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氧化应激下细胞自噬对黑素细胞mhc Ⅰ类分子膜转位的作用

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中国皮肤性病学杂志 2023年第8期37卷 878-883页

作者：王婧莹毛汉潇曾紫原潘映浩刘汝兰何渊民西南医科大学附属医院皮肤科四川泸州646000

目的探索氧化应激状态下细胞自噬在黑素细胞主要组织相容性复合体(mhc)Ⅰ类分子膜转位过程中的作用。方法分离并培养正常人原代黑素细胞,以H_(2)O_(2)处理后,采用免疫荧光检测黑素细胞膜mhc Ⅰ类分子分布及表达、黑素细胞内自噬小体数... 详细信息

目的探索氧化应激状态下细胞自噬在黑素细胞主要组织相容性复合体(mhc)Ⅰ类分子膜转位过程中的作用。方法分离并培养正常人原代黑素细胞,以H_(2)O_(2)处理后,采用免疫荧光检测黑素细胞膜mhc Ⅰ类分子分布及表达、黑素细胞内自噬小体数量,Western blot检测黑素细胞膜表面mhc Ⅰ类分子、自噬相关蛋白表达水平。用ATG5-shRNA干涉黑素细胞自噬后,用免疫荧光检测黑素细胞膜mhc Ⅰ类分子膜转位情况,Western blot检测黑素细胞膜表面mhc Ⅰ类分子表达水平。结果 H_(2)O_(2)处理黑素细胞24 h后可促进黑素细胞内mhc Ⅰ类分子向胞膜转位,诱导黑素细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著增高、p62蛋白表达显著下降、自噬小体数量增多。氧化应激状态下抑制细胞自噬可促进黑素细胞内mhc Ⅰ类分子向胞膜转位。结论氧化应激下细胞自噬水平升高可抑制黑素细胞内mhc Ⅰ类分子向胞膜转位。

关键词：细胞自噬黑素细胞氧化应激 mhcⅰ类分子

基于TAP分子亲和力模型预测mhcⅰ类分子提呈短肽的免疫原性

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生物化学与生物物理进展 2020年第2期47卷 157-168页

作者：盛浩卢玉峰包永明辽宁石油化工大学理学院抚顺113001 大连理工大学数学科学学院大连116023 大连理工大学生命科学与技术学院大连116023

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,mhc)Ⅰ类分子亲和力模型有助于筛选出候选短肽,为实验确定可以与mhcⅰ类分子形成复合物从而激活细胞毒性T细胞的短肽提供帮助;抗原处理相关转运体(transporter associated with ... 详细信息

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,mhc)Ⅰ类分子亲和力模型有助于筛选出候选短肽,为实验确定可以与mhcⅰ类分子形成复合物从而激活细胞毒性T细胞的短肽提供帮助;抗原处理相关转运体(transporter associated with antigen processing,TAP)分子亲和力模型也可用于筛选候选短肽;如何更好利用两类亲和力模型筛选出候选短肽、这两类亲和力模型对短肽选择性的异同以及这种选择性异同的生物学机制尚不清楚.本文重新整理了TAP亲和力测试集,使训练样本达到699个;使用核函数平衡矩阵算法建立的TAP亲和力模型预测精度高于同类算法,5折交叉检验Pearson相关系数0.89;结合HLA A3分子亲和力模型、TAP亲和力模型显著提高免疫原性短肽预测精度,AUC值从~0.82上升到0.87.提高的原因是两个亲和力模型对第2、9位置"最佳"氨基酸不同偏好性和这种不同偏好的互补性造成的.TAP分子与短肽模拟对接结果反映了这个结论.TAP亲和力可在线预测(http://www.***.top/mbtwo/major.aspx).

关键词：免疫原性细胞毒性T细胞 mhcⅰ类分子抗原处理相关转运体核函数平衡矩阵方法

点突变p53抗原肽的预测及其与mhcⅰ类分子的结合

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中华肿瘤杂志 1997年第4期19卷 249-252页

作者：黄兰青罗利群李默漪崔大敷张友会中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所中国科学院上海生物化学研究所

目的从肿瘤抗原的全长氨基酸序列中预测肿瘤抗原肽，据此指导肿瘤肽疫苗的设计和制备。方法采用基序（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓｍｏｔｉｆ）预测法，经计算机ＰＥＰＭＯＴＩＦ软件预测含点突变的小鼠ｐ５３蛋白肽，并建立一个计分系统来估测... 详细信息

目的从肿瘤抗原的全长氨基酸序列中预测肿瘤抗原肽，据此指导肿瘤肽疫苗的设计和制备。方法采用基序（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓｍｏｔｉｆ）预测法，经计算机ＰＥＰＭＯＴＩＦ软件预测含点突变的小鼠ｐ５３蛋白肽，并建立一个计分系统来估测预测肽与ＭＨＣⅠ类分子结合的可能性，进一步通过ＭＨＣⅠ类分子－肽结合试验和ＭＨＣⅠ类分子－肽结合稳定性试验检测它们与ＭＨＣⅠ类分子的结合力和亲和力。结果预测了３条肽，其中ｍｐ５３Ｐ１３２Ｆ（ＬＮＫＬＦＦＱＬ）能与Ｈ－２Ｋｂ结合而不与Ｈ－２Ｄｂ结合；ｍｐ５３Ｐ２４６Ｓ（ＭＧＧＭＮＲＳＰＩＬ）和ｍｐ５３Ｐ２７０Ｃ（ＧＲＤＳＦＥＶＣＶ）既不与Ｈ－２Ｋｂ结合也不与Ｈ－２Ｄｂ结合。肽与ＭＨＣⅠ类分子之间的结合与用计分系统计算的肽积分高低有关，即高分值的肽能与相应的ＭＨＣⅠ类分子结合。结论计算机ＰＥＰＭＯＴＩＦ软件配合肽计分是简便有效的ＭＨＣⅠ类分子结合肽预测法。

关键词：点突变 P53蛋白 mhcⅰ类分子肿瘤免疫疗法

重组mhcⅰ类分子K^b-EGFP分子的构建及表达

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免疫学杂志 2004年第2期20卷 100-102,109页

作者：姜曼万瑛周镜然邹丽云韩俊峰吴玉章第三军医大学全军免疫学研究所重庆400038

目的　构建绿色荧光蛋白标记的mhcⅰ类分子Kb(Kb EGFP融合蛋白 ) ,并在哺乳动物细胞中获得功能性表达。方法　RT PCR的方法获得小鼠mhcⅰ类分子KbcDNA ,克隆入真核表达载体pEGFP N1中EGFP分子的上游 ,脂质体转染COS 7细胞 ,G4 18加压筛... 详细信息

目的　构建绿色荧光蛋白标记的mhcⅰ类分子Kb(Kb EGFP融合蛋白 ) ,并在哺乳动物细胞中获得功能性表达。方法　RT PCR的方法获得小鼠mhcⅰ类分子KbcDNA ,克隆入真核表达载体pEGFP N1中EGFP分子的上游 ,脂质体转染COS 7细胞 ,G4 18加压筛选获得抗性重组细胞。荧光显微镜下观测重组分子的表达及胞内定位情况。结果　分子克隆的方法获得了预期的重组质粒 ,质粒经DNA序列测定证实阅读框无误 ,转染COS 7细胞后的抗性克隆胞浆内可以观察到明亮的绿色荧光 ,特征性地分布于细胞质膜 ,及核周、膜下的囊泡结构中。结论　所构建的Kb EGFP融合蛋白在细胞内表达后具有mhcⅰ类分子的特征性分布 ,提示该重组分子具有野生型mhcⅰ类分子的生物学特性和胞内分布特征。

关键词： mhcⅰ类分子绿色荧光蛋白融合蛋白重组表达

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mhcⅰ类分子在内质网中的组装研究进展

免疫学杂志 2001年第Z1期17卷 1-4页

作者：牟芝蓉吴玉章第三军医大学免疫学研究所重庆400038

mhcI类分子在内质网中组装形成肽 mhc复合体。抗原肽主要来自于胞内蛋白 ,在蛋白酶体作用下形成的 8～ 10个氨基酸小肽。内质网中的多个伴侣分子与I类分子相互作用形成肽组装复合体。这些伴侣分子对于Ⅰ类分子的有效组装以及配体的选择... 详细信息

mhcI类分子在内质网中组装形成肽 mhc复合体。抗原肽主要来自于胞内蛋白 ,在蛋白酶体作用下形成的 8～ 10个氨基酸小肽。内质网中的多个伴侣分子与I类分子相互作用形成肽组装复合体。这些伴侣分子对于Ⅰ类分子的有效组装以及配体的选择均有重要作用。

关键词： mhcⅰ类分子肽组装复合体伴侣分子

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mhcⅰ类分子对外源蛋白的递呈

上海免疫学杂志 1999年第6期19卷 380-382页

作者：徐卫锋中国科学院上海细胞生物学研究所上海200031

经典的mhcⅰ类分子对内源蛋白的递呈途径被广泛接受。然而,无论人为或天然情况下都有mhcⅰ类分子对外源蛋白递呈现象的存在。人们对这一现象的机理提出了多种可能的解释。

关键词： mhcⅰ类分子外源蛋白递呈

鸳鸯鸭mhcⅰ类分子蛋白表达与结构分析及其限制性病毒T细胞表位的筛选

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鸳鸯鸭MHCⅠ类分子蛋白表达与结构分析及其限制性病毒T细胞表位的...

作者：孙凯河南农业大学

学位级别：硕士

主要组织相容性复合体Ⅰ(mhcⅠ)广泛存在于所有有核细胞表面,是由mhcⅠ类基因编码的重链(α链)同另一条染色体上β2m基因编码的轻链(β2m链)以非共价键连接而组成,它可以和病毒的某些抗原多肽结合,将多肽递呈到细胞表面,被CTL细胞的TCR... 详细信息

主要组织相容性复合体Ⅰ(mhcⅠ)广泛存在于所有有核细胞表面,是由mhcⅠ类基因编码的重链(α链)同另一条染色体上β2m基因编码的轻链(β2m链)以非共价键连接而组成,它可以和病毒的某些抗原多肽结合,将多肽递呈到细胞表面,被CTL细胞的TCR识别,诱导机体产生细胞免疫应答,这些多肽被称为T细胞表位。为了阐明鸭mhcⅠ的特征,进一步体外重建鸭mhcⅠ-β2m复合体来鉴定禽源病毒的T细胞表位,我们进行了以下研究: 1采用RT-PCR技术从鸳鸯鸭脾脏组织提取的RNA中克隆了鸳鸯鸭mhcⅰ类分子的α和β2m链基因。结果显示,克隆获得的909bpα链基因中包含1个完整的α链胞外区(功能区)成熟肽基因序列以及部分跨膜区基因序列和信号肽序列,共编码303个氨基酸。α链胞外区成熟肽长度为271个氨基酸,其包含92个氨基酸的α1区,89个氨基酸的α2区,90个氨基酸的α3区,在α2、α3区域分别存在2个半胱氨酸残基,有1个潜在的N-糖基化位点。分析发现不同物种α2、α3区域差异较大,进化关系显示鸭比鱼类、蛙、鸡等低等脊椎动物更接近人类mhcⅰ类分子,推测其在动物mhcⅰ类分子的起源与分化中占有重要的位置。所克隆的440bp鸳鸯鸭β2m链基因中,前297bp为β2m链成熟肽基因,共编码99个氨基酸,成熟肽第25位和80位为半胱氨酸(C),且在第80位半胱氨酸附近序列为“YTCRVDH”,这与免疫球蛋白超基因家族的特征基序“YxCxVxH”相符。与GenBank中已登陆的北京鸭β2m链基因序列(AB246408)同源性为100%,证明了其高度保守性。 2用pET-28a(+)/E.coli表达系高效表达了鸳鸯鸭mhcⅰ类分子的α链胞外区和β2m链成熟肽,经SDS-PAGE显示目的蛋白大小分别为31.0 KDa和11.4 KDa,BandScan软件分析显示,目的蛋白的含量分别约占细菌总蛋白29.8%和36.5%。对克隆的鸳鸯鸭mhcⅰ类分子的α链胞外区和β2m成熟肽基因核苷酸序列推导的氨基酸序列进行了二级结构(2D)、三级结构(3D)分析,结果显示鸳鸯鸭mhcⅰ类分子的α链胞外区链成熟肽具有典型的α螺旋结构,其中β-折叠含量最少,为13%;α-螺旋和β-转角含量都在24%;其它松散结构含量最为丰富,分布为40%。β2m链成熟肽蛋白中四种元件组成相对均衡,其中α-螺旋、β-转角和其它松散结构含量较多,为26%,β-折叠含量则较少,为21%。同源建模的α链胞外区成熟肽的抗原多肽结合区(PBD)由2个反向平行的α螺旋和8条β片层组成,这同人(HLA-A2)和小鼠(H2)结构类似,β2m链成熟肽3D结构与人及小鼠的类似,但在α螺旋、β折叠、转角和其他松散结构的具体位置与数目方面存在微小差异。 3根据鸳鸯鸭mhcⅰ类分子α链胞外区β2m链成熟肽的结构和功能筛选出了3条可能为体外重建的鸳鸯鸭mhcⅠ-β2m复合体所结合的禽流感病毒(Influenza A virus (A/duck/Henan/1652/2006(H5N1))核衣壳蛋白T细胞表位NP71-79(FDERRNRYL)、NP217-215 (IAYERMCNI)和NP380-388 (LERSRYWAI)。综上所述,本研究揭示了鸳鸯鸭mhcⅠ类和β2m基因的特征,获得了具有正常功能结构的鸳鸯鸭mhcⅰ类分子的α链胞外区和β2m链成熟肽,阐明了其2D结构组成及3D结构、功能,并在此基础上筛选了鸳鸯鸭mhc I-β2m复合体可能结合的禽流感病毒T细胞表位,为进一步构建鸭mhcⅠ-β2m复合体体外鉴定禽流感病毒及其它病毒T细胞表位平台奠定了基础。

关键词：鸳鸯鸭 mhcⅰ类分子蛋白表达结构与功能分析禽流感病毒T细胞表位

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鸡mhcⅰ类分子信号肽的预测及其序列特征

畜牧与饲料科学 2015年第12期36卷 1-3页

作者：戴银王骏俊沈学怀胡晓苗赵瑞宏张丹俊安徽省农业科学院畜牧兽医研究所安徽合肥230031 安徽省宣城市畜牧兽医局安徽宣城242000

旨在进一步研究mhcⅰ类分子作用机制,分析mhcⅰ类分子α链和β2m链的信号肽序列特征。运用信号肽分析软件预测淮南麻黄鸡mhcⅰ类分子的α链和β2m链信号肽区域,通过序列比对,进一步分析鸡mhcⅰ类分子2条链的序列特征。信号肽分析软件预... 详细信息

旨在进一步研究mhcⅰ类分子作用机制,分析mhcⅰ类分子α链和β2m链的信号肽序列特征。运用信号肽分析软件预测淮南麻黄鸡mhcⅰ类分子的α链和β2m链信号肽区域,通过序列比对,进一步分析鸡mhcⅰ类分子2条链的序列特征。信号肽分析软件预测结果表明,鸡mhcⅰ类分子的α链和β2m链均存在信号肽,且均由21个氨基酸残基组成。序列分析结果表明,鸡mhcⅰ类分子β2m链信号肽区域的氨基酸序列较为保守,但α链信号肽区域则呈现出一定的多态性,有23.8%的氨基酸残基发生突变。此外,将鸡mhcⅰ类分子信号肽序列与鸭、人和鼠的相应区域进行比对,表明鸡与鸭的α链和β2m链分子信号肽相似性均较高,分别为60%和65%,但与人和鼠的相似性均较低。

关键词：鸡 mhcⅰ类分子信号肽序列特征

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NK细胞识别mhc Ⅰ类分子的机理

国外医学（免疫学分册） 1999年第1期22卷 33-36页

作者：张惠丽北京儿童医院

人及鼠Ｎ细胞上抑制性受体的结构功能已研究得较为清楚了，其识别ＭＨＣⅠ类分子的机理公认的为“失去自己”假说，具体作用模式为效应抑制模式和靶干扰模式，前者已越来越为实验所证实。本文对效应抑制模式的信号传导机制及ＮＫ细胞抑... 详细信息

人及鼠Ｎ细胞上抑制性受体的结构功能已研究得较为清楚了，其识别ＭＨＣⅠ类分子的机理公认的为“失去自己”假说，具体作用模式为效应抑制模式和靶干扰模式，前者已越来越为实验所证实。本文对效应抑制模式的信号传导机制及ＮＫ细胞抑制性受体识别ＭＨＣⅠ类分子位点的研究进行了综述。

关键词：信号传导机制 NK细胞识别 mhcⅰ类分子