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mdr1基因短发卡样RNA表达载体逆转K562/A02人白血病细胞多药耐药的研究

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中华肿瘤杂志 2006年第6期28卷 422-425页

作者：肖希斌谢兆霞秦群中南大学湘雅医院血液科长沙410008 中南大学湘雅医院药剂科长沙410008

目的构建mdr1基因短发卡样RNA(shRNA)真核表达载体,观察对K562/A02人白血病细胞株mdr1基因的沉默作用以及对P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响。方法以基因重组技术构建表达质粒,转染重组质粒pEGFP-C1/U6/mdr1-A和pEGFP-C1/U6/mdr1-B至K56... 详细信息

目的构建mdr1基因短发卡样RNA(shRNA)真核表达载体,观察对K562/A02人白血病细胞株mdr1基因的沉默作用以及对P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响。方法以基因重组技术构建表达质粒,转染重组质粒pEGFP-C1/U6/mdr1-A和pEGFP-C1/U6/mdr1-B至K562/A02细胞株,通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹法,检测mdr1基因表达及P-gp表达水平的变化；以MTT法检测阿霉素(ADM)对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC_(50))；高效液相色谱(HPLC)法检测细胞内ADM含量。结果构建的2种重组质粒pEGFP-C1/U6/mdr1-A和pEGFP-C1/U6/mdr1-B均明显抑制K562/A02细胞株mdr1基因表达,抑制率最高为48．2%±2．5%；同时抑制P-gp蛋白的表达,抑制率最高为50．67%。对ADM药物敏感性的相对逆转效率分别为40．8%和62．4%；同时使K562/ A02细胞内ADM含量增加。结论shRNA表达载体可明显抑制K562/A02细胞mdr1 mRNA的转录和P-gp蛋白的表达,增加K562/A02细胞内ADM含量,恢复K562/A02细胞对化疗药物的敏感性,逆转mdr1基因编码蛋白P-gp介导的多药耐药。

关键词： mdr1基因真核表达载体 K562/A02人白血病细胞株 P-糖蛋白多药耐药

mdr1基因多态性与儿童难治性癫痫的相关性研究

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中华医学遗传学杂志 2019年第11期36卷 1073-1076页

作者：高丽殷小静李岩肖海杨柳范宏业齐晖张君冯杰郑斐洋河南省人民医院儿科郑州450000 河南省人民医院医学遗传研究所郑州450000 约翰霍普金斯大学公共卫生学院美国巴尔的摩MD 21209

目的探讨多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,mdr1)单核苷酸多态性与儿童难治性癫痫的相关性.方法2014年12月至2017年3月本院小儿神经门诊就诊的200例癫痫患儿及100名体检正常儿,提取DNA、PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳,目标位点测序... 详细信息

目的探讨多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,mdr1)单核苷酸多态性与儿童难治性癫痫的相关性.方法2014年12月至2017年3月本院小儿神经门诊就诊的200例癫痫患儿及100名体检正常儿,提取DNA、PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳,目标位点测序对rs1922242、rs2235048、rs10808072、rs868755、rs1202184单核苷酸位点进行基因分型.结果耐药组与药物敏感组rs1922242、rs2235048、rs10808072、rs868755位点基因型分布和等位基因频率及rs1202184等位基因频率的差异均无统计学意义,而rs1202184位点基因型分布差异有统计学意义(P=0.008),两组不同单倍型频率差异无统计学意义.结论mdr1基因rs1202184位点基因型与难治性癫痫相关,且以AA基因型为主.

关键词： mdr1基因单核苷酸多态性位点难治性癫痫基因型

mdr1基因甲基化与新疆维吾尔族、汉族宫颈癌新辅助化疗疗效的相关性

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现代妇产科进展 2011年第8期20卷 604-609页

作者：李文婷王英红高丽敏新疆石河子大学医学院第一附属医院妇产科石河子832008

目的:探讨多药耐药基因(mdr1)启动子区的甲基化状态与新疆维吾尔族、汉族宫颈癌新辅助化疗疗效的相关性。方法:采用MassARRY EpiTYPER DNA甲基化分析技术定量分析宫颈鳞癌61例(汉族:39例,维吾尔族:22例)新辅助化疗前后及正常宫颈组织50... 详细信息

目的:探讨多药耐药基因(mdr1)启动子区的甲基化状态与新疆维吾尔族、汉族宫颈癌新辅助化疗疗效的相关性。方法:采用MassARRY EpiTYPER DNA甲基化分析技术定量分析宫颈鳞癌61例(汉族:39例,维吾尔族:22例)新辅助化疗前后及正常宫颈组织50例(汉族:30例,维吾尔族:20例)中mdr1基因启动子区22个CpG位点的甲基化状态。结果:(1)宫颈癌组的平均甲基化率均低于正常宫颈组,汉族除了CpG-11,CpG-12、13,CpG-23,CpG-30,维吾尔族除了CpG-5,CpG-11,CpG-12、13,CpG-19、20,CpG-22,CpG-23,CpG-25、26、27外,其余CpG单位差异均有统计学意义(Pmdr1基因启动子区部分CpG岛的异常甲基化与宫颈癌的新辅助化疗疗效密切相关,且在维吾尔族、汉族之间存在一定差异。

关键词： mdr1基因甲基化宫颈癌新辅助化疗维吾尔族汉族

mdr1基因下调逆转人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM的耐药性

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肿瘤防治研究 2010年第5期37卷 515-518页

作者：魏玲宋现让孙菊杰王兴武宋宝郑燕山东省肿瘤医院基础研究中心济南250117 山东省肿瘤医院病理科济南250117

目的探讨RNA干扰(RNAi)人mdr1基因对人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM耐药性的影响。方法应用针对人mdr1基因的RNAi质粒pENTRTM/U6-mdr1转染人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM和亲本细胞株K562,48h后实时荧光定量PCR检测mdr1mRNA表达,... 详细信息

目的探讨RNA干扰(RNAi)人mdr1基因对人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM耐药性的影响。方法应用针对人mdr1基因的RNAi质粒pENTRTM/U6-mdr1转染人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM和亲本细胞株K562,48h后实时荧光定量PCR检测mdr1mRNA表达,流式细胞术检测P-gp蛋白表达和P-gp功能,MTT法检测细胞对ADM的耐药性。结果与未转染细胞相比,K562/ADM耐药细胞pENTRTM/U6-mdr1组的mdr1mRNA和P-gp蛋白表达和功能均显著下降(Pmdr1基因下调可逆转人白血病阿霉素耐药细胞株对阿霉素的耐药性。

关键词：白血病 mdr1基因 RNA干扰耐药性

mdr1基因转染骨髓造血细胞移植联合超剂量化疗治疗兔VX2肝癌的实验研究

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中华小儿外科杂志 2004年第3期25卷 274-278页

作者：王佚金先庆王荞王少春王珊罗庆罗小辑重庆医科大学附属儿童医院普外科 400014 重庆医科大学附属儿童医院超声科 400014

目的　研究mdr1基因转染骨髓造血细胞移植联合超剂量阿霉素化疗在兔VX2肝癌治疗中的骨髓保护和治疗作用。方法　通过逆转录病毒包装细胞PA317 Hamdr1/A作为载体 ,将mdr1基因转入兔骨髓单个核细胞并自体移植到VX2兔肝癌模型体内 ,在阿霉... 详细信息

目的　研究mdr1基因转染骨髓造血细胞移植联合超剂量阿霉素化疗在兔VX2肝癌治疗中的骨髓保护和治疗作用。方法　通过逆转录病毒包装细胞PA317 Hamdr1/A作为载体 ,将mdr1基因转入兔骨髓单个核细胞并自体移植到VX2兔肝癌模型体内 ,在阿霉素超剂量化疗中观察骨髓造血功能的保护和肿瘤的治疗效果。结果　mdr1基因成功转入兔骨髓单个核细胞 ,体外 4d转染率达 35 % ;转染细胞移植后能定植于受体骨髓中并功能性表达 ,定植率为 9.5 %。在超剂量化疗中 ,mdr1基因能有效保护受体骨髓的造血功能 ,荷瘤动物能耐受 3倍剂量阿霉素化疗 ,外周血白细胞数能维持在 (4 .2 6± 1.0 3)× 10 9/L ;同时超剂量化疗能迅速杀灭肿瘤细胞 ,使荷瘤动物存活时间明显延长 (P mdr1基因转染骨髓造血细胞移植能明显提高受体骨髓对化疗药物的耐受性 ,联合超剂量化疗能快速、有效的杀灭肿瘤细胞 ,提高恶性肿瘤的治愈率。

关键词： mdr1基因基因转染骨髓造血细胞移植超剂量化疗兔 VX2肝癌肿瘤多药抗药基因

汉防己甲素干预K562细胞mdr1基因表达的研究

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中华血液学杂志 2008年第7期29卷 468-471页

作者：吕旭晶许文林罗文娟王法春陈巧云江苏大学附属人民医院血液科镇江市212002

目的观察汉防己甲素（TTD）对阿霉素诱导的K562细胞mdr1基因表达的影响，并初步探讨其机制。方法采用MTT法观察TTD对K562细胞的毒性作用，以0．6 μg/ml阿霉素单独作用或0．6 μg/ml阿霉素联合不同浓度的TTD（0．5、1．0、2．0 μg/ml... 详细信息

目的观察汉防己甲素（TTD）对阿霉素诱导的K562细胞mdr1基因表达的影响，并初步探讨其机制。方法采用MTT法观察TTD对K562细胞的毒性作用，以0．6 μg/ml阿霉素单独作用或0．6 μg/ml阿霉素联合不同浓度的TTD（0．5、1．0、2．0 μg/ml）作用于K562细胞，用RT—PCR法检测mdr1 mRNA、NF—κB mRNA水平，用流式细胞术检测P—gp的表达情况，用胞内罗丹明123（Rh0123）积聚试验检测P—gP的功能。结果空白对照K562细胞未见明显mdr1 mRNA及P-gP表达（水平分别为0．171±0．012、7．85±0．15），细胞内Rh0123平均荧光强度（反映P—gP功能）为711．9±63．6，NF—κB mRNA水平为0．783±0．090；0．6 μg／ml阿霉素作用24h后mdr1 mRNA、P—gP、NF—κB mRNA表达上调为0．428±0．012、73．68±1．84、1．075±0．047，细胞内Rh0123平均荧光强度下降为347．8±60．6（P值均〈0．05）；2．0 μg／ml TTD预作用24h再与0．6 μg／ml阿霉索联合作用24h能显著抑制阿霉素诱导的mdr1 mRNA、P—gP表达及功能、NF—κB mRNA的上调（分别为0．148±0．006、7．18±0．38、799．7±45．8、0．627±0．098）（P〈0．05），而0．5、1．0 μg／ml TTD无明显影响。结论TTD以浓度依赖性的方式干预阿霉素诱导的mdr1 mRNA、P—gP表达和P-gP功能的上调，其机制可能与TTD抑制了阿霉素诱导的NF—κB的表达有关。

关键词： K562细胞汉防己甲素 mdr1基因 NF—κB

以mdr1基因启动子为靶点的药物筛选模型的建立

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华东理工大学学报（自然科学版） 2008年第5期34卷 650-653,674页

作者：李长龙萨晓婴邓皖利许建华范忠泽刘建文华东理工大学药学院上海200237 浙江省医学科学院浙江省实验动物中心杭州310013 上海中医药大学附属普陀中心医院上海200062

通过构建以mdr1启动子为启动序列的荧光素酶报告基因载体,建立基于双荧光素酶报告基因系统的多药耐药抑制剂筛选模型。从HCT-8细胞中提取DNA并克隆含有mdr1基因启动子的序列。将该序列重组到荧光素酶报告基因载体pGL-3-Basic的启动区域... 详细信息

通过构建以mdr1启动子为启动序列的荧光素酶报告基因载体,建立基于双荧光素酶报告基因系统的多药耐药抑制剂筛选模型。从HCT-8细胞中提取DNA并克隆含有mdr1基因启动子的序列。将该序列重组到荧光素酶报告基因载体pGL-3-Basic的启动区域中,从而构建报告基因载体pGL-mdr1。将pGL-mdr1和pRL-TK载体共转染到HCT-8和HCT-8/VCR细胞中,建立用于筛选多药耐药抑制剂的方法。通过调节不同载体的比例来优化转染效率。通过mdr1基因激活剂(热诱导)和抑制剂(EGCG)来验证该方法。通过直接测序法验证了pGL-mdr1含有mdr1基因启动子序列且没有出现碱基突变。在n(pGL-mdr1)∶n(pRL-TK)=5∶5时,转染效率最高并具有最高的荧光素酶活性。通过mdr1基因激活处理后表现为时间依赖性地激活mdr1基因的表达,而mdr1基因抑制剂的作用则相反。

关键词： mdr1基因双荧光素酶报告基因药物筛选

CYP3A5基因和mdr1基因位点的单核苷酸多态性与CML细胞遗传学复发风险的关系分析

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中国实验血液学杂志 2018年第6期26卷 1644-1648页

作者：杨章元张友山梁彩霞周正菊荆州市第一人民医院检验科湖北荆州434000 荆州市第一人民医院血液科湖北荆州434000 荆州市第一人民医院血液肿瘤实验室湖北荆州434000

目的:分析CYP3A5基因和mdr1基因位点的单核苷酸多态性(SNP)与慢性髓系白血病(CML)细胞遗传学复发风险的关系。方法:收集本院收治的90例行伊马替尼治疗的CML患者的临床资料,根据有无复发进行分组,并分析CYP3A5基因和mdr1基因位点的SNP与... 详细信息

目的:分析CYP3A5基因和mdr1基因位点的单核苷酸多态性(SNP)与慢性髓系白血病(CML)细胞遗传学复发风险的关系。方法:收集本院收治的90例行伊马替尼治疗的CML患者的临床资料,根据有无复发进行分组,并分析CYP3A5基因和mdr1基因位点的SNP与CML细胞遗传学复发风险的关系。结果:无细胞遗传学复发者41例(无复发组),复发者49例(复发组),随访36个月。相比mdr1基因位点中的C3435T、C1236T的TT+CT基因型的患者,CC基因型的患者细胞遗传学复发的几率显著升高(P mdr1基因位点中的C3435T的CT+CC基因型的患者,TT基因型的患者细胞遗传学复发的几率显著下降(P mdr1基因位点中的C1236T、C3435T的CT、CC基因型患者,TT基因型者无复发生存期明显延长(P mdr1基因中的C3435T基因型(OR=0. 09,95%CI:0. 05～0. 72)是CML患者细胞遗传学复发的影响因素(均P mdr1基因中的C3435T、C1236T基因型对CML患者细胞遗传学复发造成一定的影响,其中mdr1基因中的C3435T基因型对评估患者细胞遗传学复发风险具有一定的预测价值,因此可作为一种临床潜在的生物标志物。

关键词：慢性髓系白血病细胞遗传学复发伊马替尼 CYP3A5基因 mdr1基因

mdr1基因mRNA在结肠腺瘤-结肠癌序列中的表达及临床意义

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中华消化杂志 1999年第1期19卷 69-70页

作者：赵行远孙宁东吴建平侯炜空军汉口医院湖北省肿瘤医院湖北医科大学病毒所

结肠癌主要治疗手段是手术加术后化疗。然而，在治疗过程中常发现病人对某些药物具有耐受现象，这种多药耐药（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）的机制是肿瘤细胞中ｍｄｒ１基因的过度表达，该基因的产物是一种相对分... 详细信息

结肠癌主要治疗手段是手术加术后化疗。然而，在治疗过程中常发现病人对某些药物具有耐受现象，这种多药耐药（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）的机制是肿瘤细胞中ｍｄｒ１基因的过度表达，该基因的产物是一种相对分子质量为１７００００的Ｐ－糖蛋白。...

关键词：结肠癌 mdr1基因 mRNA 结肠腺瘤