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靶向madcam-1超声造影剂的制备及其体外寻靶实验研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2014年第6期34卷 745-749页

作者：陈文颖郑凯黄敏南京医科大学附属苏州医院超声科江苏苏州215001

目的:制备适用于炎症性肠病超声诊断并靶向madcam-1的长循环脂膜超声造影剂,并鉴定其物理性状及体外寻靶能力。方法:采用超声破碎法制备长循环脂膜超声微泡,通过"生物素-亲和素"法桥接超声微泡与抗madcam-1单克隆抗体(MECA-367)。对制... 详细信息

目的:制备适用于炎症性肠病超声诊断并靶向madcam-1的长循环脂膜超声造影剂,并鉴定其物理性状及体外寻靶能力。方法:采用超声破碎法制备长循环脂膜超声微泡,通过"生物素-亲和素"法桥接超声微泡与抗madcam-1单克隆抗体(MECA-367)。对制备出的靶向微泡造影剂进行物理性状检测;通过光镜和激光共聚焦显微镜观察该靶向造影剂对TNF-α诱导的炎症性肠病细胞模型的结合能力。同法制备携同型对照抗体IgG2a微泡作对照。结果:制备的靶向超声微泡形态好且粒径较均匀,平均粒径(464.5±85.7)nm,Zeta电位(-19.3±2.5)mV。SVEC4-10细胞madcam-1的表达与TNF-α刺激时间成正相关。并且,当TNF-α浓度达到20 ng/ml时,madcam-1的表达达到峰值。体外寻靶试验表明,该靶向造影剂较多并牢固地黏附到表达madcam-1的细胞周围;携IgG2a的同型对照组未见明显结合。结论:成功制备出桥连MECA-367的靶向长循环脂膜超声造影剂,该造影剂在体外对高表达madcam-1的炎性细胞模型有较强的特异性亲和力;TNF-α诱导SVEC4-10细胞建立炎症性肠病细胞模型的方法简便易行。

关键词：靶向超声造影剂 madcam-1 炎症性肠病细胞模型

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人madcam-1真核表达载体的构建及其表达细胞株的建立

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中国免疫学杂志 2002年第1期18卷 9-12页

作者：赖燕来高杰英陈志华孔祥英军事医学科学院微生物流行病研究所北京100850

目的:建立表达人madcam-1的细胞模型。方法:从pUC21/hmadcam-1质粒酶切下hmadcam-1全长cDNA片段,将其克隆于巨细胞病毒载体pCIneo中,构建出由CMV启动子控制的重组真核表达载体pCIneo-hMAd,经脂质体介导转染至CHO细胞,以G418筛选抗性克... 详细信息

目的:建立表达人madcam-1的细胞模型。方法:从pUC21/hmadcam-1质粒酶切下hmadcam-1全长cDNA片段,将其克隆于巨细胞病毒载体pCIneo中,构建出由CMV启动子控制的重组真核表达载体pCIneo-hMAd,经脂质体介导转染至CHO细胞,以G418筛选抗性克隆。结果:筛选出的阳性克隆细胞以免疫荧光和免疫酶标染色法检测,表明有人madcam-1分子表达;其细胞裂解物经免疫印迹分析,证实约63 kD的新增蛋白带与抗 hmadcam-1抗体有特异性结合反应;淋巴细胞粘附实验结果提示表达产物具有一定的功能活性。结论:成功地获得了表达人madcam-1分子的细胞株,为进一步研究其生物学功能及其作用机制奠定了基础。

关键词：粘膜血管地址素真核表达中华仓鼠卵巢细胞 madcam-1 真核表达载体

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madcam-1及NF-КB在小鼠恶唑酮结肠炎中的表达及一氧化氮供体的干预作用

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世界华人消化杂志 2008年第6期16卷 596-601页

作者：张丽航欧阳钦上海市嘉定区中心医院消化内科上海市201800 四川大学华西医院消化内科四川省成都市610041

目的:探讨madcam-1在恶唑酮结肠炎中的表达及一氧化氮供体DETA NONOate和GTN对恶唑酮结肠炎的干预作用.方法:32只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(A)、恶唑酮结肠炎组(B)、GTN干预组(C)和DETA NONOate干预组(D).除正常对照组外,其余3组... 详细信息

目的:探讨madcam-1在恶唑酮结肠炎中的表达及一氧化氮供体DETA NONOate和GTN对恶唑酮结肠炎的干预作用.方法:32只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(A)、恶唑酮结肠炎组(B)、GTN干预组(C)和DETA NONOate干预组(D).除正常对照组外,其余3组均建立小鼠恶唑酮结肠炎模型,两个一氧化氮供体干预后处死小鼠.评价DAI、大体评分和组织学评分;免疫组织化学法检测madcam-1及NF-КB;硝酸还原酶法测定血清中NO含量;测定结肠组织MPO活性.结果:B组小鼠DAI评分自灌肠之日起逐渐增高,而D组则变化不明显.B组小鼠大体评分、组织学评分、NF-КB的表达、madcam-1的表达、MPO活性(3.13±0.84,20.31±2.63,30.29±8.68,17.60±6.53,3.83±0.60)均分别高于A组(0.38±0.52,0.88±0.83,7.38±2.29,4.08±1.30,1.75±0.25,P1)和D组(1.38±0.52,11.13±1.48,12.60±3.54,8.42±2.16,2.76±0.48,P1),而C组则与B组相近.B组小鼠血清NO浓度高于A组(54.51±22.28 vs 32.17±14.88,P1±22.28 vs 88.53±24.77,80.12±19.79,均Pmadcam-1的表达与组织学评分、MPO活性、NF-КB P65 L4值呈正相关(r=0.786,r=0.833,r=0.833,Pmadcam-1的表达增加,DETA NONOate可能是治疗溃疡性结肠炎的有价值药物.

关键词：恶唑酮 madcam-1 核因子-КB 一氯化氮溃疡性结肠炎

奶牛黏附分子madcam-1基因的克隆及原核表达

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中国畜牧兽医 2011年第8期38卷 131-134页

作者：刘文博陈媛媛孙玲李德朋付云贺张乃生郭梦尧杨正涛吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 吉林大学白求恩学院病原生物学实验室吉林长春130021

原核表达madcam-1基因、纯化madcam-1黏附蛋白,并制备其多克隆抗体,为进一步功能研究奠定基础。根据madcam-1的已知基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术扩增madcam-1基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-... 详细信息

原核表达madcam-1基因、纯化madcam-1黏附蛋白,并制备其多克隆抗体,为进一步功能研究奠定基础。根据madcam-1的已知基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术扩增madcam-1基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-madcam-1,转化入E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定,以纯化后的融合蛋白为抗原,免疫家兔,获得抗血清。结果表明,重组表达质粒pGEX-4T-1-madcam-1经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,测序结果与GenBank中登录的基因序列同源性为100%。表达产物经Western blotting鉴定,结果证实成功表达了分子质量约为50ku的蛋白质。纯化的蛋白质免疫家兔后,经ELISA检测多克隆抗体效价为1∶32000。因此,成功获得了奶牛madcam-1多克隆抗体,为进一步研究奶牛黏附分子madcam-1的功能奠定了基础。

关键词： madcam-1 克隆表达纯化多克隆抗体

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猴头菇多糖对MDRV感染雏番鸭肠道修复作用与madcam-1分泌量关系的研究

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中国家禽 2016年第9期38卷 24-28页

作者：孙雪宁陈景杰黄诗杭黄丽娜姜慧慧李宇辰吴异健黄一帆福建农林大学福建省兽医中药与动物保健重点实验室福建福州350002

为研究猴头菇多糖(HEPS)对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染雏番鸭肠道修复作用与黏膜地址素细胞黏附分子1(MAd CAM-1)分泌量的关系,将200只1日龄番鸭随机分为空白对照组(BCG)、猴头菇多糖对照组(HCG)、同居感染对照组(CICG)和猴头菇多糖预防组... 详细信息

为研究猴头菇多糖(HEPS)对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染雏番鸭肠道修复作用与黏膜地址素细胞黏附分子1(MAd CAM-1)分泌量的关系,将200只1日龄番鸭随机分为空白对照组(BCG)、猴头菇多糖对照组(HCG)、同居感染对照组(CICG)和猴头菇多糖预防组(HPG),其中后两组按建立MDRV自然感染发病模型进行同居感染;各组番鸭分别于同居感染3、6、10、15和21 d后取血液和十二指肠样品进行放射性免疫检测MAd CAM-1含量,并观察其肠道形态和淋巴细胞分布及数量变化。结果显示,HCG组番鸭肠道MAd CAM-1分泌量极显著高于HPG(P1),且显著高于CICG(P1含量的调节作用不显著;HPG组与CICG组相比,肠道形态结构较完整,淋巴细胞的分布有向黏膜上皮移动的趋向,且分布在细胞顶端的数量增多。研究表明:HEPS可能通过调节MDRV感染番鸭肠道MAd CAM-1的分泌量,参与淋巴细胞归巢过程,起到修复和保护肠道黏膜,提高雏番鸭的黏膜免疫力的作用。

关键词：番鸭呼肠孤病毒猴头菇多糖黏膜免疫 madcam-1

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madcam-1及NF-κB在小鼠恶唑酮结肠炎中的表达及一氧化氮供体的治疗作用

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MAdCAM-1及NF-κB在小鼠恶唑酮结肠炎中的表达及一氧化氮供体的治...

作者：张丽航四川大学

学位级别：硕士

目的探讨madcam-1在恶唑酮结肠炎中的表达及长效的一氧化氮供体DETA NONOate和短效的一氧化氮供体GTN对恶唑酮结肠炎的治疗作用。方法32只雄性C57BL／6小鼠随机分为4组：1)正常对照组;2)恶唑酮结肠炎组;3)GTN干预组;4)DETA NONOate干预... 详细信息

目的探讨madcam-1在恶唑酮结肠炎中的表达及长效的一氧化氮供体DETA NONOate和短效的一氧化氮供体GTN对恶唑酮结肠炎的治疗作用。方法32只雄性C57BL／6小鼠随机分为4组：1)正常对照组;2)恶唑酮结肠炎组;3)GTN干预组;4)DETA NONOate干预组。用恶唑酮酒精溶液皮肤致敏和灌肠，建立小鼠恶唑酮结肠炎模型，以上述两个一氧化氮供体干预后处死小鼠。评价DAI、大体评分、组织学评分;免疫组织化学法检测madcam-1及NF-κB;硝酸还原酶法测定血清中NO含量;测定结肠组织MPO活性。结果1恶唑酮结肠炎组及GTN干预组小鼠DAI评分自灌肠之日起逐渐增高，而DETA NONOate干预组则变化不明显。2恶唑酮结肠炎组小鼠大体评分(3．13±0．84)高于正常对照组(0．38±0．52，p＜0．01)和DETA NONOate干预组(1．38±0．52，p＜0．01)，而GTN干预组(2．88±0．84，P＞0．05)则与恶唑酮结肠炎组相近。3恶唑酮结肠炎组小鼠组织学评分(20．31±2．63)高于正常对照组(0．88±0．83，p＜0．01)和DETA NONOate干预组(11．13±1．48，p＜0．01)，而GTN干预组(18．81±2．48，P＞0．05)则与恶唑酮结肠炎组相近。4恶唑酮结肠炎组小鼠黏膜上皮NF-κB的表达(IOD：30．29±8．68)高于正常对照组(7．38±2．29，P＜0．01)和DETA NONOate干预组(12．60±3．54，P＜0．01)，GTN干预组(26．81±8．56，P＞0．05)则与恶唑酮结肠炎组相近。5恶唑酮结肠炎组小鼠黏膜固有层madcam-1的表达(IOD：17．60±6．53)高于正常对照组(4．08±1．30，P＜0．01)和DETA NONOate干预组(8．42±2．16，P＜0．01)，GTN干预组(14．37±5．85，P＞0．05)则与恶唑酮结肠炎组相近。6恶唑酮结肠炎组小鼠血清NO浓度(54．51±22．28)高于正常对照组(32．17±14．88，P＜0．05)，而低于DETA NONOate干预组(88．53±24．77，P＜0．05)和GTN干预组(80．12±19．79，P＜0．05)。7恶唑酮结肠炎组小鼠结肠组织MPO活性(3．83±0．60)高于正常对照组(1．75±0．25，P＜0．01)和DETA NONOate干预组(2．76±0．48，P＜0．01)，而和GTN干预组(3．55±0．59，P＞0．05)无明显差别。8恶唑酮结肠炎组固有层madcam-1的表达与组织学评分(r=0．786，P＜0．05)、MPO活性(r=0．833，P＜0．05)、NF-κB P65 IOD值(r=0．833，P＜0．05)呈正相关。结论小鼠恶唑酮结肠炎中结肠固有层madcam-1的表达增加，用长效的DETA NONOate干预后，各项炎症指标明显下降，而短效的GTN对小鼠恶唑酮结肠炎的各项炎症指标的改变不明显，DETA NONOate可能是治疗溃疡性结肠炎有价值的药物。

关键词：恶唑酮 madcam-1 NF-κB 一氧化氮溃疡性结肠炎

整合素α4β7-madcam-1相互作用的力依赖机制

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整合素α4β7-MAdCAM-1相互作用的力依赖机制

作者：粟尤敏华南理工大学

学位级别：硕士

在炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)中,由于免疫反应过度亢进,大量的淋巴细胞穿过肠粘膜涌入炎症部位,导致肠粘膜损伤。这一过程包含了整合素αβ与粘膜血管地址素细胞黏附分子-1(Mucosal adressin cell adhesion molecule-1... 详细信息

在炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)中,由于免疫反应过度亢进,大量的淋巴细胞穿过肠粘膜涌入炎症部位,导致肠粘膜损伤。这一过程包含了整合素αβ与粘膜血管地址素细胞黏附分子-1(Mucosal adressin cell adhesion molecule-1,madcam-1)的相互作用介导的循环淋巴细胞黏附在高内皮静脉表面。淋巴细胞的黏附是一个多步级联过程,包括初始黏附、滚动黏附、稳定黏附和爬行,整合素αβ既参与稳定黏附,又涉及滚动黏附过程。在IBD中无论靶向整合素αβ或其配体madcam-1都可以减少炎症的程度,从而达到治疗的效果。此外,整合素αβ及其配体之间的相互作用发生在血液环境中,因此该过程除了受内在化学因素的影响外,并受血流剪切应力环境影响。究竟血流环境如何调控整合素αβ-madcam-1的相互作用?因此,本研究试图通过动力学测量来探索整合素αβ和madcam-1之间相互作用的力依赖机制。本研究采用平行平板流动腔技术,模拟人体生理环境,驱动表达有整合素αβ的RPMI 8226细胞在不同剪切力条件下,在madcam-1铺展的底板上黏附。利用不同二价金属离子Ca、Ca+Mg、Mg或Mn激活整合素αβ到不同的活性状态,研究RPMI 8226细胞黏附行为的变化。测量整合素αβ-madcam-1相互作用的生存时间以及细胞的滚动速度。结果表明,在Ca或/和Mg离子溶液环境中,细胞的平均滚动速度随力的增大先减小后增大,存在流动增强黏附现象,而瞬时黏附的生存时间和滚动黏附的平均停留时间先增加而后降低,成负相关关系。该结果表明整合素αβ-madcam-1相互作用存在力依赖的流动增强行黏附现象,并受逆锁键机制所调节。金属离子Mg和Mn激活整合素到中或高亲和力水平,使细胞趋向稳定黏附。进一步,利用原子力显微镜技术,研究整合素αβ和madcam-1分子之间的相互作用。在不同二价金属离子溶液条件下,整合素αβ处于不同活性状态,测量分子对之间的黏附频率和生存时间。结果表明,整合素αβ与madcam-1相互作用的生存时间随力的增加先增加后减少,是有逆锁键-滑移键的转换调节的双态曲线。此外,该过程也受离子调节,Ca离子条件下整合素αβ可能被激活但是亲和力比较低,在Mg离子和Mn离子条件下整合素αβ被激活到中等亲和力和高等亲和力状态。因此,整合素αβ与madcam-1相互作用是力和金属离子依赖的黏附过程。综上,本研究探讨了整合素αβ与madcam-1相互作用的流动增强型黏附,并存在逆锁键机制。整合素αβ-madcam-1相互作用是引起炎症性肠病的关键免疫分子,因而本研究深化了淋巴细胞归巢,炎症性肠病等生理病理过程的理解,为免疫反应的干预和新抗炎治疗的发展提供了新视角。

关键词：整合素α4β7 madcam-1 平行平板流动腔原子力显微镜流动增强型黏附逆锁键

肺肠合治法对哮喘小鼠血清总IgE、肺肠粘膜浆细胞及madcam-1影响的实验研究

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肺肠合治法对哮喘小鼠血清总IgE、肺肠粘膜浆细胞及MAdCAM-1影响...

作者：白亚辉成都中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过探讨肺肠合治法对哮喘小鼠血清总IgE、肺肠粘膜浆细胞、肠系膜淋巴结madcam-1分子影响的实验研究,为肺肠合治法作用的分子机制和“肺与大肠相表里”脏腑相关理论寻找实证依据。方法:采用鸡卵清蛋白(OVA)致敏小鼠作为动物模型,... 详细信息

目的:通过探讨肺肠合治法对哮喘小鼠血清总IgE、肺肠粘膜浆细胞、肠系膜淋巴结madcam-1分子影响的实验研究,为肺肠合治法作用的分子机制和“肺与大肠相表里”脏腑相关理论寻找实证依据。方法:采用鸡卵清蛋白(OVA)致敏小鼠作为动物模型,以加味升降散作为肺肠合治法的代表方,通过药物干预后,采取肺、肠同步观察的研究思路,用病理学方法观察肺肠组织的病理形态变化,用ELISA法测定血清总IgE含量,用免疫组化法检测肺肠组织粘膜浆细胞数量以及肠系膜淋巴结中madcam-1分子的含量。结果:1.组织病理形态显示,肺肠合治组小鼠肺内支气管壁及周围组织炎症细胞侵润、粘膜上皮损伤较病理模型组减轻,各组肠组织未见明显炎症反应及肠粘膜损伤。2.与病理模型组对照,肺肠合治组血清总IgE含量显著降低(P＜0.01)。3.与病理模型组对照,肺肠合治组肺粘膜浆细胞数显著降低(P＜0.01),肠粘膜浆细胞数显著升高(P＜0.01)。4.与病理模型组对照,肺肠合治组肠组织淋巴结madcam-1水平显著降低(P＜0.01)。5.病理模型组和肺肠合治组肺肠组织浆细胞数量变化出现正相关性,其余各组皆未出现相关性。结论:1.肺肠合治法可以减轻哮喘小鼠肺组织的炎症细胞侵润,减轻气道粘膜损伤;2.肺肠合治法能够降低哮喘小鼠血清总IgE水平:3.肺肠合治法能抑制哮喘小鼠肺组织粘膜浆细胞的炎症反应,同时,该治法能升高肠粘膜浆细胞数,增强肠道粘膜浆细胞免疫;4.肺肠合治法能促进哮喘小鼠肠系膜淋巴结中madcam-1分子淋巴细胞归巢、再循环以及调节炎症反应的功能。

关键词：肺肠合治法过敏性哮喘血清总IgE 浆细胞 madcam-1 肺肠相关

补肾生血法治疗慢性再障的临床观察及对ICAM-1，madcam-1表达影响的研究

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补肾生血法治疗慢性再障的临床观察及对ICAM-1，MAdCAM-1表达影响...

作者：代月黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的观察采用补肾生血法（内服补髓生血颗粒）治疗肾阴虚、肾阳虚两种类型慢性再生障碍性贫血（CAA）患者的中医临床症状积分、外周血象、治疗前后外周血中黏附分子madcam-1、ICAM-1表达,明确补肾生血法的临床疗效,掌握补肾生血药物对MA... 详细信息

目的观察采用补肾生血法（内服补髓生血颗粒）治疗肾阴虚、肾阳虚两种类型慢性再生障碍性贫血（CAA）患者的中医临床症状积分、外周血象、治疗前后外周血中黏附分子madcam-1、ICAM-1表达,明确补肾生血法的临床疗效,掌握补肾生血药物对madcam-1,ICAM-1的干预作用及不同肾虚分型（肾阴虚、肾阳虚）受体表达异常程度与疗效差异,以探索其对慢性再障造血粘附调节的影响机制。方法依据中、西医临床再障的纳入、剔除诊断标准以及患者的外周血象、临床症状积分为基础,纳入慢性再障患者（肾阴虚、肾阳虚）55例为治疗组,临床内服补髓生血颗粒治疗以及基础常规辅助治疗6个月,观察并记录治疗组不同肾虚证型的患者治疗前后的一般情况、中医证候积分、外周血象的变化,进行疗效的鉴定与剖析。纳入健康志愿者20例为对照组并采集其外周血。采用ELISA法测定两组不同证型的患者治疗前后外周血中黏附分子madcam-1、ICAM-1的表达水平,并与对照组进行比较分析,明确是否存在细胞粘附分子madcam-1、ICAM-1的异常以及补髓生血颗粒对其的干预作用。应用SPSS 25.0统计软件进行相关的统计分析,以P＜0.05为有统计学意义。结果1.补肾生血法对慢性再障患者临床治疗效果颇佳,其总有效率可高达80.0%,治疗后两证型临床总疗效均改善明显,差异具有统计学意义（P＜0.05）;2.肾阴虚、肾阳虚两种证型的组内比较:两组中医症状积分均显著下降（P＜0.05）,血象情况均有所提高（P＜0.05）,外周血中黏附分子madcam-1、ICAM-1的表达水平均有所提升（P＜0.05）;两证型治疗后的组间比较:中医症候积分肾阳虚型改善优于肾阴虚型（P＜0.05）;血细胞分析:治疗后,阳虚型HGB值高于阴虚型（P＜0.05）,WBC值阳虚型与阴虚型改善无明显差异（P＞0.05）,PLT值阳虚型与阴虚型改善无明显差异（P＞0.05）;外周血中黏附分子madcam-1、ICAM-1治疗前两证型患者均低于对照组（P＜0.05）,治疗后两类型肾虚患者均有所提升,但仍与正常对照组有所差异（P＜0.05）,其中肾阳虚型madcam-1、ICAM-1表达均优于肾阴虚型（P＜0.05）。结论1.补肾生血法治疗CAA的临床疗效明显。2.CAA患者外周血中黏附分子madcam-1、ICAM-1表达存在异常。3.CAA不同肾虚证型（肾阴虚、肾阳虚）用药后治疗效果存在差异,肾阳虚型患者在临床症状缓解程度、外周血象的提升、黏附分子madcam-1、ICAM-1的表达均明显优于肾阴虚型。4.CAA患者外周血中黏附分子madcam-1、ICAM-1表达经补肾生血治疗改善效果显著,提示补肾生血疗法对机体造血粘附功能具有改善作用,有利于恢复CAA患者的造血机能。

关键词：贫血再生障碍性补肾生血法 madcam-1 ICAM-1