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结核分枝杆菌mpt64抗原对巨噬细胞的影响及其与Toll样受体-2的相关性

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华南国防医学杂志 2014年第3期28卷 197-201页

作者：王庆敏刘淑鹏唐瑛武文斌张术刘秋红姚永杰海军医学研究所航空医学研究室上海200433 长海医院临床实验中心

目的观察结核分枝杆菌mpt64抗原对RAW264.7巨噬细胞凋亡及Toll样受体-2(toll-like receptor 2,TLR-2)表达的影响。方法将佛波肉荳蔻醋酸(phorbol myristoyl acetate,PMA)分化的RAW264.7巨噬细胞分为阴性对照组、卡介菌纯蛋白衍化物(purified protein derivative of BCG,BCG-PPD)诱导组、PPD+mpt64共同作用组,孵育16 h后,Annexin V-FITC染色,用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)和Western blot检测细胞凋亡、细胞膜及细胞内TLR-2的表达情况。结果 BCG-PPD可以诱导RAW264.7巨噬细胞凋亡,PPD+mpt64作用组的细胞凋亡水平明显低于BCG-PPD组,随着mpt64蛋白浓度的逐渐增高,凋亡水平逐渐降低。FCM和Western blot技术检测结果表明,BCG-PPD组的TLR-2表达水平明显高于阴性对照组,在诱导16 h达到高峰。而在PPD+mpt64组,细胞膜及细胞内的TLR-2水平均明显低于BCG-PPD组。结论 mpt64抗原能够抑制PPD诱导的巨噬细胞凋亡,可能通过调节TLR-2的表达水平来实现。mpt64抗原可能是一种毒力因子,在结核分枝杆菌感染机体的过程中,通过抑制巨噬细胞凋亡参与宿主与结核分枝杆菌的相互作用。

关键词：结核分枝杆菌 mpt64抗原巨噬细胞凋亡 Toll样受体-2

结核分枝杆菌mpt64抗原对淋巴细胞的作用

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华南国防医学杂志 2016年第2期30卷 77-80,91页

作者：王庆敏唐瑛刘淑鹏海军医学研究所航空医学研究室上海200433 长海医院临床实验中心

目的分析结核分枝杆菌mpt64抗原对EL4淋巴细胞瘤的影响及相关机制。方法将EL4淋巴细胞分为3组,分别为阴性对照组、mpt64低剂量组(10μg/ml)、mpt64高剂量组(15μg/ml)。孵育16 h后;AnnexinV-FITC染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用酶联... 详细信息

目的分析结核分枝杆菌mpt64抗原对EL4淋巴细胞瘤的影响及相关机制。方法将EL4淋巴细胞分为3组,分别为阴性对照组、mpt64低剂量组(10μg/ml)、mpt64高剂量组(15μg/ml)。孵育16 h后;AnnexinV-FITC染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测培养细胞上清的细胞因子水平,用实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和Western blot检测凋亡基因Fas、FasL的表达水平。结果 mpt64可以诱导EL4淋巴细胞凋亡,并呈浓度依赖性。与阴性对照组相比,白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)和转化生长因子β(transformation growth factor beta,TGF-β)分泌水平明显升高,而干扰素γ(interferon gamma,IFN-γ)的分泌水平未见明显变化。在mpt64诱导淋巴细胞凋亡的过程中,Fas基因表达升高。结论mpt64抗原能够诱导EL-4淋巴细胞凋亡,这种促凋亡作用可能与IL-4和TGF-β分泌水平的升高、Fas基因的表达升高相关。mpt64抗原可能是一种毒力因子,在结核分枝杆菌感染机体的过程中,可能通过促进淋巴细胞凋亡参与机体与结核分枝杆菌的相互作用。

关键词：结核分枝杆菌 mpt64抗原 EL4淋巴细胞凋亡

结核杆菌抗原mpt64基因在大肠杆菌中的表达及纯化

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第二军医大学学报 2004年第10期25卷 1146-1147页

作者：王庆敏胡振林周凤娟殷明章建程孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 上海海军医学研究所舰艇卫生研究室上海200433

近几年来,结核病的发病有上升的趋势,全世界每年约有300万人死于结核病,800万人患结核病[1].尤其是多重耐药菌株的出现及与艾滋病共同感染更加重了结核病对人类健康的危害.

关键词：结核分枝杆菌 mpt64抗原表达纯化

遍在蛋白质-结核mpt64融合基因DNA疫苗的构建及免疫效应

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第二军医大学学报 2008年第2期29卷 117-121页

作者：王庆敏孙树汉康林第二军医大学基础部医学遗传学教研室河北医科大学解剖学教研室石家庄050017

目的:用遍在蛋白质调节结核杆菌单一抗原DNA疫苗,以期获得更强的免疫保护。方法:构建结核杆菌mpt64抗原DNA疫苗(pM)和遍在蛋白质基因与mpt64抗原基因融合的DNA疫苗(pUM)。分别将构建的两种DNA疫苗肌内注射免疫BALB/c雌性小鼠,检测小鼠... 详细信息

目的:用遍在蛋白质调节结核杆菌单一抗原DNA疫苗,以期获得更强的免疫保护。方法:构建结核杆菌mpt64抗原DNA疫苗(pM)和遍在蛋白质基因与mpt64抗原基因融合的DNA疫苗(pUM)。分别将构建的两种DNA疫苗肌内注射免疫BALB/c雌性小鼠,检测小鼠的血清抗体(IgG、IgG1、IgG2a)、细胞因子(IFN-γ、IL-4)和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应,比较融合基因DNA疫苗和单基因DNA疫苗诱导的免疫应答强度。结果:pM组小鼠血清IgG水平高于pUM组(P抗原特异性体液免疫应答不及单基因DNA疫苗,但其能诱导更强的细胞免疫应答。结论:遍在蛋白质-mpt64融合基因DNA疫苗对于防治结核病可能比单基因DNA疫苗更为有效。

关键词：结核分枝杆菌 mpt64抗原 DNA疫苗遍在蛋白质免疫应答

纳米技术及生物放大技术应用于结核分枝杆菌DNA与抗原检测的电化学传感器研究

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纳米技术及生物放大技术应用于结核分枝杆菌DNA与抗原检测的电化...

作者：刘心竹重庆医科大学

学位级别：硕士

目的结核病由结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex)引起,对公众健康造成了极大威胁。在目前全球结核病负担下,结核分枝杆菌检测面临着巨大挑战。本研究旨在使用新型夹心型电化学传感器,对结核分枝杆菌DNA和抗原分别... 详细信息

目的结核病由结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex)引起,对公众健康造成了极大威胁。在目前全球结核病负担下,结核分枝杆菌检测面临着巨大挑战。本研究旨在使用新型夹心型电化学传感器,对结核分枝杆菌DNA和抗原分别进行快速、灵敏的测定。方法本研究中首次合成了由富勒烯纳米粒子、石墨烯和氮杂化碳纳米管组成的几种新型碳纳米复合材料,具有比表面积大、导电性优异的特点,同时也具有突出的内在电活性,因此可以同时作为纳米载体和氧化还原纳米探针应用于电化学传感器构建。通过上述各种纳米复合材料以及纳米金粒子等纳米材料组合进行电化学传感器的构建,其中引入生物素-亲和素系统以增加靶标分子识别量,引入适配体识别系统或通过碱基互补配对以完成典型的夹心型识别。识别完成后,使用四正辛基溴化铵(TOAB)激发示踪标记的固有电活性,即可对电流响应进行测量,进而对靶标分子进行定量检测。电化学传感器构建成功后,进行了重复性和稳定性测试,采用不同浓度的靶标分子溶液测量其线性范围和检出限,使用干扰物质检测其选择性,之后收集临床标本检验其在临床检测中使用的可行性。结果使用四正辛基溴化铵(TOAB)激发示踪标记的固有电活性后,形成了可识别的峰值电流。该电化学传感器检测线性范围宽,检出限低,并且具有出色的重复性、选择性和稳定性。在临床标本检测中,与传统方法相比,该电化学传感器也显示出优异的检验性能,可对结核病患者与非结核病患者的临床标本进行良好的区分。结论成功构建了用于结核分枝杆菌DNA和抗原检测的电化学传感器,其在临床标本中进行初步应用检测效果明确,有望在临床实践中进一步应用。

关键词：基于C60的信号放大标签生物素-亲和素系统 IS6110片段 mpt64抗原

基于电化学生物传感器的结核分枝杆菌特异性抗原的检测新方法研究

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基于电化学生物传感器的结核分枝杆菌特异性抗原的检测新方法研究

作者：彭登勇重庆医科大学

学位级别：硕士

目的结核病是由结核分枝杆菌所致的传染性疾病,对全球卫生系统造成了极大的负担。结核病的早期诊断对疾病的治疗和传染的控制尤其重要,而当前的实验室检测手段各有不足,无法满足临床需求。电化学生物传感器价格低廉、操作简便,能对靶标... 详细信息

目的结核病是由结核分枝杆菌所致的传染性疾病,对全球卫生系统造成了极大的负担。结核病的早期诊断对疾病的治疗和传染的控制尤其重要,而当前的实验室检测手段各有不足,无法满足临床需求。电化学生物传感器价格低廉、操作简便,能对靶标进行快速而准确的检测。本研究旨在应用新型电化学生物传感器检测结核分枝杆菌特异性抗原mpt64,为结核病的诊断提供一种新的方法。方法本研究首次合成了蒽醌衍生物蒽醌-2-羧酸(AQCA,Anthraquinone-2-carboxylic acid)与有序介孔碳CMK-3所形成的复合纳米材料,并将其作为生物分子电化学信号响应及放大材料,然后以海胆状铈基金属有机框架与金纳米粒子复合物作为传感界面,通过适体识别系统构建了夹心型电化学生物传感器,用于结核分枝杆菌特异性抗原mpt64的检测。在合成各纳米材料后,采用多种方法对纳米材料结构进行了表征,以证明纳米材料的成功合成。在构建该电化学生物传感器时,采用循环伏安法和电化学阻抗谱验证了该生物传感器的各步骤是否构建成功。之后,优化了实验中对生物传感器检测性能有影响的数个关键因素,采取最佳实验条件构建生物传感器。然后,利用不同浓度的mpt64抗原溶液测量了生物传感器检测的线性范围和检测限,探究了该生物传感器的重复性和稳定性,并采用多种干扰物质评价其特异性。之后,采用加标回收实验考察了生物传感器在血清基质中检测mpt64抗原的可行性。此外,我们还收集了结核病患者和健康人的血清标本,应用生物传感器对其进行了检测,初步探究了该生物传感器临床应用的可行性。结果本研究成功构建了电化学生物传感器。该新型电化学生物传感器在对结核分枝杆菌mpt64抗原的检测中呈现出优异的信号响应,其检测限为67.6 fg m L,线性范围宽(100 fg m L-10 ng m L),具有良好的选择性、重现性和稳定性。血清基质加标回收实验的回收率和相对标准偏差分别在87.3%～109.9%和3.60%～9.49%之间。此外,构建的生物传感器在人血清样本MTP64抗原的检测中也展现出了良好的特异性(93.3%)和灵敏度(86.7%)。结论本研究成功构建了新型电化学生物传感器,并实现了对结核分枝杆菌特异性抗原mpt64的检测,其优良的检测性能以及人血清标本检测结果表明该电化学生物传感器有望作为一种新的检测方法用于结核病的诊断。

关键词： mpt64抗原结核病电化学生物传感器纳米信号放大技术