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非小细胞肺癌A549细胞基因组不稳定性和myc基因突变在吉西他滨耐药中的作用

吉林大学学报（医学版） 2024年第2期50卷 355-363页

作者：陈宗军陈亚红黄丽云梁紫盈海南医学院第二附属医院药学部海南海口570311 海南医学院第二附属医院呼吸科海南海口570311 海南医学院第一附属医院药学部海南海口570216 海口市第四人民医院体检科海南海口571100

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞基因不稳定性和myc基因突变在吉西他滨耐药中的作用,并阐明其作用机制。方法:采用2mg·L^(-1)吉西他滨持续作用A549细胞(A549组),构建耐药细胞株A549R(A549R组),并将si-NC和si-myc转染至A549R细胞... 详细信息

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞基因不稳定性和myc基因突变在吉西他滨耐药中的作用,并阐明其作用机制。方法:采用2mg·L^(-1)吉西他滨持续作用A549细胞(A549组),构建耐药细胞株A549R(A549R组),并将si-NC和si-myc转染至A549R细胞,作为si-NC A549R组和si-myc A549R组。采用CCK-8法检测不同浓度(0、1、2、4、8、16和32 mg·L^(-1))吉西他滨对各组细胞的抑制率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。转录组测序技术(RNA-seq)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析A549组及A549R组细胞中的差异表达基因,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测A549组和A549R组细胞中基因组不稳定性相关基因错配修复基因2(MSH2)、错配修复基因6(MSH6)和DNA修复蛋白RAD50(RAD50)的表达水平,Western blotting法检测基因组不稳定性相关蛋白myc原癌基因(myc)和磷酸化组蛋白(γH2AX)的表达水平,染色质免疫共沉淀(ChIP)法检测RNA polⅡ和γH2AX在myc基因上的富集程度,PCR法扩增并检测A549R细胞myc基因突变情况。结果:与A549组比较,2、4、8、16和32 mg·L^(-1)吉西他滨作用后A549R组细胞抑制率降低(Pmyc表达水平明显升高(Pmyc和γH2AX蛋白表达水平升高(Pmyc转录起始位点及exon 2上富集程度增加,myc exon 2上存在G254A基因突变。与si-NC A549R组比较,si-myc A549R组细胞中myc mRNA和蛋白表达水平降低(Pmyc A549R组细胞抑制率升高(Pmyc基因发生突变和扩增,而敲减myc可以恢复A549R细胞对吉西他滨的敏感性。

关键词：吉西他滨癌,非小细胞肺基因组不稳定性 myc扩增 myc突变

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