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细胞与分子免疫学杂志 2016年第8期32卷 1045-1050页

作者：戴晨宋基伟梁卓文张倩张坤王哲胡学昱第四军医大学西京骨科医院陕西西安710032 第四军医大学神经科学研究所陕西西安710032

目的研究不同能量参数的810 nm弱激光照射对于巨噬细胞极化状态的影响。方法体外分离、培养BALB/c小鼠来源的骨髓巨噬细胞,应用巨噬细胞集落刺激因子(m-CSF)条件性培养基培养的骨髓细胞,流式细胞术检测F4/80表达鉴定培养结果。脂多糖-... 详细信息

目的研究不同能量参数的810 nm弱激光照射对于巨噬细胞极化状态的影响。方法体外分离、培养BALB/c小鼠来源的骨髓巨噬细胞,应用巨噬细胞集落刺激因子(m-CSF)条件性培养基培养的骨髓细胞,流式细胞术检测F4/80表达鉴定培养结果。脂多糖-γ干扰素(LPS-IFN-γ)刺激进行m1细胞极化诱导,反转录PCR检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、精氨酸酶1(Arg1)、CD86 mRNA水平,Western blot法检测i NOS和Arg1蛋白水平。应用(1、2、3、4)J/cm2的810 nm弱激光对体外培养的m1细胞进行照射,mTT法检测细胞增殖,免疫荧光细胞化学染色检测i NOS、Arg1的表达,反转录PCR检测m1细胞i NOS、Arg1 mRNA水平,Western blot法检测m1细胞i NOS、Arg1蛋白水平。结果流式细胞术结果证明分离细胞的F4/80阳性率达99.9%。骨髓源性巨噬细胞在LPS-IFN-γ刺激下,高表达i NOS和CD86 mRNA。Western blot法检测发现,给予极化刺激后,骨髓源性巨噬细胞高表达i NOS和CD86蛋白。不同能量的弱激光照射m1型巨噬细胞,mTT法检测发现,(1、2、3)J/cm2弱激光刺激时,m1细胞活力与对照组比较无显著性差异;4 J/cm2刺激时,m1细胞活力降低。免疫荧光细胞化学染色显示,与对照组比较,(1、2)J/cm2照射时,m2型巨噬细胞标志物Arg1阳性细胞数无明显差异,照射剂量为(3、4)J/cm2时,Arg1阳性细胞数显著增多,m1型巨噬细胞标志物i NOS阳性细胞数显著减少。与对照组比较,照射剂量为(1、2)J/cm2时,i NOS及Arg1 mRNA和蛋白表达水平无明显变化,在照射剂量为(3、4)J/cm2时,i NOS mRNA和蛋白水平表达下降,Arg1 mRNA和蛋白水平表达升高。结论 (1、2)J/cm2的810 nm弱激光对于m1型巨噬细胞活力及极化无影响。照射剂量为3 J/cm2时,m1型巨噬细胞可向m2型巨噬细胞极化,且细胞活性无明显变化。但照射能量为4 J/cm2时,m1型细胞虽然可向m2型细胞极化但同时伴有细胞活性降低。

关键词： 810 nm弱激光脊髓损伤 m1/m2细胞极化骨髓来源巨噬细胞

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