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视网膜色素上皮细胞吞噬功能与mertk-Ras-肌球蛋白通路关系的研究

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国际眼科杂志 2016年第1期16卷 28-33页

作者：孙昱昭张若霜谷峰中国医科大学附属一院眼科中国辽宁省沈阳市110001

目的：研究视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞吞噬功能与mertk受体及其下游信号通路Ras-MEK-MLCK-肌球蛋白的关系。方法：用视细胞外节膜盘（rod outer segments,ROS）于37益孵育离体培养的3~5代C57小鼠RPE细胞,在... 详细信息

目的：研究视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞吞噬功能与mertk受体及其下游信号通路Ras-MEK-MLCK-肌球蛋白的关系。方法：用视细胞外节膜盘（rod outer segments,ROS）于37益孵育离体培养的3~5代C57小鼠RPE细胞,在孵育0、30、60、120、180、240min终止吞噬反应。双重荧光标记法检测RPE细胞吞噬动力学;以mertk及Ras抗体、磷酸化MEK及MLCK抗体应用Western-Blot方法检测不同孵育时间（30、60、120、180min）mertk、Ras、MEK及MLCK的激活状态;以瞬时转染质粒方法抑制Ras及mertk基因表达后,再次以Western-Blot方法检测对应时间mertk-Ras通路激活状态及吞噬功能的变化。结果：C57小鼠RPE细胞吞入ROS发生在孵育30min,并在3h达到饱和。在吞噬过程中,随着孵育时间的延长,RPE细胞mertk、Ras、MEK和MLCK的蛋白表达水平不断增多（与对照组相比,P〈0.05）。Ras及mertk干扰后的RPE细胞与ROS共孵育（30、60、120、180min）的全过程中,mertk、Ras、MEK和MLCK的蛋白表达及ROS的吞入数量始终维持较低水平,仅在孵育180min见到少量ROS吞入;与未转染RPE细胞相比,si Ras-RPE细胞及si mertk-RPE细胞与ROS共孵育120、180min时,mertk、Ras、MEK及MLCK的蛋白表达量均明显减少（P〈0.05）。结论：Ras-MEK-MLCK-肌球蛋白通路是鼠RPE细胞吞噬过程中mertk受体激活的下游信号通路。

关键词：视网膜色素上皮吞噬 mertk Ras 肌球蛋白

mertk分子在JEV感染单核/巨噬细胞中的作用及其调控机制研究

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MerTK分子在JEV感染单核/巨噬细胞中的作用及其调控机制研究

作者：段甜延安大学

学位级别：硕士

乙型脑炎是由乙型脑炎病毒(又称日本脑炎病毒,Japanese Encephalitis Virus,JEV)感染引起的急性中枢神经系统疾病,主要通过蚊虫叮咬宿主传播,幸存患者大多都伴有严重的神经和精神系统后遗症。尽管减毒或者灭活JEV疫苗具有良好的保护效率... 详细信息

乙型脑炎是由乙型脑炎病毒(又称日本脑炎病毒,Japanese Encephalitis Virus,JEV)感染引起的急性中枢神经系统疾病,主要通过蚊虫叮咬宿主传播,幸存患者大多都伴有严重的神经和精神系统后遗症。尽管减毒或者灭活JEV疫苗具有良好的保护效率,但是在流行区疫苗接种不能全部覆盖,故目前在全世界范围内每年仍约有6-7万的乙脑病例。JEV尚无特异有效的治疗药物和方法。因此,更加深入的研究JEV感染及致病机制,将有助于JEV药物靶点的发现及治疗策略的研发。JEV感染导致脑炎主要是分为外周的病毒血症期和脑内炎症期两个阶段。在外周,JEV主要的靶细胞是单核/巨噬细胞,其不仅可在单核/巨噬细胞内复制,而且可以诱导单核/巨噬细胞活化并产生炎症因子和趋化因子,这些细胞因子不但可以参与外周免疫系统的抗病毒作用,而且可以从外周迁移到中枢神经系统加剧脑内炎症反应。关于JEV如何进入单核/巨噬细胞及调控机制目前还不清楚。mertk是TAM受体酪氨酸激酶家族(TYRO3,AXL和mertk)的成员之一,在髓系细胞上高表达,同时在维持组织细胞稳态、调节炎症方面发挥着重要作用。近年来一些研究还发现宿主细胞的mertk可以通过配体Gas6/Pro S1与病毒包膜上的磷脂酰丝氨酸结合,模拟凋亡细胞被吞噬的过程,从而介导病毒的入胞;同时在疾病发展中,mertk在调控炎症修复方面也发挥着重要的作用。目前关于mertk分子在JEV致脑炎过程中调节单核/巨噬细胞感染与炎症方面的作用机制尚不清楚,我们进行了如下研究。目的:以分离培养的鼠源性原代骨髓来源单核/巨噬细胞(BMDMs)、mertkBMDMs和单核巨噬细胞系RAW264.7为研究对象,明确mertk分子是否参与了JEV感染骨髓巨噬细胞的入胞过程、病毒复制调控以及BMDMs极化方向。为理解JEV的致病机制提供实验基础。方法:分离小鼠骨髓细胞,利用L929细胞培养上清诱导小鼠骨髓细胞分化成BMDMs,流式细胞术鉴定其纯度。1.收取JEV感染(MOI=0.1)BMDMs和RAW264.7细胞12 h、24 h的样品,RT-q PCR检测不同感染时间点JEV m RNA表达和mertk m RNA表达水平变化;***与JEV(MOI=10)冷孵育40 min,充分清洗未附着的病毒,RT-q PCR检测WT和mertk小鼠BMDMs吸附的JEV m RNA差异;冷孵育后37℃启动JEV进入细胞内,分别在1 h、4 h后通过RT-q PCR检测WT和mertk两组小鼠BMDMs细胞内JEV m RNA表达差异。***感染(MOI=0.1)WT和mertk小鼠BMDMs 12 h、24 h后收取上清和细胞样品,RT-q PCR检测JEV m RNA复制水平,空斑形成实验检测细胞上清中感染性病毒颗粒水平,进一步利用RT-q PCR测定BMDMs感染JEV后干扰素相关基因的表达。***-8检测mertk激酶抑制剂UNC2881对于BMDMs活力的影响,确定UNC2881的工作浓度;用UNC2881处理BMDMs并感染JEV,RT-q PCR检测JEV m RNA表达变化。5.用流式细胞术和RT-q PCR检测JEV感染24 h后BMDMs的极化情况;流式细胞术和RT-q PCR检测并比较WT和mertkBMDMs在极化方面的差异;Western blot检测WT和mertkBMDMs中STAT1、p-STAT1蛋白表达的差异。结果:***-q PCR结果显示JEV的感染上调了BMDMs和RAW264.7细胞中mertk分子的表达。2.4℃孵育40 min,细胞洗涤3次后,RT-q PCR结果显示:与WT BMDMs相比,mertkBMDMs表面吸附的JEV明显减少。之后37℃孵育1 h和4 h,mertkBMDMs内的病毒RNA水平也比WT细胞低。***和WT两种小鼠的BMDMs在MOI为0.1的情况下感染JEV 12 h和24 h后,RT-q PCR、空斑测定结果显示:与WT BMDMs相比,在24 h mertkBMDMs中JEV增殖明显减少。***-q PCR的结果显示:与WT BMDMs相比,JEV感染的mertkBMDMs中干扰素相关基因IFN-α、MYD88、IFI204等明显上调表达。***-q PCR结果显示:在JEV感染后36 h,与DMSO处理组相比,UNC2881组处理的BMDMs JEV m RNA水平明显降低。***感染后,流式细胞术结果显示:BMDMs细胞标记物CD86表达升高同时CD206的表达降低;RT-q PCR结果显示:M1表型标志分子IL-1β、i NOS、TNF-α、IL-6、CD16 m RNA在JEV感染BMDMs后均有明显的升高。7.流式

关键词： mertk JEV 单核/巨噬细胞 M1

mertk在结核性胸腔积液和恶性胸腔积液鉴别诊断中的价值

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MerTK在结核性胸腔积液和恶性胸腔积液鉴别诊断中的价值

作者：张珍珍吉林大学

学位级别：硕士

目的:探讨mertk在结核性胸腔积液(TPE)和恶性胸腔积液(MPE)鉴别诊断中的价值及其与相关炎症因子的相关性。研究对象及研究方法:于2017年4月至2018年9月期间,我们筛选了符合标准的就诊于吉林大学第一医院的初治型胸腔积液患者,并收集其... 详细信息

目的:探讨mertk在结核性胸腔积液(TPE)和恶性胸腔积液(MPE)鉴别诊断中的价值及其与相关炎症因子的相关性。研究对象及研究方法:于2017年4月至2018年9月期间,我们筛选了符合标准的就诊于吉林大学第一医院的初治型胸腔积液患者,并收集其起始段胸腔穿刺液,需在30分钟内进行实验室处理获得胸腔积液上清液。所有入组患者均为经胸腔镜取病理并诊断明确的患者,共有104例患者纳入本研究,其中结核性胸腔积液(TPE)组54例,恶性胸腔积液(MPE)组50例。收集患者一般资料,采用ELISA检测技术,检测出结核性胸腔积液组与恶性胸腔积液组中mertk的浓度。我们采用SPSS17软件进行统计学分析,1)若两组间符合正态分布,采用均±标准差(x±s)表示,若符合非正态分布,则采用中位数表示。组间比较若符合正态分布,选择t检验,符合非正态分布,则选择非参数秩和检验。2)研究胸水中mertk的表达水平对胸腔积液性质的诊断价值,主要采用采用受试者工作特征曲线(ROC)进行分析。3)研究胸腔积液中mertk的表达水平与胸水中各种炎症因子如IL-1β、TNF-α的表达水平的相关性,主要采用Pearson线性相关法分析,相关系数用r表示,以Pmertk的浓度为5310.38±2769.791ng/L,恶性胸水中mertk浓度为904.29±561.547ng/L,结核性胸腔积液中mertk浓度明显高于恶性胸腔积液,有明显统计学差异(Pmertk鉴别TPE组与MPE组的ROC曲线下面积为0.961,敏感度88.9%,特异性98.0%,临界值(cut-off值)为2178.22ng/L(Pmertk表达水平与白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)无相关性。结论:1.在结核性胸腔积液组与恶性胸腔积液组中,mertk浓度存在显著统计学差异(Pmertk浓度大于2178.22ng/L时,倾向于结核性胸腔积液。3.当胸腔积液上清液中mertk浓度小于2178.22ng/L时,倾向于恶性胸腔积液。

关键词：结核恶性肿瘤胸腔积液 mertk ELISA

传代后视网膜色素上皮细胞mertk基因表达变化的研究(英文)

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国际眼科杂志 2013年第3期13卷 421-424页

作者：孙昱昭彭荣梅刘经纬洪晶中国医科大学附属第一医院眼科中国医科大学眼科中心中国辽宁省沈阳市110004 北医三院北京大学眼科中心中国北京市100191 中国医科大学附属第一医院外科中国辽宁省沈阳市110004

目的:检测传代后的视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial,RPE)mertk基因表达的变化,明确传代的异体RPE移植的可行性。方法:离体培养原代的人视网膜色素上皮细胞,将原代细胞以1∶3比例进行传代至第6代,以SYBRGreen I real ti... 详细信息

目的:检测传代后的视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial,RPE)mertk基因表达的变化,明确传代的异体RPE移植的可行性。方法:离体培养原代的人视网膜色素上皮细胞,将原代细胞以1∶3比例进行传代至第6代,以SYBRGreen I real time RT-PCR方法检测不同传代数的RPE细胞mertk基因表达的水平,采用2-ΔΔCT方法计算定量PCR的数值进而比较各代mertk基因表达的的变化。结果:原代及传代的RPE细胞均表达mertk基因。第二代RPE细胞mertk基因表达水平与原代相同,第3～6代RPE细胞mertk基因表达水平均明显低于原代。结论:传代的RPE细胞可以作为异体视网膜色素上皮细胞移植的细胞来源,但以第二代的RPE细胞为最佳选择。

关键词：视网膜色素上皮传代 mertk

可溶性mertk在胸腔积液病因学中的诊断价值

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中国老年学杂志 2020年第18期40卷 3896-3898页

作者：赵海鹏张珍珍丁会华北电力大学医院外科北京102206 潍坊市人民医院吉林大学第一医院

目的讨论mertk在胸腔积液常见病因鉴别中的临床意义及其与一些常见炎症指标的关系。方法经胸腔镜下胸膜活检,明确病理诊断共104例患者,其中结核性胸腔积液(TPE)组54例,恶性肿瘤性胸腔积液(MPE)组50例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两... 详细信息

目的讨论mertk在胸腔积液常见病因鉴别中的临床意义及其与一些常见炎症指标的关系。方法经胸腔镜下胸膜活检,明确病理诊断共104例患者,其中结核性胸腔积液(TPE)组54例,恶性肿瘤性胸腔积液(MPE)组50例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组mertk含量。结果TPE组中mertk浓度〔(5310.380±2769.791)ng/L〕显著高于MPE组〔(904.290±561.547)ng/L,Pmertk鉴别两组的受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.961,敏感度88.9%,特异性98.0%,临界值为2178.22 ng/L(Pmertk含量与白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α无明显相关性。结论mertk可用于鉴别结核性胸腔积液与恶性胸腔积液。

关键词：结核恶性肿瘤胸腔积液 mertk

非酒精性脂肪肝及冠心病发病风险与mertk rs4374383遗传易感基因位点的相关性研究

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非酒精性脂肪肝及冠心病发病风险与MERTK rs4374383遗传易感基因...

作者：叶梦斐大连医科大学

学位级别：硕士

背景非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)目前已成为世界范围内最常见的慢性肝脏疾病,其不仅可导致肝脏疾病相关的死亡,还与冠心病(Coronary Artery Disease,CAD)、2型糖尿病等多种疾病的高发密切相关。NAFLD与CAD... 详细信息

背景非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)目前已成为世界范围内最常见的慢性肝脏疾病,其不仅可导致肝脏疾病相关的死亡,还与冠心病(Coronary Artery Disease,CAD)、2型糖尿病等多种疾病的高发密切相关。NAFLD与CAD的风险增加有关,脂质代谢异常、胰岛素抵抗等均是两种疾病的共同危险因素。遗传因素对NAFLD及CAD的发生发展可产生重要作用。髓样上皮再生酪氨酸激酶(Myeloid-Epithelial-Reproductive Tyrosine Kinase,mertk)是一种定位于胞质膜的酪氨酸激酶受体,国外研究表明mertk rs4374383 A等位基因可通过提高脂质代谢及胰岛素敏感性影响NAFLD及CAD的发病,但在我国人群中mertk rs4374383基因多态性与NAFLD及CAD发病风险的相关性尚不明确。目的探讨mertk rs4374383基因多态性与非酒精性脂肪肝及冠心病易感性的相关性。方法(1)本研究采用病例对照研究,受试者均来自青岛地区部分人群。本研究纳入132名NAFLD患者为NAFLD组,148名CAD患者为CAD组,同时满足NAFLD和CAD诊断标准的112名患者作为合并组,于查体中心随机筛选213名健康个体为健康对照组,并收集四组的一般临床资料。(2)收集受试者空腹血于抗凝管中,检测空腹血糖(GLU),甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),高密度脂蛋白(HDL),低密度脂蛋白(LDL),谷丙转氨酶(ALT),谷草转胺酶(AST),谷丙转肽酶(GGT),碱性磷酸酶(ALP),总胆红素(TBIL)等指标。(3)提取血液样品DNA,采用聚合酶链反应及飞行质谱分析的方法检测mertk rs4374383位点的基因型。(4)统计学分析:采用Hardy-Weinbeurg遗传平衡定律检验四组受试者是否有群体代表性,两组间符合正态分布的计量资料应用独立样本t检验分析,非正态分布的计量资料应用Wilcoxon秩和检验分析,计数资料的分析比较应用Pearson χ检验,非条件Logistic回归模型分析各组间基因型的发病风险,本文的数据分析均采用SPSS 25.0软件,以P0.05),在年龄、BMI、GLU、TG、TC、HDL、LDL、ALT、GGT、ALP的差异存在统计学意义(Pmertk rs4374383位点基因型的分布在CAD组与对照组间,合并组与对照组间,NAFLD组与合并组间,CAD组与合并组间,均存在统计学差异(Pmertk rs4374383等位基因的发病情况,分析得出:相比于G等位基因,mertk rs4374383位点A等位基因为NAFLD(OR=0.680,95%CI:0.470～0.983,P=0.040),CAD(OR=0.440,95%CI:0.313～0.619,P0.05)。结论青岛地区部分人群中,mertk rs4374383位点基因多态性与NAFLD及CAD疾病的易感性相关。mertk rs4374383位点AA+AG基因型为NAFLD及NAFLD合并CAD的保护因素,mertk rs4374383位点A等位基因为NAFLD及NAFLD合并CAD的保护因素。

关键词：非酒精性脂肪肝冠心病 mertk 基因多态性

受体酪氨酸激酶mertk分子在JEV感染致脑炎中的作用研究

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受体酪氨酸激酶MerTK分子在JEV感染致脑炎中的作用研究

作者：罗传玉延安大学

学位级别：硕士

病毒性脑炎是威胁人类生命健康的一类重要疾病,其中流行性乙型脑炎又称为日本脑炎(Japanese encephalitis,JE),是由嗜神经性乙型脑炎病毒(简称乙脑病毒),国际上称日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的脑实质性炎症为主... 详细信息

病毒性脑炎是威胁人类生命健康的一类重要疾病,其中流行性乙型脑炎又称为日本脑炎(Japanese encephalitis,JE),是由嗜神经性乙型脑炎病毒(简称乙脑病毒),国际上称日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的脑实质性炎症为主的急性中枢神经系统传染病。全球每年约有6.7万例JE患者,其病死率可高达约25%～30%,幸存者中约有30%～50%患者出现严重的神经、精神系统后遗症。迄今,对于乙脑尚无特异有效的治疗方法。近年来由于JEV疫苗的广泛使用,极大地降低了乙脑的发病率,但是在一些地区还会时常出现局部暴发流行,JEV感染仍然是亚洲多个国家的重要公共卫生问题之一。研究表明,机体被携带JEV的蚊虫叮咬后,病毒首先在局部皮肤和淋巴结中复制,然后经过两次病毒血症,在一部分人群中JEV可突破血脑屏障(Blood brain barrier,BBB)进入中枢神经系统(Central nervous system,CNS),引起神经元的感染与破坏、小胶质细胞活化等,最终导致脑炎发生。目前,在JEV致脑炎过程中哪些分子参与BBB维持与破坏,神经元、胶质细胞中抗病毒相关分子、致病因子的种类及机制等尚不清楚。TAM受体是新近发现的一个受体酪氨酸激酶亚家族,包括Tyro3、mertk和Axl,在固有免疫系统的调控及凋亡细胞的吞噬方面发挥着重要作用。最近一些研究显示,mertk参与病原体入胞、炎症反应调控,特别是在与JEV同属黄病毒属的西尼罗病毒(WNV)感染后保持BBB完整性从而减少脑内炎症中发挥重要作用。目前关于mertk分子在JEV感染致脑炎过程中的作用尚未见报道。为此,我们进行了如下研究:目的:1.研究JEV致脑炎过程中mertk分子在外周组织对病毒复制的影响和炎症反应的调控作用。2.研究JEV致脑炎过程中mertk分子在脑组织对病毒复制的影响和炎症反应的调控作用。方法:1.构建小鼠模型,以mertk基因敲除小鼠和野生型小鼠为对象,通过足底注射(10PFU)明确JEV感染后小鼠存活率以及行为学变化。2.构建足底注射小鼠模型,通过qPCR、Wb以及空斑实验明确两组小鼠感染JEV后外周组织的病毒载量及炎性反应。3.构建mertk基因敲低的巨噬细胞和mertk敲除原代巨噬细胞,通过qPCR明确JEV感染后巨噬细胞中病毒复制和炎症反应。4.构建足底及脑内注射小鼠模型,通过qPCR、Wb、空斑实验以及HE染色明确两组小鼠感染JEV后脑组织的病毒载量及炎性反应。5.构建体内外BBB模型,通过荧光素钠法定量、Wb、组织免疫荧光、qPCR以及电阻抗检测明确JEV感染后体内外BBB通透性的变化。6.构建mertk基因敲低的神经元细胞、星形胶质细胞以及小胶质细胞细胞系,通过qPCR、Wb、空斑试验明确低表达mertk的神经细胞在JEV感染后病毒复制变化。结果:***小鼠JEV感染后发病率和死亡率明显增加,脑炎症状更加明显;与WT小鼠组相比,mertk小鼠感染JEV后外周组织(血液、脾脏)中病毒复制和炎症因子无明显差异;敲除/敲低mertk能够抑制巨噬细胞中病毒的复制及炎症反应。2.与正常小鼠相比,mertk小鼠脑组织中病毒载量较高,炎症反应增加不明显;在体内、外BBB模型中,mertk基因敲除/敲低组在JEV感染后BBB通透性明显增加,内皮细胞紧密连接分子表达量降低;神经元细胞、星型胶质细胞、小胶质细胞中低表达mertk后促进了JEV的复制。结论:***在JEV感染致脑炎的过程是一种保护性因子;***分子缺失对外周组织中JEV复制、炎症反应的影响较小;***分子通过参与BBB完整性的维持,调控JEV在神经元细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞中的复制,从而缓解JEV引起的病毒性脑炎。而其在炎症反应调控方面不明显。

关键词： mertk JEV 脑炎血脑屏障

星形胶质细胞吞噬受体mertk在应激性认知功能障碍中的作用及机制

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星形胶质细胞吞噬受体MERTK在应激性认知功能障碍中的作用及机制

作者：郭博敏军事科学院

学位级别：硕士

第一章应激致认知功能障碍中星形胶质细胞吞噬受体mertk/MEGF10的变化规律目的:观察慢性束缚应激对大鼠认知功能的影响,检测前额叶皮质、海马、杏仁核、纹状体神经元的病理改变和星形胶质细胞活化、吞噬受体表达情况。方法:(1)采用慢... 详细信息

第一章应激致认知功能障碍中星形胶质细胞吞噬受体mertk/MEGF10的变化规律目的:观察慢性束缚应激对大鼠认知功能的影响,检测前额叶皮质、海马、杏仁核、纹状体神经元的病理改变和星形胶质细胞活化、吞噬受体表达情况。方法:(1)采用慢性束缚应激(CRS)方法建立慢性应激小鼠模型,16只SD大鼠随机分为对照组和慢性束缚应激组;(2)采用ELISA法检测脑脊液、血浆GC含量;(3)采用旷场实验检测大鼠自主行为、探究行为与紧张度,采用Morris水迷宫实验检测大鼠的空间学习记忆能力,采用物体识别实验通过检测大鼠对已熟悉物体与新陌生物体的探索时间长短的评价动物的一般学习记忆能力;(4)采用q PCR、WB、免疫荧光法检测前额叶皮质、海马、杏仁核、纹状体突触结构蛋白、MEGF10、mertk表达情况,配合稀疏标记病毒脑立体定位注射,观察树突棘密度变化;(5)ELISA法检测前额叶皮质、海马、杏仁核、纹状体Aβ沉积情况。结果:(1)CRS大鼠血浆、脑脊液皮质酮水平显著升高、体重下降;(2)CRS导致大鼠发生认知障碍,表现为空间学习记忆能力受损、一般学习记忆能力受损、自主探究能力下降、情绪处于焦虑状态;(3)CRS大鼠海马的树突棘密度下降,前额叶皮质、海马突触结构蛋白PSD95、GAP43、SYP表达下降,Aβ沉积增加;(4)前额叶皮质、海马星形胶质细胞发生A1型活化,mertk水平升高,MEGF10水平不变。结论:(1)慢性束缚应激导致大鼠出现认知障碍,前额叶皮质、海马神经元树突棘减少、突触结构损伤、Aβ沉积;(2)慢性束缚应激大鼠星形胶质细胞活化、mertk水平升高,可能与上述变化有关;(3)杏仁核、纹状体神经元、星形胶质细胞无上述改变,可能与认知障碍发生无关。第二章 mertk在应激致认知功能损伤中作用目的:通过下调mertk表达翻转认知功能障碍和神经元病理改变,验证慢性应激时认知功能障碍及神经元病理改变是否与星形胶质细胞激活、mertk表达升高有关。方法:(1)通过r AAV-sh mertk海马立体定位注射,建立Ctrl+GFP、Ctrl+sh mertk、CRS+GFP、CRS+sh mertk四组模型。(2)采用ELISA法检测大鼠脑脊液、血浆GC含量;(3)采用旷场、Morris水迷宫、物体识别实验评价动物学习记忆能力;(4)采用q PCR、WB、免疫荧光法检测海马神经元树突棘密度、突触结构蛋白变化,及星形胶质细胞活化和吞噬受体mertk表达情况。(5)采用荧光共聚焦扫描三维重建海马星形胶质细胞吞噬突触结构蛋白情况。结果:相比于应激组,干扰序列为GGAAGAAATCAAGCCAGATCA的r AAV-sh mertk海马脑立体定位注射能有效降低海马星形胶质细胞mertk表达,减少海马星形胶质细胞吞噬突触结构情况,翻转CRS引起的认知功能障碍及神经元病理变化;结论:慢性束缚应激导致大鼠出现认知障碍,海马神经元树突棘减少、突触结构损伤、Aβ沉积,与星形胶质细胞活化、mertk水平升高、吞噬功能增强密切相关。第三章应激致星形胶质细胞吞噬异常的分子机制目的:建立应激细胞模型,探究GC升高mertk的可能机制,研究mertk在星形胶质细胞吞噬功能中的作用方法:(1)在体外采用不同浓度、不同时间GC干预小鼠小脑星形胶质细胞系C8-D1A,建立合适的应激细胞模型;(2)通过查询UCSC基因数据库、NCBI和JASPAR基因数据库,寻找GC与mertk启动子可能的结合部位;(3)染色质免疫共沉淀法验证预测的GRE(GC结合原件)结合效率和富集倍数(4)抑制mertk功能,观察C8-D1A体外吞噬Aβ情况的变化。结果:(1)100μM 4h GC干预星形胶质细胞,mertk升高水平最高,Megf10表达水平不变;(2)RU486干预应激细胞模型,mertk水平下降;(3)实验组和阴性对照组的富集倍率和富集效率之比小于8,GRE不在mertk上游2000bp启动子区域内;(4)UNC2250干预星形胶质细胞后,在体外吞噬Aβ能力减弱。结论:(1)GC通过糖皮质激素受体(GR)及其基因组效应升高mertk;(2)糖皮质激素结合元件(GRE)位于mertk基因上游启动子2kb区域之外,或者GC通过某种方式间接上调mertk表达;(3)星形胶质细胞通过mertk的活性形式p-mertk发挥吞噬作用,能在体外有效吞噬Aβ蛋白。

关键词：慢性束缚应激星形胶质细胞认知功能障碍 mertk MEGF10 rAAV shmertk 吞噬 RU486 GRE UNC2250 p-mertk

mertk介导NF-κb通路影响雪旺细胞炎症反应的作用

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昆明医科大学学报 2023年第12期44卷 20-24页

作者：付怡丹陈文婷苏晓杨赵燕兰丹凤杨秋萍昆明医科大学第一附属医院干疗科云南昆明650032 昆明医科大学第一附属医院重症医学科云南昆明650032 昆明医科大学第一附属医院糖尿病科云南昆明650032 云南省第一人民医院消化内科云南昆明650032 昆明医科大学第一附属医院内分泌一科云南昆明650032

目的探究mertk表达水平对大鼠雪旺细胞NF-κb通路的调控作用及其可能的机制。方法体外培养大鼠雪旺细胞,免疫印迹法检测mertk在高糖环境雪旺细胞中表达情况。免疫共沉淀法检测内源性mertk与Ikbkb相互作用。免疫印迹法检测沉默mertk后雪... 详细信息

目的探究mertk表达水平对大鼠雪旺细胞NF-κb通路的调控作用及其可能的机制。方法体外培养大鼠雪旺细胞,免疫印迹法检测mertk在高糖环境雪旺细胞中表达情况。免疫共沉淀法检测内源性mertk与Ikbkb相互作用。免疫印迹法检测沉默mertk后雪旺细胞内Ikbkb、P65、肿瘤坏死因子-α表达水平。免疫荧光法检测沉默mertk后mertk、Ikbkb、P65蛋白表达。结果mertk在雪旺细胞中存在表达,且表达量随葡萄糖浓度增加而提高;免疫共沉淀实验表明mertk与Ikbkb在大鼠雪旺细胞内相互作用;免疫印迹实验显示,将雪旺细胞内mertk敲减表达后,与对照组相比,mertk表达水平降低(Pmertk荧光减弱,Ikbkb、P65荧光增强。结论mertk表达降低后,可以通过与Ikbkb进行相互作用,介导调控雪旺细胞NF-κb通路,上调P65和炎症因子TNF-α的表达。

关键词： mertk Ikbkb 核因子κB 雪旺氏细胞糖尿病周围神经病变