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几个水稻mar序列的筛选及其初步分析

几个水稻MAR序列的筛选及其初步分析

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作者：武建伟福建农林大学

学位级别：硕士

mar/sar(Matrix/Scaffold attachment region or Matrix/Scaffold association region,mar/sar)是真核基因组中大量存在的附着在核基质上的一段DNA序列。研究表明,mar序列可以有效地克服植物基因工程中经常发生的转基因沉默现象,并可使外源基因在转基因受体中高效稳定表达。传统的mar序列分离纯化方法步骤繁琐,耗时耗材。随着生物序列信息的丰富,可以逐一查看其染色体的基因图谱,并通过mar预测技术在基因组中筛选mar序列,可大大加快mar序列的筛选速度和降低筛选成本。本研究利用BGI基因组数据库,以水稻基因组上转录活跃区中位于基因间隔区的序列为候选序列,使用mar-Wiz对候选序列预测分析。根据mar-Analysis Summary Report,筛选出 mar-potential值较高的 10 条序列做为候选mar序列。克隆候选mar序列,选择gus为报告基因,将候选mar序列连在gus表达框两端构建植物表达载体,共计构建21个植物表达载体(包括1个对照载体),通过农杆菌介导转化法获得了 509株转基因水稻植株。检测转上述转基因株中的gus酶活力,初步确定了可以明显提高外源基因表达水平的4条mar序列,其中编号M2的序列位于chr07(06882521),可使gus表达水平提高约4倍;编号M3的序列位于chr07(21231402),可使gus表达水平提高约18倍;编号M6的序列位于chr08(25631056),可使gus表达水平提高约1倍;编号M7的序列位于chr09(20378264),可使gus表达水平提高约1倍。

关键词： mar/sar mar预测技术 mar-Wiz(marFinder) gus表达水平高效稳定表达

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