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lncrna-gas5/miRNA21 ceRNA调控网络在高氧性急性肺损伤发病过程中的作用研究

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中国免疫学杂志 2022年第18期38卷 2200-2204页

作者：石磊付豹何英廖贞亮陈涛陈淼(指导) 遵义医科大学附属医院重症医学科遵义563000

目的:探究lncrna-gas5/miRNA21 ceRNA调控网络在高氧性急性肺损伤(HALI)发病过程中的作用。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、lncrna组和lncrna联合miRNA组,空白组不做任何处理,lncrna组静脉注射lncrnagas5过表达慢病毒载体,lncrna联... 详细信息

目的:探究lncrna-gas5/miRNA21 ceRNA调控网络在高氧性急性肺损伤(HALI)发病过程中的作用。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、lncrna组和lncrna联合miRNA组,空白组不做任何处理,lncrna组静脉注射lncrnagas5过表达慢病毒载体,lncrna联合miRNA组静脉注射lncrna-gas5和miR-21过表达慢病毒载体,模型组静脉注射等体积慢病毒空载体;模型组和各干预组大鼠均吸入高浓度氧气建立大鼠HALI模型。高氧处理48 h后检测大鼠动脉血氧合指数(OI)、呼吸指数(RI),ELISA检测血浆细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平,观测肺组织病理损伤,计算左肺上叶湿/干重比(W/D),AnnexinⅤ-PI凋亡染色试剂盒检测肺泡上皮细胞凋亡,RT-PCR、Western blot检测肺组织lncrna-gas5、miR-21、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达及NF-κB激活情况。结果:模型组大鼠肺组织lncrna-gas5水平显著高于空白组,而miR-21水平显著低于空白组(Plncrna组大鼠OI显著降低,RI、肺W/D、病理评分、肺组织凋亡细胞数、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达、IκBα磷酸化水平及细胞核内NF-κB p65水平显著升高(Plncrna组相比,lncrna联合miRNA组大鼠OI显著升高,RI、肺W/D、病理评分、肺泡上皮凋亡细胞数、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达、IκBα磷酸化及细胞核内NF-κB p65水平显著降低(Plncrna-gas5/miRNA21轴参与HALI发病过程,lncrna-gas5通过负调节miR-21表达间接激活NF-κB通路,促发HALI。

关键词： lncrna-gas5 miR-21 高氧性急性肺损伤 NF-κB

lncrna-gas5抑制miR-21介导的非完全匹配靶mRNA降解

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生物化学与生物物理进展 2017年第7期44卷 580-590页

作者：郑伟董洁李少华丁红梅李慧黄皑雪夏伟白琛俊郭晓华李达耿介李洁邵宁生军事医学科学院基础医学研究所北京100850

lncrna-gas5作为miR-21的"分子海绵",通过"吸收"miR-21从而调控miR-21对靶基因的抑制.此外,miR-21直接调控非完全匹配靶基因PTEN和TPM1的表达.我们首先在HEK293T和HeLa细胞中确认,miR-21通过碱基互补配对调控非完全匹配靶基因PTEN和TPM... 详细信息

lncrna-gas5作为miR-21的"分子海绵",通过"吸收"miR-21从而调控miR-21对靶基因的抑制.此外,miR-21直接调控非完全匹配靶基因PTEN和TPM1的表达.我们首先在HEK293T和HeLa细胞中确认,miR-21通过碱基互补配对调控非完全匹配靶基因PTEN和TPM1的蛋白表达,但不影响PTEN和TPM1mRNA的水平.此外,过表达miR-21后,qRT-PCR检测PTEN和TPM1mRNA的半衰期,发现它们的半衰期显著缩短,miR-21加速PTEN和TPM1mRNA的降解.通过转染lncrna-gas5的过表达质粒,发现lncrna-gas5竞争性地与miR-21结合能够延长PTEN和TPM1mRNA的半衰期,而miR-21与lncrna-gas5碱基互补配对结合后,又对lncrna-gas5存在调节作用,减弱lncrna-gas5的稳定性并加速lncrna-gas5的降解.lncrna-gas5作为miR-21的"分子海绵"能够抑制miR-21对非完全匹配靶mRNAPTEN和TPM1的降解,同时,miR-21与lncrna-gas5结合后又存在对lncrna-gas5的反馈调节,这些相互作用机制的发现有助于了解lncrna、miRNA、mRNA之间这个复杂又精细的调控环路.

关键词： lncrna-gas5 miR-21 PTEN TPM1 RNA稳定性

lncrna-gas5对鲍曼不动杆菌降解HeLa细胞中SNAP29的调控作用

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微生物与感染 2022年第4期17卷 220-226页

作者：丁文一安志远复旦大学附属华山医院宝山院区感染科上海市传染病与生物安全应急响应重点实验室上海市重大传染病和生物安全研究院上海201907 复旦大学附属华山医院宝山院区上海201907

本文旨在构建lncrna-gas5(长链非编码RNA-生长抑制特异性转录本5,long non-coding RNAgrowth arrest-specific transcript 5)的真核过表达载体及敲减载体,研究鲍曼不动杆菌对突触体相关蛋白29(synaptosomal-associated protein 29,SNAP29)表达的影响及lncrna-gas5在其中发挥的调控作用。采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增lncrna-gas5基因,将其克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体中,形成pcDNA3.1-gas5真核表达载体;通过RNA干扰技术,设计敲减gas5的寡核苷酸序列,将其构建至pRNAT-U6.1/Neo载体中,形成pRNAT-U6.1-gas5敲减载体;采用实时荧光定量PCR法检测gas5的表达,以确定是否成功过表达和敲减;采用蛋白免疫印迹法检测过表达或敲减gas5后HeLa细胞中SNAP29表达的变化,并检测鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞后不同时间点SNAP29的表达,以及敲减或过表达gas5后再感染鲍曼不动杆菌的HeLa细胞中SNAP29的表达。结果显示:pcDNA3.1-gas5和pRNAT-U6.1-gas5构建成功;pcDNA3.1-gas5可使lncrna-gas5在HeLa细胞中大量表达,而pRNAT-U6.1-gas5可使HeLa细胞中gas5表达明显减少;过表达lncrna-gas5可使HeLa细胞中SNAP29表达减少,而敲减lncrna-gas5可使SNAP29表达增加;随着鲍曼不动杆菌感染时间延长,HeLa细胞中SNAP29的表达减少,敲减lncrna-gas5可使SNAP29表达回复,而过表达lncrna-gas5可增强SNAP29的降解。结果提示,本研究成功构建了lncrna-gas5的过表达和敲减载体,并发现其对SNAP29表达具有负向调控作用,表明鲍曼不动杆菌对SNAP29的降解依赖lncrna-gas5,为进一步探讨鲍曼不动杆菌引起细胞自噬降解障碍的深层机制奠定了理论基础。

关键词：鲍曼不动杆菌 lncrna-gas5 SNAP29 HeLa细胞

血清lncrna-gas5及miR-451在重症肺炎患儿中的表达水平及临床意义

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检验医学与临床 2023年第6期20卷 725-728页

作者：李娜王维娟曾静霞西北妇女儿童医院儿科急诊与PICU 陕西西安710061 南京医科大学附属儿童医院重症医学科江苏南京210008

目的探讨lncrna-gas5及miR-451在重症肺炎患儿血清中的表达及临床意义。方法选取2017年1月至2020年1月西北妇女儿童医院收治的89例重症肺炎患儿为研究组,另选取同期健康体检儿童92例作为对照组。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测血清... 详细信息

目的探讨lncrna-gas5及miR-451在重症肺炎患儿血清中的表达及临床意义。方法选取2017年1月至2020年1月西北妇女儿童医院收治的89例重症肺炎患儿为研究组,另选取同期健康体检儿童92例作为对照组。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测血清lncrna-gas5和miR-451水平;通过免疫比浊法检测血清载脂蛋白E(ApoE)及C-反应蛋白(CRP)水平;通过化学发光法检测血清降钙素原(PCT)水平;通过Pearson相关分析lncrna-gas5、miR-451表达与ApoE、CRP、PCT水平的相关性;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析lncrna-gas5及miR-451对重症肺炎的诊断价值。结果与对照组相比,研究组血清lncrna-gas5水平明显降低,miR-451、ApoE、CRP、PCT水平明显升高,差异均有统计学意义(P5);重症肺炎患儿血清中lncrna-gas5表达与ApoE、CRP、PCT水平呈负相关(r=-0.493、-0.526、-0.477,P5),miR-451表达与ApoE、CRP、PCT水平呈正相关(r=0.547、0.446、0.454,P5);lncrna-gas5与miR-451联合检测诊断重症肺炎的曲线下面积(AUC)高于二者单项检测。结论 lncrna-gas5及miR-451可作为早期诊断重症肺炎的分子标志物。

关键词： lncrna-gas5 miR-451 重症肺炎

原发免疫性血小板减少症患儿外周血lncrna-gas5和lncrna-PVT1表达及意义

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中华实用诊断与治疗杂志 2023年第6期37卷 614-618页

作者：童琳琳方芳许彬马慧平邯郸市中心医院儿科河北邯郸056001 邯郸市传染病医院CT/MRI室河北邯郸056005

目的分析原发免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)患儿外周血lncrna-gas5、lncrna-PVT1表达情况及其与辅助T(helper T,Th)17、调节性T(regulatory T,Treg)细胞和出血评分、疗效的关系,探讨其对ITP的诊断价值和一线治疗无效的预测价值。方法首次诊断为ITP患儿55例为ITP组,体检健康儿童45例为对照组,采用实时荧光定量PCR法检测2组外周血lncrna-gas5、lncrna-PVT1相对表达量,应用流式细胞仪检测2组外周血Th17、Treg细胞百分比;采用Pearson相关法分析ITP患儿外周血lncrna-gas5、lncrna-PVT1相对表达量与Th17、Treg细胞百分比的相关性;评价ITP患儿出血评分及一线治疗反应,比较不同出血评分、一线治疗不同反应的ITP患儿外周血lncrna-gas5、lncrna-PVT1相对表达量;绘制ROC曲线,评估外周血lncrna-gas5、lncrna-PVT1相对表达量诊断ITP及预测ITP一线治疗无效的效能。结果 ITP组外周血lncrna-gas5(0.68±0.18)、lncrna-PVT1(0.71±0.18)相对表达量及Treg细胞百分比[(4.41±0.73)%]均低于对照组[1.00±0.25、1.00±0.32、(5.62±0.84)%](P5),Th17细胞百分比[(2.25±0.51)%]高于对照组[(1.61±0.36)%](t=7.093,Plncrna-gas5、lncrna-PVT1相对表达量与Th17细胞百分比均呈负相关(r=-0.421,P=0.003;r=-0.294,P=0.017),与Treg细胞百分比均呈正相关(r=0.384,P=0.012;r=0.371,P=0.014)。出血评分1、2、3分的ITP患儿外周血lncrna-gas5(0.79±0.17、0.66±0.22、0.48±0.19)、lncrna-PVT1(0.82±0.24、0.70±0.23、0.49±0.17)相对表达量均依次降低(P5),一线治疗后完全反应、反应、无效的ITP患儿外周血lncrna-gas5(0.77±0.19、0.62±0.13、0.47±0.09)、lncrna-PVT1(0.81±0.12、0.63±0.19、0.54±0.17)相对表达量均依次降低(P5)。外周血lncrna-gas5、lncrna-PVT1相对表达量以0.761、0.851为最佳截断值,单独及联合诊断ITP的AUC分别为0.849(95%CI:0.775~0.922,P5%CI:0.682~0.888,P5%CI:0.888~0.978,P5.45%。外周血lncrna-gas5、lncrna-PVT1相对表达量以0.546、0.659为最佳截断值,单独及联合预测ITP一线治疗无效的AUC分别为0.886(95%CI:0.784~0.987,P=0.001)、0.806(95%CI:0.650~0.962,P=0.006)、0.910(95%CI:0.828~0.991,P50%、87.50%、87.50%,特异度分别为80.85%、76.60%、85.10%。结论ITP患儿外周血lncrna-gas5、lncrna-PVT1表达降低,出血评分越高、一线治疗反应越差其表达越低;二者通过调控Th17/Treg平衡参与ITP发生、发展,二者联合对ITP的诊断价值及一线治疗无效的预测价值均较高。

关键词：原发免疫性血小板减少症 lncrna-gas5 lncrna-PVT1 辅助性T17细胞调节性T细胞

非小细胞肺癌患者血清lncrna⁃gas5、lncrna⁃UFC1表达及临床意义

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辽宁医学杂志 2023年第5期37卷 9-12页

作者：常娅洁齐容容许昌中医院河南许昌461000

目的分析非小细胞肺癌患者血清lncrna⁃gas5、lncrna⁃UFC1表达及临床意义。方法随机选择医院2019年1月⁃2020年1月诊治的非小细胞肺癌患者66例,将其纳入观察组。另在同期选择良性肺病患者66例,将其纳入对照组。检测血清lncrna⁃gas5、LncRN... 详细信息

目的分析非小细胞肺癌患者血清lncrna⁃gas5、lncrna⁃UFC1表达及临床意义。方法随机选择医院2019年1月⁃2020年1月诊治的非小细胞肺癌患者66例,将其纳入观察组。另在同期选择良性肺病患者66例,将其纳入对照组。检测血清lncrna⁃gas5、lncrna⁃UFC1表达,问卷调查非小细胞肺癌患者病理特征。比较两组患者lncrna⁃gas5、lncrna⁃UFC1水平,分析lncrna⁃gas5、lncrna⁃UFC1表达与病理特征的关系,探讨联合检查的临床意义。结果观察组患者lncrna⁃gas5(0.45±0.05)、lncrna⁃UFC1(0.74±0.06)水平分别高于于对照组、健康组(P5),且对照组lncrna⁃gas5、lncrna⁃UFC1水水平与健康组比较差异无统计学意义(P>0.05)。除性别与血清lncrna⁃gas5、lncrna⁃UFC1表达无关系(P>0.05)外,年龄、吸烟史、病理分级、临床分期、肺癌类型、淋巴结转移与lncrna⁃gas5、lncrna⁃UFC1表达关系密切(P5)。联合lncrna⁃gas5、Ln⁃cRNA⁃UFC1诊断非小细胞肺癌中敏感度90.8%、特异度92.1%、AUC=0.925、95%CI(0.877~0.974),诊断效能最大。结论非小细胞肺癌患者血清lncrna⁃gas5、lncrna⁃UFC1表达水平较良性肺疾病患者高,联合检测Ln⁃cRNA⁃gas5、lncrna⁃UFC1表达水平有利于提升诊断价值,推荐使用。

关键词：非小细胞肺癌表达 lncrna-gas5 lncrna-UFC1 诊断意义

lncrna-gas5调节Notch通路对肺癌A549细胞血管生成拟态的影响

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临床与实验病理学杂志 2019年第12期35卷 1412-1417页

作者：汤建华樊頔牛玉春马峰张志华河北北方学院附属第一医院药学部张家口075000 河南省许昌市建安区五女店镇中心卫生院许昌461000 河北北方学院附属第一医院肿瘤内科张家口075000 河北北方学院附属第一医院呼吸内科张家口075000

目的探讨lncrna-生长停滞特异性转录本5(growth arrest specific transcript 5,gas5)通过调节Notch通路对肺癌A549细胞血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的影响。方法培养人肺癌细胞A549和人正常肺细胞MRC-5,采用qRT-PCR技术检测细胞中lncrna-gas5的表达水平,向肺癌细胞A549转染gas5过表达质粒(p-EGFP-C1-gas5组)和空载体质粒p-EGFP-C1(阴性对照组),空白对照组未处理,荧光显微镜观察转染效率,收集转染后对数期细胞进行三维体外培养法,观察VM,Western blot法检测HIF-1α、VEGF、VE-cadherin、MMP-2、MMP-9及Notch通路蛋白Notch1、DLL4的表达水平。结果qRT-PCR结果显示,与正常细胞MRC-5比较,肺癌细胞A549 lncrna-gas5 mRNA水平显著降低(P5);荧光显微镜下观察质粒转染24 h后细胞转染效率达80%;细胞转染后,与空白对照组比较,p-EGFP-C1-gas5组lncrna-gas5表达水平显著升高(P5),阴性对照组与空白对照组差异无显著性。肺癌A549细胞接种后10 h细胞贴附在Matrigel基质胶上彼此连接成空腔样、环状结构,形成拟态血管,转染过表达质粒的A549细胞组管腔形成数明显多于阴性对照组和空白对照组(P5),阴性对照组与空白对照组差异无显著性;Western blot检测显示,p-EGFP-C1-gas5组VEGF、VE-cadherin、HIF-1α、MMP-2、MMP-9表达水平与阴性对照组和空白对照组相比,均显著降低(P5),阴性对照组和空白对照组各蛋白表达量无显著变化;p-EGFP-C1-gas5组血管生成相关蛋白Notch1、DLL4表达水平与阴性对照组和空白对照组相比,均显著降低(P5),阴性对照组和空白对照组各蛋白表达量无显著变化。结论lncrna-gas5过表达抑制VM的形成和血管生成相关蛋白的表达,其可能通过抑制Notch通路的激活,抑制VM的形成。

关键词：肺肿瘤 A549细胞血管生成拟态 Notch通路 lncrna-gas5

lncrna-gas5基因多态性与系统性红斑狼疮的相关性及分子免疫机制研究

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LncRNA-GAS5基因多态性与系统性红斑狼疮的相关性及分子免疫机制...

作者：刘纯宏右江民族医学院

学位级别：硕士

目的:（1）探讨lncrna-gas5基因rs145204276 I＞D、rs2235095 G＞A、rs1951625G＞A、rs2067079 C＞T和rs6790 G＞A 5个SNPs位点与系统性红斑狼疮的遗传易感性的关系。（2）检测SLE组和健康对照组外周血单个核细胞中lncrna-gas5基因的表... 详细信息

目的:（1）探讨lncrna-gas5基因rs145204276 I＞D、rs2235095 G＞A、rs1951625G＞A、rs2067079 C＞T和rs6790 G＞A 5个SNPs位点与系统性红斑狼疮的遗传易感性的关系。（2）检测SLE组和健康对照组外周血单个核细胞中lncrna-gas5基因的表达水平,并分析其多态性与lncrna-gas5基因表达水平的关系。（3）探讨THP-1细胞中lncrna-gas5/miR-221-3p/PTPN3之间的靶向调控关系。方法:（1）选取302例系统性红斑狼疮患者（SLE组）和396例健康对照者（对照组）作为研究对象,采用SNPscan技术和DNA测序技术对lncrna-gas5基因rs145204276 I＞D、rs2235095 G＞A、rs1951625 G＞A、rs2067079 C＞T和rs6790 G＞A五个SNPs位点进行基因分型检测。（2）统计分析rs145204276 I＞D多态性与SLE患者临床特征之间的关系。（3）采用在线软件SHEsis分析两组间连锁不平衡及单倍型分布情况。（4）采用qRT-PCR检测SLE组和健康对照组（各45例）外周血单个核细胞中的lncrnagas5表达水平,分析lncrna-gas5 rs145204276不同基因型在SLE组中的表达水平,探讨基因突变表达调控的功能。（5）分别构建lncrna-gas5和PTPN3基因的野生型/突变型重组质粒,转染239T细胞,采用双荧光素酶报告验证lncrna-gas5与miR-221-3p,miR-221-3p与PTPN3的靶向调控关系。（6）分别构建过表达和敲低lncrnagas5慢病毒质粒,转染THP-1细胞,细胞培养并收集后,采用qRT-PCR检测lncrnagas5、miR-221-3p和PTPN3基因的表达水平,Western blot技术检测PTPN3的蛋白水平。（7）分别构建敲低lncrna-gas5慢病毒质粒,过表达PTPN3慢病毒质粒以及miR-221-3p inhibitor,转染THP-1细胞,细胞培养并收集后,采用qRT-PCR检测miR-221-3p和PTPN3基因的表达水平,Western blot技术检测PTPN3蛋白水平。结果:（1）lncrna-gas5基因rs145204276 I＞D、rs2235095 G＞A、rs1951625 G＞A、rs2067079 C＞T和rs6790 G＞A五个SNPs位点在SLE患者和健康对照者中均存在多态性。其中rs145204276 I＞D位点多态性在SLE组和健康对照组之间比较,差异具有统计学意义,与I/I基因型相比较,I/D和D/D基因型以及显性模型I/D+D/D均具有降低SLE的发病风险（I/D vs.I/I:OR=0.627,95%CI,0.46-0.87,P=0.004;D/D vs.I/I:OR=0.541,95%CI,0.30-0.98,P=0.041;I/D+D/D vs.II:OR=0.611,95%CI,0.45-0.83,P=0.002）;与I等位基因相比较,D等位基因显著降低SLE的发病风险（D vs.I:OR=0.674,95%CI,0.53-0.86,P=0.002）。然而,rs2235095 G＞A、rs1951625 G＞A、rs2067079 C＞T和rs6790G＞A位点多态性在SLE组和健康对照组之间比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）rs145204276 I＞D位点I/D+D/D基因型和D等位基因分布频率与狼疮性肾炎相关（I/D+D/D vs.II:OR=0.57,95%CI,0.36-0.92,P=0.020;D vs.I:OR=0.63,95%CI,0.43-0.93,P=0.019）。（3）单倍型分析结果显示,A-A-C-G-D单倍型在SLE组和健康对照组间的分布差异存在统计学意义（OR=0.67,95%CI,0.49-0.91,P=0.010）。（4）SLE患者外周血单个核细胞中lncrna-gas5基因表达水平显著低于健康对照者,差异具有统计学意义（P＜0.001）,进一步分析发现,SLE组中携带D等位基因的患者lncrna-gas5基因表达水平显著高于携带I等位基因的患者。（5）双荧光素酶报告试验结果显示,lncrna-gas5（WT）+miRNA-221-3p mimics组荧光素酶活性显著低于lncrnagas5（WT）+miRNA-221-3p-NC组,差异具有统计学意义（P＜0.001）,而lncrnagas5（MT）+miRNA-221-3p mimics组与lncrna-gas5（MT）+miRNA-221-3p-NC组的荧光素酶活性相比较,差异无统计学意义（P=0.201）;PTPN3（WT）+miRNA-221-3p mimics组荧光

关键词： lncrna-gas5 miR-221-3p PTPN3 基因系统性红斑狼疮基因多态性

lncrna-gas5在高血压血管重构过程中的调控作用研究

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LncRNA-GAS5在高血压血管重构过程中的调控作用研究

作者：王杨宁致南京医科大学

学位级别：硕士

目的:本课题旨探究Long Noncoding RNA-gas5在高血压血管重构过程中的调控作用及作用机制。方法:1、通过原位杂交观察技术gas5在WKY大鼠主动脉的表达情况;通过原位杂交技术观察人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,... 详细信息

目的:本课题旨探究Long Noncoding RNA-gas5在高血压血管重构过程中的调控作用及作用机制。方法:1、通过原位杂交观察技术gas5在WKY大鼠主动脉的表达情况;通过原位杂交技术观察人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)以及血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)中的 gas5表达情况;通过PCR检测HUVEC和VSMC中以及自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)和 WKY 大鼠视网膜、颈动脉、肾动脉、尾动脉、胸主动脉以及血浆中的gas5表达情况;通过qRT-PCR比较50位高血压患者以及30位正常人的血浆中的gas5表达情况。2、动物实验分为四组:正常WKY大鼠、SHR大鼠、下调Scr的SHR大鼠、下调gas5的SHR大鼠,采用视网膜平铺片观察视网膜新生血管情况;Evans Blue方法观察视网膜渗漏情况;采用小鼠碱烧伤模型,通过显微裂隙灯观察各组眼球新生血管情况。使用Coda 6血压系统非侵入性测量收缩压、舒张压和平均动脉血压。通过HE染色观察各组尾动脉、肾动脉、颈动脉以及胸主动脉的血管形态。3、利用H2O2(50μmol/L)构建HUVEC、VSMC细胞氧化损伤模型。实验分四组:对照组、H2O2刺激组、下调Scr的H2O2刺激组、下调gas5的H2O2刺激组。采用MTT检测各组细胞的活力;Hoechst染色和PI/Calcein-AM染色检测各组细胞凋亡和死亡情况;成管实验和迁移实验分别检测各组内皮细胞的成管能力和迁移能力;Ki67染色检测各组细胞的增殖能力。采用免疫荧光标记增殖细胞核抗原PCNA检测各组大鼠颈动脉中EC和VSMC细胞的增殖情况。4、通过gas5过表达的HUVEC培养基(EC-CM)孵育VSMC,观察其活性;通过gas5过表达的VSMC培养基(VSMC-CM)孵育HUVEC,观察其活性。并将培养基暴露于脱氧核糖核酸酶,核糖核酸酶或蛋白酶K中,观察其变化。5、采用qRT-PCR法来检测在gas5下调后HUVEC及VSMC中的c-Myc,细胞周期蛋白D1(cyclinD1)和过氧化物酶体增殖剂激活受体δ(PPARδ)的转录情况,探究gas5是否通过β-catenin信号通路调控EC及VSMC的功能。结果:1、gas5在WKY大鼠血管的EC及VSMC中均有表达。与WKY大鼠相比,SHR的gas5表达明显下调。与正常人相比,高血压患者血浆中gas5的表达下调。2、gas5进一步增加了 SHR视网膜中新生血管的数量,加剧了毛细血管变性和毛细血管渗漏;下调gas5进一步加重碱烧伤诱导的血管新生。下调gas5进一步升高了 SHR的收缩压、舒张压及平均动脉压。3、HUVEC和VSMC细胞给予H202刺激后,细胞活力和增殖能力均下降,细胞死亡和凋亡数量增加;下调两种细胞的gas5并给予H202刺激后,细胞活力和增殖能力增强,细胞死亡和凋亡数量减少。下调gas5后促进大鼠颈动脉血管EC及VSMC的增殖。4、EC-CM降低VSMC活性,VSMC-CM降低HUVEC活性,糖核酸酶A或蛋白酶K可部分消除该作用。5、下调 gas5 后 HUVEC 及 VSMC 中 c-Myc,cyclin D1 和 PPARδ 的表达增多。结论:Lnc-gas5通过β-catenin信号通路调节EC和VSMC功能从而参与调控高血压的血管重构,gas5有可能成为治疗高血压的新靶点。

关键词： lncrna-gas5 高血压血管重构内皮细胞平滑肌细胞 β-catenin