检索结果-南通市图书馆

作者：丁寿鹏大理大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在生物信息学分析的基础上,对mav-5183蛋白进行蛋白结构、理化性质、抗原表位等分析;进行原核表达、纯化目的蛋白;最后建立体外细胞模型,研究分析mav-5183蛋白诱导小鼠巨噬细胞凋亡的免疫学机制,为下一步临床血清学诊断与... 详细信息

目的:本研究旨在生物信息学分析的基础上,对mav-5183蛋白进行蛋白结构、理化性质、抗原表位等分析;进行原核表达、纯化目的蛋白;最后建立体外细胞模型,研究分析mav-5183蛋白诱导小鼠巨噬细胞凋亡的免疫学机制,为下一步临床血清学诊断与疫苗研发奠定理论基础。方法:1、利用Expasy-Protparam、PHYRE2、IEDB、String软件分析mav-5183蛋白的理化性质、蛋白质结构、T/B细胞抗原表位;Signl P5.0信号肽预测在线网址、TMHMM Server2.0、Port Scale、Net PHos3.1Serve分析蛋白信号肽、跨膜域、疏水性、磷酸化位点。2、构建pET-21a-mav-5183重组质粒,重组mav-5183蛋白通过克隆、表达与纯化,并通过抗His标签抗体鉴定,此外通过免疫家兔获取抗血清并通过WB检测抗体效价以及免疫反应性。3、不同浓度mav-5183蛋白与小鼠Ana-1巨噬细胞一起孵育。基于ANNEXIN V-FITC/PI双染后通过流式细胞术检测细胞凋亡。荧光抗体染色后荧光显微镜检测凋亡。Western Blot检测凋亡相关分子Caspase-9/8/3、以及炎症小体相关分子ASC、NLRP3、Cleaved-casp1。ELISA法检测TNF-α、IL-6与LDH,ROS试剂盒检测ROS分泌。q PCR检测Caspase-9/8/3、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、Bax、Bcl-2、TNF-α、IL-6 m RNA表达量。结果:1、mav-5183由355个氨基酸组成,为稳定的外分泌蛋白。二级结构中含有23%无规则卷曲、39%的α螺旋和14%的β折叠。三级结构具有较为稳定疏松的结构且具有多个磷酸化位点。mav-5183具有7个B细胞抗原表位(得分>0.5)和11个T细胞抗原表位。2、成功克隆、纯化鉴定mav-5183蛋白,蛋白浓度为0.2mg/ml,并通过抗血清成功验证具有良好的免疫反应性。3、mav-5183蛋白体外作用于Ana-1巨噬细胞后,提高了Caspase-9/8/3、ASC、NLRP3的表达(P0.05)。同时,mav-5183诱导Ana-1巨噬细胞发生凋亡(P0.05)。结论:1、生物信息学预测分析mav-5183蛋白具有良好的免疫原性。2、成功克隆诱导表达mav-5183蛋白,并具有良好的免疫反应性。3、mav5183蛋白可通过内、外源性通路诱导巨噬细胞凋亡,并通过分泌ROS促进炎性细胞因子的分泌。

关键词： mav-5183 分枝杆菌凋亡炎症巨噬细胞

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鸟结核分枝杆菌mav-5183蛋白的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2021年第10期16卷 1153-1157页

作者：丁寿鹏李祥芳高婧华陈晓文陈越吴利先大理大学基础医学院微生物与免疫学教研室云南大理671000

目的预测鸟结核分枝杆菌致病基因mav-5183编码蛋白的结构和功能。方法从NCBI数据库下载mav-5183基因编码蛋白的基因序列和氨基酸序列;采用Protparam tool分析蛋白的氨基酸数量、等电点、相对分子质量,以及氨基酸的组成比例、分子式、分... 详细信息

目的预测鸟结核分枝杆菌致病基因mav-5183编码蛋白的结构和功能。方法从NCBI数据库下载mav-5183基因编码蛋白的基因序列和氨基酸序列;采用Protparam tool分析蛋白的氨基酸数量、等电点、相对分子质量,以及氨基酸的组成比例、分子式、分子组成、脂肪指数;利用Phyr、SWISS-MODEL在线预测软件进行二级结构和三级结构模型预测;使用TMHMM Server2.0进行跨膜区预测;使用PortScale进行疏水性预测分析;采用SignlP5.0进行信号肽预测分析;采用IEDB在线软件进行B细胞表位以及CD4免疫原性预测分析;采用NetPHos3.1Server进行磷酸化位点分析;运用String在线软件进行蛋白质相互作用分析。结果 mav-5183基因编码355个氨基酸,编码蛋白为Antigen 85-C,相对分子质量为38.052 79×10^(3),等电点6.74,分子式为C_(1705)H_(2570)N_(462)_O_(504)S_(14),为不稳定的疏水性蛋白;含有跨膜区与信号肽、25个磷酸化位点(其中丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸分别有14、6、5个),三级结构较为稳定,有多种蛋白与之相互作用。结论 mav-5183含有多个磷酸化位点和B细胞优势表位,可为MAC临床血清学诊断和疫苗研发提供理论基础。

关键词：鸟结核分枝杆菌 mav-5183 生物信息学血清学诊断

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