检索结果-南通市图书馆

map3k8内含子保留的鉴定与调控机制的初步探究

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

MAP3K8内含子保留的鉴定与调控机制的初步探究

作者：赵海萍武汉大学

学位级别：硕士

pre-m RNA的可变剪接是真核生物包括人类中普遍存在的一种重要的转录后调控机制,在提高生物体蛋白质多样性,调控细胞生长、分化和发育,维持机体正常生命活动等过程中起重要作用。在已报道可变剪接类型中,内含子保留的研究较少。前期分... 详细信息

pre-m RNA的可变剪接是真核生物包括人类中普遍存在的一种重要的转录后调控机制,在提高生物体蛋白质多样性,调控细胞生长、分化和发育,维持机体正常生命活动等过程中起重要作用。在已报道可变剪接类型中,内含子保留的研究较少。前期分析发现map3k8基因内含子保留现象,鉴于该基因在免疫、炎症和肿瘤中的重要功能,本论文拟通过实验验证map3k8基因的内含子保留和其调控机制。本研究发现了map3k8基因内含子2的保留,并验证保留内含子的map3k8转录本滞留细胞核。为了进一步探究map3k8内含子保留的调控机制,我们构建了一系列重组质粒转染细胞,发现map3k8保留内含子中可能存在抑制内含子剪接的顺式作用调节元件。通过si RNA敲低实验,我们推测,PTBP1在可能会抑制map3k8内含子的剪接。其次,为了验证其保留内含子的转录本滞留细胞核是否是为了响应细胞外刺激因子或者信号变化从而来调节map3k8的产生和表达,我们用LPS作为刺激因子,通过不同LPS浓度梯度处理检测内含子保留情况。结果显示,LPS处理后细胞map3k8内含子保留相对于对照有变化,但不显著。除内含子保留之外,我们还发现全长型和截短型的map3k8蛋白在细胞中定位不同,由此推测其功能发生改变。我们的研究为探究内含子保留的调控机制奠定了一定的基础,为深入了解map3k8基因的功能提供了新思路。

关键词：可变剪接内含子保留 map3k8 机制

OVOL2降低map3k8表达抑制结直肠癌上皮间质转化的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

OVOL2降低MAP3K8表达抑制结直肠癌上皮间质转化的研究

作者：高进厦门大学

学位级别：硕士

目的:本研究探讨OVOL2蛋白及其下游相关因子map3k8及CXCL16在结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)中的功能和临床实践意义。方法:我们用RNA转录组测序(RNA-Seq)对过表达OVOL2的HCT116细胞系和沉默OVOL2的SW480细胞系进行测序,测定差异性表... 详细信息

目的:本研究探讨OVOL2蛋白及其下游相关因子map3k8及CXCL16在结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)中的功能和临床实践意义。方法:我们用RNA转录组测序(RNA-Seq)对过表达OVOL2的HCT116细胞系和沉默OVOL2的SW480细胞系进行测序,测定差异性表达基因(DEGs)。应用交叉染色质免疫沉淀测序法(ChiP-Seq)测定相关峰(Peaks),验证相关因子的相互作用。在体外细胞实验中,我们对结直肠癌细胞系进行了划痕实验和细胞迁移侵袭实验,验证敲减前后细胞表型变化,并应用免疫印迹实验验证相关因子表达水平继而验证相关信号通路及分子相互作用机制。同时,我们对结直肠癌病人的癌和癌旁组织应用免疫印迹实验和免疫组化以及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行评估,主要评估了 OVOL2及其相关的有丝分裂蛋白激酶激酶激酶(map3k8)和C-X-C基序的趋化因子16(CXCL16)的RNA表达(n=597)水平及蛋白表达(n=93)水平,并进行生存和预后相关指标分析。我们还对培养的细胞上清液和29例结肠息肉患者及24例结直肠癌患者的血清样本进行ELISA测定,测定它们中的CXCL16的表达水平。结果:研究发现,OVOL2通过阻断map3k8/AkT/NF-κb信号通路抑制CRC细胞的迁移和上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT),并降低map3k8/AkT/NF-κ b信号通路下游CXCL16的水平。此外,与邻近的正常组织相比,患者的肿瘤组织样本中OVOL2的表达量较低,而CXCL16表达水平较高。生存分析显示,OVOL2和CXCL16表达高低与总生存期(OS)相关,是CRC的独立预后因素。相关数据分析还表明,OVOL2和CXCL16两者联合检测对预后判断更有价值,CXCL16有可能作为CRC潜在的诊断性生物学标志物和预后判断指标。结论:OVOL2/map3k8/CXCL16轴在结直肠肿瘤发生和转移中起关键作用,CXCL16可能是循环中一个潜在的结直肠肿瘤诊断和预后相关的生物学标志物。

关键词：结直肠癌上皮间质转化 OVOL2 map3k8 CXCL16

miR-370-5p靶向map3k8抑制绵羊黑色素细胞增殖调节黑色素生成

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

miR-370-5p靶向MAP3K8抑制绵羊黑色素细胞增殖调节黑色素生成

作者：温茹军安徽农业大学

学位级别：硕士

绵羊被毛是毛纺织业的主要原料,由于绵羊毛色相对单一,无法满足现在人们对颜色的追求,因此获取天然优质绵羊毛皮制品,降低化学染色剂的使用成为科研人员关注的重点。动物被毛的颜色是由毛囊毛乳头部位的黑色素细胞产生的黑色素决定。map... 详细信息

绵羊被毛是毛纺织业的主要原料,由于绵羊毛色相对单一,无法满足现在人们对颜色的追求,因此获取天然优质绵羊毛皮制品,降低化学染色剂的使用成为科研人员关注的重点。动物被毛的颜色是由毛囊毛乳头部位的黑色素细胞产生的黑色素决定。mapk激酶激酶8(mitogen-activated protein kinase kinase kinase 8;map3k8),它可以激活包括MEk,ERk和JNk在内的大量下游分子,参与黑色素生成。前人研究发现,不同毛色羊驼的皮毛中miR-370-5p的基因表达水平存在显著差异,由此推测可能参与动物毛色的生成。因此,本研究以白、棕两色绵羊皮肤为研究对象,每组准备3个同样处理的样本,探究miR-370-5p介导的map3k8调控途径是否与动物毛色表型之间存在调控关系。试验方法及结果如下:1通过RT-q PCR检测发现,miR-370-5p在白色绵羊黑色素细胞中的表达量显著高于棕色绵羊黑色素细胞。构建miR-370-5p过表达载体转染黑色素细胞;过表达载体转染于黑色素细胞检测黑色素生成相关指标变化,与对照组相比,处理组的细胞增殖速率、黑色素含量、酪氨酸酶活性均显著降低。2 MiRbase软件预测发现,miR-370-5p与map3k8存在靶向关系;同源性分析结果显示,map3k8与miR-370-5p靶向结合位点在绵羊、人、牛和小鼠等物种之间保守性高;双荧光素酶结果显示:miR-370-5p与map3k8之间存在靶向吸附关系;Western blot和RT-q PCR检测结果表明:过表达miR-370-5p显著抑制map3k8的m RNA和蛋白表达。3原位杂交检测结果显示,map3k-m RNA位于毛囊和细胞质位置。4构建3对map3k8干扰载体,RT-q PCR筛选结果显示,si RNA-710的干扰效果稳定且符合预期,继续用于后续实验;黑色素生成相关指标检测结果显示,与对照组相比,转染si RNA-710组的细胞增殖速率、黑色素含量、酪氨酸酶活性均显著降低。5构建map3k8替代物,转染黑色素细胞,RT-q PCR和Western blot检测map3k8替代物的效率,符合预期;指标检测结果显示,与对照组相比,转染map3k8替代物组的细胞增殖速率、黑色素含量、酪氨酸酶活性均显著降低。基于以上结果得出结论,miR-370-5p通过靶向map3k8抑制绵羊黑色素细胞增殖,抑制黑色素生成。

关键词：绵羊被皮黑色素细胞 miR-370-5p map3k8

miR-26a靶向map3k8抑制奶牛子宫内膜炎的机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

miR-26a靶向MAP3K8抑制奶牛子宫内膜炎的机制研究

作者：黄志华中农业大学

学位级别：硕士

奶牛子宫内膜炎是多发于奶牛产后的子宫炎性损伤,通常由机械性损伤或病原微生物入侵引起,可造成胚胎植入失败、反复性流产、不孕等疾病,严重影响奶牛繁殖效率,不利于乳制品行业的健康可持续发展,给世界奶牛乳业带来了巨大的经济损失。... 详细信息

奶牛子宫内膜炎是多发于奶牛产后的子宫炎性损伤,通常由机械性损伤或病原微生物入侵引起,可造成胚胎植入失败、反复性流产、不孕等疾病,严重影响奶牛繁殖效率,不利于乳制品行业的健康可持续发展,给世界奶牛乳业带来了巨大的经济损失。尽管近年来对奶牛子宫内膜炎的研究已逐渐深入,但由于其病原微生物众多且发病机制尚不十分明确,因此,目前已知的治疗方法都存在较大局限性。抗微生物药物具有高效的杀灭病原菌能力,是过去临床上治疗奶牛子宫内膜炎的最佳选择,而由于目前无抗养殖的推广,禁止使用大量的抗微生物药物,所以急需新的治疗方式来替代。micro RNA(miRNA)可通过靶基因间接参与多种生物体内的调控机制,对机体保持健康和疾病防控具有重要作用。miR-26a是一种多功能的miRNA,属于miR-26家族,在急性肾炎和急性肺损伤等疾病过程中发挥关键调节因子作用。然而,miR-26a在奶牛子宫内膜炎症中的作用和调节机制仍不明确。本文以奶牛炎性子宫内膜组织为研究对象,着眼于miR-26a与其可能靶基因map3k8之间的关系,揭示二者对于奶牛子宫内膜炎的调控机制,探索治疗奶牛子宫内膜炎的新方法,为其他研究者提供新的研究思路。主要研究内容和实验结果如下:(1)选取健康和具有明显子宫内膜炎临床症状的奶牛,采集子宫角组织。通过组织病理学观察、MPO活性测定和RT-q PCR实验,发现疾病组奶牛子宫组织结构发生重度异常,可见有大量炎症细胞浸润,MPO活性显著增加,促炎因子的表达水平上升,说明所采集的疾病组奶牛子宫组织存在炎症反应。进一步测定发现,miR-26a表达量在疾病组中下降,而map3k8的m RNA、蛋白和免疫荧光水平反而升高。以上结果提示,miR-26a与map3k8的表达水平和炎症反应相关,可能影响奶牛子宫内膜炎的发生。(2)通过Target Scan、miRDB等靶基因预测数据库,发现map3k8与miR-26a之间可能存在靶向关系。构建了野生型和突变型map3k8 3’-UTR的报告基因重组载体,进行荧光素酶活性检测发现,miR-26a mimics对野生型载体荧光素酶活性有抑制作用,表明miR-26a对map3k8具有沉默作用,证实了二者间的靶向关系。(3)利用LPS建立牛子宫内膜上皮细胞系(b EECs)炎症模型,通过CCk-8实验发现LPS对b EECs活性无影响,RT-q PCR实验发现,miR-26a表达水平与LPS刺激时间与剂量高度相关。将miR-26a mimics转染至b EECs发现,map3k8的m RNA和蛋白表达均发生下降,且位于mapk通路的下游蛋白如ERk、MEk的磷酸化水平也随之降低,IL-1β、IL-6和TNF-α等炎性因子的释放也同步减少。但这一变化在转染miR-26a inhibitor时发生逆转。转染si-map3k8显著抑制了map3k8及其下游蛋白的表达和炎性因子的释放,该结果与转染miR-26a mimics时高度一致,确证了map3k8在miR-26a调控子宫内膜炎的过程中发挥重要的生物学功能。(4)为进一步证明map3k8对子宫内膜炎的影响,本研究利用LPS成功构建了小鼠急性子宫内膜炎模型,发现LPS刺激小鼠的子宫中map3k8的m RNA、蛋白和荧光水平均显著上升,ERk、MEk的磷酸化水平与炎性因子水平同步升高,该结果与奶牛子宫样品中所获结果趋势完全一致。以上研究结果表明,miR-26a靶向map3k8抑制mapk信号通路的激活,缓解炎症反应造成的奶牛子宫内膜炎性损伤。

关键词：奶牛子宫内膜炎 miR-26a map3k8 mapk

map3k8通过LAP介导前列腺素E2对肺部炎症的影响

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术 2022年第4期32卷 487-494页

作者：朱小琴徐丹娟如皋市人民医院肿瘤化疗科江苏如皋226500

[目的]探讨LC3-Ⅱ相关吞噬作用(LC3-Associated Phagocytosis,LAP)在肺纤维化患者肺部炎症反应中的作用和潜在机制。[方法]以肺纤维化患者24例、健康志愿者24例为研究对象,分离血浆中外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cel... 详细信息

[目的]探讨LC3-Ⅱ相关吞噬作用(LC3-Associated Phagocytosis,LAP)在肺纤维化患者肺部炎症反应中的作用和潜在机制。[方法]以肺纤维化患者24例、健康志愿者24例为研究对象,分离血浆中外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),检测PBMCs中LAP水平。蛋白质组学检测和shRNA筛选鉴定调控LAP的关键因子。[结果]肺纤维化患者PBMCs中LC3-Ⅱ和Rubicon水平高于健康志愿者。敲低Rubicon后,肺纤维化患者PBMCs中LC3-Ⅱ水平降低。敲低map3k8后,肺纤维化患者PBMCs中LC3-Ⅱ、Rubicon、LAP水平下降。敲低map3k8后,肺纤维化患者PBMCs中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18水平上升(Pmap3k8表达水平较高,促进了LAP水平上升,增加了PGE2水平,随后降低炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18的水平以抵抗肺部炎症。

关键词： map3k8 LAP 前列腺素E2 肺部炎症 TNF-α IL-1β IL-6 IL-18

miR-375通过靶基因map3k8抑制POMC的转录表达

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧与兽医 2012年第S1期44卷 146-146页

作者：张楠林军凯刘雄飞周豆豆梁小璇罗昊澍崔胜中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100193

最近的研究表明,一些microRNA在垂体的发育,激素的调控以及垂体腺瘤的发生中起着重要的作用,但是miR-375在垂体中的功能尚不清楚。本文通过原位杂交,以及体内、体外转染miR-375的小分子抑制物和模拟物实验,研究了miR-375在垂体细胞中的... 详细信息

最近的研究表明,一些microRNA在垂体的发育,激素的调控以及垂体腺瘤的发生中起着重要的作用,但是miR-375在垂体中的功能尚不清楚。本文通过原位杂交,以及体内、体外转染miR-375的小分子抑制物和模拟物实验,研究了miR-375在垂体细胞中的表达类型以及miR-375在垂体细胞中的主要功能以及相关的分子机理。研究结果证明:在小鼠胚胎期15.5天时。

关键词：垂体细胞转录表达 map3k8 POMC miR-375 垂体腺瘤小鼠胚胎体外转染 microRNA 模拟物