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2021年湖南省猪流行性腹泻病毒流行调查及M基因序列分析

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中国兽医杂志 2022年第6期58卷 88-92页

作者：周宇骏杜雅萍陈宇明胡鹏辉袁智龙明英谭镜明湖南中科基因技术有限公司湖南长沙410128 长沙市农业综合行政执法局湖南长沙410128

为初步了解湖南省猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行情况,本试验于2021年1—12月从湖南省不同地区213个猪场采集疑似感染PEDV样品共1406份,采用实时荧光定量反转录PCR(RT-qPCR)方法对采集样品进行病原检测,并对22份阳性样品的M基因序列进行扩... 详细信息

为初步了解湖南省猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行情况,本试验于2021年1—12月从湖南省不同地区213个猪场采集疑似感染PEDV样品共1406份,采用实时荧光定量反转录PCR(RT-qPCR)方法对采集样品进行病原检测,并对22份阳性样品的M基因序列进行扩增和测序,以进一步分析其基因型和遗传变异情况。结果显示:2021年湖南省PEDV场阳性率为39.91%,样品平均检出率为21.55%;M基因遗传进化分析结果显示:19个毒株属于G2亚型(变异株),3个毒株则属于G1亚型(传统株),说明湖南省流行的PEDV毒株存在2种基因型,但以变异株为主。结果表明,PEDV是湖南省猪群腹泻的主要病因之一,且该地区流行的PEDV基因型较为复杂,但仍然以变异株为主,本试验为湖南省猪流行性腹泻的防控提供了流行病学依据。

关键词：猪流行性腹泻病毒流行调查 M基因遗传进化

经典源和09年大流行源M基因对H1N1亚型猪流感病毒致病力的影响

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经典源和09年大流行源M基因对H1N1亚型猪流感病毒致病力的影响

作者：桑浩田山东农业大学

学位级别：硕士

猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)是一种分为8个节段的负链RNA病毒,属于正黏病毒科。SIV感染猪后会导致猪的生产性能下降,影响猪群健康和产品质量,造成巨大的经济损失。由于猪体内同时含有禽流感受体和人流感受体,猪、禽、人流感... 详细信息

猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)是一种分为8个节段的负链RNA病毒,属于正黏病毒科。SIV感染猪后会导致猪的生产性能下降,影响猪群健康和产品质量,造成巨大的经济损失。由于猪体内同时含有禽流感受体和人流感受体,猪、禽、人流感都可以感染猪,各种流感在猪体内可以相互进行基因重排,促进了大流行性流感病毒株的出现,目前,已有一些H1N1亚型SIV能够引起人类感染,给公共卫生安全构成严重威胁。病毒的M基因编码基质蛋白m1和离子通道蛋白m2,二者在流感病毒生命周期的多个阶段起重要作用,有研究称不同谱系的M基因会影响重组病毒的致病力,目前还没有关于09年大流行源(pdm09)M基因和经典源(CS)M基因影响H1N1 SIV致病力的研究,所以,有必要对其影响致病性的相关机制进行研究,为猪流感病毒的防控提供新的思路。实验室前期分离出了两株H1N1亚型SIV代表毒株,分别是A/swine/Henan/NY361/2013(H1N1),简称NY361,其M基因来源于pdm09 H1N1 SIV;另一株是A/swine/Hubei/HG394/2018(H1N1),简称HG394,其M基因来源于CS H1N1SIV。通过体内试验验证两株病毒对小鼠的致病力,结果显示,HG394对小鼠的致死率远高于NY361。通过序列比对发现,NY361和HG394氨基酸同源性非常接近,二者仅在M基因上存在较大差异,其余7个基因的同源性在99.9%～100%之间,推测M基因影响二者对小鼠的致病力。为了进一步解析病毒分子致病机制,本研究以H1N1亚型猪流感病毒NY361和HG394亲本毒株为骨架,利用反向遗传操作技术,拯救出重组毒进行体内外试验,结果显示:拯救毒株与野生毒株在A549细胞上的复制能力一致,反向遗传操作没有改变重组毒的致病性;HG394对小鼠的致病力和在细胞中的复制能力均高于NY361,HG394在低温条件下的复制水平高于NY361。下一步通过对NY361和HG394进行m1、m2和M基因片段的替换,拯救并鉴定重组病毒,进一步研究pdm09源和CS源的m1、m2和M基因对H1N1亚型猪流感病毒致病力的影响。体内外研究数据表明,CS源m1基因、m2基因增强了重组病毒对小鼠的致病性和在细胞中的复制水平,CS源m2基因增强了重组病毒在小鼠鼻甲中的复制和在低温下在细胞中的复制能力。通过进一步对NY361毒株进行m1和m2基因片段替换,拯救并鉴定重组病毒。体外实验发现,CS源m1基因207AA～232AA区域和m2基因的43AA～49AA区域存在影响重组病毒的致病力和在细胞中的复制能力的关键氨基酸位点,m2基因的43AA～49AA区域存在影响重组病毒在低温下的复制能力的关键氨基酸位点。综上所述,本研究分析了CS源和pdm09源M基因对H1N1 SIV致病力的影响,并发现影响重组病毒致病力和低温下复制能力的氨基酸区域,这将有助于我们了解CS源和pdm09源M基因对H1N1 SIV生物学特性的影响,进一步提高对流感病毒致病力分子机制的认识,掌握流感病毒对人类的潜在风险,为下一次流感大流行提供可靠的理论基础。

关键词：猪流感病毒重配病毒 M基因致病性

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A型流感病毒M基因的研究进展

中国兽医学报 2021年第8期41卷 1639-1644页

作者：乔树苗顾敏刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

M基因是A型流感病毒基因组的第7个节段,全长1027个碱基,进化上可被划分为7个特有宿主谱系:人谱系Hu1、Hu2,禽谱系Av1、Av2,猪谱系Sw1、Sw2和犬/马谱系CE。M基因主要编码基质蛋白m1和离子通道蛋白m2,这2种结构蛋白在A型流感病毒的生命周... 详细信息

M基因是A型流感病毒基因组的第7个节段,全长1027个碱基,进化上可被划分为7个特有宿主谱系:人谱系Hu1、Hu2,禽谱系Av1、Av2,猪谱系Sw1、Sw2和犬/马谱系CE。M基因主要编码基质蛋白m1和离子通道蛋白m2,这2种结构蛋白在A型流感病毒的生命周期中具备多种功能。现简要综述A型流感病毒M基因的遗传进化特点以及m1和m2蛋白的结构与功能,以期为A型流感病毒的相关机制研究提供参考。

关键词： A型流感病毒 M基因遗传进化基质蛋白离子通道

闽西地区猪流行性腹泻病毒M基因遗传进化及分子结构特征分析

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浙江农业学报 2018年第6期30卷 939-945页

作者：董波安永帅戴爱玲李晓华杨小燕龙岩学院生命科学学院福建龙岩364012 福建省生猪疫病防控工程技术研究中心福建龙岩364012

为了解2015—2017年闽西地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)遗传进化规律,本研究收集了闽西地区12份PEDV阳性样品,对其M基因进行RT-PCR扩增,克隆至p mD18-T载体测序,并与国内外已知参考毒株序列进行比对及遗传进化分析。结果表明,12株闽西毒株... 详细信息

为了解2015—2017年闽西地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)遗传进化规律,本研究收集了闽西地区12份PEDV阳性样品,对其M基因进行RT-PCR扩增,克隆至p mD18-T载体测序,并与国内外已知参考毒株序列进行比对及遗传进化分析。结果表明,12株闽西毒株M基因氨基酸序列同源性为100.0%;遗传进化分析表明,12株闽西毒株与经典毒株CV777、2010年前中国分离毒株LCZ、以及韩国毒株Sm98、virulent DR13的亲缘性较远,而与2010年后国内分离毒株以及2013年美国分离毒株亲缘关系最近,说明闽西PEDV毒株属于目前国内外流行毒株。分子结构特征分析表明,PEDV M基因具备高度保守的特性,可以作为设计疫苗的候选基因。

关键词：猪流行性腹泻病毒 M基因进化特征分子特征

犬冠状病毒JS1706株M基因的分子特性与真核表达

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畜牧与兽医 2020年第4期52卷 86-90页

作者：田晓彦吕海峰熊文斌甘军纪扬州大学兽医学院/江苏省人兽共患病重点实验室江苏扬州225000

为了解犬冠状病毒(CCV)江苏分离毒株(JS1706)M基因的分子特性,对其全序列进行了扩增和序列分析。结果表明,该基因ORF全长为792 bp,编码263个氨基酸。与CCV参考毒株(I型和II型)进行核苷酸和氨基酸同源性比较,其同源性分别为86.3%~98.7%,8... 详细信息

为了解犬冠状病毒(CCV)江苏分离毒株(JS1706)M基因的分子特性,对其全序列进行了扩增和序列分析。结果表明,该基因ORF全长为792 bp,编码263个氨基酸。与CCV参考毒株(I型和II型)进行核苷酸和氨基酸同源性比较,其同源性分别为86.3%~98.7%,88.2%~99.2%。进化树分析表明,JS1706株与CCVⅡ型国内流行株NJ17、NTU 366共属一个分支。生物信息学分析表明,m蛋白有一个17个氨基酸构成的信号肽区域,3个跨膜区和3个N-糖基化位点。根据基因序列推测m蛋白的分子量为29 823。将扩增得到的M基因全序列片段经纯化后与载体pCDNA3.1连接,构建了pCDNA3.1CCV-m真核表达质粒,在293T细胞上能成功表达。本研究结果不仅有助于了解国内CCV的M基因分子特性,也为CCV分子快速诊断和疫苗研究奠定了基础。

关键词：犬冠状病毒 M基因分子特性真核表达

中国非小细胞肺癌患者EGFRT790M基因突变检测专家共识

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中华医学杂志 2018年第32期98卷 2544-2551页

作者：中国临床肿瘤学会肿瘤生物标志物专家委员会《中国非小细胞肺癌患者EGFR T790M基因突变检测专家共识》制定专家组中国临床肿瘤学会肿瘤生物标志物专家委员会《中国非小细胞肺癌患者EGFR T790M基因突变检测专家共识》制定专家组

表皮生长因子受体（EGFR）基因突变是东亚人群中非小细胞肺癌（NSCLC）最常见的驱动基因突变，发生率为30％～40％。既往多项研究支持EGFR．酪氨酸激酶抑制剂（TKI）单药治疗是EGFR基因突变局部晚期或转移NSCLC患者的标准治疗方案，但... 详细信息

表皮生长因子受体（EGFR）基因突变是东亚人群中非小细胞肺癌（NSCLC）最常见的驱动基因突变，发生率为30％～40％。既往多项研究支持EGFR．酪氨酸激酶抑制剂（TKI）单药治疗是EGFR基因突变局部晚期或转移NSCLC患者的标准治疗方案，但大多数患者会在用药后9～14个月发生耐药，其中EGFR基因第20号外显子发生错义突变（即T790m突变）是耐药突变中最主要的类型。

关键词：非小细胞肺癌突变检测肺癌患者 M基因 EGFR基因表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂专家

8株禽源H_(9)N_(2)亚型禽流感病毒分离鉴定及M基因的序列分析

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现代畜牧兽医 2023年第1期 11-16页

作者：杨金波李培东刘春国范春艳河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸056038 青岛信得药业有限公司山东青岛266100

试验旨在了解中国目前H_(9)N_(2)亚型禽流感病毒(AIV) M基因的遗传变异情况,对2019—2022年分离到的8株H_(9)N_(2)亚型AIV M基因进行测序,并对核苷酸序列、氨基酸序列一致性和分子遗传进化进行分析。结果显示:8株分离株与参考株序列一... 详细信息

试验旨在了解中国目前H_(9)N_(2)亚型禽流感病毒(AIV) M基因的遗传变异情况,对2019—2022年分离到的8株H_(9)N_(2)亚型AIV M基因进行测序,并对核苷酸序列、氨基酸序列一致性和分子遗传进化进行分析。结果显示:8株分离株与参考株序列一致性均在88.4%以上,8株分离株m之间的核苷酸一致性为88.0%~99.7%;XD1~XD7属于G1-like分支,XD8属于BJ94-like分支。与经典株相比,分离株产生多个增加病毒感染性的突变。XD1~XD7含有对金刚烷胺类药物抗性的31N突变,而XD8则对金刚烷胺类药物敏感。研究表明,试验结果可为AIV的m蛋白相关生物学机制提供一定参考。

关键词：禽流感病毒 H_(9)N_(2)亚型 M基因序列分析

2020—2021年我国部分地区猪流行性腹泻病毒S1、m和ORF3基因遗传进化分析

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黑龙江畜牧兽医 2023年第15期 8-17页

作者：熊谋康梁太润刘献辉王志朋王爽云刘燕玲张乐宜宋长绪华南农业大学国家生猪种业工程技术研究中心/动物科学学院广州510642

为了解2020—2021年我国部分地区猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)毒株变异及遗传进化情况,试验从多个地区的51家猪场采集340份疑似感染PEDV的猪小肠组织、粪便和肛拭子,提取病毒核酸后采用RT-PCR方法扩增S1、m... 详细信息

为了解2020—2021年我国部分地区猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)毒株变异及遗传进化情况,试验从多个地区的51家猪场采集340份疑似感染PEDV的猪小肠组织、粪便和肛拭子,提取病毒核酸后采用RT-PCR方法扩增S1、m和ORF3基因并测序,与GenBank中PEDV参考毒株进行比对分析,利用生物信息学软件构建遗传进化树,分析核苷酸序列同源性及氨基酸序列。结果表明:共获得57份PEDV阳性样品,来源于14家猪场,猪场阳性率为27.5%,并对从阳性猪场获得的14株毒株进行命名。与经典毒株CV777相比,14株PEDV毒株的S1、m和ORF3基因均出现不同程度的氨基酸突变。在14株毒株的S1基因中,Heyuan2021-7毒株位于G1-2分支,其余13株位于G2分支,14株毒株与参考毒株GD-A核苷酸序列的相似性较高,为89.3%~99.9%,存在多处氨基酸的缺失和插入。在M基因中,14株毒株位于G2分支且与参考毒株FR-001核苷酸序列的相似性为98.1%~99.7%,只存在氨基酸突变。在ORF3基因中,FC2021-1、GDzq2020-12、GDmm^(2)021-1和GDjm-DG-2021-12毒株位于G1-2分支,其余10株位于G2分支,14株毒株与参考毒株VN-JFP1013核苷酸序列的相似性为95.4%~99.3%,同源性较高,只存在氨基酸突变。说明2020—2021年我国部分地区流行的PEDV毒株有G1型和G2型毒株,其S1基因较m和ORF3基因突变程度更大,PEDV的流行情况相对复杂。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) 检测 S1基因 M基因 ORF3基因基因测序遗传变异

小反刍兽疫病毒疫苗株N和M基因的克隆、序列分析及原核表达

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西北农业学报 2017年第2期26卷 179-184页

作者：何亚鹏鲍长磊张琪付明哲许信刚西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

根据GenBank已登录的PPRV基因组序列,设计并合成2对特异性引物,以PPRV疫苗株基因组为模板,经RT-PCR扩增获得N和M基因并进行序列分析,再将2个基因插入到原核表达载体pET-28a中,经鉴定正确后转化BL21感受态细胞进行IPTG诱导表达,并进行SDS... 详细信息

根据GenBank已登录的PPRV基因组序列,设计并合成2对特异性引物,以PPRV疫苗株基因组为模板,经RT-PCR扩增获得N和M基因并进行序列分析,再将2个基因插入到原核表达载体pET-28a中,经鉴定正确后转化BL21感受态细胞进行IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE和Western blot检测。成功克隆PPRV疫苗株N和M基因,重组菌经IPTG诱导后表达分子质量为57.7ku N蛋白(核衣壳蛋白)和38.1ku的m蛋白(基质蛋白),2个蛋白均能与小反刍兽疫阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。

关键词：小反刍兽疫毒 N基因 M基因克隆序列分析原核表达