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“易层”贴敷调控巨噬细胞M2型极化促进DRG神经元自噬缓解KOA冷痛敏的机制研究

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时珍国医国药 2024年第3期35卷 758-765页

作者：廖太阳马振源杨楠李晓辰吴鹏苑军徐波张力王培民南京中医药大学附属医院/江苏省中医院江苏南京210029 南京中医药学大学代谢病中医研究重点实验室江苏南京210023 江苏省中医外用药开发与应用工程研究中心江苏南京210023 东南大学附属中大医院江苏南京210009 南京中医药大学附属苏州市中医医院江苏东苏州215007

目的研究“易层”贴敷(YC)改善膝骨关节炎(KOA)冷痛敏的作用及机制。方法用IL-4处理骨髓来源的巨噬细胞成功构建m2型巨噬细胞模型。将60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术(Sham)组、KOA组、m2型巨噬细胞鞘内注射(m2-II)组、m2型巨噬细... 详细信息

目的研究“易层”贴敷(YC)改善膝骨关节炎(KOA)冷痛敏的作用及机制。方法用IL-4处理骨髓来源的巨噬细胞成功构建m2型巨噬细胞模型。将60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术(Sham)组、KOA组、m2型巨噬细胞鞘内注射(m2-II)组、m2型巨噬细胞鞘内注射+“易层”贴敷(m2-II+YC)组,每组15只。KOA模型通过内侧半月板失稳术(Dmm)构建,造模成功后,m2-II组和m2-II+YC组予以鞘内注射m2型巨噬细胞,m2-II+YC组使用“易层”贴敷28天,给药完成后提取各组背根神经节(DRG)组织。采用冷板实验和丙酮低温实验进行冷痛行为学检测;免疫荧光法检测小鼠DRG组织中CGRP、PGP9.5、c-Fos和m2型巨噬细胞标志物荧光强度;Western blot和qPCR检测巨噬细胞CD206、Arg-1和DRG组织TRPA1、TRPm8、LC3B、Beclin1、P62蛋白和基因表达量。结果与KOA组比较,m2-II组和m2-II+YC组小鼠冷板实验和丙酮低温实验所测定的冷痛阈值均明显提高(Pm8蛋白和基因表达明显降低(Pm2表型CD206和Arg-1蛋白荧光强度明显升高(Pm2-II组比较,m2-II+YC组小鼠上述各指标均明显改善(PM2型极化促进DRG神经元自噬,发挥对KOA小鼠冷痛敏的抑制作用。

关键词：巨噬细胞 M2型极化自噬膝骨关节炎冷痛敏 “易层”贴敷

中性粒细胞胞外诱捕网通过诱导巨噬细胞M2型极化促进非小细胞肺癌增殖和侵袭

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中国免疫学杂志 2023年第3期39卷 472-477页

作者：苏莹马丽丽柳江韩忠诚新疆维吾尔自治区人民医院肿瘤科乌鲁木齐830000

目的:探究中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)诱导巨噬细胞极化在非小细胞肺癌(NSCLC)增殖和侵袭中的作用及其相关机制。方法:采集28例NSCLC患者肿瘤组织及其癌旁组织,通过免疫组化检测PAD4和Arg-1表达水平。采用PmA/LPS和PmA/IL-4极化THP-1细... 详细信息

目的:探究中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)诱导巨噬细胞极化在非小细胞肺癌(NSCLC)增殖和侵袭中的作用及其相关机制。方法:采集28例NSCLC患者肿瘤组织及其癌旁组织,通过免疫组化检测PAD4和Arg-1表达水平。采用PmA/LPS和PmA/IL-4极化THP-1细胞为m1和m2型巨噬细胞的过程中加入NETs共孵育,qRT-PCR检测巨噬细胞iNOS、IL-6、TNF-α、Arg-1、IL-10和TGF-β表达水平。将各组m2型巨噬细胞与A549细胞共孵育,CCK8检测A549细胞增殖变化,Transwell检测细胞侵袭能力变化,qRT-PCR和Western blot检测细胞VEGF表达水平变化。结果:与癌旁组织比较,NSCLC患者肿瘤组织PAD4和Arg-1表达水平升高。在向m1型巨噬细胞极化过程中,加入NETs后巨噬细胞iNOS、IL-6、TNF-α表达水平降低,Arg-1、IL-10、TGF-β表达水平升高。在向m2型巨噬细胞极化过程中,加入NETs后巨噬细胞Arg-1、IL-10、TGF-β表达水平升高。与Control组比较,m2组A549细胞增殖、侵袭能力和VEGF表达水平升高。与m2组比较,m2+NETs组A549细胞增殖、侵袭能力和VEGF表达水平升高。结论:NETs通过诱导巨噬细胞向M2型极化,促进NSCLC增殖和侵袭。

关键词：非小细胞肺癌中性粒细胞胞外诱捕网巨噬细胞 M2型极化

温下方调控肿瘤相关巨噬细胞M2型极化抑制肺癌侵袭转移的机制

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中华中医药杂志 2022年第5期37卷 2799-2804页

作者：王梦然毕倩宇章蓓滢黄盛琦季旭明浙江中医药大学基础医学院杭州310053 浙江省神经药理学与转化研究重点实验室杭州310053 浙江中医药大学中医药科学院杭州310053

目的:探讨温下方对巨噬细胞极化调控机制及m2型巨噬细胞(m2-TAms)对A549细胞侵袭转移的影响。方法:动物实验:BALB/c裸鼠随机分为模型组和温下方组,灌胃干预。活体成像分析光子强度;观察肺部病理变化;识别CD68/CD163双标m2-TAms。细胞实... 详细信息

目的:探讨温下方对巨噬细胞极化调控机制及m2型巨噬细胞(m2-TAms)对A549细胞侵袭转移的影响。方法:动物实验:BALB/c裸鼠随机分为模型组和温下方组,灌胃干预。活体成像分析光子强度;观察肺部病理变化;识别CD68/CD163双标m2-TAms。细胞实验:佛波酯(PmA)及白介素-4(IL-4)诱导m2-TAms;流式细胞术检测m2-TAms标志蛋白CD163表达;PCR检测温下方对m2-TAms相关基因mRNA表达的影响;划痕和Transwell检测温下方对m2-TAms促A549细胞侵袭转移的影响;Western blot和PCR检测非受体型酪氨酸蛋白激酶3(J AK3)、信号转导及转录激活因子6(ST AT6)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(PP A Rγ)蛋白及mRNA表达。结果:动物实验显示,与模型组比较,温下方在第28天~35天有效降低转移灶光子强度(Pm2-TAms特异性表型CD68和CD163双阳表达。细胞实验显示,成功诱导的m2-TAms高表达CD163;与m2组比较,温下方显著抑制m2-TAms标志物Arg-1、Fizz-1、C D206 m R NA表达(Pm2组比较,m2+WC F组显著降低m2-T A m s促A549细胞的迁移和侵袭能力(Pm2组相比较,温下方有效降低p-JAK3、p-STAT6和PPARγ蛋白及JAK3、STAT6、PPARγmRNA表达(Pm2极化,降低A549细胞侵袭转移。

关键词：温下方肿瘤相关巨噬细胞 M2型极化肿瘤微环境肺癌侵袭转移

基于补体D因子介导的自噬探讨平喘颗粒抑制巨噬细胞M2型极化的机制

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中华中医药杂志 2022年第5期37卷 2488-2494页

作者：王瑶田春燕孙丽丽刘琪袁星星李竹英黑龙江中医药大学哈尔滨150040 黑龙江中医药大学附属第一医院哈尔滨150040 黑龙江省中医药科学院消化科哈尔滨150006

目的:观察平喘颗粒对巨噬细胞补体D因子(CF D)表达水平及其介导的自噬的影响,从而明确其抑制巨噬细胞M2型极化的作用机制。方法:采用白介素-4诱导U937细胞构建m2型巨噬细胞模型并给予平喘颗粒含药血清进行干预,分别以Western blot、RT-q... 详细信息

目的:观察平喘颗粒对巨噬细胞补体D因子(CF D)表达水平及其介导的自噬的影响,从而明确其抑制巨噬细胞M2型极化的作用机制。方法:采用白介素-4诱导U937细胞构建m2型巨噬细胞模型并给予平喘颗粒含药血清进行干预,分别以Western blot、RT-qPCR及免疫荧光法检测CFD的表达水平。以慢病毒转染CFD-shRNA及自噬诱导剂雷帕霉素作为对照,分别采用Western blot、RT-qPCR和流式细胞术巨噬细胞中M2型极化标记分子、自噬相关蛋白及CF D的表达水平,透射电镜观察巨噬细胞自噬小体的数量。结果:与模型组比较,平喘颗粒组显著降低U937细胞中CFD、Arg-1、FI ZZ1、Ym1的表达水平及CD206阳性细胞百分比(Pm1的表达水平及CD206阳性细胞数与模型组比较无显著性差异。与模型组比较,平喘颗粒组Beclin1与LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著降低(P2蛋白表达水平显著增加(P型组比较无显著性差异。平喘颗粒+雷帕霉素组A rg-1、FIZZ1、Ym1的表达水平及CD206阳性细胞数量显著高于平喘颗粒组(PM2型极化。

关键词：平喘颗粒巨噬细胞细胞自噬补体D因子 M2型极化雷帕霉素慢病毒 U937细胞

Linc00514通过调控miR-378a对肝癌巨噬细胞M2型极化的影响

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中国免疫学杂志 2023年第3期39卷 478-482页

作者：刘洪锋陈中建王晨曦张文南阳医学高等专科学校第一附属医院普通外科四病区南阳473000 吉林市中心医院普外科吉林132001

目的:探讨Linc00514调节肝癌巨噬细胞M2型极化的作用及分子机制。方法:RT-qPCR检测Linc00514和miR-378a在肝癌患者组织和细胞中的表达。生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验预测和验证Linc00514与miR-378a的相互作用。将Linc00514-s... 详细信息

目的:探讨Linc00514调节肝癌巨噬细胞M2型极化的作用及分子机制。方法:RT-qPCR检测Linc00514和miR-378a在肝癌患者组织和细胞中的表达。生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验预测和验证Linc00514与miR-378a的相互作用。将Linc00514-siRNA或NC-siRNA及NC inhibitor、miR-378a inhibitor质粒共转染至HepG2细胞。人单核细胞THP-1与转染后的HepG2细胞上清共培养诱导巨噬细胞极化。RT-qPCR和Western blot检测m2型巨噬细胞标志物精氨酸酶-1(Arg-1)、CD163、CD206和m1型巨噬细胞标志物TNF-α、人类白细胞抗原(HLA)-DR mRNA和蛋白水平。结果:肝癌组织和细胞系中,Linc00514表达显著升高,miR-378a表达显著降低(Pm2型巨噬细胞标志物Arg-1、CD163、CD206 mRNA表达显著升高(PmiR-378a表达。沉默Linc00514显著抑制Arg-1、CD163和CD206 mRNA和蛋白表达,促进m1型巨噬细胞标志物TNF-α和HLA-DR mRNA和蛋白表达(PmiR-378a显著逆转Linc00514对巨噬细胞极化的作用。结论:沉默Linc00514通过靶向miR-378a抑制肝癌巨噬细胞M2型极化。

关键词：肝癌 Linc00514 miR-378a 巨噬细胞 M2型极化肿瘤相关巨噬细胞

枸杞多糖通过抑制TLR4/NF-κB信号通路促进LPS诱导的BV2小胶质细胞M2型极化

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第12期37卷 1066-1072页

作者：王玉银魏文悦郭敏芳李苏垚柴智马存根降雨强宋丽娟尉杰忠山西中医药大学神经生物学研究中心国家中医药管理局益气活血法治疗多发性硬化重点研究室山西晋中030619 山西大同大学脑科学研究所炎性神经退行性疾病山西省重点实验室山西大同037009 山西医科大学第一临床医学院神经内科山西太原030001 中国科学院遗传与发育生物学研究所北京100101 大同市第五人民医院神经内科山西大同037009

目的探讨枸杞多糖(LBP)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞由m1型向M2型极化的作用及其机制。方法实验分为对照组、LPS组、(0.6、0.9、1.2)g/L LBP处理组。噻唑蓝(mTT)法检测LBP对BV2细胞活性的影响,Griess法检测细胞一氧化氮(NO)释放量,... 详细信息

目的探讨枸杞多糖(LBP)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞由m1型向M2型极化的作用及其机制。方法实验分为对照组、LPS组、(0.6、0.9、1.2)g/L LBP处理组。噻唑蓝(mTT)法检测LBP对BV2细胞活性的影响,Griess法检测细胞一氧化氮(NO)释放量,ELISA检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的分泌,免疫荧光细胞化学染色法检测Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg1)的表达,Western blot法检测钙离子结合接头蛋白分子1(Iba-1)、TLR4、NF-κB、iNOS和Arg1的蛋白水平。结果不同剂量LBP处理后,细胞存活率无明显变化。与正常组相比,LPS组小胶质细胞活化明显,呈阿米巴样,NO释放量增加;Iba-1、TLR4、NF-κB、iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6含量增加,Arg1和IL-10含量降低。LBP组Iba-1、TLR4、NF-κB、iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6含量降低,与剂量呈负相关,Arg1和IL-10含量增加,与剂量呈正相关。结论LBP可能通过阻断TLR4/NF-κB信号通路抑制LPS诱导的BV2细胞活化并促进激活的BV2细胞由m1型向M2型极化。

关键词：枸杞多糖(LBP) 脂多糖(LPS) BV2细胞 M2型极化 Toll样受体4(TLR4) 核因子κB(NF-κB)

依达拉奉对脂多糖激活的小胶质细胞向M2型极化的影响

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神经解剖学杂志 2023年第4期39卷 433-438页

作者：祁志杨力鲁子旭段兆达贾秋叶陈浩伦吴春云昆明医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系昆明650500

目的:探究依达拉奉对脂多糖(LPS)激活的小胶质细胞(mG)向M2型极化的影响。方法:利用脂多糖(LPS)激活体外培养的BV2小胶质细胞,复制小胶质细胞激活模型,分为对照组(control)、模型组(LPS)和LPS+依达拉奉组(LPS+E,100μmol/L),通过Western... 详细信息

目的:探究依达拉奉对脂多糖(LPS)激活的小胶质细胞(mG)向M2型极化的影响。方法:利用脂多糖(LPS)激活体外培养的BV2小胶质细胞,复制小胶质细胞激活模型,分为对照组(control)、模型组(LPS)和LPS+依达拉奉组(LPS+E,100μmol/L),通过Western Blot和荧光双标染色技术,检测m2型小胶质细胞标记物:几丁质酶样蛋白1/2(Ym1/2)、精氨酸酶⁃1(Arg⁃1)、白介素10(IL⁃10)和甘露糖受体(CD206)的表达变化。结果:Western Blot和免疫荧光双标染色均提示:LPS组中Ym1/2、Arg⁃1、IL⁃10和CD206的表达升高,与control组相比差异具有显著性(Pm2型小胶质细胞标记物表达进一步增高,LPS+E组与LPS组相比差异具有统计学意义(PM2型极化,发挥抗炎作用。

关键词：依达拉奉脂多糖 M2型极化小胶质细胞

大黄酚促进巨噬细胞M2型极化缓解脓毒症大鼠肺损伤

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免疫学杂志 2020年第9期36卷 748-755页

作者：魏攀郭晋祥于德意朱前进洛阳职业技术学院内科学教研室 471000 洛阳职业技术学院外科学教研室 471000

目的本研究旨在探究大黄酚(Chrysophanol,CP)对脓毒症模型大鼠肺损伤、巨噬细胞极化以及对核因子κB p65(NF-κB p65)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路的影响,为治疗脓毒症提供理论依据。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、低、中... 详细信息

目的本研究旨在探究大黄酚(Chrysophanol,CP)对脓毒症模型大鼠肺损伤、巨噬细胞极化以及对核因子κB p65(NF-κB p65)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路的影响,为治疗脓毒症提供理论依据。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、低、中、高剂量CP组。HE染色观察各组大鼠肺组织损伤情况并进行肺损伤评分。称取大鼠右肺湿质量、干质量,计算湿/干(W/D)比值。其次,通过RT-PCR和Western blot检测肺组织中裂解型半胱天冬酶cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9的表达情况;通过流式细胞术分选大鼠外周血中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)+、CD16/32+m1型和CD206+、CD10+m2型巨噬细胞。通过Western blot和ELISA检测大鼠肺巨噬细胞中iNOS和CD10的表达。Western blot检测大鼠肺组织中NF-κB p65、ERK1/2通路磷酸化情况。结果与对照组相比,模型组大鼠肺泡结构破坏严重,而在低、中、高剂量CP组中,随CP剂量增加肺脏损伤程度降低。与对照组相比,模型组大鼠肺损伤评分和W/D比值升高(Pm1型巨噬细胞数增多(P型组相比,中、高剂量CP组大鼠肺损伤评分和W/D比值降低(Pm2型巨噬细胞数增多(P型组中NF-κB p65、ERK1/2磷酸化水平较对照组显著升高(P型组显著降低(P型大鼠巨噬细胞向M2型极化进而缓解脓毒症大鼠模型肺损伤,下调大鼠肺组织中cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量,抑制NF-κB p65、ERK1/2通路活性,有望成为脓毒症的治疗药物。

关键词：大黄酚脓毒症肺损伤巨噬细胞 M2型极化

猪肺泡巨噬细胞m1/M2型极化过程中mRNA与lncRNA的表达谱研究

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猪肺泡巨噬细胞M1/M2型极化过程中mRNA与lncRNA的表达谱研究

作者：吴雅兰华中农业大学

学位级别：硕士

猪肺泡巨噬细胞（porcine alveolar macrophages,PAms）处于机体先天免疫第一防线,其强可塑性为猪（Sus scrofa）的免疫调控机制解析提供重要细胞模型。lncRNA参与免疫相关过程且是巨噬细胞极化的潜在调控分子。为了建立猪肺泡巨噬细胞... 详细信息

猪肺泡巨噬细胞（porcine alveolar macrophages,PAms）处于机体先天免疫第一防线,其强可塑性为猪（Sus scrofa）的免疫调控机制解析提供重要细胞模型。lncRNA参与免疫相关过程且是巨噬细胞极化的潜在调控分子。为了建立猪肺泡巨噬细胞不同极化亚型,本研究以3头30日龄健康大白仔猪分离的原代PAms为实验材料,利用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）加γ干扰素（interferon gamma,IFN-γ）组合和白介素4（interleukin 4,IL-4）进行极化诱导,并选择刺激时间为0 h、6 h、12 h和24 h,分别构建m1和m2细胞模型（每个时间点3个生物学重复）。对本研究获得的21个细胞样品进行链特异性转录组测序,分析和比较了各时间点PAms两种不同极化亚型的mRNA表达谱变化,筛选差异表达基因进行功能富集分析。同时,对PAms全基因组长链非编码RNA（lncRNA）进行了筛选鉴定、与mRNA基本特征比较、靶基因预测、共表达趋势分析和靶基因功能分析,并将靶基因显著富集通路中的lncRNA作为潜在的极化相关lncRNA。本研究主要结果如下所示:（1）对6 h、12 h和24 h时间点m1和m2极化亚型组PAms样品进行了差异表达分析。相比于m0对照组,m1极化亚型组中分别筛选到1038、3118和4826个差异表达基因。m2极化亚型组中分别筛选到509、3399和5183个差异表达基因。两种极化亚型较m0对照组,上调和下调表达的差异基因数量都随着刺激时间的增加而增加。（2）对以上差异基因进行GO和KEGG注释和功能富集分析。PAms的m1型极化早期差异表达基因主要参与免疫反应,如产生白介素12和多种干扰素、抑制抗炎因子白介素10生成、激活NFκB信号通路和趋化因子介导的信号通路、调控STAT蛋白酪氨酸磷酸化并正调控自然杀伤细胞增殖、促进炎症过程以及启动对病原体的防御等相关通路。12 h时间点的差异表达基因主要参与激活趋化因子介导的信号通路、抑制抗炎因子白介素10生成和正调控自然杀伤细胞增殖、正调控JNK级联、促进T细胞增殖、加强氧化还原过程、抑制细胞增殖和使细胞周期停滞等相关通路。在24 h时间点,差异表达基因主要参与促炎症反应,在NF-κB转录因子活性、促进胸腺中的T细胞增殖和分化、细胞周期、自噬和凋亡等通路显著富集。（3）PAms的M2型极化中,经IL-4刺激6 h的差异基因主要在癌症中的胆碱代谢、VEGF信号通路、mAPK信号通路、FcγR介导的吞噬作用、PI3K-Akt信号通路等通路富集。12 h时间点差异基因主要参与HTLV-I感染、趋化因子信号通路、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路和范可尼贫血途径等通路。24 h时间点,m2型PAms样品差异基因显著富集于B细胞受体信号通路鞘脂信号通路、Toll样受体信号通路、小细胞肺癌和酗酒和NF-κB信号通路。（4）m1型极化过程中,PAms在三个时间点都上调表达的390个差异基因最显著富集于细胞因子与细胞因子受体的相互作用通路,其中参与的基因为CD40、CXCL9、IL2RA、IL12B、CXCL10、IL23A、TNFSF10、IL15、CSF3、IL1B、IL12RB1、CCL8、IL23R、CCL2、IL10、CXCL8、Sus＿scrofa＿new Gene＿12336、TNFSF13B、CCL20、LOC110258579、IL15RA、IL10RA、HGF和CXCL11;三个时间点都下调表达的150个差异基因最显著富集于Notch信号通路,其中参与的基因为DTX1、DLL1、DTX4和NUmBL。M2型极化过程中,PAms在三个时间点都上调表达的121个差异基因最显著富集于EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药通路,其中参与的基因为NRG1、mAPK3、Sus＿scrofa＿new Gene＿1215和PLCG1;三个时间点都下调表达的147个差异基因最显著富集于PI3K-Akt信号通路,其中参与的基因为Sus＿scrofa＿new Gene＿1306、LPAR5、DDIT4、JAK2、SPP1、LPAR1、CSF1、PIK3R5、HGF、LAmC2和GNG8。（5）对21个样品组装的转录本进行lncRNA识别和预测,共得到23995条可靠性高的lncRNA。共表达趋势分析显示,两种极化亚型中lncRNA都被划分成了两个共上调趋势和共下调趋势的数据集。m1型极化过程中,共表达趋势为上调的lncRNA靶基因主要富集于Jak-STAT信号通路、磷脂酰肌醇信号系统和自然杀伤细胞介导的细胞毒性;共表达趋势为下调的lncRNA靶基因主要富集于错配修复、丁酸代谢和脂肪酸生物合成。M2型极化过程中,共表达趋势为上调的lncRNA靶基因主要富集于背腹轴形成、泛酸酯和辅酶a的生物合成和一个由叶酸组成的碳库等通路;共表

关键词：猪肺泡巨噬细胞 PAms mRNA Lnc RNA m1型极化 M2型极化