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Neonatal Dubin-Johnson Syndrome and its Differentiation from Biliary Atresia

Journal of Clinical and Translational Hepatology 2023年第1期11卷 163-173页

作者： Teng Liu Jing Zhao Jia-Yan Feng Yi Lu Jonathan A.Sheps Ren-Xue Wang Jun Han Victor Ling Jian-She Wang The Center for Pediatric Liver Diseases Children’s Hospital of Fudan UniversityShanghaiChina The Department of Pathology Children’s Hospital of Fudan UniversityShanghaiChina BC Cancer Agency VancouverBritish ColumbiaV5Z 1L3Canada University of Victoria-Genome BC Proteomics Center University of VictoriaVictoriaBritish ColumbiaV8Z 7X8Canada Shanghai Key Laboratory of Birth Defects ShanghaiChina

Background and Aims:The aim was to determine if liver biochemistry indices can be used as biomarkers to help differentiate patients with neonatal Dubin–Johnson syndrome(nDJS)from those with biliary atresia(BA).Methods:Patients with genetically-confirmed nDJS or cholangiographically confirmed BA were retrospectively enrolled and randomly assigned to discovery or verification cohorts.Their liver chemistries,measured during the neonatal period,were compared.Predictive values were calculated by receiver operating characteristic curve analysis.Results:A cohort of 53 nDJS patients was recruited,of whom 13 presented with acholic stools,and 14 underwent diagnostic cholangiography or needle liver biopsy to differentiate from BA.Thirty-five patients in the cohort,with complete biochemical information measured during the neonatal period,were compared with 133 infants with cholangiographically confirmed BA.Total and direct bilirubin,alanine aminotransferase(ALT),aspartate aminotransferase(AST),total bile acids,alkaline phosphatase,and gamma-glutamyl transferase were significantly lower in nDJS than in BA.In the discovery cohort,the areas under the curve for ALT and AST were 0.908 and 0.943,respectively.In the validation cohort,13/15 patients in the nDJS group were classified as nDJS,and 10/53 in the BA control group were positive(p<0.00001)with an ALT biomarker cutoff value of 75 IU/L.Thirteen of 15 patients were classified as nDJS and none were classified positive in the BA group(13/15 vs.0/53,p<0.00001)with an AST cutoff of 87 IU/L.Conclusions:Having assembled and investigated the largest cohort of nDJS patients reported to date,we found that nDJS patients could be distinguished from BA patients using the serum AST level as a biomarker.The finding may be clinically useful to spare cholestatic nDJS patients unnecessary invasive procedures.

关键词： Jaundice ABCC2 Cholestasis mrp2 Acholic stools

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Effect and molecular mechanism research of Astragalus membranaceus on inhibiting intestinal absorption of six alkaloids of Aconitum carmichaelii in spleen deficiency rats

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Chinese Herbal Medicines 2022年第1期14卷 117-124页

作者： Xulong Chen Xinli Liang Xiaoqiang Kong Miaomiao Ji Abid Naeem Cheng Li Hao Zheng Mingxia Gao Zhenggen Liao Key Laboratory of Modern Preparation of Traditional Chinese Medicine Ministry of EducationJiangxi University of Traditional Chinese MedicineNanchang 330004China Affiliated Hospital Jiujiang UniversityJiujiang 332000China

Objective:To investigate the effect and the mechanism of Astragalus membranaceus(Huangqi in Chinese,HQ)extract on the intestinal absorption of six alkaloids of Aconitum carmichaelii(Fuzi in Chinese,FZ)in rats with spleen deficiency and provide novel insights into the application of HQ on modulating intestinal barrier.Methods:Four-week-old male Sprague-Dawley rats were fed with Xiaochengqi Decoction to induce the spleen deficiency model for 40 d.Single-pass intestinal perfusion model were used to study the effects of HQ extract on the absorption of alkaloids.Protein expression and mRNA levels of mrp2 and BCRP and tight junction proteins(TJ,including Claudin-1,Occludin and ZO-1)were measured using Western blot and real-time PCR,respectively.The location and expression of TJ protein was also investigated by the immunofluorescence method.Results:Compared with the normal group,the protein expression of mrp2,BCRP and TJ proteins in the model group were significantly down-regulated.After oral administration of HQ,the alkaloid absorption in intestinal villi was inhibited,mrp2,BCRP and TJ proteins were up-regulated,the green fluorescence staining of Claudin-1,Occludin,and ZO-1 was enhanced,and a thick layer of mucus was deposited on the surface of the epithelium of the intestinal cavity.Conclusion:HQ as an intestinal barrier modulator improves the physiological changes of the intestinal environment of spleen deficiency to reduce the absorption of toxic components,leading to a decrease in the absorption of drug-like molecules.

关键词： alkaloids Aconitum carmichaelii Debx. Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.BCRP intestinal absorption mrp2 spleen deficiency tight junction

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Reversal Effect of BM-cyclin 1 on Multidrug Resistance by Down-regulating mrp2 in BALB/C Nude Mice Bearing C-A120 Cells

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2013年第6期33卷 840-844页

作者：王林李肖芸江高峰梁继珍孙嫣刘炜 Department of Oncology the Fourth Affiliated Hospital of Medical CollegeJinan UniversityGuangzhou Red Cross Hospital Guangdong Provincial Key Laboratory of Liver Disease Research the Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University School of Public Health Medical CollegeWuhan University of Science and Technology Department of Gastroenterology the Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University

Our previous study demonstrated that BM-cyclin 1, a traditional anti-mycoplasma drug, could effectively reverse the multidrug resistance （MDR） of C-A120 cells. The present study aims to explore the reversal effect of BM-cyclin 1 on MDR and its mechanisms in BALB/C nude mice bearing C-A120 cells. Irnmunoblotting analysis and reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR） were used to study the change in multidrug resistance-associated protein 2 （mrp2） induced by BM-cyclin 1. We found that the expression levels of mrp2 protein and mRNA in C-A120 cells treated with BM-cyclin 1 were reduced significantly. Chemical colorimetry revealed no significant change in the level of glutathione （GSH）. In the xenografl model, the inhibitory rate of C-A120 cells growth in BM-cyclin 1 plus adriamycin （ADM） group was 52%, which was significantly higher than in control group （P〈0.01）. The immunoblotting and RT-PCR results conclusively demonstrated that BM-cycin 1 could significantly reduce the expression of mrp2 in transplanted tumor. In conclusion, BM-cyclin 1 could effectively reverse the MDR of C-A 120 cells in vivo by suppressing the expression of mrp2.

关键词： BM-cyclin 1 mrp2 multidrug resistance in vivo

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甘草酸拮抗雷公藤多苷所致肾毒性的分子机制研究

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南京中医药大学学报 2022年第5期38卷 382-389页

作者：李秋红胡勇鞠爱霞赵娇郄青松周育生黑龙江中医药大学药学院黑龙江哈尔滨150040

目的从转运体角度探究甘草酸拮抗雷公藤多苷所致肾毒性的分子机制。方法采用网络药理学预测雷公藤多苷和甘草酸作用于肾毒性的靶点,从中选出与肾脏转运体有关的靶点,并通过动物实验对其进行验证。采用ELISA法测定大鼠血清中BUN和Scr含量... 详细信息

目的从转运体角度探究甘草酸拮抗雷公藤多苷所致肾毒性的分子机制。方法采用网络药理学预测雷公藤多苷和甘草酸作用于肾毒性的靶点,从中选出与肾脏转运体有关的靶点,并通过动物实验对其进行验证。采用ELISA法测定大鼠血清中BUN和Scr含量,通过HE染色判断大鼠肾脏病理情况,采用qPCR和Western blot检测转运体基因和蛋白表达量。结果网络药理学预测雷公藤多苷和甘草酸共同作用于肾毒性的靶点73个,分子功能81种,主要富集于蛋白结合,涉及转运体ABCB1和ABCC2。动物实验表明,雷公藤多苷组大鼠肾脏的BUN和Scr含量显著升高,病理结果显示大鼠肾脏受到较严重的损伤;配伍甘草酸后BUN和Scr含量显著降低,肾脏损伤得以改善。qPCR和Western blot结果显示雷公藤多苷可显著下调P-gp和mrp2基因和蛋白表达量;配伍甘草酸后P-gp和mrp2基因和蛋白的表达量显著上调。结论甘草酸通过影响P-gp和mrp2转运体,加速毒性物质排出,拮抗雷公藤多苷所致肾毒性,为临床两药联合治疗肾病、减轻毒性反应提供实验依据。

关键词：雷公藤多苷甘草酸肾毒性网络药理学转运体 P-gp mrp2

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罗伊氏乳杆菌FLRE5K1改善APAP诱导的高胆红素血症

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南昌大学学报(理科版) 2023年第5期47卷 441-447页

作者：焦四平徐淑雅魏华徐锋南昌大学中德联合研究院江西南昌330047

阐明罗伊氏乳杆菌FLRE5K1可以改善对乙酰氨基酚(APAP)诱导的高胆红素血症。对昆明鼠连续7 d灌胃L.reuteri FLRE5K1,7 d后,实验组小鼠腹腔注射500 mg·Kg^(-1)的APAP造模,对小鼠禁食不禁水12 h,之后眼球取血用于测定血清生化指标,并对其... 详细信息

阐明罗伊氏乳杆菌FLRE5K1可以改善对乙酰氨基酚(APAP)诱导的高胆红素血症。对昆明鼠连续7 d灌胃L.reuteri FLRE5K1,7 d后,实验组小鼠腹腔注射500 mg·Kg^(-1)的APAP造模,对小鼠禁食不禁水12 h,之后眼球取血用于测定血清生化指标,并对其肝脏进行组织病理学分析。结果表明L.reuteri FLRE5K1能够降低小鼠血清中总胆红素、尿素以及肌酐含量。病理切片分析也表明,L.reuteri FLRE5K1对APAP引起的炎症有明显的缓解作用。通过分子检测,发现L.reuteri FLRE5K1能提高肝脏中多药耐药相关蛋白2(mrp2)表达水平而影响胆红素代谢,改善高胆红素血症,填补了目前益生菌在改善高胆红素血症机制探究方面的空白,为未来临床辅助治疗提供技术支撑,具有较好的潜在应用价值。

关键词：罗伊氏乳杆菌FLRE5K1 高胆红素血症 mrp2

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大补脾汤对伊立替康所致小鼠迟发性腹泻的影响

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中成药 2023年第2期45卷 569-572页

作者：岳晓华张小平孙少伯王碧莹谢晓蓉耿广琴安方玉甘肃中医药大学甘肃兰州730000 甘肃中医药大学敦煌医学与转化教育部重点实验室甘肃兰州730000

目的探讨敦煌古方大补脾汤对伊立替康腹泻小鼠脾胃虚弱证的干预作用。方法将小鼠随机分为空白组,模型组,大补脾汤低、中、高剂量组(4.29、8.58、17.16 g/kg)。除空白组外,其余各组均腹腔注射伊立替康进行造模,各组给予相应药物7 d。H... 详细信息

目的探讨敦煌古方大补脾汤对伊立替康腹泻小鼠脾胃虚弱证的干预作用。方法将小鼠随机分为空白组,模型组,大补脾汤低、中、高剂量组(4.29、8.58、17.16 g/kg)。除空白组外,其余各组均腹腔注射伊立替康进行造模,各组给予相应药物7 d。HE染色观察小鼠小肠组织形态改变,RT-qPCR法检测肠道菌群改变和大肠杆菌数量变化,比色法测定结肠内容物β-葡萄糖醛酸苷酶活性,Western blot法检测多药耐药相关蛋白2(mrp2)表达。结果大补脾汤各剂量组小鼠腹泻和肠道黏膜损伤程度均减轻(Pmrp2蛋白表达降低(Pmrp2蛋白表达,减轻伊立替康所致毒性。

关键词：大补脾汤伊立替康腹泻 β-葡萄糖醛酸苷酶 mrp2

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香烟烟雾和LPS诱导的肺部炎症下mrp2表达的变化及其调控机制的研究

香烟烟雾和LPS诱导的肺部炎症下MRP2表达的变化及其调控机制的研究

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作者：方鑫安徽医科大学

学位级别：硕士

mrp2是一种ATP结合盒转运蛋白,参与转运范围广泛的化合物,可以外排肺部慢性炎症因子和烟雾致炎物质,在解毒和化学保护中发挥重要作用。香烟烟雾里的尼古丁、氨、一氧化碳、氮氧化合物等可以对人的肺部造成损伤,已经证明吸烟是导致肺部... 详细信息

mrp2是一种ATP结合盒转运蛋白,参与转运范围广泛的化合物,可以外排肺部慢性炎症因子和烟雾致炎物质,在解毒和化学保护中发挥重要作用。香烟烟雾里的尼古丁、氨、一氧化碳、氮氧化合物等可以对人的肺部造成损伤,已经证明吸烟是导致肺部慢性炎症发生的主要危险因素。FXR是一种多用途核受体,在脂蛋白和糖代谢方面以及各种呼吸系统疾病的发病机制起着重要作用。本实验通过利用香烟烟雾(CS)联合LPS的方法在SD大鼠体内建立肺部炎症模型,利用香烟烟雾提取物(CSE)、LPS以及CSE联合LPS的方法在A549细胞中建立细胞炎症模型,探究mrp2在肺部炎症状态下表达的变化以及其可能的影响机制。目的使用CS联合LPS的方法建立大鼠体内肺部炎症模型,通过单独CSE、单独LPS以及CSE联合LPS建立体外肺部炎症模型,观察相关蛋白和基因表达变化,探究转运蛋白mrp2在肺部炎症状态下表达的变化以及其可能的通路调节机制。方法1、通过CS联合LPS的方法在SD大鼠体内建立肺部炎症模型,检测mrp2和相关炎症因子的表达变化正常对照组和CS+LPS刺激组。CS+LPS刺激组通过用香烟烟雾刺激和气管内滴注LPS的方法建立,正常对照组是通过放置在新鲜空气中和气管内滴注生理盐的方法建立。造模结束后通过观察大鼠的体表特征,以及病理分析肺部状态,考察mrp2以及相关炎症因子的表达。2、通过单独CSE、单独LPS以及CSE+LPS的方法在A549细胞中建立体外炎症模型,检测mrp2和相关炎症因子的表达变化正常对照组、单独CSE组、单独LPS组和CSE+LPS组。作用24小时后,考察mrp2和相关炎症因子的表达。3、通过CSE+LPS在A549细胞中建立体外细胞炎症模型,对FXR进行沉默或过表达操作,检测mrp2、FXR以及相关炎症因子的表达变化正常对照组、模型组、模型组+阴性对照组、模型+沉默FXR组或模型+过表达FXR组。考察mrp2、FXR和相关炎症因子的表达。结果1、体内实验结果表明大鼠模型组与对照组相比,模型组大鼠随着造模时间的增加逐渐出现疲倦现象,呼吸越发急促并伴有咳嗽,通过对肺组织病理学观察可发现随着造模时间的增加肺泡破裂程度逐渐增大、支气管逐渐变窄、气管壁逐渐变厚,免疫组化结果分析显示中性粒细胞以及巨噬细胞的数量逐渐增多,mrp2的数量逐渐减少,通过对组织蛋白和基因分析发现MPP2随着造模时间的增加表达逐渐下调,相反,相关炎症因子表达逐渐上调。2、细胞实验结果表明与正常对照组相比,单独CSE组和CSE+LPS组,mrp2的表达下降,IL-6和TNF-α表达上调;单独LPS组,mrp2的表达不变,IL-6和TNF-α表达上调。3、细胞机制实验结果表明与正常对照组对比,CSE+LPS模型组中mrp2和FXR表达下降,IL-6和TNF-α表达上升;与CSE+LPS模型组比较,CSE+LPS+沉默FXR组mrp2和FXR表达下调,而IL-6和TNF-α的表达上调,CSE+LPS+过表达FXR组mrp2和FXR表达上调,而IL-6和TNF-α的表达下调。结论1、在大鼠体内,CS联合LPS诱导的肺部慢性炎症模型,mrp2的表达随着造模时间的增加逐渐下调。2、在A549细胞中,单独CSE和CSE+LPS诱导的肺部炎症模型,mrp2的表达下调,单独LPS单独CSE诱导的肺部炎症模型,mrp2的表达不变。3、沉默FXR可以下调mrp2的表达,过表达FXR可以上调mrp2的表达。mrp2的表达变化可能与FXR信号通路有关。

关键词：香烟烟雾 mrp2 肺部慢性炎症 FXR

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基于Caco-2细胞的大黄-甘草药对活性成分在线筛选及其肠吸收过程研究

基于Caco-2细胞的大黄-甘草药对活性成分在线筛选及其肠吸收过程...

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作者：李秀江苏大学

学位级别：硕士

目的:大黄为临床常用药材,药理作用广泛,其中蒽醌类是其主要的有效成分。但同时研究发现这类成分对机体有毒性作用,特别是肝肾毒性。所以临床上大黄一般都经过炮制或者配伍后使用。大黄-甘草为临床常用配伍形式,是经典的泻下药对,配伍... 详细信息

目的:大黄为临床常用药材,药理作用广泛,其中蒽醌类是其主要的有效成分。但同时研究发现这类成分对机体有毒性作用,特别是肝肾毒性。所以临床上大黄一般都经过炮制或者配伍后使用。大黄-甘草为临床常用配伍形式,是经典的泻下药对,配伍甘草能够缓和大黄的烈性,降低大黄的毒性。本课题通过Caco-2脂筏色谱对大黄-甘草主要有效成分进行在线筛选,应用分子对接技术验证筛选出的有效成分与外排转运体之间的相互作用关系,考察甘草中主要活性成分对P-糖蛋白功能及BCRP、mrp2外排蛋白表达的影响,最后建立Caco-2细胞吸收转运模型,研究甘草主要有效成分对大黄酸、大黄素吸收转运的影响,以期从药物吸收转运的角度为甘草解毒提供新的依据。方法:首先构建Caco-2细胞脂筏亲和色谱,并对其专属性进行考察,将成功构建的脂筏色谱应用于甘草及大黄主要有效成分的在线筛选。结合筛选结果及文献报道,以甘草主要有效成分甘草酸、甘草次酸、甘草苷及异甘草苷作为小分子配体,以P-糖蛋白、BCRP、mrp2等外排蛋白作为大分子受体,应用分子对接进一步探讨和验证其相互作用关系。MTT实验考察大黄-甘草主要有效成分对Caco-2细胞的毒性,通过大黄-甘草成分联合给药的方式考察甘草有效成分对大黄酸、大黄素的解毒作用,罗丹明-123蓄积实验考察甘草主要有效成分对P-糖蛋白功能的影响。同时,利用Western Blot和RT-PCR实验考察甘草酸、甘草次酸、甘草苷等甘草主要有效成分对P-糖蛋白、BCRP、mrp2外排转运蛋白等表达的影响。在此基础上建立Caco-2细胞单层模型,研究甘草主要有效成分对大黄酸、大黄素吸收转运的影响。结果:课题成功构建了基于Caco-2细胞的脂筏亲和色谱识别模型,并对大黄及甘草的主要有效成分进行了在线识别。结果表明,该模型能特异性识别甘草中的甘草酸、甘草次酸、甘草苷、异甘草苷、异甘草素及光甘草定等成分,以及大黄中的大黄酸和大黄素。分子对接实验证明,甘草中的甘草酸、甘草次酸、甘草苷和异甘草苷均能与P-糖蛋白、BCRP及mrp2的多个活性氨基酸位点产生氢键作用力。细胞毒性实验表明,甘草酸(10μg/m L)、甘草次酸(5μg/m L)均能够降低大黄酸、大黄素对Caco-2细胞的生长抑制作用。在罗丹明蓄积实验中,显示甘草酸、甘草次酸、甘草苷三种成分都能促进P-糖蛋白对罗丹明-123的外排作用。同时,Western Blot和RT-PCR实验研究显示,甘草酸、甘草次酸、甘草苷均可在一定程度上诱导P-糖蛋白、BCRP、mrp2蛋白的表达,其中甘草次酸能够降低紧密连接Claudin-1蛋白的表达。大黄酸和大黄素的双向转运实验中,成功构建了Caco-2细胞单层模型,并证实甘草酸、甘草次酸及甘草苷具有促进大黄酸、大黄素外排的作用。结论:本课题分别从脂筏色谱亲和识别、分子对接、蛋白表达和细胞单层模型等多方面进行研究,证实甘草主要有效成分甘草酸和甘草次酸能不同程度降低大黄酸、大黄素对Caco-2细胞的毒性。其中,甘草酸、甘草次酸和甘草苷对P-糖蛋白、BCRP的表达具有显著诱导作用,甘草酸的诱导作用最强。此外,甘草酸、甘草次酸及甘草苷能够增强P-糖蛋白的外排功能,促进大黄酸、大黄素的外排。推测甘草可通过促进大黄的外排而发挥减毒效果,本课题的研究结果能够从药物吸收转运的角度为甘草的解毒效应提供新的依据。

关键词：大黄-甘草药对解毒作用 Caco-2细胞脂筏色谱分子对接 P-糖蛋白 BCRP mrp2 吸收转运

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基于外排转运体探究齐墩果酸诱导的肝细胞损伤机制

基于外排转运体探究齐墩果酸诱导的肝细胞损伤机制

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作者：曾莉遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:明确齐墩果酸(OA)所致肝细胞损伤对胆汁酸外排转运体的调控作用。方法:(1)分别提取C57BL/6J雄性野生型(WT)小鼠、FXR敲除(FXR-KO)小鼠和BSEP敲除(BSEP-KO)小鼠原代肝细胞,采用“三明治”培养法培养至第3天,给予OA的剂量为0,20,40,6... 详细信息

目的:明确齐墩果酸(OA)所致肝细胞损伤对胆汁酸外排转运体的调控作用。方法:(1)分别提取C57BL/6J雄性野生型(WT)小鼠、FXR敲除(FXR-KO)小鼠和BSEP敲除(BSEP-KO)小鼠原代肝细胞,采用“三明治”培养法培养至第3天,给予OA的剂量为0,20,40,60,80,100μM,给药时间为2 d,通过MTT、LDH法检测原代肝细胞活力的影响。(2)提取雄性C57BL/6J小鼠原代肝细胞,培养至第3天,给予OA剂量为0,20,40,60μM,给药2 d后收集细胞样本。实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测OA对小鼠原代肝细胞中胆汁酸核受体(FXR)和胆汁酸外排转运体(BSEP和mrp2)m RNA转录水平;蛋白免疫印迹法(WB)法检测肝细胞中BSEP蛋白表达水平。给药6 h后收集样本,采用UPLC-MS/MS检测肝细胞中BSEP的外排功能;荧光检测荧光标记的胆管强度。(3)提取雄性C57BL/6J小鼠原代肝细胞,培养至第3天,给予OA剂量为0,20,40,60μM,分别在OA给药前1 h给予GW4064(10μM)、BMS-986020(7.5μM)、Sulfanitran(15μM)、MK571(30μM)进行预处理,给药2 d后收集细胞样本,通过LDH法检测原代肝细胞活力的影响。(4)将C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组和OA组(443.88、641.16mg/kg),FXR激动剂GW4064组(70 mg/kg),GW4064(70 mg/kg)+OA组(641.16 mg/kg),BSEP抑制剂BMS-986020组(10 mg/kg),BMS-986020(10mg/kg)+OA组(641.16 mg/kg),mrp2激动剂组Sulfanitran(60 mg/kg),Sulfanitran(60 mg/kg)+OA组(443.88 mg/kg),mrp2抑制剂MK571组(15mg/kg),MK571(15 mg/kg)+OA组(443.88 mg/kg)。分别在OA给药前7 h和1 h给予GW4064、BMS-986020、Sulfanitran、MK571进行预处理,给药5 h后,再收集血清、肝组织。采用肝生化试剂盒检测肝生化指标。RT-PCR法检测OA对小鼠中FXR、BSEP和mrp2 m RNA转录水平;WB法检测肝细胞中FXR、BSEP和mrp2蛋白表达水平。结果:(1)确定OA的浓度。MTT和LDH结果表明细胞活力在OA药物浓度100μM细胞活力下降至60%左右;LDH活性成浓度梯度增加;倒置光学显微镜下观察细胞形态在OA处理后细胞轮廓消失,间隙增大。因此后续选择0,20,40,60μM作为实验给药浓度。(2)FXR-KO小鼠能够减轻OA诱导的细胞毒性。在40μM OA处理后FXR-KO小鼠细胞存活率高于WT小鼠,细胞毒性降低。(3)BSEP-KO小鼠能够减轻OA诱导的细胞毒性。在BSEP-KO小鼠中,细胞活力在OA药物浓度100μM细胞活力下降至70%左右;倒置光学显微镜下观察细胞形态在OA处理后细胞损伤后细胞轮廓消失,间隙增大;在60μM OA处理后BSEP-KO小鼠细胞存活率高于WT小鼠,细胞毒性降低。(4)确定OA给药时间。荧光检测法鉴定胆管第三天开始形成,因此选择第三天作为实验给药时间。OA处理后显著增加胆管的损伤。(5)OA处理后抑制BSEP的外排功能。与空白组相比,cells组CA-D4总的积累量显著减少;cells+bile duct组CA-D4总的积累量显著减少。胆汁酸排泄指数降低。(6)原代肝细胞经OA处理后,胆汁酸核受体FXR和胆汁酸外排转运体mrp2、BSEP和MDR2 m RNA的转录水平受到抑制。在60μM OA处理后FXR-KO小鼠中mrp2、BSEP m RNA转录水平高于WT小鼠。在60μM OA处理后BSEP-KO小鼠中FXR m RNA转录水平高于WT小鼠。因此mrp2、BSEP在OA诱导的肝损伤中发挥重要作用。(7)OA处理后,胆汁酸核受体FXR和胆汁酸外排转运体mrp2、BSEP和MDR2 m RNA转录水平和蛋白的表达受到抑制。(8)FXR激动剂GW4064可显著减轻OA诱导的肝毒性。GW4064处理后显著减少肝脏的生化指标AST,ALT,AKP,TBA,增加了下游转运蛋白FXR、BSEP m RNA的表达;LDH活性显著减少,肝毒性减轻。(9)BSEP抑制剂BMS-986020可显著增加OA诱导的肝毒性。BMS-986020处理后显著增加的肝脏的生化指标AST,ALT,AKP,TBA;LDH活性显著增加,肝毒性增加。(10)mrp2激动剂Sulfanitran可显著减轻OA诱导的肝毒性。Sulfanitran处理后显著减少肝脏的生化指标AST,ALT,AKP,TBA,LDH活性显著减少,肝毒性减轻。(11)mrp2抑制剂MK571

关键词：齐墩果酸原代肝细胞三明治培养 FXR BSEP GW4064 mrp2

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The effects of multidrug resistance protein 2 (mrp2) and breast cancer resistance protein (Bcrp) on biliary excretion of cefditoren in rats

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沈阳药科大学学报 2008年第S1期25卷 79-80页

作者： MENG Qiang,LIU Qi,WANG Chang-yuan,LIU Ke-xin(Dalian Medical University,Dalian 116044,China)

Objective Cefditoren,a third-generation cephalosporin antibiotics,has been used in clinic extensively.Whether mrp2 or other canalicular transporters such as Bcrp and P-gp are involved in the biliary excretion of cefditoren is unknown.This study is performed to investigate the role of the canalicular transporters in the biliary excretion of cefditoren and the effect of cefditoren on expression levels of some hepatic transporters.Methods We examined the hepatobiliary disposition of cefditoren using probenecid,novobiocin and verapamil as the inhibitors of mrp2,Bcrp and P-gp respectively in perfused rat livers.The concentration of cefditoren in the perfusate and bile were determined by RP-HPLC with ultraviolet detection at 295nm using a mobile phase composed of 0.1% ammonium acetate-methanol(65∶35).We also investigated the effects of cefditoren on expression of hepatic transporters.The change in mRNA of main canalicular transporters was investigated by RT-PCR and Western blot after administration of cefditoren.Results The values for the hepatic extraction ratio did not change,whereas cumulative biliary excretion rates of cefditoren were significantly reduced to 43.78% and 79.52% over 25 min in the perfused probenecid and novobiocin rats,respectively.After oral administration of cefditoren,the expression levels of mrp2,Bcrp,Oat2 mRNA were markedly up-regulated,while Mdr1a and Oct1 mRNA were down-regulated by RT-PCR.In concordance with RT-PCR results,mrp2 expression level was up-regulated by Western blot.Conclusions mrp2 and Bcrp mediated the biliary excretion of cefditoren,whereas P-gp had no contribution to the transportation of cefditoren into bile.The expression levels of mrp2,Bcrp and Oat2 mRNA were up-regulated and the expression levels of Mdr1a and Oct1 mRNA were down-regulated by cefditoren.These results provide important data for drug-drug interaction.

关键词： mrp2 Bcrp cefditoren

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