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Journal of Cancer Therapy 2013年第6期4卷 34-43页

作者： Vermont P. Dia Elvira Gonzalez de Mejia Department of Food Science and Human Nutrition University of Illinois at Urbana-Champaign Urbana USA

lunasin is a bioactive peptide originally isolated from soybean and has demonstrated chemopreventive and anti-cancer properties against skin, colon and breast cancers. The objective of the study was to evaluate the capability of intraperitoneally and orally-administered soybean-derived peptide lunasin to inhibit KM12L4 human colon cancer cell metastasis in a mouse model. Intraperitoneal (i.p.) injection of lunasin (4 mg/kg bw/day) reduced the number of liver metastasis by 50% (P = 0.047) and the liver weight/body weight ratio by 23% (P = 0.039). Oral administration of lunasin reduced the number of liver metastasis by 56% (8 mg/kg bw/day, P = 0.293) and 94% (20 mg/kg bw/day, P = 0.247). Immunohistochemical staining of the liver-tissue section showed that lunasin at 20 mg/kg bw dose did not significantly reduce the expression of proliferating cell nuclear antigen, increased the expression of proapoptotic Bax by 2.7-fold but also increased the expression of the antiapoptotic Bcl-2 by 3.8-fold. Regarding epigenetic markers, H3K18 was not significantly affected by either oral dose while H4K8 was dose dependently increased by 2.3-fold (P = 0.001, 8 mg/kg bw) and 2.7-fold (P s of administration used leading to digestion of lunasin when given by oral gavage. In conclusion, lunasin reduced colon cancer metastasis in vivo;however, more studies are needed to determine the oral dose of lunasin and prevent colon cancer metastasis.

关键词： lunasin Colon Cancer Metastasis Apoptosis Histones

lunasin对实验性类风湿关节炎大鼠滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响

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免疫学杂志 2016年第2期32卷 114-118页

作者：王凤杰樊莎莎陈显兵王玲洁谭志鑫陈宗海袁林风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室恩施445000 湖北民族学院医学院恩施445000 恩施州民族医院检验科 445000

目的探讨大豆多肽lunasin对实验性类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠滑膜成纤维细胞(synovialfibroblasts,SFs)增殖与凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用弗氏完全佐剂(freund’s complete adjuvant,FCA)注入大鼠足跖皮内建... 详细信息

目的探讨大豆多肽lunasin对实验性类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠滑膜成纤维细胞(synovialfibroblasts,SFs)增殖与凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用弗氏完全佐剂(freund’s complete adjuvant,FCA)注入大鼠足跖皮内建立大鼠RA模型,造模成功后从大鼠关节滑膜组织中分离纯化出SFs,然后与不同浓度的lunasin(0、50、100、200μmol/L)分别孵育24、48和72 h,MTT法检测SFs增殖;RT-PCR、Western blot检测Caspase3、Bax、Bcl-2基因及蛋白的表达。结果lunasin可显著抑制体外培养的滑膜成纤维细胞增殖,增加Caspase3、Bax的表达,抑制Bcl-2基因和蛋白的表达,并呈现一定的时间和剂量依赖关系。结论 lunasin对RA的治疗作用可能与其抑制SFs增殖和促进凋亡有关。

关键词： lunasin 类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖凋亡

重组毕赤酵母(Pichia pastoris)高产lunasin的发酵工艺优化

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中国生物工程杂志 2016年第8期36卷 73-79页

作者：康国凯冯国栋曹坤琳陈正军葛向阳华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

lunasin是一个最初从大豆中分离,具有43个氨基酸的多肽,具有抗高血压,抗氧化活性,预防癌症,抗炎和降胆固醇的活性。为了实现lunasin的高效生产,对重组毕赤酵母GS115 LN诱导阶段甲醇补料策略(溶氧反馈补料,指数-恒速补料)以及诱导温度进... 详细信息

lunasin是一个最初从大豆中分离,具有43个氨基酸的多肽,具有抗高血压,抗氧化活性,预防癌症,抗炎和降胆固醇的活性。为了实现lunasin的高效生产,对重组毕赤酵母GS115 LN诱导阶段甲醇补料策略(溶氧反馈补料,指数-恒速补料)以及诱导温度进行了优化,并且在此基础上对双碳源(山梨醇、甘露醇)和甲醇混合补料策略以及复合氮源与甲醇混合补料策略进行了优化。研究表明,最优补料策略以及诱导温度分别为指数-恒速补料、24℃,最终在流加1%大豆蛋白胨以及0.02%天冬氨酸条件下,lunasin表达量最高,达到3.27 g/L,是单一甲醇诱导的1.27倍。

关键词： lunasin 重组毕赤酵母高密度发酵工艺优化

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抗癌大豆多肽lunasin的研究现状

食品工业科技 2010年第10期31卷 405-407,412页

作者：季国冯志彪东北农业大学理学院应用化学系黑龙江哈尔滨150030 乳品科学教育部重点实验室黑龙江哈尔滨150030

lunasin是一种全新的、具有癌症预防作用的多肽。lunasin是从大豆中分离出来的具有43个氨基酸的大豆多肽,在预防化学致癌和病毒基因致癌方面有显著效果。本文就抗癌大豆多肽lunasin的序列结构、提取和纯化、抗癌特性、抗癌的作用机理及l... 详细信息

lunasin是一种全新的、具有癌症预防作用的多肽。lunasin是从大豆中分离出来的具有43个氨基酸的大豆多肽,在预防化学致癌和病毒基因致癌方面有显著效果。本文就抗癌大豆多肽lunasin的序列结构、提取和纯化、抗癌特性、抗癌的作用机理及lunasin在大豆和大豆蛋白中的含量进行了详细综述。

关键词： lunasin 预防癌症乙酰化-去乙酰化大豆和大豆蛋白

异源重组联合酶法环化制备环状lunasin及其性质研究

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食品工业科技 2024年

作者：石帆侯轶赵劲松胡松青华南理工大学食品科学与工程学院华南理工大学轻工科学与工程学院

为了实现环状多肽clunasin的全生物合成，本文设计了合成clunasin的线性前体alunasin，构建了含MBP与SUMO双标签的重组表达载体，应用大肠杆菌重组表达alunasin后经多肽连接酶Butelase 1介导合成clunasin，进一步通过圆二色光谱、内源... 详细信息

为了实现环状多肽clunasin的全生物合成，本文设计了合成clunasin的线性前体alunasin，构建了含MBP与SUMO双标签的重组表达载体，应用大肠杆菌重组表达alunasin后经多肽连接酶Butelase 1介导合成clunasin，进一步通过圆二色光谱、内源荧光光谱和细胞实验探究了环化对lunasin热稳定性、结构特性与抗结直肠癌活性的影响。结果显示，37 ℃诱导后重组蛋白成功表达，质谱鉴定结果显示Butelase 1成功环化alunasin，通过该法每升发酵液可以制备6.36 mg的电泳纯clunasin。圆二色光谱与内源荧光光谱结果表明，环化在一定程度上提升了lunasin结构的有序性与致密性。而且，环化改善了lunasin的热稳定性，在97 ℃孵育30 min后，多肽保留率从lunasin的62.3%提高到clunasin的74.9%。clunasin对结直肠癌HCT-116细胞的半抑制浓度为15.2 μmol/L，显著低于lunasin的30.3 μmol/L，抗结直肠癌活性增强。本文建立了一种clunasin的绿色生物合成方法，为活性多肽的改造与重组表达提供有益探索。

关键词：大豆 lunasin 重组表达环化 Butelase 1 稳定性抗结直肠癌活性

大豆多肽lunasin对类风湿关节炎大鼠T细胞免疫指标的影响

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中国应用生理学杂志 2018年第1期34卷 13-15页

作者：向艳丽石思蓉覃晓莉赵方毓唐鲜娥陈显兵恩施州中心血站湖北民族学院医学院湖北民族学院生物资源保护湖北省重点实验室恩施445000

目的:探讨lunasin对实验性类风湿关节炎(RA)大鼠免疫功能的影响。方法:Wistar雄性大鼠50只,按体重随机分为(n=10):对照组、模型组和3个lunasin处理组(0.1,0.2,0.4 mg/kg灌胃)。利用弗氏完全佐剂(FCA)局部注入大鼠足跖皮内,建立RA模型,... 详细信息

目的:探讨lunasin对实验性类风湿关节炎(RA)大鼠免疫功能的影响。方法:Wistar雄性大鼠50只,按体重随机分为(n=10):对照组、模型组和3个lunasin处理组(0.1,0.2,0.4 mg/kg灌胃)。利用弗氏完全佐剂(FCA)局部注入大鼠足跖皮内,建立RA模型,治疗组lunasin灌胃每天1次,对照组和模型组灌胃等量生理盐水;于实验第21天,检测足跖厚度、滑膜液T淋巴细胞活化情况和滑液中白介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子β(TNF-β)和IL-4、IL-10的分泌情况。结果:lunasin可降低T淋巴细胞活化标志物CD69+和CD25+的表达,减少滑膜液中IL-12、TNF-β的分泌,增加IL-4、IL-10的分泌。结论:lunasin能够抑制类风湿关节炎滑膜液中T细胞的活化并能反转Th1/Th2型细胞因子的分泌,调节类风湿关节炎免疫微环境。

关键词：大鼠 lunasin 类风湿关节炎细胞免疫

原核表达lunasin的抗炎生物学活性鉴定及其对J774A.1细胞组织因子表达的影响

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中国动脉硬化杂志 2017年第11期25卷 1093-1098,1106页

作者：陈玉华付常振李明英李敬达迟彦大连大学生命科学与技术学院糖脂代谢重点实验室辽宁省大连市116622

目的检测原核表达lunasin(露那辛)的抗炎生物学活性,为lunasin今后在生物医药领域的开发奠定基础。方法利用基因工程技术将PCR扩增得到的lunasin DNA片段定向克隆至表达载体p ET28,酶切及测序鉴定后对其诱导表达,利用镍离子亲和层析法... 详细信息

目的检测原核表达lunasin(露那辛)的抗炎生物学活性,为lunasin今后在生物医药领域的开发奠定基础。方法利用基因工程技术将PCR扩增得到的lunasin DNA片段定向克隆至表达载体p ET28,酶切及测序鉴定后对其诱导表达,利用镍离子亲和层析法对其进行纯化;Griess法和ELISA法检测小鼠J774A.1细胞培养液中lunasin对一氧化氮和肿瘤坏死因子α、白细胞介素6等炎症因子含量的影响;Western blot检测lunasin对核因子κB(NF-κB)p65磷酸化以及组织因子(TF)表达的影响。结果成功构建了lunasin的原核表达载体,获得纯度达90%的lunasin多肽。lunasin能通过抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠J774A.1细胞NF-κB的活化而抑制一氧化氮合成以及下游基因肿瘤坏死因子α、白细胞介素6的表达。lunasin对LPS诱导的J774A.1细胞TF的表达也具有显著抑制作用。结论原核表达的lunasin表现出显著的抗炎生物学活性,明显抑制LPS诱导的J774A.1细胞TF表达,其机制可能是通过抑制NF-κB的活化而实现的。

关键词： lunasin 核因子κB 炎症因子组织因子脂多糖

大豆生物活性肽功能研究-lunasin原核表达纯化及活性鉴定

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大豆生物活性肽功能研究-Lunasin原核表达纯化及活性鉴定

作者：盖文丽华中科技大学

学位级别：硕士

大豆生物活性肽lunasin是1987年日本的一个研究小组从大豆中分离鉴定的一个天然多肽,全长43个氨基酸残基,分子量5kDa。分子内含有一个细胞粘附序列Arg-Gly-Asp (RGD),此序列可与细胞外基质相连;lunasin的C末端含有8个天门冬氨酸残基,此... 详细信息

大豆生物活性肽lunasin是1987年日本的一个研究小组从大豆中分离鉴定的一个天然多肽,全长43个氨基酸残基,分子量5kDa。分子内含有一个细胞粘附序列Arg-Gly-Asp (RGD),此序列可与细胞外基质相连;lunasin的C末端含有8个天门冬氨酸残基,此结构与多肽的抗有丝分裂效应相关,可以结合到去乙酰化的染色质区(如,着丝粒),导致有丝分裂中止而最终引起细胞死亡。研究发现,lunasin具有抑制结肠癌、乳腺癌和前列腺癌的功能。该多肽具有抗炎作用,可以通过抑制NF-κB通路来抑制炎症进程。由于lunasin具有特殊结构和功能,因此对lunasin的研究具有重要意义。 lunasin在天然原料中的含量很低,因此直接提取纯化程序复杂且成本高。所以本研究以lunasin的基因序列为依据,人工合成基因寡聚核苷酸序列,通过酶切、连接将lunasin基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,得到重组载体pET-32a(+) -lunasin-6His,然后将重组载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。通过对诱导表达条件的优化,发现工程菌在30℃,0.05mM IPTG诱导4h后可溶性表达。经过经Sephrose-镍亲和层析柱纯化,并由SDS-PAGE和Western Blot鉴定表达产物为6kDa的带六个组氨酸(6His)标签的融合蛋白。并利用巨噬细胞RAW264.7检验其生物活性。通过原核表达的方法表达纯化lunasin的优点是流程短、操作简单方便、成本较低、技术成熟稳定。本研究为lunasin的结构功能研究打下了基础,对今后利用基因工程的方法生产该蛋白并应用于临床具有一定的意义。

关键词： lunasin 原核表达载体构建亲和层析 Western Blot 生物活性分析

多肽lunasin的生物活性和药理作用研究进展

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中国药房 2015年第28期26卷 3993-3995页

作者：干飞薛承斌陈正望华中科技大学医院武汉430074 华中科技大学生命科学与技术学院武汉430074

目的:为多肽lunasin的研究与开发提供参考。方法:以"生物活性肽""药理作用""lunasin"为关键词,组合查询2009-2014年中国知网、Pub Med等数据库中的相关文献,并对文献从lunasin生物活性和药理作用两个方面分类整理后进行综述。结果与结论... 详细信息

目的:为多肽lunasin的研究与开发提供参考。方法:以"生物活性肽""药理作用""lunasin"为关键词,组合查询2009-2014年中国知网、Pub Med等数据库中的相关文献,并对文献从lunasin生物活性和药理作用两个方面分类整理后进行综述。结果与结论:共查询到相关文献46条,其中有效文献27条。lunasin主要具有抗炎和抗氧化的生物活性,且已被证实具有相应药理作用。此外,其还具有明显的抗癌作用,可考虑用作一种皮肤癌、前列腺癌、结肠癌和乳腺癌的抑制剂。lunasin来源于天然,具有毒副作用小、安全性高、不良反应小的特点,使其有可能成为一线抗癌药物。但目前对其部分氨基酸功能及三维结构仍不是很明确,是否还具有更多的生物活性和药理作用还有待进一步研究。

关键词： lunasin 生物活性肽药理作用

重组毕赤酵母产lunasin发酵工艺及lunasin生物活性研究

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重组毕赤酵母产Lunasin发酵工艺及Lunasin生物活性研究

作者：康国凯华中农业大学

学位级别：硕士

lunasin是一个最初从大豆中分离,含有43个氨基酸,分子量为5 kDa,具有抗氧化、抗炎症、抗癌症、降血脂功能的多肽。本文对一株毕赤酵母工程菌高产lunasin的发酵工艺和膜分离纯化条件,以及降血脂活性进行了研究。主要研究结果如下:(1)菌... 详细信息

lunasin是一个最初从大豆中分离,含有43个氨基酸,分子量为5 kDa,具有抗氧化、抗炎症、抗癌症、降血脂功能的多肽。本文对一株毕赤酵母工程菌高产lunasin的发酵工艺和膜分离纯化条件,以及降血脂活性进行了研究。主要研究结果如下:(1)菌株生长特性研究。以OD600为指标,确定了该毕赤酵母在YPG培养基中的生长曲线,确定其一级种子液和二级种子液培养最适时间分别为28 h和20 h。以蛋白表达量为指标确定山梨醇添加量为40 g/L,甘露醇添加量为20g/L。(2)高密度发酵工艺优化。比较了溶氧反馈补料和指数-恒速补料两种补料方式,溶氧反馈补料lunasin最高表达量为0.889 g/L,指数-恒速补料最高表达量为1.805 g/L;诱导温度为24℃条件下表达量最高,为2.57 g/L;比较了诱导期单一碳源与双碳源(甲醇-山梨醇,甲醇-甘露醇)补料策略,发现甲醇-甘露醇混合补料更有利于提高lunasin的表达,最高表达量达到3.02 g/L;甲醇-复合氮源混合补料最高表达量达到3.26 g/L,是最初lunasin表达量的3.67倍。(3)膜分离工艺优化。研究了Vivaflow200超滤膜包的两级膜过滤来提纯lunasin并提高回收率的条件。结果表明一级膜过滤最优条件为进料压力0.2MPa,pH 8.5,发酵液温度40℃,添加0.6倍原体积超纯水稀释,回收率达到0.9412;二级膜过滤最优条件为进料压力0.25 MPa,pH 5.5,发酵液温度30℃,稀释倍数为625倍,回收率为0.7895。两级超滤分离后综合回收率为0.7396。(4)lunasin降血脂活性研究。通过高脂饲料饲喂SD大鼠构建高血脂模型,探讨lunasin对大鼠实验性高血脂症的降血脂作用。实验结果显示lunasin能有效降低高血脂症大鼠血清中的谷丙转氨酶(ALT),总胆固醇(TC),低密度脂蛋白(LDL),差异均达到显著水平(plunasin能够降低血清中谷丙转氨酶(ALT)胆固醇(TC)以及低密度脂蛋白(LDL)的含量。

关键词：毕赤酵母 lunasin 高密度发酵膜分离工艺优化降血脂