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MACC1、SIRT1、mta3在EGJA中的表达与肿瘤侵袭相关临床病理因素及预后的关系

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MACC1、SIRT1、MTA3在EGJA中的表达与肿瘤侵袭相关临床病理因素及...

作者：葛运飞山东大学

学位级别：硕士

研究背景：食管胃交界腺癌(esophagogastric junction adenocarcinoma, EGJA)是指发生于食管胃交界区域的癌。在过去的几十年中,EGJA的发病率显著升高,尤其是欧美等发达国家,发病率较20世纪70年代增加了2.5倍。近年来,EGJA发病率在我国... 详细信息

研究背景：食管胃交界腺癌(esophagogastric junction adenocarcinoma, EGJA)是指发生于食管胃交界区域的癌。在过去的几十年中,EGJA的发病率显著升高,尤其是欧美等发达国家,发病率较20世纪70年代增加了2.5倍。近年来,EGJA发病率在我国也呈现出上升的趋势。目前对于中晚期食管胃交界腺癌临床上多采用以手术切除为主的综合治疗方式,术后辅以放疗或化疗来加强疗效,效果并不理想。相比于胃远端癌和食管上段癌而言,EGJA具有特殊的生物学行为,恶性程度高,预后差,5年生存率(5-year survival rate,5-YS)不足20%,学术界倾向将其列为一类独立类型的肿瘤。EGJA病人大多最终死于肿瘤的复发和浸润转移。鉴于传统治疗方式效果的局限性使得许多学者对EGJA研究主要集中在对肿瘤的诊断和治疗方法方面,鲜有对患者预后生物指标的研究。本研究是探讨结肠癌相关转移基因1(metastasis-associated in colon cancer-1, MACC1)、沉默信息调节因子1(silent information regulator 1, SIRT1)、肿瘤转移相关蛋白3 (metastasis associated protein 3, mta3)在食管胃交界腺癌组织和癌旁正常组织中表达情况,分析三者的表达与肿瘤侵袭相关临床病理因素之间的相关性,并论述其与食管胃交界腺癌患者预后的关系。方法：收集存档蜡块制作石蜡组织芯片(tissue microarray, TMA)并应用免疫组织化学SP-9001三步法检测65例食管胃交界腺癌组织和相应癌旁正常组织中MACC1、SIRT1、mta3的表达情况。使用社会科学统计软件包——SPSS23.0 (statistical package for social sciences)分析MACC1、SIRT1、mta3在食管胃交界腺癌组织和癌旁正常组织中表达情况、三者表达之间的关联性及其与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置、浸润深度、脉管侵犯、神经侵犯、淋巴结转移、淋巴结阳性数、远处转移、形态学分型、病理分级、TNM分期等临床病理参数间的关系,并分析三者表达与EGJA患者预后的关系。结果：1. MACC1在EGJA组织中表达阳性者55例,阳性率为85%(55/65),而在癌旁正常组织中表达阳性者25例,阳性率为38%(25/65),MACC1在EGJA中的表达显著高于癌旁正常组织(X2=29.25,P=0.000,P3. mta3在EGJA组织中表达阳性者23例,阳性率为35%(23/65),而在癌旁正常组织中表达阳性者52例,阳性率为80%(52/65),mta3在EGJA中的表达显著低于癌旁正常组织(X2=26.50,P=0.000,P3-YS为40.7%,5-YS为20.2%,平均生存时间为39.042月,中位生存时间为23月;阴性组10例,1-YS为90%,3-YS为81.3%,5-YS为66.8%,平均生存时间为64.700月,中位生存时间为43月。单因素生存分析显示,阳性组生存时间显著缩短(X2=5.724,P=0.017,P3-YS为40.7%,5-YS为20.2%,平均生存时间为36.309月,中位生存时间为22月;阴性组15例,1-YS为93.3%,3-YS为73.3%,5-YS为52.6%,平均生存时间为61.267月,中位生存时间为36月。单因素生存分析显示,阳性组生存时间显著缩短(X2=5.226,P=0.022,Pmta3在EGJA组织表达情况分2组,即阳性组和阴性组。阳性组23例,1-YS为95.7%,3-YS为87%,5-YS为80.2%,平均生存时间为69.942月,中位生存时间为45月;阴性组42例,1-YS为66.7%,3-YS为26.2%,5-YS为21.2%,平均生存时间为26.090月,中位生存时间为19月。单因素生存分析显示,阳性组生存时间显著缩短(X2=23.706,P=0.000,P345,P=0.005)、浸润深度(X2=7.879,P=0.004

关键词：食管胃交界腺癌 MACC1 SIRT1 mta3 TMA 预后

mta3通过β-hCG调控上皮性卵巢癌侵袭转移的机制研究

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同济大学学报（医学版） 2017年第4期38卷 1-5,12页

作者：彭书敏王凯詹光熙美丽古丽.莫合买提郭晓青石河子大学医学院新疆石河子832003 同济大学附属第一妇婴保健院转化医学研究中心上海200040 同济大学附属第一妇婴保健院妇科上海200040

目的探讨上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)转移相关基因3(metastasis associated gene 3,mta3)的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系。方法收集晚期(FIGOⅢ-Ⅳ期)EOC术中冰冻标本(8例)及石蜡标本(21例),qRT-PCR和IHC检测卵巢部位肿瘤组织和转移瘤组织中mta3的表达;Transwell细胞迁移实验观察下调mta3、下调β-hCG、同时下调mta3和β-hCG的EOC细胞株(SKOV3和ES-2)体外迁移力的变化。EOC细胞体外分别转染50、100、200 nmol/L siRNA-mta3,qRT-PCR检测分析mta3和β-hCG的表达相关性;qRT-PCR及Western印迹法检测分析下调mta3对β-hCG以及上皮间质转化(EMT)标记物E-cadherin、N-cadherin表达的调控作用。结果qRT-PCR、IHC示EOC转移瘤组织中mta3的表达显著低于卵巢部位肿瘤组织(Pmta3显著增强了EOC细胞的迁移能力(Pmta3下调β-hCG显著降低了EOC细胞的迁移能力(Pmta3与β-hCG的表达呈显著负相关(Pmta3下调时,β-hCG和N-cadherin的表达显著上调,而Ecadherin的表达则显著下调。结论 mta3可能通过β-hCG干预EM T进程,进而调控上皮性卵巢癌侵袭转移。

关键词：上皮性卵巢癌 mta3 β-hCG EMT 肿瘤转移

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mta3在肝细胞癌中的表达及意义

实用癌症杂志 2018年第4期33卷 530-533页

作者：周薏傅志泉朱樑上海市中西医结合医院 200082 第二军医大学附属长征医院 200003

目的探讨肝细胞癌组织及肝癌细胞中mta3的表达情况及其对肝癌细胞增殖的影响。方法采集临床肝细胞癌样本,应用定量PCR和免疫组织化学方法,检测mta3的表达,同时在多种人肝癌细胞株中应用定量PCR检测mta3的表达;使用mta3的干扰siRNA转染... 详细信息

目的探讨肝细胞癌组织及肝癌细胞中mta3的表达情况及其对肝癌细胞增殖的影响。方法采集临床肝细胞癌样本,应用定量PCR和免疫组织化学方法,检测mta3的表达,同时在多种人肝癌细胞株中应用定量PCR检测mta3的表达;使用mta3的干扰siRNA转染人肝癌细胞株HepG2和Huh7,分别采用CCK-8实验和克隆形成实验检测下调mta3表达对人肝癌细胞增殖的影响。结果 mta3在肝细胞癌组织中表达水平显著升高(Pmta3表达水平显著高于正常肝细胞株L02(Pmta3的si RNA干扰效率均在50%左右,转染siRNA-mta3后,人肝癌细胞株HepG2和Huh7的增殖受到显著抑制(Pmta3作为促癌基因参与了肝细胞癌的发生,成功构建了mta3的干扰siRNA,干扰mta3能有效抑制肝癌细胞的增殖,mta3有望成为肝细胞癌靶向治疗的新靶点。

关键词：肝细胞癌 mta3 siRNA 增殖基因治疗

结直肠癌组织CSMD1、mta3蛋白表达与肿瘤进展及预后的关系

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中国现代普通外科进展 2023年第8期26卷 652-655页

作者：杨言通智鹏柯周博裴哲孟元普河南科技大学第一附属医院胃肠肿瘤外科河南洛阳471003

探讨结直肠癌(CRC)组织中CSMD1、转移相关基因基因3(mta3)蛋白表达与肿瘤进展及预后的关系。应用免疫组化法检测102例CRC患者癌组织和癌旁组织(距离癌组织边缘>2 cm)中CSMD1、mta3蛋白表达情况。Spearman秩相关分析CRC组织中CSMD1与mta... 详细信息

探讨结直肠癌(CRC)组织中CSMD1、转移相关基因基因3(mta3)蛋白表达与肿瘤进展及预后的关系。应用免疫组化法检测102例CRC患者癌组织和癌旁组织(距离癌组织边缘>2 cm)中CSMD1、mta3蛋白表达情况。Spearman秩相关分析CRC组织中CSMD1与mta3蛋白表达的相关性。分析CSMD1、mta3蛋白表达与患者临床病理特征的关系。Log-rank检验及Kaplan-Meier生存分析不同CSMD1、mta3蛋白表达患者生存情况。单因素和多因素COX回归分析CRC患者预后的影响因素。CRC组织中CSMD1、mta3蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织(均Pmta3蛋白阳性表达率差异具有统计学意义(均Pmta3阴性表达患者5年总体生存率显著低于阳性表达患者(Pmta3阴性表达、低分化程度和肿瘤分期Ⅲ期是CRC患者不良预后的危险因素。CRC组织中CSMD1、mta3阳性表达降低,两者表达与肿瘤分期及分化程度有关,均可促进肿瘤进展,是患者不良预后的危险因素。

关键词：结直肠癌 CSMD1 mta3 预后

miR-32/mta3介导上皮-间质转化促进肝纤维化

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miR-32/MTA3介导上皮-间质转化促进肝纤维化

肺岩宁方调控NF-KappB、mta3、GSK-3beta的实验研究

首届东方药理论坛暨2018年全国心脑血管药理学术会议、上海市药理学会第十九届学术年会

作者：亢旭娟张勇李占革林园杨宝峰哈尔滨医科大学药学院

目的:肝纤维化是Ⅱ型糖尿病(T2DM)患者常见的并发症之一,肝纤维化的特征在于细胞外基质(ECM)蛋白的异常产生,积累和沉积。有研究表明上皮-间质转化(EMT)在肝纤维化发生的起始和进展中发挥关键作用。尽管最近已经确定microRNA为EMT的关... 详细信息

目的:肝纤维化是Ⅱ型糖尿病(T2DM)患者常见的并发症之一,肝纤维化的特征在于细胞外基质(ECM)蛋白的异常产生,积累和沉积。有研究表明上皮-间质转化(EMT)在肝纤维化发生的起始和进展中发挥关键作用。尽管最近已经确定microRNA为EMT的关键调节因子,但是目前对microRNA与高血糖诱导肝纤维化过程中发生EMT关系的研究很少。本研究旨在探究EMT与糖尿病诱发肝纤维化之间的关系,并阐明其相关机制。方法:体内实验,通过高脂饮食(2ml/d,2周)和注射链脲佐菌素(STZ)(35mg/kg/d,3天)建立大鼠模型;通过HE和Masson染色分析检测大鼠肝脏组织病理学变化。通过胶原蛋白测定试剂盒检测胶原蛋白含量;通过qPCR,Western blot和免疫荧光染色技术分析检测Col-1,α-SMA,Snail,Vimentin,E-cadherin (E-cad)和mta3的mRNA和蛋白表达水平。体外实验,培养肝实质细胞AML12,高糖(6000mg/1,24h)处理模拟糖尿病模型,过表达miR-32或抑制miR-32表达后,应用qPCR,Western blot和免疫荧光染色技术检测EMT过程中相关因子的表达水平。结果:在链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠的肝组织和高糖处理的AML12细胞中Col-1,α-SMA,Snail,Vimentin的mRNA和蛋白表达上调,E-cadherin和mta3表达下调,表明发生EMT过程;在糖尿病大鼠的肝组织和高糖处理的AML12细胞中miR-32表达显著增加;过表达miR-32可使mta3蛋白表达减少;luciferase实验表明miR-32可靶向抑制mta3;此外,过表达miR-32能诱导Col-1,α-SMA,Snail,Vimentin的mRNA和蛋白表达上调,E-cadherin表达下调;在高糖条件下,转染AMO-miR-32可以抑制发生EMT过程。结论:糖尿病大鼠模型中,miR-32/mta3介导上皮-间质转化促进肝纤维化,表明miR-32和mta3可成为糖尿病性肝纤维化预防和治疗的新靶点。

关键词：糖尿病性肝纤维化 miR-32 mta3 上皮-间质转化高糖

来源： cnki会议评论

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肺岩宁方调控NF-KappB、MTA3、GSK-3beta的实验研究

Emodin alleviates cardiac fibrosis by suppressing activation of cardiac fibroblasts via upregulating metastasis associated protein 3

第三届江浙沪中西医结合高峰论坛

作者：赵晓珍吴中华徐振晔王中奇龙华医院浦东分院肿瘤二科上海中医药大学科技实验中心

目的:在以往实验证实肺岩宁方具有调控上皮-间质细胞核转录因子Snail信号途径及上游信号分子ILK基因的基础上(文章已经发表),我们进一步从体内实验和体外实验的角度深入研究肺岩宁方对Snail信号途径的上游信号分子NF-KAPPB、mta3、GSK-3... 详细信息

目的:在以往实验证实肺岩宁方具有调控上皮-间质细胞核转录因子Snail信号途径及上游信号分子ILK基因的基础上(文章已经发表),我们进一步从体内实验和体外实验的角度深入研究肺岩宁方对Snail信号途径的上游信号分子NF-KAPPB、mta3、GSK-3beta的调控作用,以揭示肺岩宁方抗肺癌转移的信号通路。方法:体内实验通过建立C57小鼠Lewis肺癌模型,体外实验应用不同浓度肺岩宁含药血清干预治疗人高转移肺癌细胞95-D,采用Real time PCR和Western blot方法分别检测移植瘤组织、转移灶发生的肺组织以及人高转移肺癌细胞95-D细胞中信号分子NF-KappB、mta3、GSK-3betamRNA、蛋白水平的表达。以进一步阐述肺岩宁方抗肿瘤转移的有效靶点和可能的信号通路。结果:体内实验结果显示对于各组移植肿瘤组织和转移的肺组织中,mta3基因无论从mRNA转录水平、蛋白质水平经肺岩宁方治疗后,与模型组相比明显降低(p3beta经肺岩宁方治疗后与模型组相比无差异(p>0.05);体外实验Real-time PCR结果表明:与对照组相比较,20%浓度的肺岩宁含药血清对mta3、GSK-3beta均有下调作用(Pmta3、GSK-3beta无显著下调作用((p>0.05);结论:肺岩宁方通过抑制mta3的表达,从而抑制肿瘤侵袭转移。

关键词：肺恶性肿瘤中医上皮-间质细胞转化 NF-KappB mta3 GSK-3beta 肿瘤转移

来源： cnki会议评论

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Acta Pharmaceutica Sinica B 2019年第4期9卷 724-733页

作者： Dan Xiao Yue Zhang Rui Wang Yujie Fu Tong Zhou Hongtao Diao Zhixia Wang Yuan Lin Zhange Li Lin Wen Xujuan Kang Philipp Kopylov Dmitri Shchekochikhin Yong Zhang Baofeng Yang Department of Pharmacology(State-Province Key Laboratories of Biomedicine-Pharmaceutics of China Key Laboratory of Cardiovascular ResearchMinistry of Education)Harbin Medical UniversityHarbin 150081China Department of Pharmacy The First Affiliated Hospital of Harbin Medical UniversityHarbin 150081China Department of Preventive and Emergency Cardiology Sechenov First Moscow State Medical UniversityMoscow 119991Russian Federation Institute of Metabolic Disease Heilongjiang Academy of Medical ScienceHarbin 150086China Department of Pharmacology and Therapeutics Melbourne School of Biomedical SciencesFaculty of MedicineDentistry and Health SciencesThe University of MelbourneMelbourne 3010Australia

Excess activation of cardiac fibroblasts inevitably induces cardiac fibrosis. Emodin has been used as a natural medicine against several chronic diseases. The objective of this study is to determine the effects of emodin on cardiac fibrosis and the underlying molecular mechanisms. Intragastric administration of emodin markedly decreased left ventricular wall thickness in a mouse model of pathological cardiac hypertrophy with excess fibrosis induced by transaortic constriction(TAC) and suppressed activation of cardiac fibroblasts induced by angiotensin II(AngII). Emodin upregulated expression of metastasis associated protein 3(mta3) and restored the mta3 expression in the setting of cardiac fibrosis. Moreover, overexpression of mta3 promoted cardiac fibrosis;in contrast, silence of mta3 abrogated the inhibitory effect of emodin on fibroblast activation. Our findings unraveled the potential of emodin to alleviate cardiac fibrosis via upregulating mta3 and highlight the regulatory role of mta3 in the development of cardiac fibrosis.

关键词： Emodin Cardiac fibrosis mta3 Angiotensin Ⅱ Cardiac fibroblast Mouse

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消化系统新肿瘤标志物的初步探索与研究

消化系统新肿瘤标志物的初步探索与研究

作者：于金玉山东大学

学位级别：硕士

研究背景在全球范围内,恶性肿瘤是威胁人类生命健康的主要公共卫生问题之一。消化系统主要包括消化道和消化腺,所含器官众多,恶性肿瘤发病率也较高。其中肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)在世界范围内有着很高的发病率和死亡率... 详细信息

研究背景在全球范围内,恶性肿瘤是威胁人类生命健康的主要公共卫生问题之一。消化系统主要包括消化道和消化腺,所含器官众多,恶性肿瘤发病率也较高。其中肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)在世界范围内有着很高的发病率和死亡率,尤其是在中国,因为乙肝病毒的广泛流行,肝癌也是我国常见的恶性肿瘤,死亡率位居第二,HCC患者的数量大约占了全球患者数量的一半。另外结直肠癌(colorectal cancer,CRC)也是十分常见的消化道恶性肿瘤之一,在我国,其死亡率居恶性肿瘤第五位,发病率和死亡率也呈逐年上升趋势。目前,消化系统恶性肿瘤的发病机制尚未完全研究清楚,由于其不良预后和高死亡率,早期诊断、早期治疗就变得尤为重要。临床上消化系统恶性肿瘤早期诊断主要依赖于病理活检、影像学检查和血清学标志物等,但因具有侵入性或因敏感性、特异性不足,而无法满足临床的需求。寻找敏感性、特异性高的标志物用于消化系统恶性肿瘤早期诊断仍是临床亟待解决的问题。非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)通常是指不能翻译为蛋白的功能性RNA分子,包含短链ncRNA(如microRNA,piRNA,siRNA等),长链ncRNA(lncRNA)及环状RNA。lncRNA一般是指大于200nt的ncRNA,可在各种层面上调控基因表达,在细胞生长、发育、衰老、死亡等过程中均扮演关键角色。近些年研究发现,血液中存在大量且稳定的lncRNA,其表达谱同miRNA一样,也具有明显的组织和疾病特异性,即在不同组织、不同肿瘤中具有特异的表达谱,具有成为肿瘤早诊的血液学标志物的潜在价值。单一 lncRNA作为标志物的特异性和敏感性尚且较难满足临床需求,将差异表达的lncRNA组合建立肿瘤特异性表达谱,将改进单一标志物的低灵敏度、低特异性问题,成为早期诊断的有效手段。此外,肿瘤转移基因(Metastasis-Associated Protein,mta)家族是一类重要的肿瘤转移相关基因,mta3是其重要组成成员之一。到目前为止,有研究已发现mta3在非小细胞肺癌中表达较正常肺组织升高;而在胃食管交界癌、乳腺癌及晚期子宫内膜腺癌中表达下降。其在肝癌和结直肠癌中尚未有研究,从既往的研究中可以推测,mta3可能成为组织中的一种标志物。目的第一部分:1.用实时荧光定量的方法从82例肝细胞肝癌患者治疗前的血清中和74例健康者的血清中检测31种lncRNA的含量,并建立表达谱,利用lncRNA的表达量对肝癌进行诊断。2.从71例结直肠癌患者治疗前的血清中和70例健康者的血清中检测17种lncRNA的含量,并建立表达谱利用lncRNA的表达量对结直肠进行诊断。3.比较癌症患者术前术后血清lncRNA表达谱的变化,为监测肿瘤复发与进展提供依据。第二部分:1.采用含90对肝癌组织及对应癌旁组织标本的组织芯片检测mta3蛋白的表达情况,以寻找预后指标与潜在治疗靶点。2.探究mta3在肝细胞癌细胞中的生物作用。方法第一部分:1.用实时荧光定量的方法检测血清中lncRNA的含量。从选定的肿瘤相关的lncRNA中筛选出在肿瘤患者与健康者血清之间表达有差异的lncRNA。通过logistic回归分析建立lncRNA表达谱,用于区分癌症患者与健康者,通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,简称 ROC 曲线)下面积(area under ROC,简称AUC)检验模型的诊断效力。此外,将表达谱模型与传统肿瘤标志物结合,并检验结合后的诊断效力。2.比较患者术前术后血清中lncRNA表达谱水平的变化,以及lncRNA表达谱与临床参数之间的关系。第二部分:1.以购自上海芯超生物科技有限公司的肝细胞肝癌组织芯片为研究对象,芯片含有90对肝癌组织及对应癌旁组织标本。利用免疫组织化学技术检测组织芯片中mta3蛋白表达水平,分析其表达状态与肝细胞肝癌患者临床特点以及预后的关系。2.从肝癌细胞系中研究mta3的功能。通过干扰肝癌细胞中的mta3表达,观察mta3对肝癌细胞生物行为的影响。主要用到的实验方法包括:细胞培养、siRNA干扰、western blot、克隆形成、transwell、划痕实验等。结果第一部分:1.在肝癌患者血清中,被检测的31种lncRNA,有25种表达,其中7种表达有统计学差异(p33)。十折交叉验证AUC为0.744(95%CI:0.662-0.815)。乙肝病毒感染的肝癌患者AUC为0.742(95%CI:0.652-0.818);乙肝病

关键词：消化系统恶性肿瘤 lncRNA 诊断 mta3 预后

柔嫩艾美耳球虫感染BHK-21细胞差异蛋白的筛选及特性研究

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柔嫩艾美耳球虫感染BHK-21细胞差异蛋白的筛选及特性研究

作者：赵宗平中国农业科学院

学位级别：硕士

在鸡群各类流行病中鸡球虫病占据很高的致病率,据统计其致死率高达30%,对养殖业造成极大的经济损失。但迄今,鲜有与艾美耳球虫入侵相关的宿主细胞相关蛋白的报道。为了全面研究宿主细胞参与球虫入侵、发育和增殖等相关的功能蛋白,我们利... 详细信息

在鸡群各类流行病中鸡球虫病占据很高的致病率,据统计其致死率高达30%,对养殖业造成极大的经济损失。但迄今,鲜有与艾美耳球虫入侵相关的宿主细胞相关蛋白的报道。为了全面研究宿主细胞参与球虫入侵、发育和增殖等相关的功能蛋白,我们利用iTRAQ联合质谱分析了宿主BHK-21细胞在柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵24 h后的差异表达蛋白,对其中3个差异蛋白,即活化蛋白激酶C受体1(Receptor for activated C kinase 1,RACK1)、转移基因3(Metastasis associated gene 3,mta3)、核纤层蛋白B受体(Lamin B receptor,LBR)在子孢子入侵中的功能进行了初步研究,研究结果为深入探讨球虫与宿主之间的互作关系奠定基础。1.基于iTRAQ技术分析柔嫩艾美耳球虫感染BHK-21细胞的蛋白质组学柔嫩艾美耳球虫是专性胞内寄生虫,主要侵入鸡的盲肠上皮细胞。在艾美耳球虫感染宿主细胞过程中,不仅是寄生虫起着关键作用,而且宿主也会产生相应的变化来应对感染引起的损伤。本研究利用iTRAQ偶联LC-MS/MS技术,筛选感染柔嫩艾美耳球虫子孢子24 h后BHK-21细胞的差异表达蛋白(Differentially expressed proteins,DEPs)。结果共鉴定到6139个非冗余蛋白,获得195个(倍数变化比≥1.3或≤0.7和P3KAkt信号通路、RIG-I受体介导的吞噬通路、Ras信号通路和p53信号通路等,其中上调和下调的DEPs分别主要与核糖体和mRNA的监控通路有关。研究结果为深入研究球虫与宿主之间的互作关系提供了重要的基础数据。2.柔嫩艾美耳球虫子孢子感染对宿主RACK1的影响以鸡肌肉的cDNA为模板,利用PCR技术对RACK1进行克隆,将克隆片段与pGEX-6P-1连接,构建原核表达质粒pGEX-6P-1-RACK1,在BHK-21细胞中进行表达,获得重组蛋白RACK1-GST。将纯化的重组蛋白进行电泳验证,结果在61 kDa处有单一的目的条带,证实所获得的蛋白为RACK1-GST融合蛋白。利用RT-qPCR和Western blot检测子孢子感染DF-1细胞过程中RACK1的mRNA转录水平和蛋白表达水平,结果显示,子孢子感染细胞24-72 h时,细胞RACK1的转录水平和蛋白表达水平均明显提高。利用抗体抑制试验观测RACK1多抗对虫体入侵细胞的影响,结果表明,100μg/mL和200μg/mL RACK1抗体孵育细胞后对虫体的入侵影响不大,而300μg/mL和400μg/mL孵育细胞后能明显促进虫体的入侵。以上结果表明,宿主RACK1对球虫子孢子入侵细胞起负调控的作用,但具体机制尚需深入研究。3.柔嫩艾美耳球虫子孢子感染对宿主mta3和LBR的影响为了探索球虫入侵宿主细胞中mta3和LBR发挥的作用,我们检测了感染球虫子孢子24-72 h时的细胞中两者转录水平和翻译水平的变化以及其抗体对子孢子入侵细胞的影响。结果显示,随入侵时间的增加,mta3转录水平和翻译水平表达量不断增加,24 h组明显高于不感染组(Pmta3翻译水平均明显高于24 h组和不感染组(P0.05),而48 h组和72 h组的LBR翻译水平均低于24 h组和不感染组(Pmta3或LBR抗体作用细胞后对子孢子的入侵影响不大,入侵率与对照组和正常IgG组的相当(P>0.05)。抑制效果不理想可能与所用抗体浓度不高(10-20μg/mL)相关,后续需要用更大浓度的抗体来进行子孢子入侵抑制试验,以确定mta3和LBR是否是与球虫入侵相关的蛋白。4.柔嫩艾美耳球虫子孢子感染对细胞凋亡的影响通过对筛选到的差异基因进行KEGG富集分析,我们预测得到一些差异基因参与凋亡相关的通路,如MAPK、Wnt、Ras等通路。为了进一步探究柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵对细胞凋亡的影响,我们对凋亡通路中的凋亡酶进行了测定。与对照组相比,感染子孢子12 h和24 h组的Caspase-3和Caspase-9的酶活性均差异显著(P<0.05),且随感染时间的增加,凋亡酶的活性显著升高。结果表明子孢子的

关键词： iTRAQ 柔嫩艾美耳球虫 RACK1 mta3 LBR