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O2·-和mapk信号调节镉锌互作水稻根系生长发育的机制

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O2·-和MAPK信号调节镉锌互作水稻根系生长发育的机制

作者：胡凡山东理工大学

学位级别：硕士

根系的生长发育具有很大的可塑性,受到内部遗传因子和外部环境因子共同调节。O2·-和mapk是植物体内重要的信号分子,参与生长发育、细胞分裂、胁迫应答等众多过程。镉胁迫抑制作物生长,适量的锌能减轻镉对作物的伤害。本实验旨在以水稻... 详细信息

根系的生长发育具有很大的可塑性,受到内部遗传因子和外部环境因子共同调节。O2·-和mapk是植物体内重要的信号分子,参与生长发育、细胞分裂、胁迫应答等众多过程。镉胁迫抑制作物生长,适量的锌能减轻镉对作物的伤害。本实验旨在以水稻（Oryza sativa L.,中花11号）为材料研究O2·-和mapk信号调节镉锌互作水稻根系生长发育的分子机制。 1O2·-调节镉锌互作水稻根系生长发育的机制实验分析了CK、Cd、Cd+Zn、Cd+Zn+DDC （SOD抑制剂）和Cd+Zn+Tiron（02·-清除剂）5种处理对水稻根系生长发育和基因表达的影响。结果显示,添加锌减少了镉的吸收;Cd+Zn与Cd+Zn+DDC类似促进了根系尤其是侧根的伸长生长和数量的增加;Cd+Zn+Tiron显著抑制了根系的生长发育。通过半定量RT-PCR,从转录水平综合分析了不同发育时期Osmapk基因家族、生长素相关基因家族（OsPINs、OsPID、OsARFs和OsIAAs）和细胞周期核心基因家族（共147个基因）在上述处理条件下表达的变化。结果表明,处理9天时,有115个基因的表达发生了变化,其中受Cd、Cd+Zn和02·-（包括Cd+Zn+DDC或Tiron）调节的基因分别为64、66和87个;处理13天时,有117个基因的转录水平上调或下调,其中受Cd、Cd+Zn和02·-（包括Cd+Zn+DDC或Tiron）调节的基因分别为66、67和74个。不同处理对基因表达的调节存在交叉和重叠现象,如在9天和13天时分别有28和24基因的表达受到Cd、Cd+Zn和02·-的共同调节。这些结果表明,锌对镉胁迫水稻根系的调节与O2·-有关,02·-可能通过调节mapk、生长素和细胞周期基因的表达参与了镉锌互作水稻根系生长的调节。 2 mapk信号调节镉及镉锌互作水稻根系生长发育的机制实验分析了在CK、CK+PD （mapkK抑制剂,PD98059）、Cd、Cd+PD、Cd+Zn Cd+Zn+PD 6种条件下水稻根系生长发育和基因表达的变化。结果发现,与无PD相比,添加PD后从不同程度上影响了CK、Cd和Cd+Zn处理根系的生长。利用半定量RT-PCR分析了PD对Osmapks基因、生长素相关基因（OsPINs OsPID、OsARFs和OsIAAs）和细胞周期核心基因家族在转录水平上表达的影响。结果显示,与无PD相比,在被检测的129个基因中,受PD正／负调控的基因在CK、Cd和Cd+Zn条件下分别有78、71和64个。我们的数据显示,在这3种处理条件下,mapk信号途径可能通过调控上述相关基因的表达而参与了根系生长的调节。总结论：本研究表明,镉及镉锌互作条件下根系生长发育的调节是一个复杂的过程,mapk、O2·-和生长素信号及细胞周期因子参与了根系生长的调节,mapk、O2·-和生长素信号在根系生长调节过程中可能存在交互作用,并且这种交互作用在不同发育时期也存在差异。实验结果还显示,不同处理条件下mapk信号对根系生长和基因表达的调节存在差异,说明mapk信号调节水稻根系生长发育的机制具有多样性的特点。

关键词：水稻镉锌互作 O2·- mapk信号根系细胞周期核心基因

TGF-β/BMPs、Wnt和mapk信号通路在间充质干细胞向成骨细胞分化中的作用

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细胞生物学杂志 2008年第6期30卷 697-700页

作者：万晓晨刘翠平陈海啸李继承浙江大学细胞生物学研究所杭州310058 浙江省台州医院临海317000

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一种多潜能成体干细胞,具有向成骨细胞分化的能力。在MSCs向成骨细胞分化中,受到多种信号通路调控,其中TGF-β/BMPs、Wnt、mapk信号通路发挥了重要作用。而且,通过对Smad1蛋白酶体的调节,Wn... 详细信息

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一种多潜能成体干细胞,具有向成骨细胞分化的能力。在MSCs向成骨细胞分化中,受到多种信号通路调控,其中TGF-β/BMPs、Wnt、mapk信号通路发挥了重要作用。而且,通过对Smad1蛋白酶体的调节,Wnt和mapk信号可以对TGF-β/BMPs通路进行调控。在相关信号通路的共同作用下,MSCs向成骨细胞分化。现对MSCs分化过程中TGF-β/BMPs、Wnt、mapk这三条通路进行了简要综述。

关键词：间充质干细胞成骨细胞分化 TGF-β/BMPs信号通路 Wnt信号通路 mapk信号通路

藁本内酯调控mapk信号通路的血管平滑肌细胞增生

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广东药学院学报 2010年第6期26卷 632-634页

作者：卢群罗少洪广东药学院基础学院广东广州510006

目的从细胞信号通路方面研究藁本内酯抑制体外培养的鼠血管平滑肌细胞增生的机制。方法采用MTT法测定细胞生长状况;荧光探针法、Western印迹法检测细胞内活性氧(ROS)变化、ERK和P38基因的表达活性。结果藁本内酯在40μg/mL质量浓度下作... 详细信息

目的从细胞信号通路方面研究藁本内酯抑制体外培养的鼠血管平滑肌细胞增生的机制。方法采用MTT法测定细胞生长状况;荧光探针法、Western印迹法检测细胞内活性氧(ROS)变化、ERK和P38基因的表达活性。结果藁本内酯在40μg/mL质量浓度下作用2 d抑制率达50%;胞内ROS下降;ERK、P38表达活性下降。结论藁本内酯能有效抑制鼠平滑肌细胞增生,通过抑制ROS生成、下调P38、ERK表达从而使细胞滞留在G0/G1期。

关键词：藁本内酯平滑肌细胞增生 mapk信号

Cs^(137)辐照对甲状腺FRTL细胞RET及RAS-mapk信号通路的影响

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湖南生态科学学报 2017年第2期4卷 31-35页

作者：殷杰胡南李乐谢红艳唐正午赵维超丁德馨南华大学药学与生物科学学院湖南衡阳421001

探讨不同剂量的Cs^(137)对甲状腺FRTL细胞RET蛋白以及下游mapk信号通路的影响.通过不同剂量(0.05,0.1,0.15,0.2,0.5,1 Gy)Cs^(137),对甲状腺FRTL细胞进行辐照,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blot检测未辐照组,辐照敏感组和辐照抗性组... 详细信息

探讨不同剂量的Cs^(137)对甲状腺FRTL细胞RET蛋白以及下游mapk信号通路的影响.通过不同剂量(0.05,0.1,0.15,0.2,0.5,1 Gy)Cs^(137),对甲状腺FRTL细胞进行辐照,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blot检测未辐照组,辐照敏感组和辐照抗性组中RET及下游RAS、RAF、MEK蛋白表达情况.结果:甲状腺FRTL细胞在0.2Gy辐照时辐照敏感度增加;而到1 Gy辐照时辐照抗性增加.在0.2 Gy辐照敏感条件下,诱导RET、RAS、RAF、MEK蛋白表达下调;而当1 Gy辐照时,RET、RAS、BRAF、MEK蛋白表达上调.不同剂量Cs^(137)辐照能够诱导RET蛋白表达,对后面mapk信号通路存在影响,最终影响到甲状腺FRTL细胞的细胞增殖抑制率,诱导甲状腺低剂量辐射致癌成为可能.

关键词：甲状腺FRTL细胞低剂量辐射 RET mapk信号

三七皂苷在造血细胞内mapk信号传递途径的研究

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三七皂苷在造血细胞内MAPK信号传递途径的研究

mapk-Shh信号轴在化疗脱发中的关键作用

第三届海峡两岸中西医结合学术研讨会

作者：高瑞兰陈小红林筱洁钱煦岱周郁鸿徐卫红浙江中医学院附属医院

三七作为补气活血药物已有千余年历史,其主要有效成分为三七总皂苷(Panax Notoginseng,PNS),PNS对神经、心血管、免疫系统及抗肿瘤的实验研究已有报道,但对血液学方面的研究很少。我们已报道免疫介导型再生障碍性贫血小鼠在骨髓抑制及... 详细信息

三七作为补气活血药物已有千余年历史,其主要有效成分为三七总皂苷(Panax Notoginseng,PNS),PNS对神经、心血管、免疫系统及抗肿瘤的实验研究已有报道,但对血液学方面的研究很少。我们已报道免疫介导型再生障碍性贫血小鼠在骨髓抑制及造血功能低下时,PNS能够通过刺激骨髓粒系、红系造血祖细胞增殖,而改善骨髓的造血功能:同时不但促进人骨髓CD34造血干/祖细胞增殖,而且能够诱导其向粒系细胞定向分化,上述结果均提示PNS具有类生长因子的效应,但其作用机理未明。借鉴生长因子、细胞因子及刺激信号分子在细胞内信号传递途径作用机理的研究思路,本文选用

关键词：三七皂苷造血细胞 mapk信号蛋白激酶细胞增殖信号传递途径

来源： cnki会议评论

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MAPK-Shh信号轴在化疗脱发中的关键作用

作者：滕绪福州大学

学位级别：硕士

化疗是目前治疗癌症最有效的手段之一。化疗药物能够直接作用于生长和代谢活跃的肿瘤细胞,抑制其生长,诱导凋亡,从而达到治疗效果。因此,同样具有活跃生长能力的组织器官也会受到化疗药物的损伤,其中最明显的就是脱发。尽管研究人员在... 详细信息

化疗是目前治疗癌症最有效的手段之一。化疗药物能够直接作用于生长和代谢活跃的肿瘤细胞,抑制其生长,诱导凋亡,从而达到治疗效果。因此,同样具有活跃生长能力的组织器官也会受到化疗药物的损伤,其中最明显的就是脱发。尽管研究人员在人体和动物中进行了大量实验,但是遗憾的是,十几年来对于防治化疗脱发一直没有取得突破性的进展,反而是争议不断。为了探索化疗脱发的分子机制,首先我们采用小鼠CIA模型,通过RNA-seq分析CYP处理后小鼠背部皮肤基因表达变化,发现Shh信号在化疗过程中显著下降;通过背部注射Shh抑制剂（Vismodegib或Cyclopamine）,模拟出CYP引起的化疗脱发现象;通过背部注射Shh激动剂SAG或外源Shh蛋白可以部分挽救化疗脱发,证实了Shh信号在化疗脱发中的关键作用。为了探索化疗药物调控Shh的上游机制,我们利用磷酸化蛋白组学分析,发现在Shh下降前期,mapk信号显著活化,猜想化疗过程中Shh下降是由于mapk活化引起的。因此,我们通过构建条件性竞争性敲低ERK2的转基因小鼠、注射ERK2抑制剂（U0126和PD98059）等方式抑制mapk信号通路,结果显示,当mapk信号被抑制,缓解了Shh相关基因的下调,从而部分挽救了化疗脱发,也证实了我们的猜想。此外,通过对不同化疗药物的比较研究,我们发现化疗药物普遍可以活化p53,而只有活化ERK2的化疗药物可以诱导Shh下降,引起化疗脱发,再次证明ERK2负调控Shh信号。为了更深入的研究调控机制,我们对Shh基因前面的非编码区进行同源比对,结合ATAC-seq数据,筛选出距离Shh起始172K,333K,447K,542K,619K五个可能调控毛发生长发育的Shh增强子本研究确立了mapk-Shh信号在化疗脱发中的关键作用,不仅加深了对化疗脱发机制的了解,为解决化疗脱发提出了新的见解,而且为探索调控毛发生长的Shh增强子提供了研究方向。

关键词：化疗脱发 Shh信号 mapk信号增强子

ZNF425基因抑制急性T淋巴细胞白血病细胞的凋亡

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湖南师范大学自然科学学报 2019年第3期42卷 42-48页

作者：朱双丽刘志强刘文邦江志钢林礼梁积峰陈宇王跃群范雄伟李淑均吴秀山湖南师范大学心脏发育研究中心省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室动物多肽药物创制国家地方联合工程实验室中国长沙410081 中南大学湘雅医院血液内科中国长沙410013

为了解锌指(Zinc finger,ZNF)基因在癌症发生中的作用,利用生物信息学在CCLE数据库中分析得到ZNF425在白血病细胞系中存在高表达;在COSMIC和ICGC数据库中发现ZNF425在癌症患者的造血和淋巴组织中发生突变,并且表达存在差异。在急性T淋... 详细信息

为了解锌指(Zinc finger,ZNF)基因在癌症发生中的作用,利用生物信息学在CCLE数据库中分析得到ZNF425在白血病细胞系中存在高表达;在COSMIC和ICGC数据库中发现ZNF425在癌症患者的造血和淋巴组织中发生突变,并且表达存在差异。在急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞系瞬时过表达ZNF425,能抑制Jurkat细胞凋亡但Jurkat的细胞周期却不受影响,Western Blot检测发现过表达ZNF425导致ERK活化受到抑制。本研究结果首次揭示了ZNF425在血癌细胞中的功能,可能通过影响癌症细胞的凋亡调节癌症的发生。

关键词： ZNF425 生物信息学细胞周期细胞凋亡 mapk信号

热敏灸信号在骨质疏松症大鼠筋膜结缔组织传导途径的研究

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中国骨质疏松杂志 2013年第9期19卷 919-921,940页

作者：欧阳厚淦赵志东卢文静江西中医学院南昌340004

目的为研究筋膜中结缔组织在热敏灸信号转导中的作用,揭示热敏灸产生疗效的有关机制,为临床更好应用热敏灸提供相关理论支持。方法选取80只SD雌性大鼠随机分为正常组,空白模型组、艾灸模型组及热敏灸模型组各20只,并对后三组进行造模使... 详细信息

目的为研究筋膜中结缔组织在热敏灸信号转导中的作用,揭示热敏灸产生疗效的有关机制,为临床更好应用热敏灸提供相关理论支持。方法选取80只SD雌性大鼠随机分为正常组,空白模型组、艾灸模型组及热敏灸模型组各20只,并对后三组进行造模使其处于骨质疏松症病理状态下,然后对艾灸模型组及热敏灸模型组取"肾俞"穴进行常规艾灸及热敏灸治疗,并取其灸点周围结缔组织进行染色,从形态学上及光密度值上观察各组筋膜中ERK1/2和P38的改变情况,并进行统计学分析。结果正常组与空白模型组中ERK1/2和P38改变不大,艾灸与热敏灸模型组中ERK1/2和P38表达情况都有不同程度改变,尤其热敏灸模型组改变情况明显,ERK1/2阳性染色区域多集中在成纤维细胞或巨噬细胞核周围;P38在筋膜中的表达稍弱,表达阳性区域也多集中筋膜中成纤维细胞或巨噬细胞核周围。定量分析其差异有显著性意义。结论实施热敏灸时,灸信号通过使热敏态穴区筋膜结缔组织中mapk信号通路蛋白发生变化,进而对人体生理病理状态起调节作用。

关键词：热敏灸筋膜 mapk信号骨质疏松症

IncRNA-M1ANCR在鸡原始生殖细胞形成过程中作用机制探究

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IncRNA-M1ANCR在鸡原始生殖细胞形成过程中作用机制探究

作者：汪怡临扬州大学

学位级别：硕士

原始生殖细胞(primordial germ cell,PGCs)作为配子的祖先细胞,是生殖细胞发育过程中必不可少的。研究PGCs的发生和分化机理对动物种质资源保存、创新利用以及基因修饰鸡的生产等领域具有重要理论和实践意义。PGCs的发生受到许多因素的... 详细信息

原始生殖细胞(primordial germ cell,PGCs)作为配子的祖先细胞,是生殖细胞发育过程中必不可少的。研究PGCs的发生和分化机理对动物种质资源保存、创新利用以及基因修饰鸡的生产等领域具有重要理论和实践意义。PGCs的发生受到许多因素的影响。目前,研究者们已经发现一些关键性的基因、信号通路、生长因子和表观遗传修饰因素对PGCs的发生起重要调控作用。尽管这些因素对于PGCs形成起到了一定的促进作用,但体外诱导PGCs的生成效率并没有得到提高。因此,亟需从新的领域对PGCs的生成机制进行创新性地探究,深入了解和认识PGCs的形成过程,以期获取能够满足生产研究所需的大量PGCs细胞。随着测序技术和生物信息分析技术的发展,长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)在生殖细胞分化与胚胎发育过程中的作用逐渐受到重视。研究lncRNA对PGCs发生的影响及机制,能够为提高PGCs体外生成效率提供新的研究策略。本研究基于前期单细胞高通量测序结果筛选得到鸡PGCs特异表达lncRNA-M1ANCR,利用RNA干扰技术,以家鸡为研究对象,从体内和体外两个水平探究了 lncRNA-M1ANCR在PGCs发生过程中的功能和机制,为有效提高PGCs效率提供理论依据和参考。研究结果如下:(1)lncRNA-M1ANCR的全长扩增,细胞定位与编码能力鉴定:基于前期高通量测序筛选得到PGCs特异性表达lncRNA,命名为lncRNA-M1ANCR,通过RACE实验扩增获得 lncRNA-M1ANCR 全长(共计 1115bp),qRT-PCR 验证了 lncRNA 在 PGCs 中特异性高表达(ESCs:1.021±0.231,PGCs:5.131±1.23,SSCs:1.825±0.828),与转录组测序(ESCs:1.143±0.350,PGCs:37.131±1.053,SSCs:6.825±0.923)结果一致,细胞定位监测发现lncRNA-M1ANCR定位于PGCs细胞质中(细胞核:0.773±0.051,细胞质:3.395±0.583);生物信息学预测发现lncRNA-M1ANCR的4bp-115bp为开放阅读框序列,构建原核融合表达载体发现该序列在BL菌种中不表达蛋白,表明明lncRNA-M1ANCR不存在编码小肽能力。(2)体内外研究lncRNA-M1ANCR在PGCs形成过程中的功能:根据lncRNA-M1ANCR全长序列,设计三个shRNA靶位点,连入pGMLV-SC5干扰载体,转染DF-1细胞后通过定量检测发现3号靶位点的干扰效率(67.16%±2.0%)最高且显著高于对照组(P<0.01);同时,克隆lncRNA-M1ANCR全长,构建pcDNA-M1ANCR过表达载体;然后,将lncRNA-M1ANCR慢病毒干扰载体与过表达载体分别转染鸡ESCs,在RA诱导条件下,观察细胞分化形态的变化,结果发现,干扰lncRNA后,类PGCs形成数量(3±1/400×视野)较RA单独诱导组(10±2个/400×视野)和过表达组(12±2个/400×视野)显著减少;进一步采用qRT-PCR检测PGCs细胞特异性标记基因Cvh和C-kit的表达水平发现,干扰组的表达量(CvA:1.029±0.062,C-kit:1.154±0.009)显著低于过表达组(Cvh:1.672±0.123,C-kit:2.232±0.029)和诱导组(CvA:1.232±0.234,C-kit:1.561±0.017)(P<0.01),而全能性基因Nanog的表达(Nanog:1.029±0.024)则显著高于过表达组(Nanog:0.918±0.038)与诱导组(Nanog:0.984±0.033)(P<0.01);间接免疫荧光检测结果表明,干扰组Cvh的表达显著低于RA诱导组和过表达组;流式细胞检测发现,干扰组诱导4d后产生的类PGCs细胞(3.96%±0.32%)显著少于RA诱导组(9.67%±0.24%)和过表达组(12.1%±0.46%)(P<0.01);体内实验中,将干扰载体与过表达载体通过血管注射整合进入鸡胚后,检测生殖标记基因在PGCs的表达情况,发现均出现显著性下降(Cvh:2.631±0.208,C-kit:3.028±0.23)(P<0.01),同时通过石蜡切片观察PGCs细胞在生殖嵴的数量,发现干扰组PGCs的形成明显减少(15±0.57个);为进一步说明lncRNA对PGCs形成的影响,流式细胞分选仪检测干扰lncRNA后PGCs的形成被抑制(4.0%±1.1%),与体外诱导结果一致。结果表明,lncRNA-M1ANCR对鸡ESCs向PGCs的分化过程具有正向调控作用。(3)lncRNA-M1ANCR

关键词：鸡 lncRNA-M1ANCR 原始生殖细胞 ceRNA mapk信号 ILF3蛋白