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mr-1基因功能研究:促进肝癌细胞增殖、粘附和迁移

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MR-1基因功能研究:促进肝癌细胞增殖、粘附和迁移

mr-1基因在白血病K562细胞中的功能研究

2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：任开环邵荣光中国医学科学院医药生物技术研究所

肌原纤维形成调节因子1(Myofibrillogenesis regulator 1,mr-1)是一种新发现的人类功能基因,可与肌球蛋白轻链2(MLC2)之间相互作用。已有研究表明mr-1在人肝癌细胞HepG2中的表达高于正常细胞,提示mr-1有可能与肿瘤的增殖和迁移相关。阐... 详细信息

肌原纤维形成调节因子1(Myofibrillogenesis regulator 1,mr-1)是一种新发现的人类功能基因,可与肌球蛋白轻链2(MLC2)之间相互作用。已有研究表明mr-1在人肝癌细胞HepG2中的表达高于正常细胞,提示mr-1有可能与肿瘤的增殖和迁移相关。阐明该基因在肿瘤增殖、迁移以及细胞信号转导通路中的作用及其机理,将有助于肿瘤的诊断与防治。目的:探索mr-1基因在肿瘤细胞增殖、粘附和迁移过程中的作用及机制,阐明mr-1作为一个肿瘤治疗的新靶点的可行性。方法:1、RNA干扰技术沉默mr-1表达后,通过细胞生长曲线法和克隆形成实验检测mr-1对HepG2细胞增殖速率的影响;Transwell实验检测mr-1对HepG2细胞迁移能力的影响;细胞基质粘附试验检测mr-1对细胞与基质之间粘附能力的影响。2、构建稳定表达mr-1-shRNA的pCD-sh-mr-1载体,将之稳定转染HepG2细胞,建立mr-1稳定沉默的HepG2/mr-1(-)细胞系。3、检测HepG2/mr-1(-)细胞系生长速率,细胞迁移能力,细胞与基质粘附能力以及细胞裸鼠皮下移植瘤生长速率的变化。4、通过Western Blotting方法检测mr-1对MLC2-FAK-Akt信号转导通路的影响。5、采用基因芯片技术检测mr-1沉默后细胞增殖和运动相关基因表达的变化。结果:1、经mr-1-siRNA处理后,HepG2细胞生长速度明显减慢,克隆形成率抑制率为66.81%;细胞迁移能力下降,抑制率为62.73%;细胞对纤维粘连蛋白(FN)的粘附能力下降。2、成功构建mr-1稳定沉默细胞系HepG2/mr-1(-)。3、HepG2/mr-1(-)细胞系其体外增殖速率降低,克隆形成率抑制率为31.77%;细胞迁移能力下降,抑制率为56.55%;HepG2/mr-1(-)细胞对FN的粘附能力明显下降;体内成瘤性试验表明,HepG2/mr-1(-)细胞裸鼠皮下移植瘤生长速率与HepG2细胞相比明显降低,抑制率达91.01%。说明mr-1可促进肿瘤细胞的生长,运动以及粘附。4、mr-1-siRNA抑制MLC2、粘着斑激酶(FAK)和Akt活性以及张力纤维的形成,并可抑制FN激活的FAK/Akt活性;将mr-1的表达质粒转染细胞后,细胞内MLC2、FAK和Akt磷酸化水平显著升高,该作用可被MLC激酶抑制剂阻断。5、基因芯片结果显示mr-1-siRNA处理后,细胞内192个基因上调,134个基因发生下调,其中细胞骨架调节、MAPK、细胞周期调节等通路的相关基因均受mr-1的影响。结论:mr-1基因可能与肿瘤的发生、发展和转移相关,其作用机制是通过激活MLC2-FAK-Akt信号通路,促进肿瘤细胞增殖、粘附和迁移。mr-1有可能成为肿瘤治疗的潜在靶点。

关键词： mr-1 RNA干扰肿瘤转移

来源： cnki会议评论

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MR-1基因在白血病K562细胞中的功能研究

靶向mr-1基因shRNA表达载体的构建及其对白血病K562细胞增殖的抑制作用

2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：赵午莉邵荣光中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所

肌原纤维形成调节因子1(Myofibrillogenesis regulator 1,mr-1)是一种新发现的人类功能基因。已有研究表明该基因在肿瘤细胞中的表达高于正常细胞,提示mr-1基因可能与肿瘤相关,对该基因在白血病肿瘤细胞中的表达、增殖、分化以及转移进... 详细信息

肌原纤维形成调节因子1(Myofibrillogenesis regulator 1,mr-1)是一种新发现的人类功能基因。已有研究表明该基因在肿瘤细胞中的表达高于正常细胞,提示mr-1基因可能与肿瘤相关,对该基因在白血病肿瘤细胞中的表达、增殖、分化以及转移进行研究,将有利于白血病的成因和治疗研究。目的:探索mr-1基因在白血病肿瘤细胞中增殖、分化和转移过程中的作用及机制,阐明mr-1作为一个肿瘤治疗的新靶点的可行性。方法:1采用RT-PCR方法以及Western blot方法检测mr-1基因在正常细胞和多种白血病肿瘤细胞间的表达差异。2、利用RNA干扰技术沉默mr-1表达,观察细胞形态的改变;用肿瘤细胞生长曲线法和克隆形成实验检测白血病细胞K562增殖速率的改变。3、RNA干扰沉默mr-1表达后,对白血病肿瘤细胞分化和转移的影响。结果:1、四株白血病肿瘤细胞中mr-1的表达均高于正常细胞,其中K562细胞的表达水平最高,选取该株细胞进行后续实验研究。2、白血病细胞株K562经mr-1-siRNA处理48小时后,和对照组相比,组胞膜的折光率下降,细胞皱缩,变小,半贴壁能力下降;生长速度明显减慢,克隆形成率抑制率下降3、mr-1在白血病细胞分化和转移中的作用正在研究之中。结论:mr-1基因可能与白血病的发生和增殖有关。

关键词： mr-1 白血病 RNA干扰

来源： cnki会议评论

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中国医药生物技术 2013年第1期8卷 6-12页

作者：赵午莉任开环李保卫邵荣光中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤室北京100050

目的构建一种靶向mr-1基因的shRNA稳定表达载体,并检验其对白血病K562细胞增殖能力的影响。方法以带有H1启动子可稳定表达靶基因shRNA的pCD-shRNA为载体,采用BamHI和HindIII酶切pCD-shRNA并回收线性空载体,采用T4DNA连接酶将mr-1shRNA模... 详细信息

目的构建一种靶向mr-1基因的shRNA稳定表达载体,并检验其对白血病K562细胞增殖能力的影响。方法以带有H1启动子可稳定表达靶基因shRNA的pCD-shRNA为载体,采用BamHI和HindIII酶切pCD-shRNA并回收线性空载体,采用T4DNA连接酶将mr-1shRNA模板DNA双链与酶切后线性化的载体连接,从而建立稳定表达mr-1-shRNA的载体。将构建的pCD-shRNA-mr-1载体转染人白血病K562细胞,建立稳定沉默mr-1的细胞系,采用细胞计数法和westernblot对mr-1沉默后细胞的增殖能力和信号通路进行检测分析。结果成功构建了可稳定表达mr-1-shRNA的载体pCD-shRNA-mr-1,经酶切鉴定及基因测序测定,结果表明载体中的mr-1-shRNA与设计序列完全相符,目的基因序列准确无误。将pCD-shRNA-mr-1转染白血病K562细胞,建立了两株稳定沉默mr-1的K562/mr-1细胞株。细胞增殖实验表明,mr-1稳定沉默细胞的增殖能力显著降低;细胞信号通路结果表明,mr-1稳定沉默细胞Jak2和Bcr-Abl的磷酸化水平降低。结论利用pCD-shRNA质粒构建了一个可表达mr-1-shRNA的表达载体,该载体转染K562细胞后引起细胞增殖能力降低。研究表明mr-1基因在肿瘤细胞增殖过程具有促增殖作用,其机制是降低Jak2和Bcr-Abl的磷酸化水平。

关键词：基因表达调控白血病 RNA干扰 mr-1

mr-1活化PI3K/Akt途径抑制mPTP开放减轻大鼠肾脏缺血/再灌注损伤

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中国病理生理杂志 2015年第10期 1881-1881页

作者：王晓礽丁瑞冒慧敏刘蜜陶天琪刘秀华谢院生中国人民解放军总医院病理生理学研究室

目的:本研究旨在探明线粒体功能蛋白肌纤生成调节因子1(mr-1)是否通过募集丝/苏氨酸蛋白激酶p-Akt转位至线粒体,通过维持线粒体形态完整,抑制线粒体膜通道转换孔(mP TP)开放,减轻肾脏I/R损伤。方法:以肾包膜下注射mr-1腺病毒或siRNA干... 详细信息

目的:本研究旨在探明线粒体功能蛋白肌纤生成调节因子1(mr-1)是否通过募集丝/苏氨酸蛋白激酶p-Akt转位至线粒体,通过维持线粒体形态完整,抑制线粒体膜通道转换孔(mP TP)开放,减轻肾脏I/R损伤。方法:以肾包膜下注射mr-1腺病毒或siRNA干预大鼠肾脏mr-1表达,并在此基础上复制肾脏I/R模型,检测不同mr-1水平和细胞分布对肾脏损伤、线粒体

关键词： Akt 转位线粒体作曲法粒线体 mr-1 大鼠肾脏

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多生苗油菜mr—1研究初报

湖南农业科学 1995年第3期 23-24页

作者：范志忠陈卫江湖南省作物研究所

多生苗油菜ＭＲ—１研究初报范志忠，陈卫江（湖南省作物研究所，长沙４１０１２５）油菜多生苗现象普遍存在，但发生频率一般很低，而且常常不能稳定遗传。笔者近年在湖南省作物研究所甘蓝型油菜中，观察到一多生苗频率在８０％左右的... 详细信息

多生苗油菜ＭＲ—１研究初报范志忠，陈卫江（湖南省作物研究所，长沙４１０１２５）油菜多生苗现象普遍存在，但发生频率一般很低，而且常常不能稳定遗传。笔者近年在湖南省作物研究所甘蓝型油菜中，观察到一多生苗频率在８０％左右的资源（暂名ＭＲ─１）。连续２年研究...

关键词：油菜多生苗 mr-1 遗传特性

南京大学等研制成功“mr-1型电源内阻测试仪”

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数据采集与处理 1986年第2期 20-20页

作者：魏建

“mr-1型电源内阻测试仪”在我国研制成功。1985年12月27日在南京大学通过了由江苏省高等教育局、轻工部、安徽省电子工业局组织的省级鉴定。该仪器由轻工部化学电源研究所提出课题,南京大学与化学电源研究所共同设计,並与马鞍山无线... 详细信息

“mr-1型电源内阻测试仪”在我国研制成功。1985年12月27日在南京大学通过了由江苏省高等教育局、轻工部、安徽省电子工业局组织的省级鉴定。该仪器由轻工部化学电源研究所提出课题,南京大学与化学电源研究所共同设计,並与马鞍山无线电厂一起研制。南京大学成功地将微弱信号检测技术应用于该仪器,能从电池内阻中精确地测量电池的欧姆电阻,並能测量电池的开路电压与负荷电压,同时也可用于炭棒

关键词：化学电源 mr-1 南京大学开路电压微弱信号检测无线电厂炭棒工业局毫欧姆直流稳压电源

mmr-1基因的克隆和在毕赤酵母中分泌表达

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生物工程学报 2005年第1期21卷 25-29页

作者：李天伯胡洋王以光夏焕章中国医学科学院中国协和医科大学北京100050 沈阳药科大学沈阳110015

hmr 1为本实验室首次克隆发现的一个人类新基因 ,是一种和三种肌肉收缩蛋白及多种细胞信号蛋白具有相互作用的膜蛋白。经与鼠基因组数据库进行同源分析后设计合成引物 ,利用RT PCR技术从小鼠C5 7BL 6J脾脏T淋巴细胞总RNA中反转录得到鼠... 详细信息

hmr 1为本实验室首次克隆发现的一个人类新基因 ,是一种和三种肌肉收缩蛋白及多种细胞信号蛋白具有相互作用的膜蛋白。经与鼠基因组数据库进行同源分析后设计合成引物 ,利用RT PCR技术从小鼠C5 7BL 6J脾脏T淋巴细胞总RNA中反转录得到鼠源mr 1基因 (mmr 1) ,提交GenBank ,收录号 (AY2 99972 )。序列分析证明其与人源mr 1基因 (hmr 1)同源性为 90 1%。构建表达载体pPIC9 mmr 1电转化PichiapastorisGS115 ,筛选得到整合分泌表达mmr 1蛋白的重组酵母菌株。表达目的蛋白分子量 2 5kD ,诱导 5d时产量达到 5 0mg L ,通过Westernblot验证了表达产物的正确性。本研究为进一步研究新基因mr 1的生物学功能奠定了基础。

关键词： mr-1 克隆与表达毕赤酵母

电活性微生物激活生物质炭/零价铁协同钝化Cr(Ⅵ)及机制

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环境科学 2021年第9期42卷 4520-4526页

作者：廖聪坚赵晓蕾刘凯钟松雄李芳柏方利平叶挺进石虎砚中国科学院广州地球化学研究所广州510640 广东省科学院生态环境与土壤研究所广东省农业环境综合治理重点实验室广州510650 华南土壤污染控制与修复国家地方联合工程研究中心广州510650 中国科学院大学北京100049 太原理工大学环境科学与工程学院太原030024 佛山市环境保护投资有限公司佛山528100

纳米零价铁(nZVI)具有对六价铬[Cr(Ⅵ)]还原去除能力,但其存在易老化和易团聚的问题,会大大降低对Cr(Ⅵ)反应活性.本文将具有异化铁还原能力的mr-1引入到老化生物质炭负载纳米零价铁(nZVIB)除Cr(Ⅵ)的反应体系中.研究厌氧条件下老化后nZ... 详细信息

纳米零价铁(nZVI)具有对六价铬[Cr(Ⅵ)]还原去除能力,但其存在易老化和易团聚的问题,会大大降低对Cr(Ⅵ)反应活性.本文将具有异化铁还原能力的mr-1引入到老化生物质炭负载纳米零价铁(nZVIB)除Cr(Ⅵ)的反应体系中.研究厌氧条件下老化后nZVI/B与mr-1之间对Cr(Ⅵ)去除存在的协同效应机制,以及反应体系中pH条件,初始Cr(Ⅵ)浓度和mr-1菌浓度对这种协同效应的影响.结果表明,在pH为7时体系有明显协同效应,去除率提高51.3%.并且该协同效应随初始Cr(Ⅵ)增加而减弱,随着mr-1浓度增加而增强.固相分析结果表明Cr(Ⅵ)主要以还原为Cr(Ⅲ)的形式被固定.mr-1的异化铁还原能力起到了重要的作用,通过零价铁表面铁氧化物老化层还原,为反应体系提供了大量还原性的Fe(Ⅱ),同时也释放了内部nZVI的反应活性位点,而生物质炭不仅分散了nZVI还介导mr-1的胞外电子传递过程,从而增强了体系对Cr(Ⅵ)协同钝化能力.本研究为有效解决nZVI长期使用过程中的老化问题提供了新思路.

关键词：老化纳米零价铁 mr-1 还原协同效应生物质炭

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两株异化铁还原菌与蒙脱石交互作用实验研究

矿物岩石地球化学通报 2011年第3期30卷 311-316页

作者：曹维政朱云鲁安怀李艳王清华张虓雷王浩然杨晓雪王长秋董海良大庆油田有限责任公司勘探开发研究院黑龙江大庆163712 北京大学地球与空间科学学院造山带与地壳演化教育部重点实验室北京100871 中国地质大学(北京) 地质过程与矿产资源国家重点实验室北京100083

本文选用采自辽宁某矿的天然钠基蒙脱石与两株异化铁还原菌模式菌株Shewanella putrefaciensCN32和She-wanellaoneidensismr-1,研究了蒙脱石与微生物之间的交互作用。结果表明这两株菌均能还原蒙脱石晶格中的三价铁,使微生物作用于蒙脱... 详细信息

本文选用采自辽宁某矿的天然钠基蒙脱石与两株异化铁还原菌模式菌株Shewanella putrefaciensCN32和She-wanellaoneidensismr-1,研究了蒙脱石与微生物之间的交互作用。结果表明这两株菌均能还原蒙脱石晶格中的三价铁,使微生物作用于蒙脱石之后的反应体系中二价铁离子浓度明显升高,反应悬浊液颜色由无色变为浅绿色。透射电子显微镜晶格条纹像显示微生物作用后的粘土矿物微结构发生明显变化,其层间距d001值从1.29 nm分别减小为1.06 nm(CN32)和1.02nm(mr-1)。上述结果综合指示这两株异化铁还原菌能够通过还原天然蒙脱石结构中的三价铁促进矿物发生物相转变。

关键词：钠基蒙脱石异化铁还原菌 She wanella putre faciens CN32 She wanella oneidensis mr-1