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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2024年第4期52卷 1-9页

作者：张梦帆路建卫扎老赵雪梁春年中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃省牦牛繁育工程重点实验室甘肃兰州730050 农业农村部青藏高原畜禽遗传育种重点实验室甘肃兰州730050 合作市佐盖多玛乡畜牧站甘肃合作747000 合作市农畜产品质量安全检测检验中心甘肃合作747000

【目的】研究牦牛myl3基因的结构和表达特征,探究其生物学功能及影响牦牛肌肉生长发育的机制。【方法】以美仁牦牛cDNA为模板,PCR扩增myl3基因编码区序列(CDS),利用MEGA11软件构建系统进化树,利用生物信息学软件对其编码蛋白进行分析。... 详细信息

【目的】研究牦牛myl3基因的结构和表达特征,探究其生物学功能及影响牦牛肌肉生长发育的机制。【方法】以美仁牦牛cDNA为模板,PCR扩增myl3基因编码区序列(CDS),利用MEGA11软件构建系统进化树,利用生物信息学软件对其编码蛋白进行分析。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测myl3基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏(参照)、睾丸、肌肉和脂肪组织中的相对表达量。【结果】牦牛myl3基因CDS区长600 bp,共编码199个氨基酸,存在1个碱基突变位点,位于第165位(A>T)。系统进化分析结果显示,牦牛与普通牛的亲缘关系最近,与单峰驼的亲缘关系最远。生物信息学分析结果显示,牦牛myl3蛋白为不稳定的亲水性蛋白,无信号肽,不存在跨膜结构,主要存在于细胞质内,有8个磷酸化位点和2个N-糖基化位点,蛋白的二级结构以α-螺旋为主,主要与调控肌肉生长发育的相关蛋白相互作用。RT-qPCR结果表明,myl3基因在心脏中的表达量最高,极显著高于其他组织;肌肉中次之,与除心脏外的其他组织存在极显著差异。【结论】myl3基因可能与牦牛心脏发育有关,对肌肉的生长发育和肉质有一定影响。

关键词：牦牛 myl3基因肌肉生长发育肌肉品质

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北京鸭myl3基因的生物信息学分析及其原核表达

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中国畜牧杂志 2023年第2期59卷 155-163页

作者：李茹马心如肖健刘语嫣胡志刚刘小林西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

肌球蛋白轻链3(Myosin Light Chain 3,myl3)属于myls家族,能够维持细胞结构及功能、保持肌球蛋白构型。本研究扩增了北京鸭胸肌组织myl3基因的CDS区序列,在此基础上使用生物信息学分析网站进行序列分析,下一步构建myl3原核表达载体,将... 详细信息

肌球蛋白轻链3(Myosin Light Chain 3,myl3)属于myls家族,能够维持细胞结构及功能、保持肌球蛋白构型。本研究扩增了北京鸭胸肌组织myl3基因的CDS区序列,在此基础上使用生物信息学分析网站进行序列分析,下一步构建myl3原核表达载体,将重组质粒导入*** BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,最后使用SDS-PAGE凝胶电泳技术检测myl3原核表达蛋白。结果表明:鸭myl3基因开放阅读框大小为582 bp,编码193个氨基酸,日本鹌鹑、雉鸡和鸡的氨基酸序列与鸭亲缘关系最近,其次是鸵鸟,最后是人和猪。myl3蛋白的相对分子质量为21800.01u,等电点为5.13,不稳定性系数为42.5,是一种不稳定且呈酸性的蛋白,总体平均亲水系数高达-0.727,不属于疏水性蛋白。另外,此蛋白是细胞质蛋白,无信号肽和跨膜结构,存在14个磷酸位点和2个N-糖基化位点;该蛋白具有的二级结构中比例最高的是α-螺旋,最低的是β-转角。本实验完成了大小为664 bp的myl3基因片段的扩增,pET-32a(+)-myl3重组质粒通过BamH I和Sac I双酶切后,分别形成了664 bp和5 894 bp两条带,诱导表达出了大小约21 ku的重组蛋白,且该蛋白具有可溶性。本实验克隆了北京鸭myl3基因,并进行了生物信息学分析和原核表达,为进一步深入研究myl3基因在北京鸭肌肉生长发育过程中的作用及对相关分子机制的调控提供了理论基础,为提高北京鸭肌肉发育水平提供参考依据。

关键词：北京鸭 myl3基因生物信息学分析原核表达功能

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γ-内脏平滑肌型actin基因的可变剪接对湖羊肌肉发育和肉质性状的调控作用

γ-内脏平滑肌型actin基因的可变剪接对湖羊肌肉发育和肉质性状的...

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作者：刘凤祥浙江师范大学

学位级别：硕士

湖羊是我国特有的羔皮用绵羊品种,具有性成熟早,繁殖率强,肉质细嫩的优点。但与杜泊羊等专门化肉羊品种相比,湖羊的肉用性能和屠宰率较低。本论文针对雄性初生及六月龄湖羊与杜泊羊×湖羊杂交F1代羊的肌纤维特性、myl3与ACTG2基因的可... 详细信息

湖羊是我国特有的羔皮用绵羊品种,具有性成熟早,繁殖率强,肉质细嫩的优点。但与杜泊羊等专门化肉羊品种相比,湖羊的肉用性能和屠宰率较低。本论文针对雄性初生及六月龄湖羊与杜泊羊×湖羊杂交F1代羊的肌纤维特性、myl3与ACTG2基因的可变剪接在不同肌肉组织的表达情况进行研究,探究湖羊骨骼肌生长发育的分子机理,探寻myl3和ACTG2基因与肌纤维生长和脂肪积累的关系,这些结果可为湖羊产肉性状的分子改良提供新的思路,也为肉用湖羊新品系的选育奠定理论基础。本试验屠宰了 12头雄性初生及六月龄纯种湖羊和杜泊×湖羊杂交F1代羊(刚出生、6月龄各半),采集了 BFM、LDM、MGM、GM、VLM、SOL和SSC7种肌肉组织,(1)利用石蜡切片、HE染色测定了不同肌肉组织的肌纤维直径和长度,利用油红O染色显示肌肉样品的脂肪分布;(2)分析了雄性纯种湖羊、杜泊×湖羊杂交羊7种肌肉组织内myl3、ACTG2及其5’ UTR可变剪接的表达情况;(3)构建ACTG25’UTR不同剪接方式的双荧光素酶报告基因,转染猪肾细胞(PK-15)和鸡成纤维细胞(DF-1),测定了荧光素酶活性和ACTG2 5’UTR不同剪接方式的表达情况。研究结果如下:(1)除雄性湖羊SOL肌纤维直径和长度在初生羊和6月龄羊间不存在显著差异外,雄性湖羊和杜泊×湖羊杂交F1代羊初生羊的BFM、LDM、MGM、GM、VLM和SSC肌纤维直径和长度均显著或极显著小于6月龄羊(P3bp、116bp)的双荧光素酶报告基因pLUC-pLUC-83、pLUC-116载体,猪肾细胞(PK-15)和鸡成纤维细胞(DF-1)转染结果显示,pLUC-83和pLUC-116启动子活性最强,可显著提高ACTG2 83bp的5’UTR序列的载体的表达量(P3)初生纯种湖羊SOL中myl3的表达量极显著高于LDM、SSC(Pmyl3的表达量显著高于LDM、SSC(P基因5’UTR长度为83bp的剪接表达量显著高于LDM(P基因表达量所占的比例显著高于BFM、GM、VLM、SOL(Pmyl3基因的表达量极显著高于其他6种组织(Pmyl中的表达量显著高于SSC(P基因的表达量显著高于其它5种组织(P3bp的剪接的表达量显著高于LDM MGM、SSC样品(P3bp的剪接的表达量极显著高于BFM、MGM(Pmyl3基因的表达量显著高于LDM、VLM、SSC(P基因的表达量极显著高于BFM(P3bp 的剪接形式的表达量极显著高于其它6种组织(Pmyl3、ACTG2基因及ACTG2 5’ UTR长度为83bp的剪接形式对湖羊的肌肉生长发育及肉质都有一定的影响。

关键词：湖羊杜泊羊×湖羊杂交羊 myl3基因 ACTG2基因肌肉发育肉质

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