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mek-erk信号通路在全反式维A酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化中的作用研究

诊断学理论与实践 2015年第1期14卷 36-40页

作者：盖东征翁香琴盛燕吴婧蔡循上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所上海200025 长治医学院附属和平医院血液科山西长治046000

目的:研究mek-erk信号通路在全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞分化中的作用及其可能的机制。方法:采用APL细胞株NB4作为体外模型,以细胞表面分化抗原CD11b、... 详细信息

目的:研究mek-erk信号通路在全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞分化中的作用及其可能的机制。方法:采用APL细胞株NB4作为体外模型,以细胞表面分化抗原CD11b、四唑氮蓝(NBT)还原实验和形态学观察评估细胞分化;应用蛋白印迹法研究细胞mek和erk的活化状态及PU.1、C/EBPβ、C/EBPε和PML-RARα的蛋白含量。结果 :mek-erk信号通路在ATRA处理早期即活化,并维持48 h。抑制mek活性,可使ATRA诱导的CD11b阳性率从(87.50±4.16)%下降到(38.01±2.79)%,NBT A540值从0.507±0.009下降到0.250±0.010,差异均有统计学意义(Pmekerk信号通路调控PU.1、C/EBPβ和C/EBPε蛋白表达,诱导APL细胞分化。

关键词：急性早幼粒细胞性白血病细胞分化全反式维A酸 mek-erk

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表皮生长因子EGF对胰腺祖细胞增殖的调控

表皮生长因子EGF对胰腺祖细胞增殖的调控

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作者：梁杰东北林业大学

学位级别：硕士

糖尿病是一类常见的代谢疾病,由于胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗所引起,主要包括1型和2型糖尿病。其中2型糖尿病是由于胰腺β细胞自身免疫损伤造成胰岛素分泌不足,所以患者需要注射外源胰岛素。胰岛移植是根本治疗糖尿病的方法,但是供体... 详细信息

糖尿病是一类常见的代谢疾病,由于胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗所引起,主要包括1型和2型糖尿病。其中2型糖尿病是由于胰腺β细胞自身免疫损伤造成胰岛素分泌不足,所以患者需要注射外源胰岛素。胰岛移植是根本治疗糖尿病的方法,但是供体的不足限制了该方法的推广。因此,利用干细胞治疗糖尿病被寄予厚望。本实验室通过胰腺部分消化结合连续转孔方法分离获得了呈集落样生长的胰腺细胞,并证实所分离获得的细胞具有胰腺祖细胞的特性。在此基础上,本实验进一步研究表皮细胞生长因子EGF对胰腺祖细胞增殖的调控,从而为利用胰腺祖细胞治疗糖尿病打下基础。CCK-8检测表明表皮细胞生长因子EGF能够促进胰腺祖细胞的增殖,而且这种增殖不依赖于血清和细胞粘附。Western-blot检测发现经EGF诱导后,细胞的Akt、erk磷酸化水平明显提高,即PI3K-Akt和mek-erk信号通路均被EGF激活;进一步使用信号通路抑制剂U0126和LY294002以及干涉RNA,则发现PI3K-Akt信号通路在EGF诱导的祖细胞增殖中占主要角色。因此,本实验证明表皮细胞生长因子EGF能够通过PI3K-Akt信号通路促进胰腺祖细胞的增殖,从而可能实现体外大量扩增获得胰腺祖细胞,更为利用成体胰腺祖细胞体外分化,移植治疗糖尿病提供了基础。

关键词： EGF 胰腺祖细胞 PI3K-Akt mek-erk

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HDAC1/2/6对狂犬病病毒复制的调控及其敏感细胞系的构建

HDAC1/2/6对狂犬病病毒复制的调控及其敏感细胞系的构建

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作者：殷娟斌中国农业科学院

学位级别：硕士

狂犬病（Rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）感染引起的致死性人兽共患传染病。全球每年约有120万～1700万人被犬等动物咬伤,其中约6万余人死于狂犬病。疫苗接种是预防狂犬病的有效手段,开发RABV高效复制的细胞系能够有效提高... 详细信息

狂犬病（Rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）感染引起的致死性人兽共患传染病。全球每年约有120万～1700万人被犬等动物咬伤,其中约6万余人死于狂犬病。疫苗接种是预防狂犬病的有效手段,开发RABV高效复制的细胞系能够有效提高RABV感染滴度,降低疫苗生产成本。蛋白质乙酰化（Acetylation）是一种重要的蛋白质翻译后修饰,其修饰水平受蛋白质乙酰基转移酶（Histone acetyltransferase,HATs）和蛋白质去乙酰化酶（Histone deacetylase,HDACs）的动态调控,在调节基因表达方面发挥重要作用。已有许多研究表明,去乙酰化修饰参与调控病毒感染所诱导的宿主天然免疫反应,在病毒感染过程中发挥重要作用,但其在RABV感染过程中的作用机制研究较少。基于此,本研究从筛选调控RABV复制的HDACs入手,主要开展了以下方面的工作:1.本研究首先利用HDACs广谱抑制剂TSA和SAHA处理Vero细胞后再感染RABV（RABV-GFP）,在感染后24 h通过荧光显微镜检测其对RABV复制的影响,结果表明其能够显著抑制RABV的复制;为了明确不同HDACs家族成员对RABV复制的影响,利用针对HDACs家族特异性抑制剂处理Vero细胞后再感染RABV,在感染后24 h通过荧光显微镜检测其对RABV复制的影响,结果表明HDACⅠ类家族抑制剂MGCD0103和HDAC6特异性抑制剂Tubastatin A（Tub A,）能够明显抑制RABV的复制。2.本研究通过慢病毒包装系统构建稳定表达HDACs的细胞系。通过构建HDAC1/2/6真核表达质粒转染Vero细胞后再感染RABV,在感染后24 h收集细胞样品。利用Western blot方法检测HDAC1/2/6对RABV复制的影响,结果表明其能够显著促进RABV的复制。根据以上结果,利用慢病毒包装技术成功获得了稳定过表达HDAC1/2/6基因的3种Vero细胞系。通过Western Blot,RT-q PCR,TCID等方法鉴定,与对照组细胞系相比,稳定过表达HDAC1/2/6基因的Vero细胞系能显著促进RABV复制,其中HDAC6基因过表达的Vero细胞系促进RABV复制的效果更加显著。3.针对HDAC1/2/6过表达细胞系对RABV复制的影响,本研究对HDAC6在RABV复制中的作用机制进行进一步探究。首先,RABV感染可以激活mek/erk信号通路,并且mek-erk信号通路的激活有利于RABV复制;通过构建表达RABV结构蛋白的真核表达质粒,发现M蛋白在RABV激活mek-erk信号通路中发挥主要功能;利用IP实验和质谱联合分析,筛选出可能与M蛋白相互作用的潜在宿主蛋白,利用Co-IP试验、间接免疫荧光和激光共聚焦显微镜,表明M蛋白与宿主蛋白HDAC6存在相互作用,进一步研究结果表明,M蛋白与HDAC6相互作用可以加强mek-erk信号通路的激活。综上所述,HDACs参与调控RABV的复制,过表达HDAC1/2/6基因能够显著促进RABV的复制,而且RABV感染后能够激活mek-erk信号通路来促进RABV的增殖,RABV的M蛋白与HDAC6相互作用能够激活mek-erk信号通路从而促进RABV的复制。本研究结果对进一步阐明RABV的复制机制及狂犬病的防控具有重要意义。

关键词：狂犬病病毒去乙酰化酶慢病毒包装过表达细胞系 mek-erk

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蛋白酪氨酸磷酸酶-3对结肠癌细胞表皮生长因子相关信号通路的调节

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岭南现代临床外科 2015年第3期15卷 348-350页

作者：黄伟华来伟篮球生张旸褚忠华广东省梅州市五华县人民医院普外科广东514400 中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科广东510120

目的观察蛋白酪氨酸磷酸酶-3(PRL-3)在结肠癌Lo Vo细胞中对表皮生长因子(EGFR)相关信号通路的调节作用。方法转染PRL-3的Lo Vo细胞(以下简称Lo Vo-P)及对照组Lo Vo细胞(以下简称Lo Vo-C)48 h后,通过Western blot检测Lo Vo细胞PRL-3蛋白... 详细信息

目的观察蛋白酪氨酸磷酸酶-3(PRL-3)在结肠癌Lo Vo细胞中对表皮生长因子(EGFR)相关信号通路的调节作用。方法转染PRL-3的Lo Vo细胞(以下简称Lo Vo-P)及对照组Lo Vo细胞(以下简称Lo Vo-C)48 h后,通过Western blot检测Lo Vo细胞PRL-3蛋白表达,并检测EGFR及相关信号mek-erk通路蛋白p-mek1/2,p-erk1/2,p-Msk1/2的表达。结果Western-Blot检测发现高表达PRL-3的Lo Vo细胞能够激活EGFR磷酸化水平,蛋白灰度分析显示其表达增多72.3%(Pmek-erk通道被激活。结论 PRL-3通过激活细胞表皮生长因子磷酸化参与表皮生长因子相关信号通路的调节。

关键词： PRL-3 Lo Vo EGFR mek-erk

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