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Gambogic acid induces apoptosis and inhibits colorectal tumor growth via mitochondrial pathways

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World Journal of Gastroenterology 2015年第20期21卷 6194-6205页

作者： Guang-Ming Huang Yu Sun Xin Ge Xin Wan Chun-Bo Li Department of General Surgery Heilongjiang Provincial Hospital

AIM: To investigate the effect of gambogic acid(GA) on apoptosis in the HT-29 human colon cancer cell line. METHODS: H-29 cells were used for in vitro experiments in this study. Relative cell viability was assessed using mtt assays. Cell apoptosis was detected by terminal deoxynucleotidyl transferase d UTP nick end labeling and Hoechst 33342 staining, and quantified by flow cytometry. Cellular ultrastructure was observed by transmission electron microscopy. Real-time PCR and Western blot analyses were used to evaluate gene and protein expression levels. For in vivo experiments, BALB/c nude mice received subcutaneous injections of HT-29 cells in the right armpit. When well-established xenografts were palpable with a tumor size of 75 mm3, mice were randomly assigned to a vehicle(negative) control, positive control or GA treatment group(n = 6 each). The animals in the treatment group received one of three dosages of GA(in saline; 5, 10 or 20 mg/kg) via the caudal vein twice weekly, whereas animals in the negative and positive control groups were given equal volumes of 0.9% saline or 10 mg/kg docetaxel, respectively, via the caudal vein once weekly. RESULTS: The cell viability assay showed that GA inhibited proliferation of HT-29 cells in a dose- and time-dependent manner after treatment with GA(0.00, 0.31, 0.62, 1.25, 2.50, 5.00 or 10.00 μmol/L) for 24, 48 or 72 h. After 48 h, the percentage of apoptotic cells in cells treated with 0.00, 1.25, 2.50 and 5.00 μmol/L GA was 1.4% ± 0.3%, 9.8% ± 1.2%, 25.7% ± 3.3% and 49.3% ± 5.8%, respectively. Ultrastructural analysis of HT-29 cells treated for 48 h with 2.5μmol/L GA revealed apoptotic bodies and condensed and fragmented nuclei. Levels of caspase-8,-9 and-3 m RNAs were significantly increased after treatment with GA(1.25, 2.50 or 5.00 μmol/L) for 48 h(P < 0.05 for all). Protein levels of apoptosis-related factors Fas, Fas L, FADD, cytochrome c, and Apaf-1 were increased in GA-treated cells, whereas levels of pro-caspase-8,-9 and-3 were significantly decreased(P < 0.05

关键词： Apoptosis Death receptor pathway Flowcytometry Gambogic acid Hoechst 33342 HT-29 cells Mitochondrial pathway mtt Terminal deoxynucleotidyltransferase dUTP nick end labeling

β-淀粉样蛋白25-35片段诱导PC12细胞凋亡

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复旦学报（医学版） 2004年第6期31卷 618-621页

作者：罗蔓谢瑞满复旦大学附属中山医院老年病科上海200032

目的　探讨 β -淀粉样蛋白 2 5 - 35片段 (Aβ2 5-3 5)对体外培养的PC12细胞的毒性作用机制。方法　用四甲基偶氮唑蓝 (mtt)代谢率检测 ,光镜吖啶橙荧光染色术 ,透射电镜以及流式细胞仪技术研究Aβ2 5-3 5损伤PC12细胞的途径。结果　用... 详细信息

目的　探讨 β -淀粉样蛋白 2 5 - 35片段 (Aβ2 5-3 5)对体外培养的PC12细胞的毒性作用机制。方法　用四甲基偶氮唑蓝 (mtt)代谢率检测 ,光镜吖啶橙荧光染色术 ,透射电镜以及流式细胞仪技术研究Aβ2 5-3 5损伤PC12细胞的途径。结果　用Aβ2 5-3 5处理PC12细胞 2 4h ,Aβ2 5-3 5剂量依赖性地引起PC12细胞的mtt代谢率减少 ,荧光染色及电镜观察发现经Aβ2 5-3 5处理的PC12细胞表现出凋亡细胞的特征 ,流式细胞仪检测发现 ,对照组 2 0 μmol/L及 5 0 μmol/L的Aβ2 5-3 5组PC12细胞的凋亡率分别为 0 .0 8%± 0 .0 1% ,14 .8%± 1.13% ,2 5 .9%± 2 .34%。

关键词： PCI2细胞 Aβ25-35 β-淀粉样蛋白 PC12细胞凋亡 mtt 诱导代谢率片段发现

亚纳秒脉冲电场联合温度杀伤人宫颈癌细胞的实验研究

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中国生物医学工程学报 2020年第3期39卷 335-341页

作者：郭飞张琳刘欣张玉重庆邮电大学重庆市复杂系统与仿生控制重点实验室重庆400065 重庆市中医院妇产科重庆400021

为研究亚纳秒脉冲联合温度对人宫颈癌(He La)细胞的杀伤效应,将脉冲电场参数组合(电场强度25、50、100 k V/cm,半峰值脉宽1 ns,脉冲个数分别为4000、1000、250,频率5 Hz),作用于处于不同温度(25℃、43℃、48℃)的He La细胞,利用mtt检测... 详细信息

为研究亚纳秒脉冲联合温度对人宫颈癌(He La)细胞的杀伤效应,将脉冲电场参数组合(电场强度25、50、100 k V/cm,半峰值脉宽1 ns,脉冲个数分别为4000、1000、250,频率5 Hz),作用于处于不同温度(25℃、43℃、48℃)的He La细胞,利用mtt检测亚纳秒脉冲对细胞的生长抑制情况,通过AO/EB染色和透射电镜观察细胞形态学变化,采用免疫细胞化学S-P法检测caspase-3蛋白表达活性。实验发现:当细胞悬液温度到达48℃后,随着时间推移细胞死亡率不断增加;采用亚纳秒脉冲电场(电场强度50 k V/cm,半峰值脉宽1 ns,脉冲个数1000,频率5 Hz)处理不同温度下He La细胞,细胞悬液温度达到43℃后,细胞死亡率达到18.07%±1.98%,细胞悬液温度达到48℃,细胞死亡率增至25.11%±6.05%;采用相同能量脉冲电场处理处于相同温度(48℃)的细胞悬液时,细胞死亡率与脉冲场强正相关,100 k V/cm电场作用下得到最高细胞死亡率为31.09%±5.03%,进一步的分子生物学检测结果显示He La细胞发生凋亡效应。适当场强的亚纳秒脉冲联合温度通过诱导细胞凋亡,进而杀死He La细胞。

关键词：亚纳秒脉冲 HeLa细胞 mtt 透射电镜细胞凋亡

溶剂及其体积分数对6种肺癌细胞的细胞毒作用

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中国药理学通报 2017年第4期33卷 506-511页

作者：董芳蕊臧诗蕾黎莉莉郭纪全臧林泉广东药科大学中药学院广东广州510006 广东省人民医院呼吸科广东广州510080 广东药科大学药学院广东广州510006

目的探索既能提高难溶性中药单体的溶解度,又对肿瘤细胞低毒或者无毒的有机溶剂及其体积分数窗口,阐明溶剂不同体积分数(volume fraction,VF)对模型化合物莪术醇药效作用的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝显色(mtt)法,研究二甲基亚砜(DMSO... 详细信息

目的探索既能提高难溶性中药单体的溶解度,又对肿瘤细胞低毒或者无毒的有机溶剂及其体积分数窗口,阐明溶剂不同体积分数(volume fraction,VF)对模型化合物莪术醇药效作用的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝显色(mtt)法,研究二甲基亚砜(DMSO)和乙醇两种有机溶剂对人恶性肿瘤细胞A549、NCI-H460、NCI-H1299、NCI-1650、LTEP-a2和SPC-A1等细胞活力的影响和毒性作用,并进一步研究用不同体积分数乙醇配制的莪术醇对A549和NCIH460的细胞毒作用及其差异性。结果在48 h内,当DMSO体积分数(DMSO volume fraction,DVF)≤0.008时对A549无细胞毒作用;DVF≤0.004时对NCI-H1650无细胞毒作用;DVF≤0.002时对NCI-H460无细胞毒作用;然而,另外3种细胞NCI-H1299、LTEP-a2和SPC-A1细胞则在DVF<0.001时即表现出一定的细胞毒性。在48 h内,当乙醇体积分数(ethanol volume fraction,EVF)≤0.004时对A549无细胞毒作用;EVF≤0.002时对NCI-H460和NCI-H1650无细胞毒作用;当EVF≤0.001时对NCI-H1299无细胞毒作用;对LTEP-a2和SPC-A1细胞则在EVF<0.001时即表现有一定毒性作用。当EVF低于0.01时乙醇对A549和NCI-H460无细胞毒作用,以其配制的莪术醇溶液对细胞活力的影响仅代表莪术醇的药效作用,由于EVF 0.01的乙醇比EVF0.001的乙醇具有更好的助溶作用,又具有细胞毒作用,两细胞株细胞活力差异极大,分别从93.84%和95.67%降至35.35%和36.41%。结论 A549、NCI-H1650可以首选DMSO作为溶剂,NCI-H1299可以首选乙醇作为溶剂,NCI-H460可选择其中任一溶剂,而LTEP-a2和SPC-A1则不宜以DMSO或者乙醇作为溶剂。

关键词： mtt 细胞毒性中药单体溶剂 DMSO 乙醇莪术醇

mtt法评价Ca2KNa（Po4）2陶瓷的体外细胞相容性

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功能材料 2007年第A5期38卷 1706-1708页

作者：牛金龙西北有色金属研究院陕西西安710016

羟基磷灰石（HAP，Ca10（Po4）6（OH）2）和磷酸三钙（3-TCP，β-Ca3（PO4）2）在化学成分上与骨组织中的无机盐（生物磷灰石）成分相似，而得到广泛的研究和应用。但HA在骨组织内很难被降解吸收，β-TCP在不承力的骨组织部位几乎不被... 详细信息

羟基磷灰石（HAP，Ca10（Po4）6（OH）2）和磷酸三钙（3-TCP，β-Ca3（PO4）2）在化学成分上与骨组织中的无机盐（生物磷灰石）成分相似，而得到广泛的研究和应用。但HA在骨组织内很难被降解吸收，β-TCP在不承力的骨组织部位几乎不被吸收。在β-TCP生物陶瓷的基础上，通过高温化学反应合成了化学式为Ca2KNa（PO4）2的可降解性磷酸钙陶瓷材料。采用体外细胞培养技术，以L929为评价细胞系，采用mtt法评价研究了Ca2KNa（PO4）2陶瓷材料的体外细胞相容性。研究发现，用细胞培养液浸提的Ca2KNa（PO4）2陶瓷颗粒的浸提液与L929细胞共培养2～6d，mtt法测定相对细胞存活率〉83％，说明Ca2KNa（PO4）2陶瓷材料的体外细胞毒性评级为1级，符合人体植入材料对细胞毒性的要求。

关键词：生物陶瓷磷酸碱钙细胞相容性 mtt

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阿魏酸脂质体的制备及其体外抗氧化活性评价

药学学报 2007年第10期42卷 1092-1096页

作者：秦晶陈大为崔侨乔明曦胡海洋赵秀丽王薇沈阳药科大学药学院沈阳药科大学中日医药研究所辽宁沈阳110016

采用醋酸钙梯度法制备阿魏酸脂质体,考察不同因素对包封率的影响。制备的脂质体包封率可达到(80.2±5.2)%,粒径约150 nm。空白脂质体和载药脂质体的zeta电位分别为(13.14±1.67)mV和(4.12±0.05)mV。冷冻蚀刻电镜观察结果为单室脂质体... 详细信息

采用醋酸钙梯度法制备阿魏酸脂质体,考察不同因素对包封率的影响。制备的脂质体包封率可达到(80.2±5.2)%,粒径约150 nm。空白脂质体和载药脂质体的zeta电位分别为(13.14±1.67)mV和(4.12±0.05)mV。冷冻蚀刻电镜观察结果为单室脂质体。建立了U937细胞株氧化损伤模型,采用mtt法、荧光显微镜及光学显微镜考察了细胞活度、线粒体膜电位及细胞的形态学变化,评价阿魏酸脂质体对U937细胞株氧化损伤的保护作用。结果表明,阿魏酸脂质体组体外抗氧化活性强于阿魏酸溶液。

关键词：脂质体阿魏酸醋酸钙梯度 mtt 线粒体膜电位

瓜蒌皮提取物对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制研究

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中国药理学通报 2015年第7期31卷 988-993页

作者：刘思妤谷彬卢新华王俊杰谭斌湘南学院基础医学部湖南郴州423000

目的探讨瓜蒌皮提取物(extractive pericarpium trichosanthes,EPT)对体外高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(HUVECs),观察不同浓度瓜蒌皮提取物干预高糖处理的HUVECs凋亡的变化。mtt法... 详细信息

目的探讨瓜蒌皮提取物(extractive pericarpium trichosanthes,EPT)对体外高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(HUVECs),观察不同浓度瓜蒌皮提取物干预高糖处理的HUVECs凋亡的变化。mtt法检测HUVECs的存活率、采用Hoechst染色法检测细胞凋亡、采用比色法测定细胞内Caspase-3的活性、Western blot法以及免疫荧光染色法检测核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的蛋白表达和p65核移位情况。结果 30 mmol·L-1葡萄糖处理内皮细胞48h能引起细胞活性明显降低,细胞凋亡率及caspase-3的活性明显增加,细胞中NF-κB蛋白表达升高及p65核移位增加。用瓜蒌皮提取物(12.5、25、50 mg·L-1)预处理细胞1 h,可以增加细胞活性;降低细胞凋亡率、caspase-3的活性及NF-κB蛋白表达,呈浓度依赖性,且对高糖诱导的p65核移位有抑制作用。结论瓜蒌皮提取物对体外高糖诱导的HUVECs凋亡有抑制作用,其作用机制与下调NF-κB表达和降低caspase-3活性有关。

关键词：瓜蒌皮提取物高糖内皮细胞凋亡 NF-κB Caspase-3 mtt

藏药小檗皮粗提物对人胃癌细胞株细胞活性及周期的影响

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西藏医药 2022年第2期43卷 139-141页

作者：刘章程桑旦旺姆袁瑞瑛乔蓓西藏自治区人民医院肿瘤科西藏大学医学院药学系西藏拉萨850000

胃癌是全球、我国及本区高发恶性肿瘤及常见恶性肿瘤死亡原因,是威胁全区人民健康、增加家庭和社会负担的主要恶性肿瘤,对其进行积极防治显得尤为必要与重要。当前胃癌的治疗药物种类较少,化疗、靶向及免疫药物毒副反应较重,有些种类不... 详细信息

胃癌是全球、我国及本区高发恶性肿瘤及常见恶性肿瘤死亡原因,是威胁全区人民健康、增加家庭和社会负担的主要恶性肿瘤,对其进行积极防治显得尤为必要与重要。当前胃癌的治疗药物种类较少,化疗、靶向及免疫药物毒副反应较重,有些种类不易获及且花费昂贵。藏药在本地区历史悠久,故本研究拟尝试从传统藏药中发掘抗胃癌肿瘤活性藏药,为胃癌的诊治提供新的思路和途径。通过体外药效学实验数据信息,探讨小檗皮治疗胃癌的细胞机制,为胃癌的临床治疗提供新的思路,为传统民族药的现代化研究提供理论依据。

关键词：胃癌细胞株藏药小檗皮 mtt 法流式细胞术

壳聚糖基温敏水凝胶对牙周膜成纤维细胞相容性的影响

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上海口腔医学 2012年第6期21卷 632-636页

作者：吉秋霞于新波徐全臣武宏青岛大学医学院附属医院口腔科山东青岛266003

目的:体外评价壳聚糖季铵盐/甘油磷酸(CS-HTCC/GP)温敏水凝胶的细胞相容性。方法:体外培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLCs),采用四甲基偶氮唑盐(mtt)法测定不同浓度的CS-HTCC/GP温敏凝胶浸提液对1、3、5d细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性的影... 详细信息

目的:体外评价壳聚糖季铵盐/甘油磷酸(CS-HTCC/GP)温敏水凝胶的细胞相容性。方法:体外培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLCs),采用四甲基偶氮唑盐(mtt)法测定不同浓度的CS-HTCC/GP温敏凝胶浸提液对1、3、5d细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。采用扫描电镜和透射电镜观察对细胞超微结构的影响。采用SSPS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫组化显示,培养的细胞波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性,证明体外原代培养细胞及传代细胞均为中胚层组织来源,且无上皮来源细胞混杂。不同浓度的CS-HTCC/GP温敏水凝胶浸提液均有促进HPDLCs增殖的作用,在第3天和第5天,差异有高度显著性(P<0.001)。各组均可提高ALP活性。第2组和第3组在第5天与第1天ALP表达的提高有高度显著差异(P<0.001)。扫描电镜和透射电镜观察水凝胶浸提液对HPDLCs的超微结构无影响。结论:CS-HTCC/GP温敏水凝胶具有良好的细胞相容性,具有用于牙周局部药物释放系统载体及组织工程支架的潜力。

关键词：壳聚糖温敏水凝胶 mtt ALP 细胞相容性