侵袭和迁移情况,Western-blot实验检测各组细胞HOXA13、Ki-67、MMP-2蛋白表达水平,双荧光素酶实验验证靶向关系。与鼻咽癌上皮细胞NP69比,鼻咽癌细胞系中mir-506表达量显著下降(F=74.007,Pmir-506 mimic组细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降,相关蛋白Ki-67、MMP-2蛋白表达量显著下降(Pmir-506与HOXA13-3’UTR存在结合位点,双荧光素酶实验结果显示:HOXA13是mir-506的靶基因。mir-506通过靶向HOXA13抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖、侵袭和迁移,表明mir-506与鼻咽癌的发生发展密切相关。

关键词： mir-506 HOXA13 鼻咽癌细胞增殖迁移侵袭

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mir-506通过调控MCL-1抑制耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化的作用机制

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现代肿瘤医学 2021年第2期29卷 190-195页

作者：钟有清周向东李琪覃英娇海南医学院第一附属医院呼吸内科海南海口570102 海南医学院急救与创伤研究教育部重点实验室海南海口571199

目的:探究mir-506通过调控MCL-1对耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)及侵袭转移的影响和作用机制。方法:收集2017年12月至2018年12月我院肿瘤科收治的经PET-CT结合组织病理活检... 详细信息

目的:探究mir-506通过调控MCL-1对耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)及侵袭转移的影响和作用机制。方法:收集2017年12月至2018年12月我院肿瘤科收治的经PET-CT结合组织病理活检及药敏试验确诊为耐阿立替尼的74例非小细胞肺癌患者的癌及癌旁组织以及人非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,分别采用细胞转染、免疫组化染色(IHC)、qRT-PCR和Western Blot法检测上述临床组织和细胞样本中mir-506、MCL-1、BAX/Bcl-2凋亡信号途径及EMT标志蛋白表达水平;此外,采用Transwell细胞实验观察mir-506过表达和MCL-1敲减对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:免疫组化(IHC)结果显示肺癌患者癌组织中浸润性坏死性病理损伤较癌旁组织明显加重,且癌组织中MCL-1的阳性表达率为94.64%,明显高于癌旁组织的23.27%(Pmir-506、BAX和E-cadherin的表达明显低于癌旁组织,而MCL-1、Bcl-2和N-cadherin的表达显著高于癌旁组织(Pmir-506过表达和MCL-1敲减能够明显上调BAX和E-cadherin的表达,同时抑制Bcl-2和N-cadherin的表达(Pmir-506过表达和MCL-1敲减均能显著抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力(Pmir-506可能通过抑制BAX/Bcl-2/MCL-1凋亡途径发挥抑制耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞EMT及诱导细胞凋亡作用,有望为临床抗肺癌转移及凋亡抑制靶向治疗提供新分子和靶点。

关键词： mir-506 BAX/Bcl-2/MCL-1凋亡途径非小细胞肺癌上皮间质转化(EMT) 机制研究

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mir-506和mir-542-3p在恶变的支气管上皮细胞中的功能

miR-506和miR-542-3p在恶变的支气管上皮细胞中的功能

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作者：赵垚广州医学院

学位级别：硕士

背景与目的微小RNA(microRNA,mirNA)是一类约含203个碱基、内源性非编码小分子RNA。研究表明,mirNA可通过与其靶基因信使RNA(mRNA)的3′端非编码区(3′UTR)互补配对,降解靶基因mRNA或者抑制其翻译,从而负向调控靶基因的表达,参与调节... 详细信息

背景与目的微小RNA(microRNA,mirNA)是一类约含203个碱基、内源性非编码小分子RNA。研究表明,mirNA可通过与其靶基因信使RNA(mRNA)的3′端非编码区(3′UTR)互补配对,降解靶基因mRNA或者抑制其翻译,从而负向调控靶基因的表达,参与调节细胞分化、增殖、周期和凋亡等生命进程。大量研究表明,mirNA的异常表达在肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。肺癌位居全球居民癌症死因的首位,烟草暴露是其主要环境危险因素,约90%的肺癌发生与吸烟相关。吸烟过程可产生60多种致癌物质,其中苯并[a]芘(benzo(a)pyrene,B[a]P)是最主要的致癌物之一,是多环芳(香)烃(polycyclic aromatic hydrocarbon ,PAH)家族的典型代表。B[a]P体内代谢活化后其最主要的代谢终产物反式-7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(anti-benzo(a)pyrene-7,8-diol-9,10-epoxide,anti-BPDE)具有强烈的致癌作用,但其致癌机制尚不完全明了。前期研究显示,在anti-BPDE诱导的恶性转化细胞中,存在多个肿瘤相关基因和mirNA异常表达的现象,其中,癌基因Ras基因家族(H-Ras、K-Ras、N-Ras)中的N-Ras基因在anti-BPDE诱导的恶性转化细胞中表达水平改变最大,其异常高表达在anti-BPDE诱导细胞恶性转化过程中发挥重要作用。本课题组前期对anti-BPDE诱导细胞癌变过程中部分高表达的mirNA做了初步研究,在其功能和化学致癌作用方面有了初步进展,但表达水平下调的mirNA尚缺乏研究。已有的研究表明,mirNA能通过靶向作用于癌基因或抑癌基因而调控肿瘤的发生发展,而高表达和低表达的mirNA生物学功能也极为不同。为深入研究异常低表达的mirNA在恶变支气管上皮细胞中的功能,经生物信息学预测,选则了可能以N-ras为靶基因的低表达mir-506和mir-542-3p作为研究对象探讨其功能。本研究拟利用anti-BPDE诱导的恶性转化细胞模型,通过瞬时转染处理模型细胞,上调mir-506和mir-542-3p成熟体表达水平,检测其对N-ras基因的调控作用和对恶变细胞生物学特性的影响,揭示mir-506和mir-542-3p在恶变的支气管上皮细胞中的功能。方法 1.生物信息学预测利用TargetScan、miranda、mirnet、RNA22和RNAhybrid等mirNA靶基因预测软件和网站,预测可能作用于N-Ras基因3’端非翻译区(3’UTR)的mirNA。 2. mirNA模拟物瞬时转染利用脂质体Lipofectamine-2000将mirNA的模拟物导入16HBE-T细胞,转染步骤按说明书进行。转染5.5h后荧光显微镜下观察带有荧光标记的mirNA非特异序列模拟物阴性对照组的转染效率。 3. mirNA和N-Ras表达水平的检测用TaqMan探针法和SYBR Green染料法分别对mirNA和N-Ras mRNA进行qRT-PCR定量检测。利用Western blot检测N-Ras基因在蛋白水平的表达改变。 4.细胞活力实验以3×103个/孔的细胞密度接种96孔板,隔天分组进行处理。转染24h和48h后分别用CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖能力。检测步骤按试剂盒说明书执行。 5.细胞周期实验细胞接种后无血清培养24h使细胞周期同步化,然后转染mirNA模拟物,48h后收集细胞进行检测,用PI染色,流式细胞仪检测细胞周期。 6.凋亡实验转染处理48h后,用0.25%不含EDTA的胰酶消化液收获细胞,用Annexin V-FITC试剂盒和流式细胞仪检测细胞凋亡率。 7.细胞划痕实验细胞转染24h后,接种到6孔板。待其长至完全汇合,用吸头在平板上进行划线。冲洗干净脱落的细胞,37℃无血清培养24 h后,显微镜下拍照。 8.软琼脂实验每孔加2 ml 0.35%低熔点琼脂糖细胞混合液(1000个cell/孔)于已铺好含2ml 0.6%底层琼脂的6孔板里,放置培养箱中培养2周后,计数大于50个细胞的克隆。 9.裸鼠试验转染24 h后,胰酶消化收获细胞,用PBS洗涤后重悬,各组细胞悬液调整为统一密度,取150μl约含4×106个细胞的PBS细胞悬液注射于4周龄的BALB/c裸鼠腹股沟皮下。成瘤后每五天测量肿瘤体积,20天后处死,取出肿瘤称重。 10.统计分析采用SPSS 11.5统计软件进行统计分析。数据以x±s表示,所有试验数据均至少3次重复。两组间比较用双侧Student’s t-test;3组以上的比较采用单因素方差分析,所有检验均以双侧P﹤0.05为差异有统计学意义。结果 1.生物信息学分析经预测,mir-506和mir-54

关键词：反式二羟环氧苯并芘人支气管上皮细胞细胞恶性转化 microRNA mir-506 mir-542-3p N-Ras基因

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mir-506靶向结合UHRF1经KISS1/PI3K/AKT信号轴抑制结直肠癌细胞转移的研究

MiR-506靶向结合UHRF1经KISS1/PI3K/AKT信号轴抑制结直肠癌细胞转...

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作者：林易霖福建医科大学

学位级别：硕士

目的研究mir-506靶向结合UHRF1经KISS1/PI3K/AKT信号轴抑制结直肠癌细胞的增殖,迁移和侵袭能力。方法1.免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR检测UHRF1 mRNA和蛋白在结直肠癌中的表达水平;分析UHRF1蛋白和KISS1蛋白相关性。2.结直肠癌细... 详细信息

目的研究mir-506靶向结合UHRF1经KISS1/PI3K/AKT信号轴抑制结直肠癌细胞的增殖,迁移和侵袭能力。方法1.免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR检测UHRF1 mRNA和蛋白在结直肠癌中的表达水平;分析UHRF1蛋白和KISS1蛋白相关性。2.结直肠癌细胞株（HCT116、LoVo、HT29、SW480）筛选出UHRF1高表达细胞株（HCT116）和低表达细胞株（SW480）。构建UHRF1敲低慢病毒和过表达慢病毒,分别感染HCT116和SW480细胞株。实时荧光定量PCR和蛋白印迹实验验证构建的稳转株。3.实时荧光定量PCR检测UHRF1过表达株和敲低细胞株中KISS1mRNA的表达水平;BSP法检测各组细胞中KISS1基因的甲基化程度。蛋白印迹实验检测KISS1,PI3K,p-PI3K,AKT,p-AKT,NF-κB,MMP9蛋白;EdU实验检测各组细胞的增殖情况;划痕实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell侵袭实验检测各组细胞的侵袭情况。***1过表达慢病毒转染UHRF1过表达组和PI3K过表达慢病毒转染UHRF1敲低组,继续检测各组细胞KISS1,PI3K,p-PI3K,AKT,p-AKT,NF-κB,MMP9蛋白以及各组细胞的增殖,迁移和侵袭能力。5.生物信息学预测可能与UHRF1靶向结合的mirNA。从四株结直肠癌细胞株中筛选出该mirNA高表达和低表达细胞株,在高表达细胞株中感染mirNA敲低慢病毒,低表达细胞株中感染mirNA过表达慢病毒;采用实时荧光定量PCR检测是否构建成功。6.蛋白印迹实验检测各组细胞中UHRF1,KISS1,PI3K/AKT信号轴相关蛋白的表达水平;EdU实验检测各组细胞的增殖情况;划痕实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell侵袭实验检测各组细胞的侵袭情况。***1过表达慢病毒转染mirNA过表达组和KISS1过表达慢病毒转染mirNA敲低组,继续检测各组细胞UHRF1,KISS1,I3K/AKT信号轴相关蛋白的表达水平以及各组细胞的增殖,迁移和侵袭能力。8.通过裸鼠皮下成瘤实验进一步体内验证该mirNA是否靶向结合UHRF1经KISS1/PI3K/AKT信号轴抑制结直肠癌的增殖和侵袭能力。结果***1 mRNA和蛋白在结直肠癌中的表达水平显著高于癌旁正常组织（P＜0.0001）,免疫组化实验表明在结直肠癌组织中UHRF1和KISS1蛋白表达呈负相关（P=0.0003）2.实时荧光定量PCR实验和蛋白印迹实验结果显示与对照组相比,UHRF1过表达组mRNA和蛋白显著升高（P＜0.0001）;UHRF1敲低组mRNA和蛋白较对照组显著降低（P＜0.0001）证实构建成功。3.实时荧光定量PCR实验证实与阴性对照组相比,过表达UHRF1组显著抑制KISS1 mRNA表达（P＜0.0001）;与阴性对照组相比,敲低UHRF1表达显著促进KISS1 mRNA的表达（P＜0.0001）。BSP实验检测证实过表达UHRF1增加KISS1基因甲基化（P＜0.0001）;抑制UHRF1的表达,KISS1基因甲基化程度显著下降（P＜0.0001）。蛋白印迹实验证实UHRF1通过抑制KISS1蛋白的表达激活PI3K/AKT信号通路;EdU实验、细胞迁移实验和Transwell侵袭实验证实UHRF1通过KISS1/PI3K/AKT信号轴促进结直肠癌细胞的增殖,迁移和侵袭。4.生物信息学分析mir-506可能与UHRF1有潜在的结合位点。荧光素酶报告基因实验证实mir-506靶向结合UHRF1。实时荧光定量PCR实验发现四株结直肠癌细胞中,mir-506在HCT116细胞中表达最低,在SW480细胞中表达最高（P＜0.0001）。在HCT116细胞和SW480细胞中分别感染mir-506过表达和敲低慢病毒,实时荧光定量PCR结果证实mir-506过表达和mir-506敲低稳转株构建成功;蛋白印迹实验证实mir-506靶向UHRF1激活KISS1蛋白的表达阻遏PI3K/AKT信号通路。***实验,细胞迁移实验,Transwell侵袭实验证实mir-506靶向UHRF1经KISS1/PI3K/AKT信号轴抑制结直肠癌细胞的增殖,迁移和侵袭。6.裸鼠皮下成瘤实验进一步证实mir-506靶向UHRF1通过KISS1/PI3K/AKT信号轴抑制结直肠癌的增殖侵袭能力。结论mir-506靶向结合UHRF1经KISS1/PI3K/AKT信号轴抑制结直肠癌细胞的增殖,迁移和侵袭。

关键词：结直肠癌 mir-506 UHRF1 增殖侵袭

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mir-506在胰腺导管腺癌与胰腺正常组织中的表达研究

miR-506在胰腺导管腺癌与胰腺正常组织中的表达研究

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作者：张靖宜天津医科大学

学位级别：硕士

目的:胰腺导管腺癌(Pancreatic Ductal Adenocarcinoma,PDAC)是一种高致死率的恶性肿瘤,近年来发病率和死亡率有上升的趋势。微小RNA(microRNA,mirNA)是一类短链、非编码RNA,在多种真核细胞中于转录后水平调节靶基因的表达。MicroRNA-50... 详细信息

目的:胰腺导管腺癌(Pancreatic Ductal Adenocarcinoma,PDAC)是一种高致死率的恶性肿瘤,近年来发病率和死亡率有上升的趋势。微小RNA(microRNA,mirNA)是一类短链、非编码RNA,在多种真核细胞中于转录后水平调节靶基因的表达。MicroRNA-506(mir-506)是存在于X染色体上的一种MicroRNA,通过对靶基因转录后的调控影响细胞增殖、凋亡、衰老、细胞周期、细胞分化、上皮-间质转化、血管生成、侵袭和转移等多种生命过程。关于mir-506在胰腺组织和PDAC中的表达及意义的文献较少,且相关文献均将胰腺导管、腺泡和胰岛组织作为一个整体与PDAC进行比较。由于大部分PDAC起源于导管上皮,比较mir-506在PDAC细胞和正常胰腺导管上皮中的表达水平以评估mir-506在PDAC中所起的作用将更为准确。因此,本研究拟通过两种方法检测石蜡包埋PDAC组织中mir-506的表达,并分析其与临床病理参数之间的关系,提示mir-506在PDAC发展中的作用;另外,分别检测mir-506在胰腺导管、胰腺腺泡/胰岛中的表达水平,通过比较正常胰腺组织各成分之间及其与PDAC之间的差异,提示mir-506在PDAC发生中的表达变化。方法:1、利用组织芯片(tissue microarray,TMA)和mirNA原位杂交(In Situ Hybridization,ISH)技术,结合形态学,检测mir-506在PDAC、正常胰腺导管以及腺泡/胰岛中的表达水平,并在PDAC中分析mir-506表达与临床病理参数之间的关系。2、利用激光捕获显微切割技术(Laser Capture Microdissection,LCM)和手工切割的方法,从石蜡包埋组织中分离正常的胰腺导管、腺泡/胰岛和PDAC,分别提取总RNA,逆转录后应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR),检测mir-506的表达情况,并分析PDAC中mir-506表达与临床病理参数之间的关系。3、比较mirNA ISH与qRT-PCR检测结果,明确mir-506在胰腺正常组织及PDAC中的表达特点,并分析两种方法在检测石蜡包埋组织中mirNA表达水平的优缺点。结果:1、在110例PDAC中完成了TMA基础上的mir-506 ISH,结果显示,mir-506在72例(65.5%)和38例(34.5%)PDAC中分别呈高表达和低表达。并且,在T3和T4期、低分化和发生淋巴结转移的PDAC中mir-506的表达水平分别明显低于T2期(P=0.004)、高-中分化(P=0.023)和未发生淋巴结转移(P=0.033)的PDAC,而年龄(P=0.139)、性别(P=0.127)、肿瘤原发部位(P=0.213)、肿瘤大小(P=0.638)、血管侵犯(P=0.595)及临床分期(P=0.063)与mir-506的表达无统计学差异。在100例PDAC石蜡包埋组织中完成了mir-506的qRT-PCR检测。对100例PDAC临床病理参数进行统计分析,结果显示肿瘤直径>4cm、T3和T4期的PDAC中mir-506的表达水平分别明显低于肿瘤直径≤4cm(P=0.04)、T2期(P=0.023)的PDAC,而年龄(P=0.229)、性别(P=0.417)、部位(P=0.21)、分化程度(P=0.305)、血管侵犯(P=0.295)、淋巴结转移(P=0.401)以及临床分期(P=0.389)与mir-506的表达无统计学差异。2、对TMA上的87例正常胰腺组织进行了mir-506 ISH检测,结果显示,mir-506在9.6%(7/73)和90.4%(66/73)的正常胰腺导管上皮中呈高表达和低表达,在68.3%(45/66)和32.7%(21/66)的正常胰腺组织的腺泡/胰岛中呈高表达和低表达;与第一部分在PDAC中的检测结果相比,mir-506在PDAC中的表达水平高于胰腺的正常导管(Pmir-506的表达分别高于和低于正常胰腺导管上皮,在6%(6/100)和94%(94/100)的PDAC中mir-506的表达分别高于和低于正常胰腺组织的腺泡/胰岛。对10例配对的PDAC及其正常胰腺组织进一步分析,结果显示,与配对的正常胰腺导管和胰腺腺泡/胰岛相比较,mir-506在PDAC中均呈低表达(Pmir-506 I

关键词： mir-506 胰腺导管腺癌导管上皮抑癌基因

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mir-506抑制胃癌转移的机制研究

miR-506抑制胃癌转移的机制研究

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作者：王莹昆明医科大学

学位级别：硕士

目的：侵袭和转移是恶性肿瘤重要的生物学特征,上皮一间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是肿瘤转移的重要机制之一。新近研究表明,microRNA在EMT进程中起关键调控作用。本研究拟证实mir-506介导Ets-1/MMP9抑制胃癌细... 详细信息

目的：侵袭和转移是恶性肿瘤重要的生物学特征,上皮一间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是肿瘤转移的重要机制之一。新近研究表明,microRNA在EMT进程中起关键调控作用。本研究拟证实mir-506介导Ets-1/MMP9抑制胃癌细胞发生EMT,进而抑制侵袭和转移的可能作用机制,为胃癌新靶点治疗提供理论依据。方法： ●RT-PCR检测正常胃组织和不同分期胃癌组织mir-506的表达,同时检测BGC-823、AGS、HGC-27、KatoⅢ、SGC-7901、MKN45、MGC-803七株胃癌细胞mir-506的表达情况;●将mir-506inhibitor转染至BGC-823细胞中,使其抑制mir-506,mir-506mimics转染至SGC-7901细胞中,使其过表达mir-506,无关序列作为阴性对照,并以此为研究对象,Northern blot检测各组mir-506表达水平;●transwell侵袭试验、划痕实验和3D细胞培养研究mir-506与侵袭迁移的生物学行为的关系;●Westernblotting检测抑制和过表达mir-506后,EMT相关蛋白的变化;●利用Targetscan在线数据预测mir-506的靶基因;●利用荧光素酶报告基因系统检测Ets-1mRNA的3’UTR区和mir-506结合活性： ●Westernblotting检测抑制和过表达mir-506后,Ets-1、MMP9蛋白的表达。结果： ●PCR结果显示：与正常胃组织相比,mir-506在胃癌组织中表达明显降低。随着分期的增加,mir-506表达逐步降低;mir-506在胃癌细胞系中均有表达,且表达均减少,其中BGC-823细胞表达相对较高,SGC-7901细胞表达相对较低;●在BGC-823细胞中,转染mir-506inhibitor后,mir-506表达显著降低,在SGC-7901细胞中,转染mir-506mimics后,mir-506表达明显增加;●transwell侵袭试验、划痕实验和3D细胞培养结果提示,mir-506抑制胃癌侵袭和转移;●Westernblotting结果显示mir-506能够抑制EMT;●靶基因预测软件发现转录因子Ets-1mRNA的3’UTR区存在mir-506的结合位点;●荧光素酶报道基因系统结果显示mir-506与Ets-1mRNA3’UTR直接结合并降解Ets-1mRNA;●mir-506能够调控Ets-1和MMP-9蛋白表达。结论： ●mir-506通过介导Ets-1调节MMP9表达;●mir-506能够抑制EMT,进而抑制胃癌细胞侵袭与转移。

关键词：胃癌 mir-506 Ets-1 MMP9EMT 转移

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