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PD98059对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡和mmp-2、mmp-9表达的影响

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PD98059对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡和MMP-2、MMP-9表达的影响

作者：吴强福建医科大学

学位级别：硕士

目的:研究PD98059对人胃癌细胞SGC-7901细胞系增殖凋亡的影响和mmp2/9表达的影响,并进一步探讨其作用的可能机制。方法:应用细胞培养技术培养人胃癌细胞SGC-7901,以MTT法检测PD98059对细胞的杀伤抑制作用;免疫组化法检测胃癌细胞内p-ER... 详细信息

目的:研究PD98059对人胃癌细胞SGC-7901细胞系增殖凋亡的影响和mmp2/9表达的影响,并进一步探讨其作用的可能机制。方法:应用细胞培养技术培养人胃癌细胞SGC-7901,以MTT法检测PD98059对细胞的杀伤抑制作用;免疫组化法检测胃癌细胞内p-ERK蛋白的表达情况;流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡的变化情况;RT-PCR法检测胃癌细胞内mmp-2、mmp-9表达变化情况。结果:PD98059可抑制SGC-7901细胞的生长增殖,呈剂量-时间双效应关系;免疫组化显示,经PD98059处理过的SGC-7901细胞中的p-ERK蛋白表达下降;流式细胞仪显示, SGC-7901细胞的凋亡率随着药物浓度增加而增高(Annixin V法);经PD98059处理后胃癌细胞内mmp9的表达量明显下降,mmp2表达量下降不明显。结论:PD98059可抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长增殖,诱导其凋亡;MAPK-ERK信号通路参与调控SGC-7901细胞中mmp2/9的表达,通过抑制该信号通路的活化,能够明显抑制mmp9的表达,而对mmp2表达抑制不明显。

关键词： PD98059 胃癌细胞细胞增殖 mmp2/9

褐藻素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及可能机制

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解剖科学进展 2023年第2期29卷 146-148页

作者：梁义李健白波孙宏旭辽宁省金秋医院普外科辽宁沈阳110067

目的探讨褐藻素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法体外培养人肝癌细胞HepG2,将其分为对照组(DMSO)、15、30、45μmol/L褐藻素组。各组细胞以不同浓度药物处理48h后,MTT实验与平板克隆实验检测HepG2细胞增殖能力变化;流式细... 详细信息

目的探讨褐藻素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法体外培养人肝癌细胞HepG2,将其分为对照组(DMSO)、15、30、45μmol/L褐藻素组。各组细胞以不同浓度药物处理48h后,MTT实验与平板克隆实验检测HepG2细胞增殖能力变化;流式细胞术检测HepG2细胞的细胞周期和凋亡情况;Transwell实验检测HepG2细胞侵袭能力变化;Western blot方法检测HepG2细胞p-Akt、Cyclin D1、基质金属蛋白酶2/9(mmp2/9)的表达。结果与对照组比较,不同浓度褐藻素均能抑制HepG2细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导凋亡、降低侵袭能力(P2细胞中p-Akt、Cyclin D1、mmp2/9的表达(P2细胞增殖与侵袭能力,阻滞细胞周期并诱导凋亡。

关键词：褐藻素肝癌 HepG2细胞 p-Akt Cyclin D1 mmp2/9

葛根素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡与迁移的影响

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解剖科学进展 2022年第6期28卷 711-713,718页

作者：梁义李健白波孙宏旭辽宁省金秋医院普外科辽宁沈阳110067

目的探讨葛根素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡与迁移的影响。方法体外培养人肝癌细胞HepG2,将其分为对照组(DMSO)、10、20、40μmol/L葛根素组。各组细胞以不同浓度药物处理48h后,MTT实验与平板克隆实验检测HepG2细胞增殖能力变化;流式细... 详细信息

目的探讨葛根素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡与迁移的影响。方法体外培养人肝癌细胞HepG2,将其分为对照组(DMSO)、10、20、40μmol/L葛根素组。各组细胞以不同浓度药物处理48h后,MTT实验与平板克隆实验检测HepG2细胞增殖能力变化;流式细胞术检测HepG2细胞的凋亡情况;Transwell实验检测HepG2细胞迁移能力变化;Western blot方法检测葛根素对HepG2细胞TGF-β1、Smad3、基质金属蛋白酶2/9(matrix metalloproteinase2/9,mmp2/9)的影响。结果与对照组比较,不同浓度葛根素均能抑制HepG2细胞增殖与迁移能力,并诱导凋亡(P2细胞中TGF-β1、Smad3与mmp2/9的表达(P2细胞增殖与迁移能力,并诱导凋亡。

关键词：葛根素肝癌 HepG2细胞 TGF-β1 mmp2/9

hTERT基因修饰雪旺细胞移植对脊髓损伤大鼠损伤区神经修复相关蛋白表达的影响

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hTERT基因修饰雪旺细胞移植对脊髓损伤大鼠损伤区神经修复相关蛋...

作者：刘琳琳天津医科大学

学位级别：硕士

目的:以逆转录病毒PLXSN为载体,将h TERT基因转染入体外培养的大鼠雪旺细胞,检测雪旺细胞端粒酶活性及细胞生物学特性的影响。进一步探讨h TERT基因修饰雪旺细胞移植对脊髓损伤大鼠损伤区神经修复相关相关白表达的检测及对神经功能恢复... 详细信息

目的:以逆转录病毒PLXSN为载体,将h TERT基因转染入体外培养的大鼠雪旺细胞,检测雪旺细胞端粒酶活性及细胞生物学特性的影响。进一步探讨h TERT基因修饰雪旺细胞移植对脊髓损伤大鼠损伤区神经修复相关相关白表达的检测及对神经功能恢复的影响。方法:体外培养大鼠雪旺细胞,经逆转录病毒PLXSN为载体介导端粒酶反转录酶（h TERT）基因转染雪旺细胞,体外培养Wistar大鼠雪旺细胞,经逆转录病毒PLXSN为载体介导端粒酶反转录酶（h TERT）基因转染,分为3组:对照组、阴性转染组、h TERT转染组。用RT-PCR,Western blot检测雪旺细胞在转染前后h TERT基因和蛋白的表达。应用细胞生长曲线、MTT比色法观察细胞生长的优化作用;采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化。成年雌性Wistar大鼠71只,造模成功66只,随机分为对照组,SCs组,h TERT-SCs组,22只/组,按照改良的Allen打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型。分别于造模前、造模后1天、3天、1周、2周、3周、4周通过BBB评分、斜板试验、改良的Tarlov评分进行运动功能评定。造模后72 h通过RT—PCR、Western blot检测脊髓损伤区周围AQP4/9、mmp9/2基因转录和蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡情况。造模后4周,HE染色及荧光显微镜观测PKH-26标记的SCs存活及分布情况,通过免疫组化法检测GFAP、Nogo及NF200的表达量,行HRP示踪观察神经纤维再生情况,通过SEP和MEP观察大鼠神经电生理恢复情况。结果:通过逆转录病毒PLXSN介导的h TERT基因转染大鼠雪旺细胞后,转染h TERT后,h TERT转染组与对照组、阴性转染组相比h TERT基因和蛋白水平均有表达,细胞的生长速度明显增快,细胞周期G0/G1期减少,S期细胞数增多。各组间有统计学差异（p＜0.05）。RT-PCR,Western blot检测显示转染h TERT基因的大鼠雪旺细胞体外能表达h TERT;大鼠下肢运动功能评价h TERT-SCs组优于SCs组,SCs组优于对照组。造模后72小时h TERT-SCs组细胞凋亡指数均明显低于对照组（p＜0.05）.造模后72小时,与对照组相比h TERT-SCs组AQP4/9基因和蛋白表达均较显著降低（p＜0.05）。造模后4周,HE染色对照组可见脊髓组织缺失及脊髓空洞形成,无神经轴索通过。SCs组损伤区可见少量神经轴索样结构,脊髓空洞较小,h TERT-SCs组可见较多神经轴索样结构,未见脊髓空洞。PKH-26标记的阳性细胞数:h TERT-SCs组最多,SCs组次之,对照组最少,且各组之间差异有统计学意义（p＜0.05）。造模后4周,h TERT-SCs组胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）、神经丝蛋白（NF-200）的表达较对照组明显升高,差异有显著性意义（p＜0.05）,h TERT-SCs组Nogo蛋白的表达较对照组明显降低,差异有显著性意义（p＜0.05）,HRP阳性神经纤维数:h TERT-SCs组最多,SCs组次之,对照组最少,各组之间差异有统计学意义（p＜0.05）。SEP和MEP的潜伏期:h TERT-SCs组＜SCs组＜对照组,且各组之间差异有显著性意义（p＜0.05）;波幅:h TERT-SCs组＞SCs组＞对照组,且各组之间差异有显著性意义（p＜0.05）。结论:通过转录病毒PLXSN为载体介导端粒酶反转录酶（h TERT）基因转染使雪旺细胞端粒酶活性明显升高,能够促进体外培养的大鼠雪旺细胞增殖。h TERT基因修饰雪旺细胞移植可促进脊髓损伤大鼠神经突触的再生,降低脊髓损伤区周围AQP/9、mmp9/2基因转录和蛋白的表达和神经细胞凋亡,促进胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）、神经丝蛋白（NF-200）的表达的升高,降低Nogo蛋白的表达,改善大鼠的肢体运动功能和电生理功能。

关键词：端粒酶反转录酶基因转染大鼠雪旺细胞脊髓损伤 AQP4/9 mmp2/9 胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）神经丝蛋白（NF-200,Nogo蛋白）

桦木酸通过下调S期激酶相关蛋白2抑制胃癌细胞转移侵袭的机理研究

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桦木酸通过下调S期激酶相关蛋白2抑制胃癌细胞转移侵袭的机理研究

作者：周怡乐广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:胃癌(gastric cancer,GC)是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率位居全球第四,癌细胞转移侵袭是引发胃癌患者死亡的重要原因。S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)是 Skp1-Cullin-F-box(SCF)E3 泛素连接酶复合... 详细信息

目的:胃癌(gastric cancer,GC)是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率位居全球第四,癌细胞转移侵袭是引发胃癌患者死亡的重要原因。S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)是 Skp1-Cullin-F-box(SCF)E3 泛素连接酶复合物中的F-box蛋白。研究表明Skp2在胃癌组织中过表达,并与胃癌的预后呈负相关,而下调Skp2能有效抑制胃癌细胞的转移。桦木酸(betulinic acid,BA)主要来源于白桦树树皮内,是一种天然的五环三萜类化合物。诸多研究表明桦木酸具有显著的抗肿瘤作用,并且可以选择性的作用于癌细胞,在多种肿瘤中展现出显著的抗肿瘤活性。目前,桦木酸通过下调Skp2抑制胃癌转移侵袭的作用机制还未见有报道。本研究利用SGC7901和BGC823两种胃癌细胞系,进一步深入探讨桦木酸通过作用Skp2信号通路抑制胃癌细胞转移侵袭的分子机制。方法:本研究主要利用细胞增殖实验、划痕实验和细胞侵袭实验、分子对接技术和免疫共沉淀方法、蛋白半衰期实验、蛋白免疫印迹、实时定量PCR、凝胶电泳实验等进一步探讨桦木酸通过靶向Skp2抑制胃癌细胞(SGC7901和BGC823)转移侵袭的机制。①MTT和细胞增殖实验检测桦木酸对胃癌细胞的杀伤效果和增殖抑制作用;②划痕实验和侵袭实验分析桦木酸对胃癌细胞的转移和侵袭能力影响;③分子对接技术和免疫共沉淀方法评估桦木酸对Skp1-Skp2复合物的靶向作用;④蛋白半衰期实验评价桦木酸对胃癌细胞中Skp2蛋白稳定性;⑤蛋白免疫印迹检测桦木酸对胃癌细胞中Skp2蛋白和相关转移蛋白表达的影响;⑥实时定量PCR和凝胶电泳实验验证桦木酸对胃癌细胞中Skp2 mRNA转录水平的调节作用;⑦利用慢病毒感染过表达Skp2进一步验证桦木酸通过靶向Skp2调节胃癌细胞转移和侵袭的作用。成果:MTT和细胞增殖实验结果显示桦木酸对胃癌细胞有显著的杀伤作用,并明显的抑制其增殖,且在一定浓度范围内(0-60 μ M)对正常的胃粘膜上皮细胞(GES-1)没有产生明显的毒性作用;划痕实验和细胞侵袭实验结果证明桦木酸以浓度依赖性方式抑制胃癌细胞的转移和侵袭,且Skp2过表达时会拮抗桦木酸对胃癌细胞转移、侵袭的抑制效果;分子对接技术和免疫共沉淀证实桦木酸通过氢键结合Skp1-Skp2复合物并抑制Skp1-Skp2相互作用,进一步通过蛋白半衰期实验表明桦木酸能降低Skp2蛋白稳定性,促进Skp2降解;蛋白免疫印迹结果表明桦木酸能明显抑制Skp2和转移相关蛋白mmp2/9蛋白表达,上调p27蛋白表达;实时定量PCR和凝胶电泳实验显示桦木酸对Skp2 mRNA表达具有下调作用;同时,在胃癌细胞中通过慢病毒感染并过表达Skp2能明显减弱桦木酸对胃癌细胞的转移抑制作用。结论:本研究结果证实桦木酸以氢键的方式直接作用于Skp1-Skp2复合物的蛋白结合口袋区域并抑制Skp1与Skp2相互作用,进一步研究发现桦木酸作用于Skp2-p27信号通路诱导胃癌细胞增殖抑制,且通过作用Skp2-Sp1-mmp2/9信号通路抑制SGC7901和BGC823胃癌细胞转移、侵袭。下一步将进一步探讨桦木酸通过靶向Skp2抑制胃癌细胞在体内转移的影响。

关键词：桦木酸 S期激酶相关蛋白2 Sp1 mmp2/9 胃癌

非经典NF-κB信号通路介导阿霉素心肌毒性的机制研究

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非经典NF-κB信号通路介导阿霉素心肌毒性的机制研究

作者：许然华中科技大学

学位级别：硕士

阿霉素(Doxorubicin,以下简称DOX)属于蒽环类抗肿瘤药物,在临床上广泛应用于抑制实体瘤、白血病、淋巴瘤、乳腺癌等常见肿瘤的生长,具有广谱强效抗癌性。然而,伴随治疗引起的心肌病、心衰等副作用却严重限制了DOX在临床上的广泛应用。... 详细信息

阿霉素(Doxorubicin,以下简称DOX)属于蒽环类抗肿瘤药物,在临床上广泛应用于抑制实体瘤、白血病、淋巴瘤、乳腺癌等常见肿瘤的生长,具有广谱强效抗癌性。然而,伴随治疗引起的心肌病、心衰等副作用却严重限制了DOX在临床上的广泛应用。大量研究发现DOX心肌毒性的分子机制主要涉及氧化应激、细胞凋亡、钙稳态失调、细胞外基质重塑等。而黄酮类化合物槲皮素(Quercetin,以下简称QCT)的抗氧化、抗癌等特性使之在临床上被广泛应用。我们的前期研究结果表明QCT能有效改善DOX导致的心肌毒性,但所涉及的分子机制还未完全阐释清楚。我们在DOX单独投药的斑马鱼和H9C2心肌细胞中均发现mmp2/9(matrix metalloprotein,gelatinase)有显著上升,而在DO X与QC T联用的斑马鱼和H9C2心肌细胞中,mmp2/9的表达得到恢复。mmp2/9属于基质金属蛋白酶家族成员,它们在心血管系统疾病中主要与心肌纤维化、高血压、动脉粥样硬化、心肌梗塞等相关。mmp2/9受到不同的转录因子调控,包括NF-κB、AP-1、STAT等,其中NF-κB信号通路在心血管疾病中的研究颇为广泛。大量报道表明P65核转录因子介导的经典NF-κB信号通路能够影响mmp2/9的表达,进而调控心功能。然而RelB和p100/p52介导的非经典NF-κB信号通路在心功能调控却鲜有报道,本研究聚焦于非经典NF-κB信号通路,并发现其参与QCT改善DOX导致的心肌毒性。我们通过Realtime PCR、Western blotting、CO-IP、免疫荧光、siRNA沉默等实验方法,发现非经典NF-κB信号通路中的核心蛋白激酶NIK受DOX诱导而表达增加,并伴随下游标志性的核转录因子RelB入核以及p52蛋白增加,表明非经典NF-κB信号通路能够介导DOX诱导的心肌毒性,而QCT在一定程度上抑制了上述变化,缓解了该通路的激活。另外,分别干扰RelB和p100的结果显示,由DOX引起的mmp2/9的表达上调受到调控。我们还进一步探索了可能介导非经典NF-κB信号通路的膜蛋白及其相关因子,发现RANK和TRAF2有可能通过影响NIK表达从而激活非经典NF-κB信号通路,进而调控mmp9和mmp2的转录和表达。这些结果使我们有理由相信非经典NF-κB信号通路能够介导心功能调控,并且是QCT改善DOX心肌毒性的主要分子机制之一。

关键词：非经典NF-κB信号通路 mmp2/9 阿霉素槲皮素心脏毒性

脂肪酸结合蛋白7对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响

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中风与神经疾病杂志 2020年第11期37卷 1004-1010页

作者：陈丽折霞谷超超张晓辉赵嘉欣袁蕊李锐陕西省人民医院神经内三科陕西西安710068

目的探究脂肪酸结合蛋白7(FABP7)对脑缺血再灌注(I/R)大鼠血脑屏障(BBB)通透性的影响,及其涉及的机制。方法将大鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞共培养以建立BBB细胞模型。用氧葡萄糖剥夺再复氧(OGD/R)方式建立I/R损伤BBB模型;用FABP... 详细信息

目的探究脂肪酸结合蛋白7(FABP7)对脑缺血再灌注(I/R)大鼠血脑屏障(BBB)通透性的影响,及其涉及的机制。方法将大鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞共培养以建立BBB细胞模型。用氧葡萄糖剥夺再复氧(OGD/R)方式建立I/R损伤BBB模型;用FABP7重组蛋白(rh-FABP7)单独处理,或与S7155共处理此细胞模型。采用ENDOHM仪器、Western blotting法、流式细胞术分别测定细胞跨内皮电阻(TEER)、FABP7和紧密连接(TJ)以及基质金属蛋白酶(mmp)蛋白表达、细胞凋亡。建立大鼠脑I/R模型,腹腔注射rh-FABP7,采用神经功能评分法、湿重和干重法、伊文思蓝染色法分别测定大鼠神经功能、脑含水量、BBB通透性。结果过表达FABP7逆转OGD/R诱导的FABP7和TJ蛋白表达、及TEER的下调,以及mmp2/9表达和细胞凋亡的上调(Pmmp2/9和TJ蛋白表达、TEER、以及细胞凋亡的作用(Pmmp2/9,减轻脑I/R对BBB完整性的破坏。

关键词： FABP7 血脑屏障 mmp2/9 脑缺血再灌注

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化瘀理肺方对肺纤维化大鼠治疗作用的研究

中华中医药学刊 2010年第9期28卷 1908-1911页

作者：王英田王琴刘世青李长生山东大学附属千佛山医院山东济南250014 山东大学医学院山东济南250012

目的:探讨化瘀理肺方对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的治疗作用及机制。方法:将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组,采用博莱霉素经气管内插管注入方法(5mg/kg)建立肺间质纤维化模型,对照组注入生理盐水(0.25mL/只)作为正常对照... 详细信息

目的:探讨化瘀理肺方对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的治疗作用及机制。方法:将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组,采用博莱霉素经气管内插管注入方法(5mg/kg)建立肺间质纤维化模型,对照组注入生理盐水(0.25mL/只)作为正常对照,从造模后的第2天起中药组给予化瘀理肺方药物灌胃(13410mg/kg);对照组、模型组予生理盐水灌胃(2mL/只);激素组予氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射(25mg/kg),于给药后的第14天、28天分别处死,取肺组织行苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化情况,免疫组化法测定肺组织中Smad3、Smad7蛋白的表达情况以及应用凝胶酶谱法检测mmp-2/9的活性。结果:中药组可见炎性细胞较少,肺泡结构基本正常,肺泡炎与肺纤维化较轻。中药组Smad3蛋白表达明显低于模型组和激素组;Smad7蛋白表达明显高于模型组和激素组;中药组mmp-2/9的活性明显低于模型组和激素组。结论:化瘀理肺方可明显减轻大鼠肺泡炎和肺纤维化的程度,可能通过Smad信号通路从而影响mmp-2/9的活性发挥作用。

关键词：肺间质纤维化化瘀理肺方 Smad3/7 mmp2/9

TGF-α/EGFR autocrine loop mediated by the protease ADAM17 induces prostate cancer invasion in vitro

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TGF-α/EGFR autocrine loop mediated by the protease ADAM17 i...