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犬冠状病毒JS1706株m基因的分子特性与真核表达

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畜牧与兽医 2020年第4期52卷 86-90页

作者：田晓彦吕海峰熊文斌甘军纪扬州大学兽医学院/江苏省人兽共患病重点实验室江苏扬州225000

为了解犬冠状病毒(CCV)江苏分离毒株(JS1706)m基因的分子特性,对其全序列进行了扩增和序列分析。结果表明,该基因ORF全长为792 bp,编码263个氨基酸。与CCV参考毒株(I型和II型)进行核苷酸和氨基酸同源性比较,其同源性分别为86.3%~98.7%,8... 详细信息

为了解犬冠状病毒(CCV)江苏分离毒株(JS1706)m基因的分子特性,对其全序列进行了扩增和序列分析。结果表明,该基因ORF全长为792 bp,编码263个氨基酸。与CCV参考毒株(I型和II型)进行核苷酸和氨基酸同源性比较,其同源性分别为86.3%~98.7%,88.2%~99.2%。进化树分析表明,JS1706株与CCVⅡ型国内流行株NJ17、NTU 366共属一个分支。生物信息学分析表明,m蛋白有一个17个氨基酸构成的信号肽区域,3个跨膜区和3个N-糖基化位点。根据基因序列推测m蛋白的分子量为29 823。将扩增得到的m基因全序列片段经纯化后与载体pCDNA3.1连接,构建了pCDNA3.1CCV-m真核表达质粒,在293T细胞上能成功表达。本研究结果不仅有助于了解国内CCV的m基因分子特性,也为CCV分子快速诊断和疫苗研究奠定了基础。

关键词：犬冠状病毒 m基因分子特性真核表达

2株PEDV贵州分离株m基因的克隆及相似性分析

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黑龙江畜牧兽医 2018年第17期 101-104页

作者：杨伟汤德元曾智勇王彬黄涛龙冬梅石远菊胡玲玲叶丽贵州大学动物科学学院

为了解贵州省猪流行性腹泻病毒（PEDV）分离株m基因的变异及分子进化情况,试验采用RT-PCR扩增、目的基因克隆与测序及生物信息学软件对贵州省分离的PEDV-GZAS株和PEDVGZHZ株m基因进行序列分析。结果表明：经RT-PCR扩增,得到的片段大小为... 详细信息

为了解贵州省猪流行性腹泻病毒（PEDV）分离株m基因的变异及分子进化情况,试验采用RT-PCR扩增、目的基因克隆与测序及生物信息学软件对贵州省分离的PEDV-GZAS株和PEDVGZHZ株m基因进行序列分析。结果表明：经RT-PCR扩增,得到的片段大小为695 bp;测序结果证实,贵州分离株m基因核苷酸序列大小为695 bp;贵州分离株PEDV-GZAS株与PEDV-GZHZ株之间同源性为84.2%;PEDV-GZHZ株与瑞士疫苗株（AF353511）之间的同源性为97.7%,与中国贵州（KF150217）、泰国（FJ158546）和美国（KF272920）分离株同源性最高为99.4%;贵州分离株PEDVGZAS株与瑞士疫苗株（AF353511）之间的同源性为97.5%,与中国贵州（KF150217）、泰国（FJ158546）和美国（KF272920）分离株同源性最高为99.3%;此次分离的2株分离株都与中国河南（EU287429）分离株同源性最低为83.1%。PEDV贵州分离株PEDV-GZAS株m基因与泰国（FJ158546）分离株遗传进化关系最近,与中国河北（JF508465）分离株亲缘关系较近;PEDV-GZHZ株与PEDV-GZAS株及参考毒株之间遗传进化关系较远。

关键词：贵州省猪流行腹泻病毒 m基因克隆相似性分析

2015-2018年广东省猪流行性腹泻病毒m基因的遗传进化分析

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中国兽医杂志 2020年第1期56卷 22-25页

作者：赵贤杰张天佑李舜李桂珍谢宏林李康健张熙付强马春全陈胜锋佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528225 广州长隆野生动物世界广东广州511430 佛山佛科院动物医院有限公司广东佛山528225

本试验通过对22株采集于2015-2018年广东省内猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株的m基因进行克隆和测序,并将测序结果与NCBI中PEDV参考株m基因进行同源性分析和构建系统进化树,从而了解广东省PEDV流行株的近年来遗传变异情况。结果显示,22株P... 详细信息

本试验通过对22株采集于2015-2018年广东省内猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株的m基因进行克隆和测序,并将测序结果与NCBI中PEDV参考株m基因进行同源性分析和构建系统进化树,从而了解广东省PEDV流行株的近年来遗传变异情况。结果显示,22株PEDV流行株间核苷酸序列同源性为97.5%~100.0%,与华南地区参考株m基因核苷酸序列同源性为97.7%~99.9%,与国内较早分离株CH/S和经典毒株CV777同源性较低,分别为97.5%~98.1%、97.7%~98.2%。PEDV m基因遗传进化分析显示,22株广东PEDV流行株的同源性较高,亲缘关系紧密,此外,22株广东PEDV流行株与大部分代表性毒株、疫苗株亲缘关系较远,如国内早期分离株CH/S、经典毒株CV777、韩国株KRPEDV-9-Vaccine、泰国株mNIAH10054108、日本株Jme2、英国株Brl/87等。试验结果表明,广东省当前的PEDV流行毒株存在基因变异并形成独特进化分支。

关键词：猪流行性腹泻病毒 m基因同源性分析遗传进化树分析

利用m基因鉴别新城疫病毒中强毒株与弱毒株RT-nPCR方法的建立

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中国动物传染病学报 2017年第5期25卷 21-25页

作者：朱小甫吴旭锦咸阳职业技术学院畜牧兽医研究所动物疫病分子生物学诊断实验室咸阳712000

根据GenBank上公开的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基因序列,针对m基因差异位点设计了3对引物,通过优化反应体系与条件,建立了能够区分NDV中强毒株与弱毒株的RT-nPCR检测方法。特异性试验显示,NDV中强毒株扩增出543、375 bp... 详细信息

根据GenBank上公开的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基因序列,针对m基因差异位点设计了3对引物,通过优化反应体系与条件,建立了能够区分NDV中强毒株与弱毒株的RT-nPCR检测方法。特异性试验显示,NDV中强毒株扩增出543、375 bp两个条带,弱毒株仅出现375 bp一个条带,其他常见禽病毒为阴性。灵敏度试验结果表明,该方法检测c DNA含量极限为6.15×10^(-4)ng/μL。临床样品检测发现鸡群NDV弱毒带毒率高,中强毒株带毒率较低。结果表明,本研究成功建立了一种基于m基因的快速鉴别诊断NDV中强毒株与弱毒株的RT-nPCR方法。

关键词：新城疫病毒中强毒株弱毒株 m基因鉴别诊断

一株猪流行性腹泻病毒S、m、N基因的遗传变异分析

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动物医学进展 2017年第2期38卷 12-16页

作者：易新健刘准张翠翠臧传佼徐健陈申秒山东滨州沃华生物工程有限公司山东省动物病原微生物工程实验室山东滨州256600

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777疫苗毒株与流行毒株的遗传变异和抗原位点的差异性,以RT-PCR进行PEDV CV777疫苗株和JS2016流行株S、m、N 3个基因的克隆测序,进行PEDV S、m、N 3个基因的核酸序列同源性分析,并通过软件比对CV777与JS2... 详细信息

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777疫苗毒株与流行毒株的遗传变异和抗原位点的差异性,以RT-PCR进行PEDV CV777疫苗株和JS2016流行株S、m、N 3个基因的克隆测序,进行PEDV S、m、N 3个基因的核酸序列同源性分析,并通过软件比对CV777与JS2016毒株在这3个基因上的抗原差异。S、m、N基因的同源性分析表明流行毒株与CV777存在变异,但同源性在93%以上;免疫原性预测结果显示2个毒株在S、m、N 3个基因上的抗原区域存在较小的差异。

关键词：猪流行性腹泻病毒 CV777 S基因 m基因 N基因

2014—2015年黑龙江省哈尔滨地区犬冠状病毒m基因分子流行病学调查

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黑龙江畜牧兽医（下半月） 2016年第9期 196-198页

作者：王欣宇王福军辛科睿魏姗王恩雨郜洪泉王志慧邢宇昕赵喜文孙筱璇边秀东刘秋瑾孙东波黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 黑龙江民族职业学院哈尔滨150066

为调查黑龙江省哈尔滨地区犬冠状病毒（CCo V）的流行情况,本研究通过RT-PCR对141份腹泻犬粪便拭子样品中CCo V m基因片段（409 bp）进行了扩增,进一步对m基因进行了测序和分子进化性分析。结果表明：在141份样品中,38份样品为CCo V阳性... 详细信息

为调查黑龙江省哈尔滨地区犬冠状病毒（CCo V）的流行情况,本研究通过RT-PCR对141份腹泻犬粪便拭子样品中CCo V m基因片段（409 bp）进行了扩增,进一步对m基因进行了测序和分子进化性分析。结果表明：在141份样品中,38份样品为CCo V阳性（26.95%,38/141）,其中CCo V-Ⅰ型和CCo V-Ⅱ型分别占13.16%（5/38）和86.84%（33/38）。m基因序列分析表明：5个CCo V-Ⅰ型毒株m基因序列的核苷酸同源性为95.7%~99.1%,推导的氨基酸序列同源性为97.4%~100%;33个CCo V-Ⅱ型毒株m基因序列的核苷酸同源性为97.4%~100%,推导的氨基酸序列同源性为100%;33个CCo V-Ⅱ型毒株与中国参考毒株HF3的核苷酸同源性为88.7%~96.2%,推导的氨基酸序列同源性为92.2%~97.4%。进化树分析表明：5个CCo V-Ⅰ型毒株与2个巴西参考毒株呈现出较近的亲缘关系;33个CCo V-Ⅱ型毒株形成五个亚群,与中国参考毒株（除NJ17毒株）和国外参考毒株表现出较远的亲缘关系。可见CCo V在犬腹泻中呈现出较高感染率,以CCo V-Ⅱ型毒株感染为主,并表现出遗传多样性。

关键词：犬犬冠状病毒(CCoV) m基因流行病学调查

广西优势血清西优势血清型IBV代表株m基因在杆状病毒系统中的表达

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中国家禽 2017年第15期39卷 21-25页

作者：袁园张丽华董志华唐宁王海勇韦天超黄腾磨美兰韦平广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

采用RT-PCR扩增鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西优势血清型代表性毒株GX-YL5的膜(m)蛋白基因,将其克隆至pFastBac^(Tm)/HBm-TOPO杆状病毒转移载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,获得重组杆粒rHBm-m;将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,获得重... 详细信息

采用RT-PCR扩增鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西优势血清型代表性毒株GX-YL5的膜(m)蛋白基因,将其克隆至pFastBac^(Tm)/HBm-TOPO杆状病毒转移载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,获得重组杆粒rHBm-m;将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒;利用间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白质免疫印迹(Western-blot)鉴定表达的m蛋白。IFA检测可见重组杆状病毒感染后72h细胞出现特异性荧光,Westernblot检测可见大小约为26ku的特异性蛋白带,表明该重组m蛋白在Sf9昆虫细胞中成功获得表达。研究为IBVm蛋白的生物学功能、IBV诊断试剂和新型疫苗制备等奠定基础。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 m基因 Sf9昆虫细胞杆状病毒

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猪流行性腹泻病毒山西分离株m基因序列分析

中国兽医杂志 2017年第3期53卷 32-34,38页

作者：刘文俊王娟萍姚敬明吴忻孟帆韩一超李红丽樊振华米瑞娟薛翼鹏山西省农业科学院畜牧兽医研究所山西太原030032

为了研究山西地区猪流行性腹泻病毒m基因的遗传变异情况,从2014年10月~2015年4月山西地区11个地市收集的猪流行性腹泻病毒(PEDV)病料中扩增到4株PEDV的m基因,并进行序列比对及遗传分析。结果表明,4株PEDV的m基因与CV777毒株比较,部分核... 详细信息

为了研究山西地区猪流行性腹泻病毒m基因的遗传变异情况,从2014年10月~2015年4月山西地区11个地市收集的猪流行性腹泻病毒(PEDV)病料中扩增到4株PEDV的m基因,并进行序列比对及遗传分析。结果表明,4株PEDV的m基因与CV777毒株比较,部分核苷酸及氨基酸发生改变。4株PEDV的m基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.6%~100%和99.1%~99.6%,与参考毒株的核苷酸和氨基酸的同源性分别为96.3%~99.9%和96.0%~99.1%。遗传进化分析显示,4株PEDV与2010-2013年中国分离株(BJ2010、HB/BD、HB/FN、HLJ-2012、GDHZ-1202、SHQP/Ym/2013)、2008年泰国KU04RB08株亲缘关系较近;与2株泰国株(m_NIAH2013_95和m_NIAH1795_04)、2株欧洲株(CV777和Br1/87)和2006年中国分离株LZC亲缘关系较远。

关键词：猪流行性腹泻山西分离株 m基因序列分析

2011年-2014年广西猪流行性腹泻病毒检测及其m基因的序列分析

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中国畜牧兽医 2015年第3期42卷 549-557页

作者：卢冰霞秦毅斌何颖李莹莹梁家幸黎珂钰李斌苏乾莲周英宁蒋冬福卢敬专闭炳芬梁保忠段群棚赵武广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室南宁530001 广西大学动物科学技术学院南宁530005

本试验应用RT-PCR方法对2011年1月—2014年4月采自广西南宁、玉林等14个地区的331份仔猪腹泻粪便样品进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）检测。结果显示331份样品中有210份为PEDV阳性,阳性率为63.44%。对其中25份阳性样品的PEDV m基因进行克... 详细信息

本试验应用RT-PCR方法对2011年1月—2014年4月采自广西南宁、玉林等14个地区的331份仔猪腹泻粪便样品进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）检测。结果显示331份样品中有210份为PEDV阳性,阳性率为63.44%。对其中25份阳性样品的PEDV m基因进行克隆和测序,将测序结果与GenBank中PEDV参考毒株的m基因序列进行同源性比对分析并构建系统进化树。25个PEDV m基因序列与51个参考毒株m基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.9%、94.3%~99.6%。PEDV m基因遗传变异分析结果表明,广西2013年—2014年的PEDV流行毒株与北京、安徽、武汉、河北、广东等地2010年—2013年的流行毒株亲缘关系较近,而与中国早期分离株CH/S（GenBank登录号：JN547228）、疫苗株CV777（GenBank登录号：AF353511）和Attenuated DR13（GenBank登录号：JQ023162）的遗传距离较远。提示广西现流行的PEDV与早期毒株相比已发生较为明显的变异。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) m基因遗传变异