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mre11参与炎症小体信号通路激活的初步研究

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军事医学 2015年第1期39卷 36-39页

作者：姜君郝钦芳邹德勇张丽萍张小丽葛晓幸杨晓莉安徽大学生命科学学院合肥230039 军事医学科学院生物工程研究所北京100850 武警总医院检验科北京100039

目的探究减数分裂重组蛋白11同系物A(mre11)在不同刺激物诱导下炎症小体激活中的作用和地位。方法利用不同刺激物,如Poly(I∶C)、Poly(d A∶d T)、*** g DNA、293T g DNA和CPPD以及生殖疱疹病毒(HSV)等处理单核巨噬细胞THP-1,通过IL-1... 详细信息

目的探究减数分裂重组蛋白11同系物A(mre11)在不同刺激物诱导下炎症小体激活中的作用和地位。方法利用不同刺激物,如Poly(I∶C)、Poly(d A∶d T)、*** g DNA、293T g DNA和CPPD以及生殖疱疹病毒(HSV)等处理单核巨噬细胞THP-1,通过IL-1β酶联免疫吸附试剂盒(ELISA)筛选出诱导激活炎症小体的有效刺激物;合成si mre11干扰小RNA,转染THP-1细胞,免疫印迹检测mre11干扰下调效率;利用筛选到的阳性刺激物处理mre11干扰下调的细胞,采用ELISA和免疫印迹方法检测mre11对细胞分泌炎性因子IL-1β水平和前胱天蛋白酶(pro-caspase)-1切割的影响。结果在mre11干扰下调的THP-1细胞中,Poly(I∶C)、Poly(d A∶d T)、*** g DNA和293T g DNA刺激激活细胞分泌的IL-1β水平以及前胱天蛋白酶-1切割的水平均有不同程度降低。结论mre11参与由DNA以及RNA刺激激活的炎症小体信号通路。

关键词： mre11 RNA,小分子干扰白细胞介素1β 炎症小体激活

mre11对食管鳞癌细胞凋亡和增殖的作用研究

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肿瘤防治研究 2022年第5期49卷 396-402页

作者：张燕张红蕊孟丹丹弋振营徐志巧开封市中心医院肿瘤诊疗中心开封475000

目的探讨mre11对食管鳞癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法mre11 siRNA转染食管鳞癌细胞,下调mre11表达;AKT激动剂SC79(0、0.1、0.5、1、1.5、1.8和2μg/ml)分别孵育24 h;构建过表达载体pcDNA.3.1-c-myc,与mre11 siRNA共转染细胞... 详细信息

目的探讨mre11对食管鳞癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法mre11 siRNA转染食管鳞癌细胞,下调mre11表达;AKT激动剂SC79(0、0.1、0.5、1、1.5、1.8和2μg/ml)分别孵育24 h;构建过表达载体pcDNA.3.1-c-myc,与mre11 siRNA共转染细胞;Western blot法检测食管鳞癌细胞Ec9706和TE-1中mre11、p-AKT和c-myc的蛋白表达量;Annexin-V FITC/PI试剂盒检测Ec9706和TE-1细胞凋亡;Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性;BrdU方法检测Ec9706和TE-1细胞增殖能力。结果Ec9706和TE-1细胞中mre11的蛋白表达较人食管上皮细胞Het-1A明显升高;mre11 siRNA转染后,Ec9706和TE-1细胞中AKT磷酸化水平及mre11和c-myc的蛋白表达量显著降低;下调mre11显著促进Ec9706和TE-1细胞凋亡,提高caspase-3活性,抑制食管鳞癌细胞增殖能力;下调mre11后,SC79(1.5、1.8和2μg/ml)显著提高AKT磷酸化水平,同时逆转下调mre11对c-myc蛋白表达量和细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。过表达c-myc抑制下调mre11对细胞增殖的抑制作用和对细胞caspase-3活性的促进作用。结论下调mre11可通过调控AKT和c-myc抑制食管鳞癌细胞增殖及促进细胞凋亡。

关键词： mre11 AKT c-myc 食管鳞癌增殖凋亡

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水稻mre11基因不同等位变异的创建与功能解析

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水稻MRE11基因不同等位变异的创建与功能解析

作者：曹艺伟扬州大学

学位级别：硕士

有丝分裂和减数分裂是生物体中非常重要的细胞分裂过程。有丝分裂在维持生物个体的正常生长和发育中起着重要作用;减数分裂保证有性生殖生物世代之间染色体数目的稳定性,亦为有性生殖过程中创造变异提供了遗传的物质基础。DNA双链断裂(D... 详细信息

有丝分裂和减数分裂是生物体中非常重要的细胞分裂过程。有丝分裂在维持生物个体的正常生长和发育中起着重要作用;减数分裂保证有性生殖生物世代之间染色体数目的稳定性,亦为有性生殖过程中创造变异提供了遗传的物质基础。DNA双链断裂(DSB)作为一种DNA损伤现象,对有丝分裂和减数分裂都有着重要影响。mre11是一个与细胞分裂相关的重要基因,已有研究表明该基因与DNA损伤修复有着重要关系。mre11与RAD50和NBS1共同组成MRN复合体,参与DNA损伤修复,任一蛋白的缺陷都会严重影响DNA修复过程。目前有关Osmre11基因对水稻有丝分裂和减数分裂调控的研究较少,因此我们以Osmre11为对象,通过对该基因在水稻中不同等位突变的表型分析及目标蛋白的功能研究,来探索mre11蛋白在DSB修复途径中的详细作用,以期望初步解析其在有丝分裂及减数分裂这两种细胞分裂方式中的功能差异。本研究中,我们通过T-DNA插入突变体鉴定及CRISPR/Cas9技术,获得水稻Osmre11三个不同等位突变体,分别命名为Osmre11-1、Osmre11-2和Osmre11-3。通过对三者营养生长及生殖生长的详细观察和分析,我们发现不同Osmre11等位突变体均表现出明显的配子发生缺陷,植株不育。细胞学分析显示突变体花粉母细胞染色体行为异常,终变期及中期Ⅰ发生染色体黏连,后期Ⅰ产生大量染色体碎片,导致遗传物质不能在子代细胞均等分配,致使植株不育。以上减数分裂异常表型与已报道的Osmre11RNAi株系中获得的结果一致。在此基础上,我们采用免疫染色方法检测突变体中DSB形成和修复相关蛋白的定位情况,以及联会复合体形成状态。结果显示,DSB指示信号γH2AX定位与野生型中结果相比没有显著差异,突变体前期Ⅰ早期染色体轴相关蛋白PAIR2和PAIR3可组装成线,但是联会复合体横丝蛋白ZEP1的装配及延伸无法正常进行。而DSB修复相关蛋白OsDMC1则无法定位于突变体减数分裂染色体上,同时DSB修复产物交叉的指示蛋白HEI10的定位亦受到明显影响。上述结果表明Osmre11对于水稻减数分裂同源重组及同源染色体联会是必须的。通过对水稻Osmre11-1、Osmre11-2和Osmre11-3这三个不同等位突变体营养生长观察发现,Osmre11-1和Osmre11-2的营养生长受到了明显抑制,幼苗和成株的高度约为野生型高度的50%;与之相异的是,Osmre11-3突变植株的营养生长基本正常,植株高度未受影响。比较分析Osmre11-1、1-2和Osmre11-3的突变位点,我们发现三个不同等位突变体中突变基因均编码蛋白发生移码并提前终止,而(Osmre11-2和OOsmre11-3两者编码的截断蛋白仅相差29个氨基酸。结合表型与序列分析我们推测这29个氨基酸很可能是Osmre11调控水稻有丝分裂的特异位点。综上所述,本研究通过对水稻Osmre11基因不同等位突变的表型研究及蛋白结构分析,证明Osmre11通过参与水稻性母细胞同源修复过程而调控减数分裂。这种调控作用依赖于Osmre11蛋白整体功能,不存在位点差异;而Osmre11在水稻有丝分裂过程中的重要作用很可能存在氨基酸位点差异性。有关Osmre11对水稻两种细胞分裂方式的差异调控,需要进一步研究及验证。

关键词：减数分裂有丝分裂 mre11 同源重组 DSB

果蝇mre11蛋白精氨酸甲基化鉴定及在DNA损伤应答中的功能研究

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果蝇Mre11蛋白精氨酸甲基化鉴定及在DNA损伤应答中的功能研究

作者：赵海英大连医科大学

学位级别：硕士

MRN(mre11/Rad50/Nbs1)复合物在真核生物中高度保守,是DNA损伤应答中的主要修复复合物,在DNA损伤的识别、信号传导以及修复等过程中发挥重要的功能。mre11蛋白是MRN复合物的核心成分,具有核酸酶的活性。它是DNA双链断裂修复过程的关键因... 详细信息

MRN(mre11/Rad50/Nbs1)复合物在真核生物中高度保守,是DNA损伤应答中的主要修复复合物,在DNA损伤的识别、信号传导以及修复等过程中发挥重要的功能。mre11蛋白是MRN复合物的核心成分,具有核酸酶的活性。它是DNA双链断裂修复过程的关键因子,可以对DNA断裂末端进行切割处理,从而修复DNA损伤。当人类的mre11基因发生突变时,导致共济失调性毛细血管扩张样紊乱综合症(Ataxia-Telangiectasia-Like Disorder,ATLD)。当小鼠mre11基因缺失时,导致小鼠胚胎死亡。而且,mre11基因在维持基因组的稳定性、DNA损伤后G2/M细胞周期检验点的激活及端粒稳定性等方面也发挥了很重要的作用。大量文献证明,翻译后修饰对于核酸结合蛋白的功能具有重要的调节作用。研究发现,哺乳动物的mre11蛋白与蛋白质精氨酸甲基转移酶(Protein Arginine N-methylation Enzyme 1,PRMT1)相互作用,mre11蛋白的C端具有一个甘氨酸-精氨酸富集区(Glycine-Arginine rich domain,GAR),此区域精氨酸被PRMT1催化发生甲基化修饰,并且这种修饰形式参与调节mre11蛋白在DNA损伤应答中的各种功能。例如,mre11RK/RK突变(精氨酸被赖氨酸替代)的小鼠胚胎成纤维细胞对伽马电离辐射高度敏感,辐射后细胞中畸形染色体增加,G2/M细胞周期检验点缺陷、ATR/CHK1信号通路缺失,及RPA和RAD51的聚集减少。果蝇的mre11高度保守,其缺失导致端粒融合及G2/M细胞周期检验点缺失。果蝇mre11是否被PRMT1的同源基因DART1甲基化,甲基化是否影响到DNA损伤应答功能,目前还不清楚。因此,实验室拟研究果蝇mre11精氨酸甲基化在DNA损伤应答中的功能。我们通过比对多物种间的mre11蛋白序列,发现果蝇mre11蛋白质的C端存在保守的GAR区域,具有6个精氨酸位点,分别为R559,R563,R565,R569,R571和R579。通过体外甲基化实验证明mre11蛋白质全长及mre11-C247蛋白可以被DART1甲基化。应用位点特异性的甲基化抗体检测分析GAR区域存在4个甲基化精氨酸:R559,R563,R565和R569。将果蝇mre11蛋白进行组分分离后检测,发现甲基化的mre11蛋白以核内可溶蛋白和染色质结合蛋白形式存在。用si RNA敲低DART1的表达时,mre11精氨酸甲基化水平减低。通过免疫共沉淀方法,我们发现果蝇mre11与DART1相互作用,并且不依赖于mre11的GAR区域。为了更清楚了解果蝇mre11精氨酸甲基化在DNA损伤应答中的功能,我们建立了甲基化位点的原位突变果蝇(精氨酸突变为丙氨酸,R→A突变):mre11 R559A,mre11 R559A,mre11 R559A,mre11 R563A,mre11 R565A,mre11R569A,mre11 4RA,mre11 4RA。通过电离辐射处理这些点突变果蝇的纯合三期幼虫,发现突变果蝇对电离辐射表现出高度敏感性,证明果蝇mre11精氨酸甲基化在DNA损伤应答中具有非常重要的功能,研究其具体机制对于人类疾病的治疗和预防具有重要的意义。

关键词： mre11 DNA损伤修复精氨酸甲基化 DART1

果蝇mre11精氨酸突变动物模型的建立及G2/M检验点检测

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果蝇Mre11精氨酸突变动物模型的建立及G2/M检验点检测

作者：李丽娟大连医科大学

学位级别：硕士

在生物体中,DNA不断受到内源和外源损伤因子的威胁。为了保护遗传信息的完整,细胞在生物进化过程中形成了一整套复杂的监控网络,用以监测基因组的完整性,称为DNA损伤应答。该网络监测DNA损伤的存在,传递损伤信号,实现多步的生物学反应,... 详细信息

在生物体中,DNA不断受到内源和外源损伤因子的威胁。为了保护遗传信息的完整,细胞在生物进化过程中形成了一整套复杂的监控网络,用以监测基因组的完整性,称为DNA损伤应答。该网络监测DNA损伤的存在,传递损伤信号,实现多步的生物学反应,包括细胞周期阻滞、DNA损伤修复、端粒维持和细胞凋亡等。MRN复合物(酵母中MRX)由mre11、Rad50和Nbs1(Xrs2)组成,是DNA损伤应答的一个关键组成部分,参与细胞周期检验点和损伤修复的各个方面。MRN复合物可以结合在染色体DNA上,识别双链断裂,发出损伤信号,并在DNA修复起着重要的作用。研究表明,MRN复合物突变会导致肿瘤或衰老相关疾病的发生。mre11是MRN复合物极其重要的成员之一。到目前为止,关于mre11的结构和功能已经进行了大量的研究。mre11是一种高度保守的70 k Da大小的蛋白,它的N端具有Mn/Mg依赖性磷酸酯酶结构域,中部具有一个DNA结合结构域,C端含有一个甘氨酸-精氨酸富集区(Glycine and Arginine-Rich,GAR)。mre11的主要功能包括单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)核酸内切酶活性、3’–5’双链DNA(double-stranded DNA,dsDNA)核酸外切酶活性、较弱的DNA解旋酶活性及双链断裂修复和激活细胞周期检验点的功能。研究发现,敲除小鼠mre11引起小鼠胚胎致死。人的mre11基因突变导致共济失调毛细血管扩张样疾病(Ataxia Telangiectasia Like Disorder,ATLD),患者典型表现为共济失调、神经退行性病变、免疫缺陷及癌症易发等。研究mre11的功能将有助于人们了解相关疾病的发生发展。mre11 GAR区域富含精氨酸,可以被蛋白精氨酸甲基转移酶PRMT1甲基化,调节mre11的功能。研究发现,尽管mre11 GAR区精氨酸的甲基化不影响ATM信号通路的激活和MRN复合物的形成及定位,但是对于mre11核酸外切酶活性的维持、细胞周期检验点的激活及双链断裂损伤的修复至关重要。我们实验室以果蝇为动物模型,长期致力于DNA损伤应答的研究。前期工作中成功建立了mre11缺失的果蝇株,发现mre11缺失的果蝇死于成蛹晚期,为研究mre11的体内生物学功能提供了较为理想的动物模型。前期研究将mre11蛋白序列进行同源比对,发现mre11的GAR区域较为保守;体外甲基化实验发现果蝇mre11蛋白可以被果蝇精氨酸甲基转移酶1(Drosophila Arginine Methyltransferase 1,DART1)甲基化;mre11与DART1之间存在蛋白质间的相互作用,且这种相互作用不依赖GAR区域;为了进一步确定GAR区域精氨酸甲基化情况,针对GAR区域六个精氨酸位点分别制备了相应的位点特异性甲基化抗体,发现R559、R563、R565、R569四个位点可被甲基化。为了进一步研究果蝇mre11精氨酸甲基化在DNA损伤应答中的功能,本研究采用经典的果蝇Ends-In方法,建立了mre11 4个甲基化位点的点突变果蝇和所有位点同时突变的4点突变果蝇;采用Southern Blot、基因组DNA测序和cDNA测序证实得到了正确的mre11突变果蝇;对mre11突变果蝇进行检测,发现果蝇mre11精氨酸甲基化缺失导致突变动物对电离辐射高度敏感;磷酸化组蛋白3-PH3抗体检测发现,GAR区域精氨酸甲基化突变不影响mre11调节DNA损伤导致的G2/M检测点功能。

关键词： DNA损伤应答 mre11 DART1 精氨酸甲基化

果蝇mre11蛋白精氨酸甲基化位点检测及相关突变果蝇构建

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果蝇Mre11蛋白精氨酸甲基化位点检测及相关突变果蝇构建

作者：袁卿兰州大学

学位级别：硕士

mrell是mre11/RAD50/NBN蛋白复合物(MRN复合物)的主要成分之一。MRN复合物进化上高度保守,在DNA损伤的识别、信号传导以及下游修复等过程中行使重要的功能。mrell蛋白具有核酸酶的活性,可以对DNA断裂末端进行切割处理,在MRN复合物的结... 详细信息

mrell是mre11/RAD50/NBN蛋白复合物(MRN复合物)的主要成分之一。MRN复合物进化上高度保守,在DNA损伤的识别、信号传导以及下游修复等过程中行使重要的功能。mrell蛋白具有核酸酶的活性,可以对DNA断裂末端进行切割处理,在MRN复合物的结构和功能中处于核心地位。当人类的mre11基因发生突变时,会导致共济失调性毛细血管扩张症样紊乱综合症(ATLD)。如果存在外源损伤因素,mre11基因突变会导致癌症发生,目前已经发现mre11基因突变发生于多种肿瘤中。在小鼠实验中,mre11基因缺失会引起小鼠胚胎致死。因此,研究mre11在DNA损伤修复过程中的的功能调控对于相关疾病的预防及治疗至关重要。大量的研究结果表明,翻译后修饰对于核酸结合蛋白的功能具有重要的调节作用。近期的研究发现,mre11的C端含有一个甘氨酸-精氨酸富集区(Glycine-Arginine rich domain),可以被甲基转移酶PRMT1介导发生精氨酸甲基化修饰,并且这种修饰参与调节mre11在DNA损伤修复中的各种功能。但是,到目前为止尚未见到在动物体水平研究mre11精氨酸甲基化调控的相关报道,由于mre11基因缺失会导致小鼠胚胎死于发育早期,所以,以小鼠作为模型研究mre11基因的功能受到了很大的限制。这就迫切需要建立一种其它较高等的真核生物模型,用来在动物整体水平研究mre11基因的功能和调节。秘晓林实验室的前期结果表明,mre11基因缺失的果蝇会死于成蛹阶段的晚期,使其成蛹前的幼虫成为理想的动物模型。为了验证果蝇作为精氨酸甲基化研究模型的可行性并构建相关突变果蝇,我们首先通过体外蛋白纯化,得到果蝇中的甲基转移酶DAR11和靶蛋白mre11及其N端、C端和中间区域3个分段,并通过同位素标记在体外甲基化反应中检测到mre11的甲基化修饰;然后,使用clustalw2和align软件进行同源比对,表明果蝇中的mre11在结构上高度保守,同样在C端包含了GAR结构域;再通过甲基化位点预测软件MeMo,分析了果蝇的mre11序列,结果共预测出7个精氨酸甲基化位点,其中有6个处于GAR区,分别为R559、R563、R565、R569、R571和R579。我们针对以上6个处于GAR区的预测位点,分别制备了位点特异的甲基化抗体,通过蛋白免疫印迹已经检测到果蝇0-4h胚胎中的2个甲基化位点,分别为R565和R571;同时,我们成功构建了用于mrell基因敲除的转基因果蝇,通过Targeting步骤,得到了潜在的原位插入attP重组位点的基因敲除果蝇并成功构建了甲基化预测位点精氨酸到丙氨酸的突变载体,该载体带有attB重组位点,可以用来建立甲基化位点特异的基因突变果蝇,为在动物体水平研究mre11精氨酸甲基化的功能提供理想的模型。通过这个模型,我们可以更加深入的研究mre11蛋白翻译后修饰,特别是甲基化修饰对其功能的调节模式,为人类相关疾病的预防和治疗提供新的靶点和策略。

关键词： DNA损伤修复 mre11 精氨酸甲基化基因敲除原位点突变

CBP、NOX2、Ku70及mre11在黑色素瘤细胞多种死亡方式中的作用研究

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CBP、NOX2、Ku70及Mre11在黑色素瘤细胞多种死亡方式中的作用研究

作者：文雅蕾河北大学

学位级别：硕士

目的:探究由CBP、NOX2、Ku70及mre11组成的基因转录调控网络调控人类黑素瘤细胞凋亡、副凋亡及坏死的机制,为发现联合调控ROS及DNA损伤修复机制治疗恶性黑色素瘤的siRNA靶向药物,和CBP缺失所致疾病的分子机制提供一定的研究基础。方法:1... 详细信息

目的:探究由CBP、NOX2、Ku70及mre11组成的基因转录调控网络调控人类黑素瘤细胞凋亡、副凋亡及坏死的机制,为发现联合调控ROS及DNA损伤修复机制治疗恶性黑色素瘤的siRNA靶向药物,和CBP缺失所致疾病的分子机制提供一定的研究基础。方法:1.分别设计合成mre11、Ku70的特异性的siRNA各3对,采用脂质体高效转染试剂Expect2000将siRNA转染进入黑色素瘤A375细胞。***-qPCR检测转染24 h后CBP、Ku70和mre11的mRNA水平。选用70%敲低效率作为CBP siRNA和Ku70 siRNA、CBP siRNA和mre11 siRNA单转染及共转染的剂量。***-8和流式细胞术检测转染24 h后对A375细胞增殖、死亡的影响。4.连续跟踪转染siRNA后A375细胞形态学的变化,流式细胞术转染24 h后检测ROS水平。***-qPCR及Western Blot检测转染24 h后A375细胞NOX2的表达。***染色连续跟踪转染24 h后A375细胞核的变化。***-qPCR及Western Blot检测转染24 h后A375细胞中Ku70的表达。8.流式细胞术检测转染24 h后对A375细胞各项周期分布的影响。9.独立重复实验3次,使用SPSS 22.0对结果进行统计学分析,P＜0.05为差异有统计学意义。结果:***、Ku70 siRNA以剂量依赖性的方式下调黑色素瘤A375细胞中CBP、Ku70mRNA的表达（P＜0.05）。3 fmol/cell CBP siRNA和2.5 fmol/cell Ku70 siRNA的敲低效率均为70%。CBP siRNA、Ku70 siRNA以剂量依赖性的方式抑制了A375细胞的增殖（P＜0.05）,并诱导细胞出现凋亡、坏死、副凋亡。在70%的敲低效率下,单独或同时敲低CBP和Ku70后对A375细胞死亡产生的影响差异无统计学意义（P＞0.05）。单独或同时敲低CBP和Ku70后均使细胞出现细胞质泡沫化。单独或同时敲低CBP和Ku70后均升高细胞内ROS水平（P＜0.05）。单独或同时敲低CBP和Ku70后均上调细胞内NOX2的表达（P＜0.05）。单独或同时敲低CBP和Ku70后均使细胞出现核降解（P＜0.05）。敲低CBP后下调了A375细胞内Ku70的表达（P＜0.05）。单独或同时敲低CBP和Ku70后均诱导A375细胞出现S期阻滞。***11 siRNA以剂量依赖性的方式降低了黑色素瘤A375细胞中mre11 mRNA的表达（P＜0.05）。3 fmol/cell mre11 siRNA和3 fmol/cell CBP siRNA的敲低效率均为70%。mre11 siRNA以剂量依赖性的方式升高A375细胞的ROS水平,抑制其增殖,并诱导其凋亡、坏死（P＜0.05）。在70%敲低效率下,CBP-mre11 siRNA组较CBP siRNA组的细胞凋亡率更高,呈叠加效应（P＜0.05）。在70%敲低效率下,CBP-mre11 siRNA组较CBP siRNA组的细胞核降解情况更为严重。在70%敲低效率下,CBP-mre11 siRNA组较CBP siRNA组的S期细胞阻滞更严重,呈叠加效应（P＜0.05）,而ROS结果差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:单独或同时敲低CBP和Ku70均能通过上调NOX2的表达,A375细胞内受NOX氧化酶调控的ROS水平升高,出现细胞质泡沫化、S期细胞阻滞,诱导细胞副凋亡、坏死。CBP siRNA通过下调了A375细胞内的Ku70的表达量,减少了Ku70-BAX复合物的数量,增加了细胞内游离BAX,BAX触发了线粒体-BAX凋亡途径,使细胞出现以细胞核降解为特征的细胞凋亡。本研究表明CBP、Ku70、NOX2形成了基因调控网络,调节人黑色素瘤A375细胞的副凋亡、坏死和凋亡。mre11与CBP作用于调控恶性黑色素瘤细胞内ROS水平的同一途径。敲低A375细胞中的mre11会使ROS升高、S期细胞阻滞而抑制细胞增殖,出现以细胞质泡沫化为特征的坏死;且同时敲低mre11和CBP后,核降解情况更为严重,表明mre11可能参与修复CBP敲低所导致的核降解,调控以核降解为特征的细胞凋亡。

关键词： A375 RNA干扰细胞凋亡 CBP Ku70 mre11

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mre11基因在食管鳞癌中的表达

中国卫生产业 2012年第9期9卷 21-22页

作者：刘青松朱兴春张均袁国华罗雄燕杨明辉唐中川北医学院医学检验系川北医学院附属医院检验科川北医学院附属医院风湿免疫研究所四川南充637000

目的探讨mre11 mRNA在食管癌组织中表达,并探讨其与肿瘤病理参数的相关性。方法收集22例明确诊断的食管癌中心组织及其相应癌旁组织,提取总RNA并逆转录成cDNA,采用SBYR Green适时荧光定量方法检测mre11基因在22例食管鳞癌中心组织及其... 详细信息

目的探讨mre11 mRNA在食管癌组织中表达,并探讨其与肿瘤病理参数的相关性。方法收集22例明确诊断的食管癌中心组织及其相应癌旁组织,提取总RNA并逆转录成cDNA,采用SBYR Green适时荧光定量方法检测mre11基因在22例食管鳞癌中心组织及其边缘组织mRNA水平的表达,并分析其与性别、年龄、临床分期、淋巴结转移与否以及肿瘤大小等的相关性。结果 mre11 mRNA在食管鳞癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P=0.006)。虽然其表达与年龄、分化程度、有无淋巴结转移以及有无吸烟、饮酒史均无关,但与临床分期和肿瘤生长速度有关,T1和T2期患者的mre11 mRNA的表达显著低于T3和T4期患者(P=0.000),肿瘤生长较慢的患者mre11 mRNA的表达也低于生长较快的患者(P=0.012)。结论 mre11的表达在食管鳞癌组织中的表达受到抑制可能为食管鳞癌发生的分子机制;且mre11在较低的临床分期和生长速度较慢的食管鳞癌中表达低于较高的临床分期和生长速度较快的食管鳞癌中表达,mre11可能在食管鳞癌的发生发展过程具有重要意义。

关键词：食管癌磷癌 mre11 端粒

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mre11多克隆抗体的制备及初步鉴定

西部医学 2013年第3期25卷 325-328页

作者：张付平王蕾郭莲娣王海斌任来峰曾鸣刘鳐马蕾四川大学华西基础医学与法医学院组织胚胎学和神经生物学教研室四川成都610041 四川大学华西第二医院发育与干细胞研究所四川成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041

目的原核表达人mre11蛋白,并制备出mre11蛋白的多克隆抗体,为研究mre11蛋白功能奠定基础。方法以人cDNA文库为模板,构建出原核表达质粒PET41a-mre11,然后转化受体菌*** BL21,再经IPTG诱导表达,通过采用GST亲和纯化获得GST-融合蛋白,将... 详细信息

目的原核表达人mre11蛋白,并制备出mre11蛋白的多克隆抗体,为研究mre11蛋白功能奠定基础。方法以人cDNA文库为模板,构建出原核表达质粒PET41a-mre11,然后转化受体菌*** BL21,再经IPTG诱导表达,通过采用GST亲和纯化获得GST-融合蛋白,将该融合蛋白免疫兔以制备出mre11多抗血清,最后采用western-blot及免疫荧光等方法检测其在细胞中的特异性。结果在受体菌*** BL21中成功诱导表达出了GST-mre11融合蛋白,免疫新西兰大白兔后获得了高效价的mre11蛋白抗血清,IP、western-blot及免疫荧光等多种方法检测证实该抗血清能够特异性识别293T和U2OS细胞株中mre11蛋白,并能够正确清楚检测293T和U2OS细胞株中的mre11表达情况,具有良好的特异性和高效性。结论成功制备出了兔抗人mre11蛋白的多克隆抗体,为深入研究mre11蛋白在DNA损伤中的功能奠定了基础。

关键词： mre11 多克隆抗体原核表达 MRN复合体