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文昌鸡mtnr1b基因的多态性及其与产蛋性状的关系

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畜牧兽医学报 2012年第4期43卷 540-545页

作者：李晓宁王慧于希江姜运良宋倩闫超唐辉山东农业大学动物科技学院泰安271018

本研究旨在了解褪黑激素受体基因mtnr1b的多态性及其与文昌鸡产蛋性状的关系。用直接测序的方法检测mtnr1b5′调控区、外显子1和外显子2的单核苷酸多态性,并将其与文昌鸡的产蛋性状进行关联分析。结果表明,在外显子1和2的编码区未发现... 详细信息

本研究旨在了解褪黑激素受体基因mtnr1b的多态性及其与文昌鸡产蛋性状的关系。用直接测序的方法检测mtnr1b5′调控区、外显子1和外显子2的单核苷酸多态性,并将其与文昌鸡的产蛋性状进行关联分析。结果表明,在外显子1和2的编码区未发现碱基突变或缺失,而在5′调控区发现15个单核苷酸多态位点。其中-778位点突变(A→G)对文昌鸡中期(22～31周龄)产蛋数和46周龄总产蛋数的显性效应分别达到了2.3和6.2枚(P16位点C对A为优势等位基因,加性效应值分别为2.5和3.2枚,显性效应分别为3.5和6.8枚,且表现为超显性。在4种单倍型中,AA单倍型个体的后期产蛋数和46周龄总产蛋数最低,GC单倍型个体的开产日龄最早。AC/GA联合基因型母鸡拥有最高的中期产蛋数、后期产蛋数和46周龄总产蛋数。综上所述,mtnr1b基因的外显子高度保守,而5′调控区的SNPs有望成为影响产蛋性状潜在的遗传标记。

关键词： mtnr1b SNPs 鸡产蛋性能

mtnr1b对妊娠期胰岛素分泌的影响及其机制研究

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MTNR1B对妊娠期胰岛素分泌的影响及其机制研究

作者：栗晶晶电子科技大学

学位级别：硕士

妊娠糖尿病（GDM）是孕妇在妊娠期间被发现的糖耐量异常现象,对孕妇、胎儿乃至新生儿的健康产生长期不利的影响。近来的研究证实,脑松果体分泌的与生物节律调节有关的激素——褪黑激素会通过其特异表达于胰岛β细胞上的受体mtnr1b影响... 详细信息

妊娠糖尿病（GDM）是孕妇在妊娠期间被发现的糖耐量异常现象,对孕妇、胎儿乃至新生儿的健康产生长期不利的影响。近来的研究证实,脑松果体分泌的与生物节律调节有关的激素——褪黑激素会通过其特异表达于胰岛β细胞上的受体mtnr1b影响胰岛素的分泌,调控机体的血糖代谢;而有关妊娠血糖代谢的研究包括我们前期的工作发现,mtnr1b基因变异与血糖水平具有显著的相关性,但其关联性特征在妊娠期与非妊娠期存在一些明显的差异。妊娠代谢变化涉及众多因素,其中孕期激素的改变被认为是引起代谢变化的主要原因。雌三醇（E3）作为一种次要的女性性激素,其水平在孕期母体循环中提高千倍以上,被报道与GDM显著相关,但致病机制不明。因此,本论文工作拟探讨胰岛细胞在孕期高浓度E3影响下,褪黑激素-mtnr1b介导的信号途径对胰岛素释放调控的影响及相应的分子传导机制,进而为了解妊娠血糖代谢改变的原因、糖耐量异常的产生以及GDM诊疗提供分子理论基础。研究方法:（1）对分离纯化的小鼠原代胰岛细胞和体外培养的胰岛细胞系MIN-6、NIT-1进行糖刺激胰岛素分泌实验（GSIS）,以验证不同胰岛细胞分泌胰岛素的能力。并进一步通过体外实验调查:（2）褪黑激素对胰岛素分泌的抑制作用;（3）不同种类不同浓度雌激素对胰岛素分泌的影响;（4）不同浓度E3作用下,高浓度褪黑激素刺激下的褪黑激素-mtnr1b信号对胰岛素分泌的影响,再通过Western blot检测相关信号蛋白分子（包括Rac和Akt、ERK及其磷酸化蛋白）的表达变化。结果与结论:（1）小鼠原代胰岛细胞,胰岛细胞系MIN-6,NIT-1均具备糖反应性。其中原代胰岛分泌胰岛素能力最强,而胰岛细胞系中MIN-6较NIT-1分泌胰岛素的能力更强也更稳定。体外MIN-6的实验结果显示:（2）1nM和100nM的褪黑激素都能抑制胰岛素分泌,抑制作用随浓度升高而增强,在25mM葡萄糖条件下,100nM较1nM的抑制效果增强约26%;（3）不同种类的雌激素都能不同程度地影响胰岛素分泌。其中,在一定浓度范围内,E2（1nM和100nM）和E4（0.2nM和2nM）能够促进胰岛素分泌;对于E3,当浓度从100nM增加到100μM,其抑制胰岛素分泌效果变强,约增强39%;（4）100nME3、100μME3与高浓度褪黑激素（100nM）共刺激细胞时,胰岛素分泌呈现上升趋势,反转了两种激素单独作用时的抑制效果,但100nME3与褪黑激素共同作用时胰岛素分泌的上升趋势比100μM E3与褪黑激素共同作用时更强。Western blot检测显示:与DMSO对照组相比,100nME3、100μME3、100nMMLT 单独处理以及 100nMMLT+100nM E3共同作用条件下,激酶信号系统相关蛋白Akt、P-Akt以Rac的表达量几乎没有观察到变化。但100nME3、100μME3、100nMMLT单独作用时,ERK1/2表达量增加,P-ERK1/2表达量降低;与单独作用相比,100nMMLT+100nME3共同作用时,ERK1/2表达量增强,P-ERK1/2未观察到明显变化。综上,本实验调查发现ERK1/2及其磷酸化蛋白的表达发生明显的变化,显示E3影响了褪黑激素介导的胰岛素分泌信号通路中的MAPK/ERk信号。其中,P-ERK蛋白表达的降低与两种激素单独作用时胰岛素分泌的减少相关,我们将进一步验证相关的实验结果。

关键词：妊娠糖尿病褪黑激素雌激素 mtnr1b 胰岛素分泌

mtnr1b基因与吉林地区汉族人Ⅱ型糖尿病的相关性研究

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MTNR1B基因与吉林地区汉族人Ⅱ型糖尿病的相关性研究

作者：梁世倩吉林大学

学位级别：硕士

近年来,随着人们生活方式的转变,糖尿病的发病率和患病率呈逐年上升的趋势,其中Ⅱ型糖尿病占糖尿病总数的90%以上,对Ⅱ型糖尿病的研究已成为医学研究的热点和难点。 Ⅱ型糖尿病是一种多基因遗传、多因素综合作用而导致的复杂疾病,不同... 详细信息

近年来,随着人们生活方式的转变,糖尿病的发病率和患病率呈逐年上升的趋势,其中Ⅱ型糖尿病占糖尿病总数的90%以上,对Ⅱ型糖尿病的研究已成为医学研究的热点和难点。 Ⅱ型糖尿病是一种多基因遗传、多因素综合作用而导致的复杂疾病,不同种族多态性频率的差异形成了种族特异的遗传结构,每一个特定的变异在不同的研究人群里的作用也不尽相同,因此,对不同种族人群中的易感基因进行验证有着重要意义。mtnr1b基因是最近在欧洲人群中发现的作用效果仅次于TCF7L2基因的Ⅱ型糖尿病易感基因,本研究采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分别检测了位于mtnr1b基因内含子上的rs10830963和位于mtnr1b基因5’端的rs1387153两个单核苷酸多态性(SNP)位点,试图从分子水平上探讨mtnr1b基因与Ⅱ型糖尿病的相关性。在检测rs10830963位点时,由于该位点本身没有限制性内切酶的酶切位点,因此在PCR的引物中人工设计了一个错配碱基,从而形成限制性内切酶的酶切位点,并分别选取该位点不同基因型的样品进行了测序验证。研究结果表明:rs10830963中G等位基因与Ⅱ型糖尿病相关联,rs1387153中T等位基因频率在病例组和对照组间存在差异,但是差异没有统计学意义,不排除T等位基因与Ⅱ型糖尿病相关联的可能,因此我们推断mtnr1b基因与吉林地区汉族人Ⅱ型糖尿病存在相关性。

关键词： T2DM mtnr1b SNP RFLP Hardy-Weinburg遗传平衡定律

mtnr1b rs10830963基因多态性对瑞格列奈治疗2型糖尿病患者疗效的影响

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中国临床药理学与治疗学 2015年第8期50卷 933-937页

作者：王涛吕冬梅王艳宋金方鲁茜张帆李伟印晓星徐州医学院附属医院药学部江苏省新药研究与临床药学重点实验室徐州医学院药学院临床药理学教研室徐州医学院附属医院内分泌科

目的:研究mtnr1b rs10830963基因多态性对瑞格列奈治疗2型糖尿病(T2DM)患者疗效的影响。方法:选取新诊断的T2DM患者90例,口服瑞格列奈1 mg,一日3次,连续8周,服药前和服药第8周末收集静脉血标本,测定治疗前后人体参数及糖脂代谢相关指标... 详细信息

目的:研究mtnr1b rs10830963基因多态性对瑞格列奈治疗2型糖尿病(T2DM)患者疗效的影响。方法:选取新诊断的T2DM患者90例,口服瑞格列奈1 mg,一日3次,连续8周,服药前和服药第8周末收集静脉血标本,测定治疗前后人体参数及糖脂代谢相关指标。采用高分辨溶解曲线方法对患者进行mtnr1b rs10830963基因分型。结果:80例患者完成8周随访,CG+GG基因型携带者空腹血糖(FPG)下降幅度、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)升高幅度均小于CC野生型携带者(Pmtnr1b rs10830963基因变异与瑞格列奈治疗T2DM的疗效相关,CC基因型携带者疗效更好。

关键词： mtnr1b rs10830963 基因多态性 2型糖尿病瑞格列奈

mtnr1b对妊娠期胰岛素分子信号通路影响作用的研究

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MTNR1B对妊娠期胰岛素分子信号通路影响作用的研究

作者：胡思婧电子科技大学

学位级别：硕士

妊娠期血糖代谢的适应性改变深刻地影响着孕妇、胎儿、新生儿的健康。随着现代生活方式的变化,孕妇妊娠期首次被发现血糖不耐受或糖尿病(GDM)日益增多,相关妊娠并发症持续升高,严重危害妇幼和公众健康。但当前对妊娠期血糖代谢适应性变... 详细信息

妊娠期血糖代谢的适应性改变深刻地影响着孕妇、胎儿、新生儿的健康。随着现代生活方式的变化,孕妇妊娠期首次被发现血糖不耐受或糖尿病(GDM)日益增多,相关妊娠并发症持续升高,严重危害妇幼和公众健康。但当前对妊娠期血糖代谢适应性变化的分子基础及作用机制尚缺乏调查。基因组关联分析曾证实,褪黑激素受体mtnr1b基因的单核苷酸多态性与2型糖尿病(T2DM)/妊娠糖尿病(GDM)的发生显著相关。mtnr1b在人体胰岛β细胞以及胚盘中都特异地进行表达,其信号通路在T2DM以及GDM发生中的作用机制尚不明确。我们前期在临床调查中发现,西南地区的孕妇中,mtnr1b基因突变显著地影响着孕期空腹血糖浓度和胰岛素早期的释放水平,其影响作用和关联方式与非妊娠期的情况存在一些明显的差异。因此,调查褪黑激素-mtnr1b信号通路对妊娠血糖代谢的独特影响,及其在GDM和T2DM发生中不同的作用机理,有益于了解妊娠血糖代谢适应性变化的分子基础,提高临床诊治和改善糖尿病的结局。由于高雌激素水平是妊娠期与非妊娠期以及GDM与T2DM发生最主要的差异因子,我们由此提出假设,雌激素-雌激素受体以及褪黑激素-mtnr1b之间的信号通路可能在孕期存在相互作用,共同参与调节妊娠期胰岛素的释放和分泌。研究方法:(1)根据前期在中国西南地域孕妇群体中观察到的mtnr1b基因变异影响妊娠期空腹血糖水平和早期胰岛素释放的特征,我们进一步在体外培养的不同胰岛细胞系以及原代胰岛中,检测和分析不同种类的雌激素对褪黑激素-mtnr1b抑制胰岛素分泌的影响作用的变化。(2)在上述实验结果的基础上,我们筛选采用不同浓度的雌三醇处理小鼠胰岛细胞系和小鼠原代细胞,观察褪黑激素-mtnr1b通路抑制胰岛素释放的作用与相关信号分子的改变状况,寻找雌三醇-雌三醇受体以及褪黑激素-mtnr1b之间信号通路的相互作用途径。研究结果与结论:本课题通过体外糖刺激实验,在小鼠胰岛细胞系和小鼠原代胰岛细胞中,均验证了褪黑激素-mtnr1b通路对胰岛素分泌的抑制作用;而不同种类的雌激素在不同浓度下,对胰岛素分泌产生不同的影响。其中,高浓度雌三醇对胰岛素分泌具有明显的抑制作用,而较低浓度的雌三醇反而会促进胰岛素分泌。同时,不同浓度雌三醇处理,也显著地影响了褪黑激素-mtnr1b通路抑制胰岛素分泌的作用。进一步实验表明,雌三醇处理影响胰岛素分泌相关的G蛋白偶联途径,其中,高浓度雌三醇刺激后非磷酸化Akt和ERK1/2蛋白表达减弱,低浓度雌三醇处理后将上调上述蛋白的表达但影响不显著。后续实验将进一步研究细胞膜上雌三醇及其主要受体和mtnr1b之间可能的相互作用方式以及下游的信号分子的改变途径。

关键词：褪黑激素 mtnr1b 雌激素妊娠糖尿病胰岛素分泌

宁夏汉族mtnr1b基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

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宁夏汉族MTNR1B基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

作者：刘英宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的探讨人类褪黑素受体基因变异与宁夏地区汉族人2型糖尿病(T2DM)的关系。方法对宁夏地区汉族295例T2DM患者与239例正常体检者进行病例对照研究。295例T2DM患者为（男性100例，女性90例），采集入选人群的人口统计学指标（姓名、性别... 详细信息

目的探讨人类褪黑素受体基因变异与宁夏地区汉族人2型糖尿病(T2DM)的关系。方法对宁夏地区汉族295例T2DM患者与239例正常体检者进行病例对照研究。295例T2DM患者为（男性100例，女性90例），采集入选人群的人口统计学指标（姓名、性别、年龄）、一般状况（身高、体重）、病史情况（T2DM的既往史及家族史）、空腹血生化指标（血糖、血脂、尿酸）和血压值。血压值通过水银柱血压计测量，血生化指标有宁夏医科大学第二附属医院生化室“OLIMPUSAU5400”型全自动生化仪检测提供，家族史、既往史等由病例提供。数据录入由本人和所在实验室共同完成。对照组239例（男性119例，女性120例），对照组空腹血糖及血压在正常范围内，对照组均来自宁夏医科大学第二附属医院体检中心。所有患者均符合1999年世界卫生组织（WHO）糖尿病诊断标准。入选个体间均无血缘关系。测定血清血脂、血糖水平等;采用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术宁夏地区汉族mtnr1b基因rs1387153位点的多态性与2型糖尿病发病的相关性;分析年龄、性别、高血压、血脂、体重指数等与mtnr1b基因rs1387153位点的多态性、2型糖尿病发病之间的关系。结果两组间性别、年龄、比较均无统计学差异(P>0.05);T2DM组的体重指数（bMI）、收缩压（SbP）、舒张压（DbP）、腰围、臀围、腰臀比显著高于对照组（P0.05)，;2、mtnr1b基因rs1387153位点多态性：（1）T2DM组和对照组间rs1387153位点基因型野生型CC、杂合体CT、变异后纯合体TT。其等位基因频率分布均以C等位基因为常见等位基因，两组间基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05);（2）T2DM组和对照组CT,CC,TT基因型频率分别为：50.80%vs49.50%，35.60%vs35.1%，13.60%vs15.40.1%差异无统计学意义(P>0.05),两组T、C等位基因频率分别为30%vs40.20%，61%vs59.8%，差异均无统计学意义(P>0.05);（3）T2DM组和对照组CT、CC,TT基因型频率及等位基因频率均无显著性差异(P>0.05);3、mtnr1b基因rs1387153多态性与临床的关系：T2DM患者携带TT型基因的TG显著高于携带CC和CT型（P＜0.05）;携带CT/CC型基因的T2DM患者SbP、DbP、HC、TC、、LDL、HDL与携带TT型基因者比较无显著性差异（P>0.05）。结论1、宁夏汉族T2DM与mtnr1b基因rs1387153位点多态性无明显相关;2、宁夏汉族T2DM与mtnr1b基因rs1387153位点可能与TG有关。

关键词： mtnr1b rs1387153 多态性 2型糖尿病汉族宁夏

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mtnr1b基因多态性与2型糖尿病

国际遗传学杂志 2010年第5期33卷 306-309页

作者：胡敬季虹荣海钦山东省内分泌与代谢病研究所

2型糖尿病是一种与多基因、多因素相关联的具有明显遗传异质性的疾病。全基因组关联分析显示mtnr1b基因变异与胰岛素分泌、葡萄糖水平以及2型糖尿病发病有显著相关性。mtnr1b基因是2型糖尿病重要的易感基因之一,其变异可能通过减少β细... 详细信息

2型糖尿病是一种与多基因、多因素相关联的具有明显遗传异质性的疾病。全基因组关联分析显示mtnr1b基因变异与胰岛素分泌、葡萄糖水平以及2型糖尿病发病有显著相关性。mtnr1b基因是2型糖尿病重要的易感基因之一,其变异可能通过减少β细胞胰岛素分泌,从而增加2型糖尿病的易感性。

关键词： mtnr1b 基因多态性 2型糖尿病

褪黑激素受体mtnr1b5′调控区多态及其与鸡产蛋性状的关联分析

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中国兽医学报 2014年第11期34卷 1855-1860页

作者：赵雪丹王慧康丽宋倩温杰锋贾美婷张秀梅唐辉山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

为研究褪黑激素受体基因mtnr1b对鸡产蛋性状的影响,本试验用直接测序法检测了434只寿光鸡mtnr1b5′调控区的SNPs,并与寿光鸡的产蛋性状进行关联分析。结果发现,在5′调控区有13个SNPs位点,9个位点中度多态,4个位点低度多态,所有位点处... 详细信息

为研究褪黑激素受体基因mtnr1b对鸡产蛋性状的影响,本试验用直接测序法检测了434只寿光鸡mtnr1b5′调控区的SNPs,并与寿光鸡的产蛋性状进行关联分析。结果发现,在5′调控区有13个SNPs位点,9个位点中度多态,4个位点低度多态,所有位点处于哈代温伯格平衡状态。-836位点(C→T),-778位点(G→A)和-629位点(G→A)完全连锁,群体中有CGA和TAG 2种单倍型。CGA使产蛋数增加,在前、中、后期和总产蛋数上,加性效应值分别为1.0、2.5、1.4和4.9枚。在中期、后期和总产蛋数上2种单倍型存在正向互作效应,显性效应分别达到了2.7、2.3和5.6枚。构建的包含TAG、CGA和TGG 3种单倍型启动活性试验表明,-778位点突变是单倍型效应差异的关键。综上所述,mtnr1b的5′调控区有丰富的SNPs位点,-836、-778和-629位点SNPs及单倍型对寿光鸡的产蛋量有显著影响,可作为寿光鸡产蛋量辅助选择的具有潜在应用价值的分子遗传标记。

关键词：鸡 mtnr1b 5′调控区 SNPs 产蛋性状

山羊卵巢褪黑素信号特异性载体pcDNA3.1-Pro/GDF9-ASMT与pcDNA3.1-Pro/Cyp17-mtnr1A/b的构建

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中国畜牧兽医 2020年第12期47卷 3833-3843页

作者：王晓东杨婵刘清华李振宇吴昊刘国世李翔何长久华中农业大学动物科技学院动物医学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室国家级国际联合研究中心武汉430070 中国农业大学动物科学技术学院北京100193

本研究旨在构建褪黑素(melatonin,MLT)合成酶乙酰血清素甲基转移酶(acetylserotonin methytransferase,ASMT)的卵母细胞特异表达载体GDF9-ASMT和MLT受体(mtnr1A与mtnr1b)的颗粒(黄体)细胞特异表达载体Cyp17-mtnr1A、mtnr1b,以期为进一步生产高繁殖力转基因山羊提供载体材料。首先,分别扩增出山羊生长分化因子9(GDF9)与细胞色素P450家族17亚家族A成员1(Cyp17a1)启动子序列备用;然后,扩增ASMT、mtnr1A及mtnr1b基因CDS全长序列,并通过酶切将ASMT连接至GDF9启动子下游,将mtnr1A和mtnr1b连接至Cyp17a1启动子下游,制备出Pro/GDF9-ASMT、Pro/Cyp17-mtnr1A与Pro/Cyp17-mtnr1b表达元件;最后通过酶切连接将上述表达元件整合至pcDNA3.1(+)载体中,从而构建出pcDNA3.1-Pro/GDF9-ASMT、pcDNA3.1-Pro/Cyp17-mtnr1A和pcDNA3.1-Pro/Cyp17-mtnr1b真核表达载体。经测序验证,本研究扩增出的GDF9和Cyp17a1启动子长度分别为2496和2497 bp,与Genbank数据库中山羊GDF9和Cyp17a1基因起始密码子上游2500 bp区域的同源性均为98%;扩增出的ASMT、mtnr1A与mtnr1b的CDS序列长度分别为1037、1100和1130 bp,与Genbank所递交的标准序列同源性分别为98%、98%和99%,氨基酸序列同源性分别为97%、98%和99%。上述载体的成功构建可为进一步生产褪黑素高繁殖力转基因山羊提供参考。

关键词：褪黑素黄体卵母细胞 ASMT mtnr1A mtnr1b