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mhc-ⅰ类肽组装复合体组分重要性的定量分析(英文)

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生物化学与生物物理进展 2014年第9期41卷 904-915页

作者：牛歌马娟刘长振马盼韩化敏赵云峰张鸽陶华高斌中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室(CASPMI) 中国科学院微生物研究所北京100101 中国科学院大学北京100049 中日分子免疫学与分子微生物学联合实验室中国科学院微生物研究所北京100101

TAP2、tapasin和calreticulin(CRT)是mhc-ⅰ类内源性抗原加工和递呈途径肽组装复合体(PLC)中的3个重要蛋白质.虽然对于肽组装复合体及其单个蛋白组分在抗原加工递呈中的作用,国内外已有大量的研究,但是由于研究手段的缺乏,其在复合体中... 详细信息

TAP2、tapasin和calreticulin(CRT)是mhc-ⅰ类内源性抗原加工和递呈途径肽组装复合体(PLC)中的3个重要蛋白质.虽然对于肽组装复合体及其单个蛋白组分在抗原加工递呈中的作用,国内外已有大量的研究,但是由于研究手段的缺乏,其在复合体中的相对重要性还未得到清楚和定量的分析.本文中我们建立了一种新型的抗原递送方法,利用猪链球菌溶血酶(SLY)对鼠纤维母细胞系K41及其CRT缺陷细胞系K42、tapasin缺陷细胞系90a及tapasin、TAP2双缺陷细胞系91a进行穿孔并定量递送入鸡卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),使其被内源性加工处理后的多肽SIINFEKL与小鼠H2-Kb装配成复合物并被递呈至细胞表面.通过利用小鼠T杂交瘤细胞B3Z和单克隆抗体25D1.16识别并检测不同细胞表面SIINFEKL与小鼠H2-Kb复合物,我们发现CRT缺陷细胞系K42的抗原提呈能力相比91a及90a,较K41有着更大幅度的下降,说明CRT在提呈过程中可能有着较预期更重要的作用.本文是首个对抗原递呈途径蛋白相对重要性的研究,其研究结果对于进一步研究mhc-ⅰ类抗原加工和递呈途径相关蛋白的作用提供了理论依据与研究手段.

关键词： mhc-ⅰ 肽组装复合体猪链球菌溶血酶定量分析

mhc-ⅰ^(pep)四聚体技术检测人类巨细胞病毒特异性细胞免疫功能的新进展

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检验医学 2005年第5期20卷 495-497页

作者：钱春艳季育华上海第二医科大学附属瑞金医院检验科上海200025

人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)属疱疹病毒β亚科,人群的感染率为80%～90%.大量研究表明,机体感染HCMV的后果主要决定于机体的免疫功能,尤其是特异性T细胞的功能对HCMV感染的控制和恢复起主要作用.……

关键词：人类巨细胞病毒四聚体细胞毒性T细胞细胞免疫功能病毒特异性 mhc-ⅰ 技术检测感染HCMV HCMV感染特异性T细胞

外周血单个核细胞mhc-ⅰ和mhc-Ⅱ基因mRNA表达与皮肤移植排斥的研究

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中华检验医学杂志 2007年第3期30卷 324-326页

作者：李向东邹雄山东大学齐鲁医院检验科济南山东省千佛山医院检验科250012

主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，mhc）传统上分为mhc-ⅰ类、mhc-Ⅱ类和mhc-Ⅲ类，其中mhc-ⅰ类、mhc-Ⅱ类在移植中比较重要。体内mhc有两种形式：一是以膜抗原形式存在于几乎所有组织细胞表面，二是以可溶形... 详细信息

主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，mhc）传统上分为mhc-ⅰ类、mhc-Ⅱ类和mhc-Ⅲ类，其中mhc-ⅰ类、mhc-Ⅱ类在移植中比较重要。体内mhc有两种形式：一是以膜抗原形式存在于几乎所有组织细胞表面，二是以可溶形式存在于血清、尿液、精液、乳汁、唾液等多种体液与分泌液中。

关键词： mhc-Ⅱ mhc-ⅰ 基因mRNA表达外周血单个核细胞移植排斥主要组织相容性复合体皮肤细胞表面

mhc-ⅰ、Foxp3在特发性炎性肌病患者肌肉组织中表达的研究

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MHC-Ⅰ、Foxp3在特发性炎性肌病患者肌肉组织中表达的研究

作者：刘丽娜第四军医大学

学位级别：硕士

特发性炎性肌病(idiopathic inflammatory myopathies, IIM)是一组获得性的、与自身免疫有关的骨骼肌疾病,CD8、mhc-ⅰ是其特异性标志。CD4+CD25+调节性T细胞( regulatory T cells, Treg)是一个具有调节功能的T细胞亚群,以调节自身T细... 详细信息

特发性炎性肌病(idiopathic inflammatory myopathies, IIM)是一组获得性的、与自身免疫有关的骨骼肌疾病,CD8、mhc-ⅰ是其特异性标志。CD4+CD25+调节性T细胞( regulatory T cells, Treg)是一个具有调节功能的T细胞亚群,以调节自身T细胞的活化与增殖为主要功能,在维持自身免疫耐受、防止自身免疫疾病发生方面具有不可替代的作用。Foxp3特异性的表达于CD4+CD25+Treg细胞,与其发育、成熟以及抑制功能关系密切。目的通过观察mhc-ⅰ在特发性炎性肌病患者肌肉组织中的分布表达情况和Foxp3在浸润的炎性细胞中的分布表达,探讨它们的表达与患者病情程度之间的相关性,从而发现mhc-ⅰ和Foxp3在IIM诊断中的价值和可能的病理机制。方法选取符合临床诊断的15例IIM患者进行肌肉活检,观察其病理结构的改变;运用免疫组织化学方法,观察mhc-ⅰ在特发性炎性肌病患者肌肉组织中的分布表达情况和Foxp3在浸润的炎性细胞中的分布表达情况,并与非炎症性肌病患者作对照。结果 1.在IIM患者肌肉组织中明确有mhc-ⅰ类分子的表达,在本实验的15例IIM患者中阳性率为100%。 2.15例IIM患者中有6例患者肌纤维中虽没有明显的炎性细胞浸润,但患者还是出现了临床症状且肌酶异常。 ***-Ⅰ在IIM肌肉组织中的表达强弱程度与病人肌酶呈正相关性,且具有统计学意义。 4.在15例特发性炎性肌病患者肌肉纤维中有5例Foxp3表达阳性。Foxp3表达阳性的患者较阴性患者的血清肌酶低,且mhc-ⅰ表达相对较弱、临床症状较轻。结论 ***-Ⅰ类分子可以作为IIM早期诊断的指标之一;***-Ⅰ在IIM的表达可以早于炎性细胞的浸润;***3的表达与患者病情存在一定的相关性:Foxp3表达阳性的患者病情一般较轻,而Foxp3表达阴性的患者病情一般较重;***3Treg细胞数目或功能异常可能是IIM发生的原因之一。

关键词：特发性炎性肌病 Foxp3 调节性T细胞 mhc-ⅰ CD8+

猪mhc-ⅰ α生物素化序列融合基因的构建、表达与纯化

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中国兽医学报 2008年第4期28卷 456-460页

作者：肖一红刘光亮王群童铁钢白宇孟庆文吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

采用RT-PCR技术从猪外周血单核细胞(PBMC)中获得猪白细胞抗原基因座P1、P14等位基因的胞外区,并在其3′端拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP),构建了pET-P1-BSP和pET-P14-BSP高效表达载体并进行诱导表达和纯化,用SDS-PAGE和Western ... 详细信息

采用RT-PCR技术从猪外周血单核细胞(PBMC)中获得猪白细胞抗原基因座P1、P14等位基因的胞外区,并在其3′端拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP),构建了pET-P1-BSP和pET-P14-BSP高效表达载体并进行诱导表达和纯化,用SDS-PAGE和Western blotting法对表达产物进行鉴定。结果显示,成功构建了融合表达载体pET-P1-BSP和pET-P14-BSP,表达产物以包涵体的形式存在,获得高纯度的P1-BSP和P14-BSP蛋白,为进一步利用亲和素在体外构建SLA-I类分子肽四聚体奠定了基础。

关键词： mhc-ⅰ SLA-Ⅰ 克隆生物素化序列表达纯化

mhc-ⅰ表达在特发性炎性肌病诊断价值的研究

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MHC-Ⅰ表达在特发性炎性肌病诊断价值的研究

作者：曾国勇南昌大学

学位级别：硕士

目的:研究在正常骨骼肌肌膜上不表达的mhc-ⅰ抗原在特发性炎性肌病(IIM)的表达,探讨mhc-ⅰ表达在IIM诊断和鉴别诊断中的价值。方法:对15例IIM患者骨骼肌标本进行mhc-ⅰ免疫组化染色研究(其中多发性肌炎14例、皮肌炎1例),并以5例正常骨... 详细信息

目的:研究在正常骨骼肌肌膜上不表达的mhc-ⅰ抗原在特发性炎性肌病(IIM)的表达,探讨mhc-ⅰ表达在IIM诊断和鉴别诊断中的价值。方法:对15例IIM患者骨骼肌标本进行mhc-ⅰ免疫组化染色研究(其中多发性肌炎14例、皮肌炎1例),并以5例正常骨骼肌标本和25例其它神经肌肉病为对照(其中肢带型肌营养不良18例、脂质沉积性肌病4例,糖原累积病1例,运动神经元病2例)。在光镜下采用前瞻性盲法操作判断每份标本的染色结果,计算各组的mhc-ⅰ阳性表达率,比较各组阳性表达率的差异,并计算IIM组mhc-ⅰ表达的敏感性和特异性。结果:IIM组的肌纤维mhc-ⅰ阳性表达率为86.7%(13/15),其它神经肌肉病组为24%(6/25),正常骨骼肌组均未见mhc-ⅰ表达。IIM组mhc-ⅰ的阳性表达率明显高于对照组(pmhc-ⅰ表达明显增加,且其敏感性和特异性均较高。mhc-ⅰ免疫组化染色是IIM一项较好的辅助病理诊断方法。

关键词：特发性炎性肌病 mhc-ⅰ 诊断标准

干扰素-γ对乳腺癌细胞mhc-ⅰ类分子表达的作用及调控机制的研究

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干扰素-γ对乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子表达的作用及调控机制的研究

作者：刘丽承德医学院

学位级别：硕士

乳腺癌(Breast cancer)是目前世界上第二大常见的恶性肿瘤,位居女性恶性肿瘤第一位。发病率占成人恶性肿瘤的3%,仅次于肺癌。2018年新增的乳腺癌病例超过200万例。尽管乳腺癌的早期筛查、手术治疗、放化疗、内分泌治疗以及分子靶向治疗... 详细信息

乳腺癌(Breast cancer)是目前世界上第二大常见的恶性肿瘤,位居女性恶性肿瘤第一位。发病率占成人恶性肿瘤的3%,仅次于肺癌。2018年新增的乳腺癌病例超过200万例。尽管乳腺癌的早期筛查、手术治疗、放化疗、内分泌治疗以及分子靶向治疗已取得重大进展,但乳腺癌仍然是女性肿瘤死亡的重大疾病。所以,一直以来乳腺癌都是人们研究的热点。目前应用于乳腺癌治疗的药物因其可产生多药耐药性、毒副作用严重、费用高昂等原因,给患者及其家庭带来极大苦恼,甚至使得治疗失败,从而造成可治愈率的降低。因此,开发新型的乳腺癌抗肿瘤治疗方法的研究仍具有较为广阔的应用前景。干扰素-γ(IFN-γ)是一种多效性的细胞因子,属于Ⅱ型干扰素,编码于12号染色体上。IFN-γ是由两个17 kDa多肽亚基以非共价键结合形成的同二聚体结构。在合成过程中,经过多次n-糖基化,形成一个成熟的50kda分子。主要由激活的T细胞包括Th0、TH1细胞和几乎所有的CD8细胞毒性T细胞和自然杀伤(NK)细胞分泌。具有抑制细胞分裂、调节免疫、抗病毒、抗肿瘤等多效性功能,有助于形成先天和适应性免疫反应。有文献报道干扰素-γ可以上调多种实体肿瘤细胞表面mhc-ⅰ类分子(人体中为HLA-A、HLA-B、HLA-C),提高肿瘤细胞的免疫原性,从而提高机体的免疫监视能力,发挥抗肿瘤的作用。NLRC-5属于NOD样受体(NLRs)家族成员,是存在于细胞内的主要模式识别受体,可以诱导固有免疫反应。有文献报道在淋巴细胞、宫颈癌细胞、纤维母细胞、骨髓细胞中干扰素-γ可上调NLRC-5的表达,同时有研究发现,在小鼠模型中NLRC-5可上调的mhc-ⅰ的表达。但是此种作用在乳腺癌细胞中还未得到明确证实,干扰素-γ对乳腺癌细胞mhc-ⅰ类分子的作用及机制还需要进行进一步的深入探讨。基于此,本研究拟应用乳腺癌SKBR3细胞,探讨干扰素-γ对乳腺癌细胞的mhc-ⅰ类分子的作用及其机制。目的:研究干扰素-γ(IFN-γ)对乳腺癌细胞的mhc-ⅰ类分子表达的影响,并深入探讨其对mhc-ⅰ类分子表达的调控机制。为干扰素-γ在乳腺癌临床治疗中的开发应用提供实验依据。方法:1.体外培养人乳腺癌SKBR3细胞株,根据IFN-γ浓度将其分为25U/ml、50 U/ml、100 U/ml组,未加药组为空白对照组。2.采用流式细胞术检测经不同浓度干扰素-γ作用24h后的各组乳腺癌SKBR3细胞表面的HLA-ABC类抗原的表达。3.各组加入干扰素-γ后,24h后终止培养,分别提取各组总蛋白,采用western blotting法检测各组HLA-A、HLA-B、HLA-C、NLRC-5蛋白相对表达变化。4.细胞处理24h后终止培养,采用RT-qPCR法检测细胞中HLA-AB C、HLA-A、HLA-B、HLA-C、NLRC-5的mRNA相对表达变化。结果:1.流式细胞仪检测乳腺癌SKBR3细胞表面HLA-ABC表达情况流式细胞术结果显示,空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞表面HLA-ABC蛋白表达量为(14.80±2.86)、(44.50±3.57)、(48.73±2.59)、(56.77±1.93),三个实验组的HLA-ABC蛋白表达量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.实时荧光定量PCR法检测HLA-ABC、HLA-A、HLA-B、HLA-C、NLRC-5的mRNA相对表达情况。RT-qPCR结果显示:(1)HLA-ABC的mRNA表达情况:空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞HLA-ABC mRNA表达量为(1.00±0.00)、(2.26±0.54)、(3.89±0.81)、(5.94±0.98),三个实验组表达量均升高,除25 U/ml组外,其余浓度组均与空白对照组差异有统计学意义(P<0.05),且有浓度依赖性;(2)HLA-A的mRNA表达情况:空白对照组、25 U/ml、50U/ml、100 U/ml组细胞表面HLA-A mRNA表达量为(1.00±0.00)、(3.31±0.84)、(5.32±1.25)、(8.69±1.13),三个浓度组均较空白对照组表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05),且有浓度依赖性;(3)HLA-B的mRNA表达情况:空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞表面HLA-B mRNA表达量为(1.00±0.00)、(6.28±0.31)、(12.51±1.77)、(17.69±2.79),三个浓度组均较空白对照组表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)且有浓度依赖性;(4)HLA-C的mRNA表达情况:空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞表面HL

关键词：乳腺癌干扰素-γ mhc-ⅰ NLRC-5 免疫

MPTP帕金森病模型中多巴胺能神经元表达mhc-ⅰ诱导自身免疫活化

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MPTP帕金森病模型中多巴胺能神经元表达MHC-Ⅰ诱导自身免疫活化

作者：王抱妍南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)在神经退行性疾病中是仅次于阿尔兹海默症的第二高发病率疾病,主要病理性特征为脑黒质多巴胺神经元路易小体的形成及变性死亡,特征性症状表现为静止性震颤、运动迟缓和肌张力障碍。既往的研... 详细信息

研究背景:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)在神经退行性疾病中是仅次于阿尔兹海默症的第二高发病率疾病,主要病理性特征为脑黒质多巴胺神经元路易小体的形成及变性死亡,特征性症状表现为静止性震颤、运动迟缓和肌张力障碍。既往的研究认为帕金森病与线粒体功能障碍、基因异常、炎症、环境等因素相关。近年来越来越多的研究指出自身免疫在帕金森病的病程中也起到关键作用。帕金森病人中脑黒质区神经炎症可能是一种自身免疫活化的结果。在自身免疫疾病中,主要组织相容性1型复合体(major histocompatibility complex 1,mhc-ⅰ)作为抗原提呈蛋白起着促进多种疾病发生的关键作用。真核细胞表达mhc-ⅰ后可以诱导T细胞对其产生攻击,使其凋亡。正常情况下中枢神经系统中mhc-ⅰ只在胚胎期表达,主要与神经元突触的可塑性有关,参与神系统发育。近年来,有研究发现帕金森病人中脑黒质区多巴胺能神经元表达mhc-ⅰ,而非多巴胺能神经元则未能检测到mhc-ⅰ表达,提示mhc-ⅰ的表达可能帕金森病的疾病发生与进展有关。或许是因为多巴胺能神经元表达了mhc-ⅰ,使得该神经元受到免疫细胞攻击而发生凋亡。研究目的:1、在PD细胞模型上研究mhc-ⅰ的表达及抗原提呈现象。2、在PD小鼠模型上研究多巴胺能神经元的抗原提呈及自身免疫活化现象。3、初步探讨多巴胺能神经元抗原提呈现象可能机制。研究方法:1、利用mpp+处理SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型,检测mhc-ⅰ表达情况,借此观察神经元抗原提呈情况。2、小鼠腹腔注射MPTP,构建PD动物模型,检测多巴胺能神经元的抗原提呈情况是否与细胞实验一致。再者,利用免疫荧光三标技术,观察表达多巴胺能神经元表达mhc-ⅰ后,小鼠黒质是否出现自身免疫活化现象(CD8+T细胞浸润)。最后我们通过腺病毒技术下调黒质神经元mhc-ⅰ表达,进一步观察黑质自身免疫活化情况。3、在免疫细胞中,线粒体抗原提呈与帕金森相关蛋白PINK1密切相关,我们将利用特异性siRNA敲低SH-SY5Y中PINK1蛋白表达,再予以mpp+处理构建PD细胞模型,检测细胞抗原提呈变化情况。研究结果:1、在PD细胞模型中,经mpp+处理过的SH-SY5Y细胞,mhc-ⅰ的表达在核酸转录水平和蛋白水平都明显提高。2、在PD动物模型中,可观察到,受到MPTP处理的小鼠黒质多巴胺能神经元mhc-ⅰ表达升高,而正常对照小鼠黒质多巴胺能神经元不表达mhc-ⅰ。并且,PD模型小鼠的黒质可检测到明显的CD8+T细胞浸润,而正常对照组小鼠细胞毒性T细胞浸润明显减少。进一步利用腺病毒技术抑制黑质mhc-ⅰ蛋白表达后CD8+T细胞浸润减少,多巴胺能神经元死亡减少。3、被敲低PINK1蛋白的SH-SY5Y细胞经mpp+损伤后,mhc-ⅰ表达较对照组细胞更为明显。研究结论:1、多巴胺能神经元在正常情况下不表达mhc-ⅰ,但是在PD细胞模型中,mhc-ⅰ表达增加,出现抗原提呈现象。2、PD动物模型中多巴胺能神经元mhc-ⅰ表达升高,激活自身免疫反应,加剧PD进展;进一步敲低mhc-ⅰ表达可抑制自身免疫活化,减轻MPTP诱导多巴胺能神经元损伤。3、多巴胺能神经元发生抗原提呈现象与帕金森病相关蛋白PINK1有关。

关键词：帕金森病自身免疫 mhc-ⅰ 多巴胺能神经元 PINK1

mhc-ⅰ在特发性炎性肌病患者肌肉组织中表达的研究

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现代生物医学进展 2010年第12期10卷 2212-2214页

作者：刘丽娜贾宏阁康娟第四军医大学西京医院神经内科陕西西安710032

目的:探讨mhc-ⅰ在IIM发生发展中的作用和机制。方法:对收集的15例IIM患者进行肌肉活检,观察其病理结构的改变、mhc-ⅰ在患者肌肉组织中的分布表达情况,并与非炎症性肌病患者作对照。结果:1.在IIM患者肌肉组织中明确有mhc-ⅰ类分子的表... 详细信息

目的:探讨mhc-ⅰ在IIM发生发展中的作用和机制。方法:对收集的15例IIM患者进行肌肉活检,观察其病理结构的改变、mhc-ⅰ在患者肌肉组织中的分布表达情况,并与非炎症性肌病患者作对照。结果:1.在IIM患者肌肉组织中明确有mhc-ⅰ类分子的表达,其阳性率为100%;2.虽有6例IIM患者肌纤维中没有明显的炎性细胞浸润,但患者还是出现了临床症状且肌酶异常;***-Ⅰ在IIM肌肉组织中的表达强弱程度与病人肌酶呈正相关性,且具有统计学意义(Pmhc-ⅰ类分子可以作为IIM早期诊断的指标之一,其表达强弱与患者病情程度有相关性。

关键词：特发性炎性肌病 mhc-ⅰ CD8+