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不同佐剂对随机组合多表位恶性疟疾疫苗m. rcag-1的免疫原性及体外抑虫率影响的研究

中华微生物学和免疫学杂志 2011年第12期31卷 1117-1123页

作者：王健蔺亚辉孙成金李莉莉陈祥鹏李军王恒张振龙北京生物制品研究所第四研究室 100024 北京协和医学院基础学院病原生物学系

目的研究弗氏佐剂及3种人用佐剂[Al（OH）3、montanide ISA720、montanide ISA51]对重组多表位蛋白***-1（malaria random constructed antigen-1）在BALB/c小鼠及新西兰大白兔体内产生免疫效果的影响.方法以弗氏佐剂、Al（ OH）3佐剂... 详细信息

目的研究弗氏佐剂及3种人用佐剂[Al（OH）3、montanide ISA720、montanide ISA51]对重组多表位蛋白***-1（malaria random constructed antigen-1）在BALB/c小鼠及新西兰大白兔体内产生免疫效果的影响.方法以弗氏佐剂、Al（ OH）3佐剂、montanide ISA720以及montanideISA51佐剂分别与***-1蛋白进行配伍,分别免疫BALB/c小鼠及新西兰白兔；采用ELISA法检测***-1蛋白及其所组成各个表位特异的血清IgG含量；间接荧光免疫试验分析不同配伍组免疫血清对天然疟原虫抗原的识别；酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测特异性鼠T淋巴细胞的活化；另借助生物传感器评价抗原与不同佐剂配伍组血清的亲和力,并用体外生长抑制试验（GIA）对恶性疟原虫的体外生长的影响进行评价.结果不同佐剂可诱发不同水平的抗体滴度,montanide ISA51佐剂配伍组的效果与弗氏佐剂组最为接近,并可使蛋白包含的11个表位肽能都较好诱发出特异性抗体,可有效激发以IFN-γ为主的细胞免疫应答,而且montanide ISA51佐剂组免疫产生的抗体和***-1蛋白质的亲和力高于其他两种佐剂；而montanide ISA720佐剂和Al（OH）3佐剂免疫组不能诱发小鼠产生显著的IFN-γ反应（P＞0.05）.montanide ISA51配伍蛋白质免疫产生的IgG在浓度为2mg/ml时对3D7和Dd2的抑制率分别为60%和100%,Al（OH）3佐剂组免疫兔血清IgG体外抑虫率较低（10%左右）,而montanide ISA720佐剂免疫组血清不能有效抑制疟原虫生长.结论通过比较3种人用佐剂和弗氏佐剂对BALB/c小鼠和新西兰兔的免疫辅助效能显示,montanide ISA51佐剂能很好的辅助***-1蛋白疫苗诱发动物体内的体液免疫和细胞免疫应答,可做为疫苗的候选佐剂之一.

关键词： m.rcag-1 佐剂疟疾疫苗

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药用蛋白分子原核表达与分离纯化：sTNFRⅡ、rhG-CSF、***-1

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作者：李佳睿山西大学

学位级别：硕士

随着生物原研药专利的不断到期,生物仿制药(Biosimilar)以研发成本低为优势在全球范围内迅速发展。目前,生物制药的主驱动力有四大类：基因工程蛋白因子类药物、单抗药物、受体类药物和基因工程类疫苗。受体类药物II型重组人肿瘤坏死因... 详细信息

随着生物原研药专利的不断到期,生物仿制药(Biosimilar)以研发成本低为优势在全球范围内迅速发展。目前,生物制药的主驱动力有四大类：基因工程蛋白因子类药物、单抗药物、受体类药物和基因工程类疫苗。受体类药物II型重组人肿瘤坏死因子(sTNFR II)的研发难点在于二硫键多,原核表达的错配率高,而真核表达生产成本高。本文中工程菌BL21(DE3)/pET28a/his-Cel-TNFR II-CH3经过原核发酵,采用金属螯合亲和层析法,从盐浓度,咪唑浓度,低浓度尿素添加与否这三个方向出发,对亲和层析的上样条件进行了优化,得到了经SDS-PAGE凝胶电泳和反相高效液相色谱(RPLC)验证的纯品。蛋白因子类药物重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)的中试生产经历了高密度原核表达发酵、高压匀浆破菌,离心收集包涵体,包涵体变复性,阳离子交换,SDS凝胶电泳结合高效液相色谱检验纯度和收率。基因工程类疫苗的设计趋势是多表位和通用性,恶性疟原虫多表位疫苗(***-1)采用原核表达的策略,发酵破菌后在小试阶段加入蛋白酶抑制剂PmSF,得到了较为理想的纯度,然而在中试纯化过程中,不添加蛋白酶抑制剂的技术路线确无法得到纯品,这是由蛋白结构不稳定引起的。本文中三例药物的技术开发过程提示了从源头做起的QbD(Quality by design,质量源于设计)是提高生物药产业化成功率的关键。

关键词： sTNFR2 rhG-CSF m.rcag-1 下游纯化条件优化

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