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LncRNA SOX2ot靶向SIRT1/自噬通路增强胆管癌细胞5-FU耐药

南方医科大学学报 2024年第1期44卷 187-193页

作者：辛辰王笑影李响陈宇王雪宁佳曦杨适王忠琼西南医科大学附属医院消化内科四川泸州646000 西南医科大学附属医院麻醉科四川泸州646000

目的探讨lncrnasox2ot靶向SIRT1/自噬通路调节胆管癌细胞5-FU耐药的机制。方法将未用5-FU处理HCCC-9810细胞和不同浓度(50、100、150、200μg/mL)5-FU处理的HCCC-9810细胞分为对照组和模型组,qRT-PCR检测LncRNA SOX2ot、SIRT1 mRNA表达水平,Western blot检测SIRT1、Beclin1、LC3和p62蛋白表达。pcDNA3.1-SOX2ot和pcDNA3.1-NC转染HCCC-9810/5-FU耐药细胞,CCK-8检测细胞耐药性,划痕实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR检测lncrnasox2ot、SIRT1 mRNA表达水平,Western blot检测SIRT1、Beclin1、LC3和p62表达。在以上基础上做了Rescue实验,将OV-SOX2ot(2μg/孔)和si-NC(75pmol/孔)、OV-SOX2ot(2μg/孔)和si-SIRT1(75pmol/孔)分别共转染HCCC-9810/5-FU耐药细胞,分组为OV-SOX2ot+si-NC组和OV-SOX2ot+si-SIRT1组,以证明lncrnasox2ot通过SIRT1影响自噬,并由此影响胆管癌细胞对5-FU的耐药性。RNAPulldown验证SOX2ot与SIRT1的靶向结合关系。结果不同浓度的5-FU均能抑制HCCC-9810细胞增殖(P2(P2ot mRNA水平(P2ot组细胞迁移能力、SIRT1、Beclin1(P2(Plncrnasox2otmRNA(Plncrnasox2ot过表达的HCCC-9810细胞对5-FU的耐药性显著降低。与OV-SOX2ot+si-NC组相比,OV-SOX2ot+si-SIRT1组SIRT1(P2和Beclin1(P2ot能够直接与SIRT1结合。结论LncRNA SOX2ot通过上调SIRT1表达促进自噬来增强胆管癌HCCC-9810细胞5-FU耐药性。

关键词： lncrnasox2ot SIRT1 自噬胆管癌细胞 5-FU耐药

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长链非编码RNA SOX2ot在食管鳞癌中的表达及与放疗敏感性相关性的研究

长链非编码RNA SOX2OT在食管鳞癌中的表达及与放疗敏感性相关性的...

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作者：陈莲莲蚌埠医学院

学位级别：硕士

目的:探究长链非编码RNASOX2ot在食管鳞癌(ESCC)组织及癌旁正常组织表达差异及其和食管鳞癌患者临床病理特征的关系,检测SOX2ot在ESCC患者的外周血表达差异和其与放射敏感性的关系,利用细胞实验研究SOX2ot在食管鳞癌中的生物学作用。方... 详细信息

目的:探究长链非编码RNASOX2ot在食管鳞癌(ESCC)组织及癌旁正常组织表达差异及其和食管鳞癌患者临床病理特征的关系,检测SOX2ot在ESCC患者的外周血表达差异和其与放射敏感性的关系,利用细胞实验研究SOX2ot在食管鳞癌中的生物学作用。方法:收集病理诊断为食管鳞癌,行根治性手术治疗患者的癌组织及对应的癌旁正常组织,利用q RT-PCR检测组织表达差异,并分析与ESCC患者临床病理特征的关系。收集未接受任何治疗,行根治性放疗的ESCC患者放疗前及放疗后一个月的外周血,及正常人外周血,采用q RT-PCR检测外周血中SOX2ot的表达差异,通过对比食管癌患者放疗前后食管钡餐造影及CT的检查结果,按实体瘤疗效评价标准分为:完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、疾病稳定(SD)、疾病进展(PD),然后将患者分为两组,放疗敏感组(包括CR、PR患者),放疗抵抗组(包括SD和PD患者),分析SOX2ot的表达与其近期疗效的相关性。最后,采用CCK-8、细胞划痕、克隆形成实验研究SOX2ot的表达对食管鳞癌的增殖、迁移及放疗敏感性的影响。结果:1、相较癌旁正常组织,SOX2ot在ESCC组织中明显高表达,其表达水平与肿瘤T分期相关(P0.05)。2、食管鳞癌患者外周血SOX2ot的表达高于健康人(P2ot表达水平,放疗敏感组较放疗前下降(P0.05),比较放疗前放疗敏感组及放疗抵抗组外周血SOX2ot的表达,结果显示放疗抵抗组较高,差异有统计学意义(P2ot可降低ESCC细胞的克隆形成率,并且放疗后细胞增殖能力更低;细胞划痕实验说明下调SOX2ot可抑制细胞的迁移和修复能力;进行克隆形成实验也发现,下调SOX2ot表达水平细胞克隆率下降,给予不同射线处理,两组细胞的细胞活力均下降,且si-SOX2ot组下降更显著(P2ot在ESCC中高表达,表达水平与肿瘤T分期相关。2、ESCC患者外周血SOX2ot较健康人群高表达,且表达水平与患者的近期放疗效果相关。3、下调SOX2ot的表达水平可抑制ESCC细胞增殖、迁移和修复,增加ESCC细胞的放疗敏感性。

关键词： lncrnasox2ot 食管鳞癌增殖迁移放疗敏感性

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