检索结果-南通市图书馆

作者：马立荣宁夏医科大学

学位级别：硕士

研究目的证实脂毒背景下鼠胰腺β细胞膜G蛋白偶联受体119(GPR119)通过Ca2+-CaM活化mst1-FoxO1通路引起细胞功能损伤的途径和机制。研究方法1.经棕榈酸(PA)孵育大鼠胰岛素瘤细胞株INS-1,采用MTT实验检测INS-1细胞存活率;采用蛋白免疫印... 详细信息

研究目的证实脂毒背景下鼠胰腺β细胞膜G蛋白偶联受体119(GPR119)通过Ca2+-CaM活化mst1-FoxO1通路引起细胞功能损伤的途径和机制。研究方法1.经棕榈酸(PA)孵育大鼠胰岛素瘤细胞株INS-1,采用MTT实验检测INS-1细胞存活率;采用蛋白免疫印迹实验(Western Blotting,WB)证实PA对Caspase-3及clCaspase-3的表达调节作用。***119激动剂MBX孵育INS-1细胞,通过MTT实验检测细胞存活率;运用流式细胞术检测INS-1细胞的凋亡率和钙离子浓度的变化;运用细胞免疫化学法鉴定GPR119的分布及表达;运用WB检测GPR119,phospho-mst1,clmst1,mst1,phospho-FoxO1,FoxO1,Caspase-3,clC3 及 Pdx1 的表达水平;运用qPCR检测BCL-2,Bax,Pdx1及Insulin的mRNA表达;运用酶比色法检测INS-1细胞内甘油三酯、游离脂肪酸及胰岛素的含量。***2+螯合剂EGTA和CaM抑制剂CPZ孵育INS-1细胞,通过MTT实验检测细胞存活率;运用流式细胞术检测INS-1细胞的凋亡率;运用WB检测phospho-mst1,clmst1,mst1,phospho-FoxO 1 及 FoxO 1 的表达水平。4.采用pcDNA3-mst1过表达质粒及mst1 shRNA质粒转染正常和PA孵育 12hrs 后的 INS-1 细胞 72hrs,运用 WB 检测 phospho-mst1,clmst1,mst1,phospho-FoxO 1,FoxO1,Caspase-3,clC3 及 Pdx1 的表达水平。5.C57BL/6J小鼠80只分为10组,其中高/低脂饮食各5组持续喂养到第18周,期间记录投食量,摄食量并称重。在第12周检测胰岛素耐量和糖耐量,以判断造模进展。***119过表达载体的体内干预将构建成功的 pCDH-GFP、pCDH-GPR119、shCtrl、shGPR119 质粒经脂质体转染入HEK293T细胞,经过包装、扩增后,得到实验性的重组慢病毒。采用尾静脉注射技术,将重组慢病毒LV-GFP、LV-GPR119、LV-shCtrl、LV-shGPR119分别注入8组小鼠(高脂/低脂持续喂养第18周)尾静脉。一周后处死小鼠取胰腺组织采用免疫组织化学法观察各组胰岛细胞GPR119蛋白表达量,HE染色和电镜观察胰腺胰岛细胞损伤情况;运用酶比色法检测胰腺组织内游离脂肪酸、TG及胰岛素含量;运用WB检测各组小鼠胰腺组织内GPR119,phospho-mst1,clmst1,mst1,phospho-FoxO1,FoxO1,Caspase-3,clC3及Pdx1的表达水平。研究结果***以浓度或时间依赖性增加INS-1细胞Caspase-3的表达WB 及 MTT 证实用 250.0uM/L 和 500.0uM/L PA 分别孵育 INS-1 细胞 12hrs,PA以浓度依赖性增加Caspase-3的表达水平;***/L PA分别孵育INS-1细胞 Ohr、1hr、3hrs、6hrs、12hrs、24hrs、48hrs,PA 以时间依赖性增加 Caspase-3及clCaspase-3的表达水平。2.250.0uM/LPA 孵育 INS-1 细胞 12hrs后,GPR119 激动剂 MBX 4.0uM/L干预细胞10min,检测到细胞内TG,FFA含量降低;WB结果显示MBX抑制了 mst1和FoxO1的磷酸化表达;qPCR结果显示经PA诱导后加GPR119激动剂MBX降低细胞内Bax的mRNA表达,同时Pdx1和Insulin的mRNA表达增加。***实验结果显示细胞外的Ca2+对mst1的磷酸化表达没有明显影响;经 250.0uM/L PA 处理 INS-1 细胞 12hrs 后,CaM 抑制剂 CPZ 100.0uM/L 作用60min,WB实验结果显示CPZ增加了 mst1和FoxO1的磷酸化表达水平。***3-mst1过表达质粒及mst1 shRNA质粒分别转染正常培养和PA孵育12hrs后的INS-1细胞72hrs,WB实验结果显示mst1过表达增加了mst1的磷酸化表达和FoxO1的磷酸化表达;mst1 shRNA明显抑制了 mst1的磷酸化表达和FoxO1的磷酸化表达。5.高脂诱导C57BL/6J小鼠,尾静脉注射GPR119,GPR119 shRNA慢病毒一周后,采用HE染色和电镜观察到GPR119过表达组胰腺胰岛细胞较GPR119 shRNA组损伤程度轻,血清甘油三酯及游离脂肪酸含量降低,血清胰岛素水平增加,注射慢病毒一周后HFD-LV-GPR119较HFD-LV-sh

关键词：脂毒 GPR119 Ca2+-CaM mst1 FoxO1 胰腺β 细胞损伤

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依达拉奉联合丹红注射液对急性脑梗死大鼠Hippo通路中mst1表达的影响

依达拉奉联合丹红注射液对急性脑梗死大鼠Hippo通路中MST1表达的...

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作者：张燕辉湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:探讨依达拉奉联合丹红注射液对急性脑梗死大鼠Hippo通路中mst1表达的影响。方法:采用左侧大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将SD大鼠随机分为5组,每组6只:假手术组、模型组、依达拉奉组、丹红注射液组... 详细信息

目的:探讨依达拉奉联合丹红注射液对急性脑梗死大鼠Hippo通路中mst1表达的影响。方法:采用左侧大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将SD大鼠随机分为5组,每组6只:假手术组、模型组、依达拉奉组、丹红注射液组、依达拉奉联合丹红注射液组(联合用药组),每组又分为1、3、5、7d四个时相亚组,分别给予对应药物治疗后,采用神经功能缺损评分评估大鼠神经损伤情况;采用免疫组化法、q PCR法检测mst1表达含量,观察其在海马区的变化。结果:1.神经功能缺损评分:模型组及各用药组各时间点的神经功能缺损评分均高于假手术组(P1);与模型组比较,依达拉奉组、丹红注射液组脑缺血后以第5、7天显著降低(P1),而联合用药组脑缺血后各时间点的神经功能缺损评分均低于模型组(P1);与依达拉奉组、丹红注射液组比较,联合用药组脑缺血后第3、5、7天神经功能缺损评分降低(P1)。2.免疫组化检测:与假手术组比较,模型组及丹红注射液组大鼠在同一时间点mst1蛋白表达升高(P1)。与模型组比较,依达拉奉组大鼠脑缺血后第7天mst1蛋白表达明显降低(P1);丹红注射液组无明显差异(P>0.05);联合用药组大鼠脑缺血后4个时相点的mst1蛋白表达均明显降低(P1)。与依达拉奉组比较,丹红注射液组大鼠脑缺血后第7天mst1蛋白表达明显升高(P1);联合用药组大鼠脑缺血后第5、7天mst1蛋白表达降低(P1)。与丹红注射液组比较,联合用药组脑缺血后同一时间点mst1表达均明显降低(P1)。3.q PCR检测:与假手术组比较,模型组及丹红注射液组大鼠在同一时间点mst1m RNA表达升高(P1)。与模型组比较,依达拉奉组和联合用药组大鼠脑缺血后第5、7天mst1m RNA表达明显降低,且联合用药组第3天已开始下降(P1);与依达拉奉组比较,丹红注射液组大鼠脑缺血后第5、7天mst1m RNA表达明显升高(P1);联合用药组大鼠脑缺血后第7天mst1m RNA表达降低(P1)。与丹红注射液组比较,联合用药组脑缺血后第1、5、7天mst1表达均明显降低(P1)。结论:1.依达拉奉可能通过抑制mst1表达,起到抗脑缺血作用,丹红注射液对mst1无明显抑制作用。2.依达拉奉联合丹红注射液抑制mst1的作用优于依达拉奉单一药物,能更好的起到脑保护作用。

关键词：急性脑梗死 MCAO模型依达拉奉丹红注射液联合用药 mst1

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高表达蛋白mst1对人胚肾HEK293细胞凋亡和增殖的影响

高表达蛋白Mst1对人胚肾HEK293细胞凋亡和增殖的影响

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作者：李兆明华中科技大学

学位级别：硕士

目的建立受四环素诱导表达外源基因mst1的真核表达体系人胚肾293(HEK293)细胞株,用于进一步基因功能的研究。方法利用T-REx (Tetracycline - Regulated Expression)系统建立四环素可调控的表达体系。首先,构建含有目的基因mst1的质粒pcD... 详细信息

目的建立受四环素诱导表达外源基因mst1的真核表达体系人胚肾293(HEK293)细胞株,用于进一步基因功能的研究。方法利用T-REx (Tetracycline - Regulated Expression)系统建立四环素可调控的表达体系。首先,构建含有目的基因mst1的质粒pcDNA4/TO-mst1。其次,将调节性pcDNA6/TR质粒用脂质体介导法转染人胚肾293细胞,经药物Blasticidin S筛选后的克隆用有限稀释法进行单克隆化。单克隆扩增后再瞬时转染质粒pcDNA4/TO-mst1并用Zeocin筛选并挑选单克隆。然后经四环素诱导表达,通过Western Blot方法检测目的基因mst1的表达水平,从而筛选出由四环素诱导的高表达外源基因mst1的人胚肾293单克隆细胞株。结果通过T-REx系统成功构建由四环素调控的高表达外源基因mst1的人胚肾293细胞株。结论四环素诱导表达目的基因mst1的人胚肾293细胞株可用于外源基因的真核调控表达,为研究目的基因mst1及其它真核基因功能提供了一种有力的实验手段。目的探讨四环素诱导性表达外源性mst1(Mammalian sterile 20-like kinase 1)对HEK 293细胞增殖与凋亡的影响。方法在已经成功构建的四环素可诱导表达mst1的HEK 293细胞系中,加入四环素诱导mst1在HEK293细胞中高表达。通过蛋白Western Blot分析mst1在HEK 293细胞中的表达情况;分别在加入四环素后12, 24,36,48小时通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)观察高表达mst1后对细胞增殖的影响;加入四环素后36小时加入BrdU,通过其掺入比率来显示mst1对细胞增殖的影响;加入四环素后后36小时,加入顺铂作用14小时后通过Annexin V检测其对细胞凋亡的影响。结果四环素成功诱导mst1高表达;MTT及BrdU结果显示在HEK 293细胞中高表达mst1后细胞增殖明显受到抑制;Annexin V检测结果提示高表达mst1后,细胞的凋亡率相对增高。结论在HEK 293细胞中高表达mst1,不仅可以抑制细胞增殖,还可促进细胞凋亡。

关键词： mst1 四环素诱导表达质粒构建 MTT hippo

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Malibatol A抑制mst1磷酸化促进OGD损伤后替代型小胶质细胞的激活

Malibatol A抑制MST1磷酸化促进OGD损伤后替代型小胶质细胞的激活

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作者：李晓溪南京大学

学位级别：硕士

[目的](1)探讨Malibatol A(MA)对BV2小胶质细胞在氧糖剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)后表型的影响;(2)初步探讨c-Abl-mst1信号通路在此过程中作用。[方法]BV2细胞OGD模型的建立。BV2细胞氧糖剥夺8h再灌注24h,分别用0.5,1,2,4,8,16gM不同浓度的MA或Vehicle处理细胞。MTT检测法和流式细胞术评估细胞活力和细胞凋亡。RT-PCR检测M1型小胶质细胞标志物(MCP-1,IL-1和TNF-α)和M2型小胶质细胞标志物(Ym-1,CD206,IL-10和TGF-p)mRNA表达水平。流式细胞术检测Ym-1和CD206蛋白表达水平。Western blot检测c-Abl和mst1表达水平。[结果]MA能够有效减少BV2细胞OGD损伤后凋亡水平,提高细胞活力,呈剂量依赖性;MA能够促进OGD损伤后BV2细胞Ym-1,CD206,IL-10和TGF-β的mRNA水平表达,下调MCP-1,IL-1和 TNF-α的mRNA水平表达;MA能够促进OGD损伤后BV2细胞Ym-1和CD206的蛋白水平表达;MA能够抑制OGD损伤后BV2细胞p-mst1(Y433)的表达。[结论]MA能够减轻OGD处理后BV2细胞损伤,并促进其向M2型小胶质细胞激活,其机制可能与MA抑制BV2细胞OGD损伤后mst1在Y433位点的磷酸化相关。

关键词： Malibatol A 氧糖剥夺极化 mst1

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MEX3A通过与mst1结合调节Hippo通路活性——促进肺癌细胞的增殖和转移

MEX3A通过与MST1结合调节Hippo通路活性——促进肺癌细胞的增殖和...

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作者：闫婷中国医科大学

学位级别：硕士

背景:肺癌由于其高发病率和死亡率已成为世界上最严重的恶性肿瘤之一,其中80%左右的患者为非小细胞肺癌(NSCLC)。虽然目前包括手术、放化疗等治疗技术在逐渐提高,肺癌患者的长期存活率仍处于低水平。MEX3A首先在线虫中鉴定,与肿瘤形成有... 详细信息

背景:肺癌由于其高发病率和死亡率已成为世界上最严重的恶性肿瘤之一,其中80%左右的患者为非小细胞肺癌(NSCLC)。虽然目前包括手术、放化疗等治疗技术在逐渐提高,肺癌患者的长期存活率仍处于低水平。MEX3A首先在线虫中鉴定,与肿瘤形成有关,并可能促进细胞增殖和肿瘤转移。到目前为止,关于MEX3A和肺癌之间的关系尚不清楚,它能否作为肺癌相关分子生物学标志物,为其治疗提供新型靶点,这是我们研究的重点。研究方法:通过数据库、免疫组织化学染色及western blot检测MEX3A在肺癌组织及癌旁正常组织中的表达水平,并统计分析与临床病理因素之间的相关性。在体外通过改变MEX3A的表达观察其对肺癌相关恶性表型的影响。利用双荧光素酶报告基因、核浆分离及western blot证明MEX3A对Hippo信号通路活性的调控。免疫共沉淀、免疫荧光和共转染验证MEX3A对Hippo通路的作用靶点。结果:***及Kaplan-Merier数据库提示MEX3A在肺癌组织中高表达,且与不良预后相关。免疫组化结果揭示,MEX3A在肺癌组织中呈阳性表达,且其高表达与肺癌低分化程度、高TNM分期及淋巴结转移呈正相关。2.利用质粒和小干扰RNA在体外双向调控MEX3A的表达,发现过表达MEX3A后能促进肺癌细胞的增殖和转移,且增殖及EMT相关间质表型蛋白水平升高。3.双荧光素酶报告基因和western blot结果证明MEX3A能够抑制Hippo通路活性,同时免疫荧光和核浆分离蛋白实验表明MEX3A能够促进YAP的核转位。进一步研究表明这正是通过与mst1结合而发挥作用的。结论:MEX3A在非小细胞肺癌中高表达,并是非小细胞肺癌患者不良预后的影响因素之一,MEX3A通过与mst1结合抑制Hipoo通路活性从而促进肺癌细胞恶性表型。

关键词： MEX3A Hippo通路 mst1

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DZNep联合5-杂氮-2’-脱氧胞苷酸对mst1基因表达的影响及其对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株增殖、凋亡、分化的影响

DZNep联合5-杂氮-2’-脱氧胞苷酸对MST1基因表达的影响及其对急性...

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作者：谢水玲福建医科大学

学位级别：硕士

目的：检测白血病患者和恶性血液病细胞株中mst1的表达水平及探讨其临床意义，筛选出mst1低表达的恶性血液病细胞株作为实验对象;采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR，MSP）检测急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株mst1基因启动... 详细信息

目的：检测白血病患者和恶性血液病细胞株中mst1的表达水平及探讨其临床意义，筛选出mst1低表达的恶性血液病细胞株作为实验对象;采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR，MSP）检测急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株mst1基因启动子区的甲基化状态;探讨3-Deazaneplanocin A（DZNep）及5-杂氮-2’-脱氧胞苷酸（5-aza-2'-deoxycytidine，5-Aza-2'-CdR）对mst1基因表达的影响，同时检测其对NB4细胞株增值、凋亡、分化的影响。方法：应用Real-time PCR和Western-blotting检测临床标本和5种恶性血液病细胞株中mst1的表达状态及分析其临床意义并筛选出低表达的NB4细胞株;采用MSP检测NB4细胞株mst1基因启动子区的甲基化状态;予DZNep及5-Aza-2'-CdR作用于NB4细胞后，采用CCK-8法观察细胞的增殖情况;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡情况，Annexin V FITC/PI流式细胞仪检测凋亡率;real-time PCR检测mst1、Bcl-2、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的表达情况;Western-blotting鉴定mst1、procaspase-3、procaspase-9蛋白的表达变化。结果：（1）mst1在急性白血病初治患者较正常人表达明显减低（Pmst1基因在急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株中低表达。（2）在NB4细胞中mst1基因启动子区存在完全甲基化;（3）CCK-8方法检测结果显示，DZNep及5-Aza-2'-CdR能抑制NB4细胞增殖并呈药物浓度依赖性;其也能抑制细胞G1-S转换（Pmst1表达上调;5-Aza-2'-CdR主要通过下调DNMT3A的表达使mst1的表达上调;两药联合使mst1的表达上调更为明显。结论：（1）mst1基因具有抑癌基因功能在急性白血病患者中低表达，且随着治疗的进程，其表达水平发生着动态变化。（2）在NB4细胞株中mst1基因的启动子区存在着CpG岛的完全甲基化。（3）DZNep及5-Aza-2'-CdR可使细胞阻滞于G1/S期而使分化受阻，凋亡增加，联合用药作用更明显。（4）DZNep可能通过下调DNMT3B的表达水平及相关组蛋白甲基化的修饰， mst1表达上调;5-Aza-2'-CdR主要通过下调DNMT3A的表达使mst1的表达上调;两药联合使mst1的表达上调更为明显。

关键词：白血病表观遗传学 mst1 DZNep 5-杂氮-2’-脱氧胞苷酸

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IGF1R、SHC1、GRB2、mst1及MDM2在脂溢性角化病、鲍恩病、皮肤鳞状细胞癌中的表达及意义

IGF1R、SHC1、GRB2、MST1及MDM2在脂溢性角化病、鲍恩病、皮肤鳞...

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作者：王翠芹承德医学院

学位级别：硕士

目的:近年来皮肤肿瘤的发病率逐年增高,不但给人们的生命健康带来了严重的威胁,还给人们的经济带来了沉重的负担,因此积极探讨皮肤肿瘤的发病机制,积极寻找皮肤肿瘤发病过程中的特异性指标至关重要。本研究探讨IGF1R、SHC1、GRB2、mst1... 详细信息

目的:近年来皮肤肿瘤的发病率逐年增高,不但给人们的生命健康带来了严重的威胁,还给人们的经济带来了沉重的负担,因此积极探讨皮肤肿瘤的发病机制,积极寻找皮肤肿瘤发病过程中的特异性指标至关重要。本研究探讨IGF1R、SHC1、GRB2、mst1及MDM2在脂溢性角化病(seborrheic keratosis,SK)、鲍恩病(Bowen’s disease,BD)、皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,cSCC)组织中的表达水平,并分析其意义,以期为皮肤肿瘤的早期诊断、鉴别或预后提供理论基础。方法:1收集承德医学院附属医院及沧州市中心医院手术切除的50例SK、20例BD、22例cSCC组织蜡块标本及10例色素痣周围正常皮肤组织,采用免疫组织化学SP染色法检测上述四组组织中IGF1R、SHC1、GRB2、mst1及MDM2的表达情况。2数据处理采用SPSS19.0软件,计数资料以n(%)表示,阳性率之间比较采用Pearsonχ2检验、连续性校正χ2检验或Fisher确切概率法;以P1 IGF1R在正常组、SK组、BD组及cSCC组患者皮损中的阳性率依次为0(0/10)、64.00%(32/50)、90.00%(18/20)、90.91%(20/22)。cSCC组、BD组、SK组阳性率均高于正常组(P均0.05)。(Tab.1)2 SHC1在正常组及SK组、BD组、cSCC组患者皮损中的阳性率依次0(0/10)、88.00%(44/50)、100.00%(20/20)、95.45%(21/22)。cSCC组、BD组、SK组阳性率均高于正常组(P均0.05)。(Tab.2)3 GRB2在正常组及SK组、BD组、cSCC组患者皮损中的阳性率依次为0(0/10)、18.00%(9/50)、55.00%(11/20)、72.73%(16/22)。cSCC组和BD组阳性率高于SK组和正常组(P均0.05)。(Tab.3)4 mst1在正常组及SK组、BD组、cSCC组患者皮损中的阳性率依次为100.00%(10/10)、80.00%(40/50)、95.00%(19/20)、72.73%(16/22),各组间阳性率两两比较比较差异无统计学意义(P均>0.05)。(Tab.4)5 MDM2在正常组及SK组、BD组、cSCC组患者皮损中的阳性率依次为0(0/10)、74.00%(37/50)、100.00%(20/20)、100.00%(22/22)。cSCC组、BD组、SK组阳性率均高于正常组(P均1 IGF1R在cSCC组、BD组、SK组的阳性表达率均明显高于正常组,且差异有统计学意义,推测IGF1R表达上调可能在上述表皮增生性肿瘤的进展中发挥作用;cSCC组、BD组阳性表达率均高于与SK组,且差异有统计学意义,推测IGF1R可能对上述表皮增生性疾病角质形成细胞的间变和恶变具有促进和参考意义;cSCC组阳性率与BD组比较,差异无统计学意义,推测IGF1R可能对上述表皮增生性肿瘤的发生有促进作用,但对皮肤鳞状细胞癌的侵袭和转移无预示作用。2 SHC1在cSCC组、BD组、SK组的阳性表达率均明显高于正常组,差异有统计学意义,说明SHC1可能在脂溢性角化病、皮肤原位鳞癌及皮肤浸润性鳞癌中存在异常活化;SHC1的阳性表达率在SK组、BD组、cSCC组相互之间比较差异无统计学意义,说明SHC1可能对表皮角质形成细胞的增生有促进作用,而对其间变、恶变、侵袭、转移无明显促进作用。3 GRB2的阳性表达率在cSCC组和BD组均明显高于SK组和正常组,且差异有统计学意义,但SK组与正常组阳性率相比,差异无统计学意义,表明GRB2可能参与了皮肤鳞状细胞癌的发生,而在脂溢性角化病这一良性肿瘤中作用不明显;cSCC组与BD组阳性率比较,差异无统计学意义,提示GRB2可能尚不能对皮肤鳞状细胞癌是否发生侵袭转移做出预示。4 mst1的阳性表达率在正常组、SK组、BD组及cSCC组组间多重比较中差异无统计学意义,表明mst1可能未参与脂溢性角化病和皮肤鳞状细胞癌的发生发展。5 MDM2的阳性表达率在cSCC组、BD组、SK组均高于正常组,且差异有统计学意义,提示MDM2表达上调可

关键词： IGF1R SHC1 GRB2 mst1 MDM2 皮肤肿瘤

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壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠mst1、YAP、LATS1表达的影响

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠MST1、YAP、LATS1表达的影响

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作者：张晓梅广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:本课题以肝纤维化大鼠模型为研究对象,探究壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠中mst1、YAP、LATS1表达的影响,进而探究壮肝逐瘀煎抗肝纤维化的作用机制,为壮肝逐瘀煎防治肝纤维化提供客观依据。方法:60只SD大鼠适应性喂养一周,随机选取50只... 详细信息

目的:本课题以肝纤维化大鼠模型为研究对象,探究壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠中mst1、YAP、LATS1表达的影响,进而探究壮肝逐瘀煎抗肝纤维化的作用机制,为壮肝逐瘀煎防治肝纤维化提供客观依据。方法:60只SD大鼠适应性喂养一周,随机选取50只构建肝纤维化模型,余下10只为空白组。皮下注射40%的CCL4花生油溶液,首次注射的量为0.5 ml/100g,后面每次注射的量为0.3 ml/100g,一周3次,于第6周、第8周分别取5只造模大鼠进行HE、Masson染色,观察造模是否成功。模型成功后,将造模大鼠随机分为模型组、秋水仙碱组、壮肝逐瘀煎高、中、低剂量组（ZGZYJ高、中、低剂量组）。ZGZYJ高、中、低剂量组的灌胃剂量分别是:26.46 g/kg、13.23 g/kg、6.615 g/kg,秋水仙碱组的灌胃剂量是:0.126 mg/kg,空白组与模型组则给予等量的生理盐水,一天1次,持续药物干预6周。各组最后一次给药后,禁食不禁水12 h,大鼠称重并记录体重。麻醉后进行腹腔主动脉取血,室温下静置2 h,离心取上层血清用全自动生化仪检测ALT、AST、ALB、ALP等肝功能指标。取大鼠肝脏,观察肝脏组织形态,并取肝右组织2份,1份置于10%甲醛固定,1份于-80℃冰箱冷冻备用。固定的肝脏组织作病理切片,进行HE、Masson染色,于显微镜下观察肝脏组织的病理形态。取-80℃冰箱冷冻的肝脏组织进行WB、RT-PCR等检测,分别观察肝脏组织中mst1、YAP、LATS1的蛋白、m RNA表达水平。结果:1.大鼠的一般情况给药各组大鼠毛发颜色、光泽度较好,精神、活动能力、大便形状以及颜色等均较前明显改善。给药各组大鼠体重的增长趋势高于模型组,但较空白组缓慢,无统计学意义。壮肝逐瘀煎治疗组大鼠肝脏边缘变锐利、肝体肿胀减轻,无明显颗粒状,表面光泽度尚可,质地柔软,外表颜色相似接近红褐色。秋水仙碱组大鼠肝脏颗粒减少,边缘较钝,颜色偏黄白色。2.壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠血清中ALT、AST、ALB、ALP水平的影响与模型组相比,壮肝逐瘀煎高剂量组大鼠血清中ALT、AST水平下降,ALB水平升高（P＜0.01）,壮肝逐瘀煎中、低剂量组大鼠血清中ALT、ALP水平下降（P＜0.01,P＜0.05）,ALB水平升高（P＜0.01）,秋水仙碱组大鼠血清中ALT水平下降（P＜0.05）。3.壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠组织形态变化的影响HE与Masson的结果表明,与模型组相比,壮肝逐瘀煎治疗组肝细胞坏死、变形的数量减少,纤维组织增生、纤维间隔区域面积减少,炎症细胞浸润程度减轻,未见假小叶形成。秋水仙碱组纤维间隔区域面积有一定程度的改善。4.壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠中mst1、YAP、LATS1表达的影响（1）WB结果:与空白组相比,模型组肝脏组织中YAP蛋白的表达上升（P＜0.05）,LATS1蛋白的表达降低（P＜0.01）,mst1蛋白的表达降低,差异无统计学意义。与模型组相比,壮肝逐瘀煎高剂量组肝脏组织中LATS1蛋白的表达明显升高（P＜0.01）,壮肝逐瘀煎中剂量组肝脏组织中YAP蛋白的表达降低、LATS1蛋白的表达升高（P＜0.01,P＜0.05）,壮肝逐瘀煎低剂量组肝脏组织中mst1蛋白的表达升高（P＜0.01）,秋水仙碱组肝脏组织中mst1蛋白的表达升高（P＜0.05）,YAP蛋白的表达降低（P＜0.01）。（2）PCR结果:与空白组相比,模型组肝脏组织中mst1 m RNA的表达下降,但无统计学意义,LATS1 m RNA的表达下降,YAP m RNA的表达上升（P＜0.01）。与模型组相比,壮肝逐瘀煎高、中、低剂量组、秋水仙碱组肝脏组织中mst1、LATS1 m RNA的表达升高,YAP m RNA的表达下降（P＜0.01）。结论:1.壮肝逐瘀煎可以明显改善肝纤维化大鼠肝功能、减轻肝脏组织肝纤维化程度,有很好的护肝作用。2.壮肝逐瘀煎抗肝纤维化的作用机制可能是通过上调mst1、LAST1的表达,下调YAP的表达。

关键词：壮肝逐瘀煎肝纤维化 mst1 YAP LATS1

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PGRN对调节性T细胞发育及功能的影响和机制及mst1与mst2的共同作用对B细胞发育及BCR信号的影响和机制研究

PGRN对调节性T细胞发育及功能的影响和机制及Mst1与Mst2的共同作...

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作者：杨迪重庆医科大学

学位级别：硕士

第一部分PGRN对调节性T细胞发育及功能的影响和机制目的:探讨颗粒蛋白前体(PGRN)对调节性T细胞发育和功能的影响及分子机制。方法:在野生型和PGRN基因敲除小鼠模型中,采用流式细胞术检测小鼠中枢及外周各淋巴器官中T细胞各亚群的比例及... 详细信息

第一部分PGRN对调节性T细胞发育及功能的影响和机制目的:探讨颗粒蛋白前体(PGRN)对调节性T细胞发育和功能的影响及分子机制。方法:在野生型和PGRN基因敲除小鼠模型中,采用流式细胞术检测小鼠中枢及外周各淋巴器官中T细胞各亚群的比例及调节性T细胞比例及其功能相关分子的表达。采用RT-PCR检测调节性T细胞中CTLA4的表达。最后采用调节性T细胞体外抑制试验验证其功能变化。结果:与野生型小鼠相比,PGRN敲除小鼠脾脏、胸腺和淋巴结中调节性T细胞的比例均升高,同时发现在脾脏调节性T细胞中CTLA4在基因转录和蛋白表达水平均显著升高。体外功能试验发现PGRN敲除小鼠的脾脏调节性T细胞的抑制功能也较野生型增强。结论:PGRN在调节性T细胞的发育和功能中扮演重要角色,其机制可能涉及CTLA4。第二部分mst1与mst2的共同作用对B细胞发育及BCR信号的影响和机制目的:探讨mst1与mst2的共同作用对B细胞发育和BCR信号的影响及其机制。方法:首先通过基因型为mst1f/+mst2f/f与mst1f/+mst2f/f CD19Cre/+小鼠之间杂交,得到基因型为mst2f/f CD19Cre/+的mst2条件性敲除小鼠(mst2KO)及基因型为mst1f/f mst2f/f CD19Cre/+的mst1mst2条件性敲除小鼠(mst1/2DKO),另外,mst1基因敲除小鼠(mst1KO)是复旦大学陶教授建立的背景为129 Sv Ev小鼠。在各实验小鼠模型中,采用流式细胞术检测小鼠中枢及外周B细胞发育及其各亚群比例的情况;通过Western blot及磷酸化流式细胞术检测在BCR激活的不同时间点的各信号分子的变化;利用激光共定位显微镜术检测可溶性抗原(s Ag)刺激BCR活化过程中各信号分子的变化及其与BCR的共定位情况。结果:与野生型小鼠相比,各实验小鼠模型的B细胞发育与BCR活化情况各有不同。mst1KO小鼠B细胞发育与BCR活化存在明显障碍;mst2KO小鼠B细胞在骨髓及脾脏的发育与BCR活化均未见明显异常;在mst1/2DKO小鼠中则观察到B细胞发育基本正常,BCR活化的障碍较mst1KO小鼠明显减轻。结论:mst1与mst2在B细胞发育和BCR活化中扮演重要角色,其中,mst1已被证实这一过程中发挥正向调控作用,本研究探讨了mst1KO、mst2KO、mst1/2DKO各小鼠模型中B细胞发育及BCR信号转导的变化,发现mst2在这一过程中可能扮演与mst1相反的负向调控作用。

关键词：颗粒蛋白前体调节性T细胞细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 γ-干扰素抑制功能 mst1 mst2 B淋巴细胞 BCR信号

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mst1生物学作用及信号调控研究进展

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临床与病理杂志 2016年第2期36卷 209-214页

作者：周杰灿唐圣松南华大学药物药理研究所湖南衡阳421001

哺乳动物不育系20样激酶1(mammalian sterile 20-like kinase 1,mst1)是酵母Ste20激酶在哺乳动物体内的同源蛋白,随着其作为Hippo抑制通路的核心组件在果蝇体内的重新定义,mst1得到了广泛的研究。mst1在调节胚胎生长发育、细胞迁移和分... 详细信息

哺乳动物不育系20样激酶1(mammalian sterile 20-like kinase 1,mst1)是酵母Ste20激酶在哺乳动物体内的同源蛋白,随着其作为Hippo抑制通路的核心组件在果蝇体内的重新定义,mst1得到了广泛的研究。mst1在调节胚胎生长发育、细胞迁移和分化、维护免疫系统稳定、促进细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长等多种生理活动中发挥着重要作用。本文综述了mst1的基本结构、生理功能、信号调控及其与人体疾病的关系。

关键词： mst1 作用信号调控

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