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lncrna-atb promotes autophagy by activating Yes-associated protein and inducing autophagy-related protein 5 expression in hepatocellular carcinoma

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World Journal of Gastroenterology 2019年第35期25卷 5310-5322页

作者： Chuan-Zhuo Wang Guang-Xin Yan De-Shuo Dong He Xin Zhao-Yu Liu Department of Radiology Shengjing Hospital of China Medical University

BACKGROUND Long non-coding RNAs (lncrnas) play important roles in many diseases, including hepatocellular carcinoma (HCC). Autophagy is a metabolic pathway that facilitates cancer cell survival in response to stress. The relationship between autophagy and the lncrna-activated by transforming growth factor beta (lncrna-atb) in HCC remains unknown. AIM To explore the influence of lncrna-atb in regulating autophagy in HCC cells and the underlying mechanism. METHODS In the present study, we evaluated lncrna-atb expression in tumor and adjacent non-tumor tissues from 72 HCC cases by real-time PCR. We evaluated the role of lncrna-atb in the proliferation and clonogenicity of HCC cells in vitro. The effect of lncrna-atb on autophagy was determined using a LC3-GFP reporter and transmission electron microscopy. Furthermore, the mechanism by which lncrna-atb regulates autophagy was explored by immunofluorescence staining, RNA immunoprecipitation (RIP), and Western blot. RESULTS The expression of lncrna-atb was higher in HCC tissues than in normal liver tissues, and lncrna-atb expression was positively correlated with tumor size, TNM stage, and poorer survival of patients with HCC. Moreover, ectopic overexpression of lncrna-atb promoted cell proliferation and clonogenicnity of HCC cells in vitro. lncrna-atb promoted autophagy by activating Yesassociated protein (YAP). Moreover, lncrna-atb interacted with autophagy-related protein 5 (ATG5) mRNA and increased ATG5 expression. CONCLUSION lncrna-atb regulates autophagy by activating YAP and increasing ATG5 expression. Our data demonstrate a novel function for lncrna-atb in autophagy and suggest that lncrna-atb plays an important role in HCC.

关键词： lncrna-atb Autophagy Yes-associated protein Autophagy-related protein 5 Hepatocellular carcinoma

消痰散结方通过调控lncrna-atb抑制胃癌细胞增殖和转移

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消痰散结方通过调控LncRNA-ATB抑制胃癌细胞增殖和转移

作者：曹丽萍浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:胃癌(gastric cancer,GC)是人类最常见的恶性肿瘤之一,其发病率与死亡率分别位居全球的常见恶性肿瘤的第五位和第四位,严重威胁人类健康。由TGF-β激活的长非编码 RNA(Transforming Growth Factor β Long Non-Coding RNA,lncrna-A... 详细信息

目的:胃癌(gastric cancer,GC)是人类最常见的恶性肿瘤之一,其发病率与死亡率分别位居全球的常见恶性肿瘤的第五位和第四位,严重威胁人类健康。由TGF-β激活的长非编码 RNA(Transforming Growth Factor β Long Non-Coding RNA,lncrna-atb)与胃癌的发生发展密切相关。消痰散结方是中医经验方(中国国家专利号2006100290635),临床使用能明显改善晚期胃癌患者的生存质量,但其机制尚未完全清楚。本研究目的在于了解消痰散结方是否能调节lncrna-atb的表达以抑制胃癌的细胞增殖和转移,为中西医结合治疗胃癌提供理论基础和实验依据。方法:1.lncrna-atb高表达细胞模型筛选1.1实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测lncrna-atb和上皮间质转化(EMT)相关基因和蛋白在5种人类胃癌细胞系(MKN-45、SNU-1、HGC-27、AGS和MGC-803)中的表达水平。筛选可用于体外研究消痰散结方干预的lncrna-atb高表达细胞模型。1.2 CCK8检测不同浓度消痰散结方对5种胃癌细胞生存率的影响,并计算半抑制浓度(IC50)筛选消痰散结方高敏感的细胞类型。2.消痰散结方对lncrna-atb高表达胃癌细胞HGC-27增殖凋亡的影响2.1 CCK8检测HGC-27细胞在不同消痰散结方浓度干预下,24、48和72小时不同时间点的存活率;2.2流式细胞仪检测HGC-27细胞在不同消痰散结方浓度干预下的细胞凋亡情况。2.3 EdU试剂盒检测不同消痰散结方浓度干预HGC-27细胞增殖的影响。3.消痰散结方对lncrna-atb高表达胃癌细胞HGC-27转移的影响3.1 Transwell侵袭迁移实验:检测不同消痰散结方浓度对HGC-27细胞迁移和侵袭的影响。3.2细胞划痕实验:使用倒置显微镜观察不同消痰散结方浓度对HGC-27细胞划痕实验的影响。4.消痰散结方对胃癌HGC-27细胞lncrna-atb等相关基因和EMT相关蛋白表达的影响4.1 RT-PCR技术检测分析不同浓度消痰散结方汤干预后lncrnaatb、miR-200a和EMT相关基因的表达。4.2 Western blot检测EMT相关蛋白的表达。5.消痰散结方对胃癌HGC-27移植瘤的抑瘤效果利用胃癌HGC-27细胞和裸鼠构建胃癌HGC-27移植瘤模型,并分为4个实验组:消痰散结方高、低剂量组,5-FU组,模型组,称量小鼠体重和肿瘤大小,利用HE和免疫组化观察消痰散结方在体内对肿瘤增殖基因和EMT相关蛋白表达的影响。结果:1.通过对5种胃癌细胞lncrna-atb和EMT相关蛋白表达水平及其消痰散结方的敏感性结果分析发现:HGC-27细胞系的lncrna-atb和EMT相关的基因蛋白表达水平较高,且消痰散结方对其敏感性较高,因此,胃癌HGC-27细胞系被确定为适合用于药物干预胃癌lncrna-atb的细胞模型的研究。2.通过CCK8、EdU检测分析发现:消痰散结方对胃癌HGC-27细胞增殖的抑制具有剂量依赖性,随着消痰散结方浓度的增加抑制率越高。流式细胞凋亡分析发现:消痰散结方随着剂量的增加能够促进胃癌细胞HGC-27的凋亡。3.Transwell实验和划痕实验结果发现:消痰散结方能够抑制胃癌HGC-27细胞的侵袭和迁移,并随着浓度的升高抑制效果越好。4.RT-PCR和Western blot结果发现:消痰散结方可以降低lncrna-atb、Vimentin、N-cadherin的基因和蛋白的表达,并以剂量依赖方式增加E-cadherin和miR-200a的表达。5.通过裸鼠移植瘤实验结果发现:消痰散结方在体内可以抑制移植肿瘤的生长,并且下调Ki67和EMT信号通路相关蛋白的表达。结论:体内外研究发现:消痰散结方能够下调lncrna-atb的表达,增强miR-200a的表达,从而减少ZEB-1及EMT相关蛋白表达来抑制胃癌细胞的增殖和转移。消痰散结方可以用于高表达lncrna-atb胃癌的临床治疗,这将为消痰散结方的临床应用提供一定的实验和理论依据。

关键词：胃癌 lncrna-atb 消痰散结方上皮间质转化增殖转移

下调lncrna-atb抑制骨肉瘤发生发展分子机制研究

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河北医科大学学报 2023年第6期44卷 686-691页

作者：邱明宪河北省衡水市第四人民医院骨科河北衡水053000

目的旨在分析lncrna-atb对骨肉瘤Saos-2细胞增殖、周期S期聚集、迁移及凋亡的调控作用,并探究其对皮下骨肉瘤生长及细胞增殖影响。方法实时定量-聚合酶链式反应(real time quantity polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测lncrna-atb... 详细信息

目的旨在分析lncrna-atb对骨肉瘤Saos-2细胞增殖、周期S期聚集、迁移及凋亡的调控作用,并探究其对皮下骨肉瘤生长及细胞增殖影响。方法实时定量-聚合酶链式反应(real time quantity polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测lncrna-atb在骨肉瘤组织HOS,Saos-2和U2OS细胞株及正常人成骨细胞株NHOst中的表达;CCK8、流式细胞法、Tunel及Transwell检测lncrna-atb对Saos-2细胞生物学功能调控能力;Ki67检测细胞增殖情况;利用Saos-2细胞构建骨肉瘤裸鼠移植瘤模型,检测裸鼠模型中皮下瘤体重量变化。结果28例患者组织中,骨肉瘤组织中的lncrna-atb表达水平高于癌旁正常组织(Plncrna-atb在HOS,Saos-2和U2OS中均升高,其中Saos-2中表达最高(Patb组Saos-2细胞的OD值高于NC组,atb组Saos-2周期S期长于NC组(Patb组Saos-2细胞OD值低于siNC组;siatb组Saos-2周期S期短于siNC组(Patb组能抑制Saos-2细胞凋亡率,而siatb组后则相反增加Saos-2细胞的凋亡率,atb组的细胞穿孔数多于NC组,siatb组少于siNC组(Patb组皮下肿瘤重量重于NC组(Patb组皮下肿瘤重量轻于siNC组(Patb组下骨肉瘤细胞核中阳性染色细胞百分比多于NC组,siatb组下骨肉瘤细胞核中阳性染色细胞百分比少于siNC组(Plncrna-atb可以促进骨肉瘤的发生发展及恶性生物学功能,而利用RNA干扰技术,干扰lncrna-atb抑制骨肉瘤的病理进程。

关键词：骨肉瘤 lncrna-atb siRNA Saos-2

lncrna-atb介导的上皮间质转化在胃癌进展中的机制研究

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实用肿瘤学杂志 2022年第3期36卷 208-213页

作者：智亮辉刘伟李伟甄四虎焦喜林中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院普外一科石家庄050082

目的探讨lncrna-atb介导的上皮间质转化在胃癌进展中的可能机制。方法采用生物信息学分析预测lncrna-atb的下游结合分子并采用荧光素酶报告基因验证。收集联勤保障部队第九八〇医院2017年1月—2019年12月胃癌及癌旁组织标本56例,采用qRT... 详细信息

目的探讨lncrna-atb介导的上皮间质转化在胃癌进展中的可能机制。方法采用生物信息学分析预测lncrna-atb的下游结合分子并采用荧光素酶报告基因验证。收集联勤保障部队第九八〇医院2017年1月—2019年12月胃癌及癌旁组织标本56例,采用qRT-PCR分析lncrna-atb及下游结合分子在胃癌及癌旁组织中的表达水平及二者之间的相关性,并分析二者与胃癌临床病理特征的相关性;在敲降lncrna-atb前后的胃癌BGC-823细胞系中,采用qRT-PCR及Western blot实验验证miR-200a、β-catenin、vimentin、E-cadherin表达水平的变化。结果生物信息学分析发现lncrna-atb与miR-200a有直接结合位点,miR-200a与β-catenin能直接结合并采用荧光素酶报告基因验证。lncrna-atb在胃癌组织中较癌旁组织中明显高表达(Plncrna-atb与miR-200a表达水平呈负相关(r=-0.317,P=0.017)。lncrna-atb在Ⅲ、Ⅳ期胃癌较Ⅰ、Ⅱ期表达水平明显升高,淋巴结转移阳性组、脉管内癌栓阳性及肿瘤低分化组lncrna-atb表达水平更高,差异有统计学意义(Plncrna-atb后β-catenin和vimentin表达降低、E-cadherin表达升高,差异有统计学意义(Plncrna-atb通过与miR-200a结合,影响β-catenin的表达促进上皮间质转化进程从而影响胃癌进展。

关键词：胃癌 lncrna-atb 上皮间质转化

lncrna-atb在高糖诱导的人腹膜间皮细胞表型转换及增殖中的作用

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解放军医学杂志 2017年第11期42卷 985-991页

作者：车明文龚翔张小金魏达锋王晓文王汉民巨立中解放军273医院内三科武警克州支队卫生队空军广州天河干休所空军95269部队53分队保健科空军军医大学西京医院肾脏内科

目的探讨长链非编码RNA-atb(Lnc RNA-atb)在高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)表型转换及增殖中的作用。方法将HPMCs分为对照组、甘露醇组和高糖组3组。对照组不予任何处理;高糖组和甘露醇组分别采用50mmol/L D型葡萄糖和同等渗透压... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA-atb(Lnc RNA-atb)在高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)表型转换及增殖中的作用。方法将HPMCs分为对照组、甘露醇组和高糖组3组。对照组不予任何处理;高糖组和甘露醇组分别采用50mmol/L D型葡萄糖和同等渗透压的甘露醇刺激72h。采用Real-time PCR检测各组Lnc RNA-atb、E-钙黏素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子4(CDK4)、蛋白质p27(p27)及增殖细胞核抗原(PCNA)m RNA的表达,Western blotting检测各组E-cadherin、α-SMA、CTGF、Cyclin D1、CDK4、p27及PCNA蛋白的表达,并采用流式细胞仪检测细胞周期。利用慢病毒转染技术,将Lenti-Lnc RNA-atb和sh RNA-Lnc RNA-atb导入HPMCs中,分别上调及下调Lnc RNA-atb的表达,采用Real-time PCR检测E-cadherin、α-SMA及CTGF m RNA的表达,Western blotting检测E-cadherin、α-SMA、CTGF蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期。结果 Real-time PCR、Western blotting及流式细胞仪检测结果显示,高糖刺激后,Lnc RNA-atb、α-SMA、CTGF、Cyclin D1、CDK4及PCNA表达增加,E-cadherin及p27表达减少(Patb表达可促进细胞表型转换及增殖,下调Lnc RNA-atb表达可抑制细胞表型转换及增殖。结论高糖刺激可通过上调Lnc RNA-atb的表达促进人腹膜间皮细胞表型转换及增殖。

关键词：细胞表型转换 lncrna-atb 人腹膜间皮细胞

外周血lncrna-atb和lncrna-CCAT1检测对非小细胞肺癌诊断价值

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中华肿瘤防治杂志 2020年第14期27卷 1157-1165页

作者：崔胜金楼爽郭伟权简诗慧韦唯吴云风刘欣桐兰希马雯贾兴旺南方医科大学深圳医院检验科广东深圳518101 广州华银医学检验中心有限公司临床实验室广东广州510663

目的大量研究表明,长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncrna)在体液中的异常表达可以作为非侵入性肿瘤标志物。然而,血浆中lncrna在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)诊断中的临床意义尚不明确。因此,本研究检测转化生... 详细信息

目的大量研究表明,长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncrna)在体液中的异常表达可以作为非侵入性肿瘤标志物。然而,血浆中lncrna在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)诊断中的临床意义尚不明确。因此,本研究检测转化生长因子-β(lncrna-atb)和结肠癌相关转录物1(lncrna-CCAT1)在NSCLC患者血浆中表达水平,并评估了这2种lncrna在NSCLC中的诊断价值。方法回顾性分析2016-06-05-2017-12-25南方医科大学深圳医院招募的50例NSCLC患者、50例良性肺部疾病患者(支气管扩张12例,间质性肺炎25例,肺囊肿13例)及50名健康对照受试者资料,使用实时荧光定量PCR(real-time PCR,qRT-PCR)技术检测lncrna-atb和lncrna-CCAT 1在组织和血浆中的表达水平,分析其在组织和血浆中的表达差异及相关性。同时使用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评估lncrna-atb、lncrna-CCAT1及癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)在NSCLC中的诊断能力。结果 NSCLC患者组lncrna-atb在癌旁组织的表达量为1.290±0.464,在肿瘤组织的表达量为2.887±0.644,差异有统计学意义,t=-15.629,Plncrna-CCAT1在癌旁组织的表达量为1.129±0.051,在肿瘤组织的表达量为2.266±0.077,差异有统计学意义,t=-12.269,Plncrna-atb和lncrna-CCAT1在肿瘤组织表达量均升高。lncrna-atb在健康对照组、良性肺部疾病组及NSCLC组的血浆中表达量分别为1.387±0.103、1.434±0.607和2.267±0.103;lncrna-CCAT1分别为1.250±0.507、1.283±0.455和1.863±0.697。与健康对照组相比,lncrna-atb (Z=-0.979,P=0.328)和lncrna-CCAT 1(Z=-0.555,P=0.579)在良性肺部疾病患者组的表达量均基本一致,差异均无统计学意义;而在NSCLC组中lncrna-atb(Z=-5.391,Plncrna-CCAT1(Z=-5.453,Plncrna-atb和lncrna-CCAT1在肿瘤组织与血浆中表达趋势相同,且高度相关,γ值分别为0.743和0.731。与手术前相比,NSCLC患者手术后血浆中lncrna-atb (1.226±0.724,Z=-5.768,Plncrna-CCAT 1(1.027±0.535,Z=-6.086,Plncrna-atb的AUCROC、灵敏度和特异度分别为0.836、82%和78%;lncrna-CCAT1的AUCROC、灵敏度和特异度分别为0.816、78%和74%;CEA的为0.711、76%和58%。这2种lncrna的各项诊断性能均高于CEA。当2种lncrna联合检测时,AUCROC、灵敏度和特异度分别为0.858、84%和80%,综合诊断能力得到提高。而当3种指标联合检测时,AUCROC、灵敏度和特异度分别为0.914、90%和86%,与2种lncrna联合检测相比,诊断性能差异无统计学意义。结论 lncrna-atb和lncrna-CCAT1可用作NSCLC诊断的候选标志物,这2种lncrna联合检测对NSCLC诊断更有效。

关键词： NSCLC lncrna-atb lncrna-CCAT1 CEA 生物标志物诊断

lncrna-atb在胆汁淤积性肝病患者血清中的表达及意义

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世界华人消化杂志 2019年第21期27卷 1320-1325页

作者：张向华李进英高金生四川南充仪陇县人民医院消化内五科四川省南充市637600 山东青岛市中心医院放疗科山东省青岛市266042 四川南充仪陇县人民医院肿瘤科四川省南充市637600

背景胆汁淤积性肝病(cholestatic liver disease,CSLD)是指能够引起胆汁淤积的多种肝病的集合和统称,其病因复杂,发病机制有待深入阐明,尚缺乏足够有效的治疗手段.近十余年来对CSLD的多个方面有了较多新认识,为其精准诊治提供了更多层... 详细信息

背景胆汁淤积性肝病(cholestatic liver disease,CSLD)是指能够引起胆汁淤积的多种肝病的集合和统称,其病因复杂,发病机制有待深入阐明,尚缺乏足够有效的治疗手段.近十余年来对CSLD的多个方面有了较多新认识,为其精准诊治提供了更多层面和更为有效的手段,同时许多问题仍然悬而未决,亟需继续深入研究.目的观察CSLD患者与正常人群中血清长链非编码RNA(long non coding RNA,lncrna)-atb水平的差异;探索CSLD患者血清lncrna-atb的变化与疾病病情的变化及预后的相关性.方法收集符合CSLD诊断标准的不同病因初诊肝病患者75例,同时收集健康对照者30例,采用qRT-PCR法检测lncrna-atb在上述研究对象血清标本中的表达;在分析比较正常对照与胆汁淤积、胆汁淤积不同程度各组间lncrna-atb水平差异性,采用线性相关分析lncrna-atb的变化与临床生化指标的相关性;采用受试者特征曲线分析lncrna-atb的变化对CSLD病情判断的临床意义.结果与健康对照组比较,lncrna-atb在CSLD患者中血清中明显增高,差异具有统计学意义(Plncrna-atb的表达水平在不同病因导致的CSLD及不同病程的胆汁淤积患者之间的表达无明显差异(P>0.05).血清lncrna-atb随着胆汁淤积程度的加重而下降,差异具有统计学意义(Plncrnaatb与TBA的量呈负相关关系(r=-0.627,Plncrna-atb诊断CSLD的曲线下面积为0.856,敏感性为81.42%,特异性则为73.45%(95%CI:0.809-0.904,Plncrna-atb在肝内CSLD患者血清中的含量明显升高,随着胆汁淤积程度的加重而下降,lncrna-atb的表达水平有望成为判断CSLD患者病情及预后的生物标志物.

关键词： lncrna-atb 胆汁淤积性肝病临床意义

靶向抑制lncrna-atb对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响

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中国老年学杂志 2021年第6期41卷 1274-1277页

作者：吕静刘超李可佳周晓慧薛晶王明娟承德医学院基础医学院河北承德067000 承德医学院附属医院心脏内科河北承德067000 承德医学院形态学实验中心河北承德067000

目的观察靶向抑制长链非编码RNA(lncrna)-atb对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法构建靶向干扰lncrna-atb的Si-RNA,利用脂质体法转染Ishikawa、HEC-1-A细胞,qRT-PCR检测lncrna-atb mRNA的表达,噻唑蓝(MTT)法检测细... 详细信息

目的观察靶向抑制长链非编码RNA(lncrna)-atb对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法构建靶向干扰lncrna-atb的Si-RNA,利用脂质体法转染Ishikawa、HEC-1-A细胞,qRT-PCR检测lncrna-atb mRNA的表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡水平,Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力。结果qRT-PCR结果显示,ISK-siRNA组、HEC-siRNA组中lncrna-atb mRNA的表达水平显著低于ISK-NC组、HEC-NC组(Plncrna-atb可以调控促进子宫内膜癌细胞增殖、抑制凋亡并增强其迁移侵袭能力,因此,lncrna-atb有可能成为子宫内膜癌早期诊断及治疗的新靶点。

关键词：子宫内膜癌 lncrna-atb 增殖凋亡迁移侵袭

体外滋养细胞与内皮细胞3D共培养模型的建立及lncrna-atb/miR-651-3p/YY1通路对该模型的影响

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体外滋养细胞与内皮细胞3D共培养模型的建立及lncRNA-ATB/miR-651...

作者：尹杨雪四川大学

学位级别：硕士

目的:子痫前期是一种妊娠20周以后发生的妊娠期特有疾病,尤其是重度子痫前期严重威胁母婴健康。子痫前期是一种多因素致病的综合征,众多学者对其发病机制进行了大量研究但仍不清楚。目前为止,子宫螺旋动脉重铸不足是公认的子痫前期发病... 详细信息

目的:子痫前期是一种妊娠20周以后发生的妊娠期特有疾病,尤其是重度子痫前期严重威胁母婴健康。子痫前期是一种多因素致病的综合征,众多学者对其发病机制进行了大量研究但仍不清楚。目前为止,子宫螺旋动脉重铸不足是公认的子痫前期发病的初始阶段,滋养细胞与母体内皮细胞的相互作用对子宫螺旋动脉重铸具有重要意义。本课题组的前期研究已证实,长链非编码RNA-atb(lnc RNA-atb)在重度子痫前期患者胎盘组织中表达下调并且低表达的lnc RNA-atb可显著抑制滋养细胞的增殖、侵袭、迁移、成管等多种生物学行为,然而lnc RNA-atb具体的下游通路尚不清楚。大量研究表明lnc RNA通过竞争性结合micro RNA(miRNA)来削减miRNA对下游靶基因的降解。本研究试图通过构建滋养细胞与内皮细胞的3D共培养模型模拟体内环境,探究lnc RNA-atb能否通过负向调控miR-651-3p改变YY1表达对3D共培养模型产生影响,同时验证其对滋养细胞的迁移及侵袭能力的作用,以期阐明该通路参与子痫前期的发病机制。材料和方法:1.采用体外3D共培养模型模拟体内生理环境,待绿色荧光染色的脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC)成管后,加入红色荧光染色的人绒毛膜滋养层细胞株HTR8/SVneo,观察HTR8/SVneo替换HUVEC细胞的情况。在HTR8/SVneo细胞内敲低或过表达lnc RNA-atb后,采用3D共培养模型、划痕和Transwell实验检测HTR8/SVneo细胞替换HUVEC细胞及其迁移和侵袭的能力。2.通过数据库预测到能与lnc RNA-atb结合的miRNAs,在HTR8/SVneo中过表达lnc RNA-atb后选取差异表达最大的miR-651-3p作为候选基因,并通过双荧光素酶报告基因实验验证lnc RNA-atb与miR-651-3p的直接结合位点。q RT-PCR检测过表达或敲低lnc RNA-atb对miR-651-3p的影响。选取2019年10月至2020年8月期间在四川大学华西第二医院剖宫产分娩的孕妇作为研究对象,其中对照组26例(均为正常足月妊娠),重度子痫前期24例。采用q RT-PCR检测两组孕妇胎盘组织中miR-651-3p和lnc RNA-atb的表达水平,Pearson相关性分析miR-651-3p和lnc RNA-atb的线性关系。HTR8/SVneo滋养细胞株过表达或敲低miR-651-3p后,观察miR-651-3p对3D共培养模型、HTR8/SVneo细胞迁移和侵袭能力的影响。通过共转染的方法完成功能挽救实验,进一步证明lnc RNA-atb通过负向调控miR-651-3p影响3D共培养模型、HTR8/SVneo细胞迁移及侵袭能力。3.通过数据库预测到能与miR-651-3p结合的靶基因YY1,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-651-3p与YY1的直接结合位点。q RT-PCR、Western blot实验验证YY1表达量是否受miR-651-3p含量变化的影响。检测重度子痫前期患者胎盘中YY1 m RNA和蛋白的表达,并采用Spearman相关性分析YY1和miR-651-3p的线性关系。共转染YY1和miR-651-3p后,检测二者同时作用对3D共培养模型、HTR8/SVneo细胞迁移及侵袭能力的影响。通过Western blot实验,进一步验证lnc RNA-atb通过靶向miR-651-3p来影响YY1的表达。结果:1.在共培养模型中,HTR8/SVneo细胞逐渐替换HUVEC细胞。敲低lnc RNA-atb降低了HTR8/SVneo细胞替换内皮细胞、迁移及侵袭的能力。2.MiR-651-3p是lnc RNA-atb的直接靶点。过表达lnc RNA-atb导致miR-651-3p表达量降低,而敲低lnc RNA-atb导致miR-651-3p表达量升高。MiR-651-3p在重度子痫前期胎盘组织中较对照组高表达,并与lnc RNA-atb的表达呈负相关。敲低lnc RNA-atb致HTR8/SVneo细胞替换HUVEC细胞、迁移及侵袭能力下降,而同时敲低miR-651-3p则抑制该下降趋势。3.MiR-651-3p直接靶向YY1的3’端非翻译区。YY1 m RNA和蛋白水平受miR-651-3p的负向调控。重度子痫前期患者胎盘中YY1 m RNA和蛋白水平均较对照组降低,并与miR-651-3p呈负相关。敲低YY1使HTR8/SVneo细胞替换HUVEC细胞、迁移及侵袭能力下降,而同时敲低miR-651-3p则抑制该下降趋势。过表达lnc RNA-atb使YY1蛋白量升高,同时过表达miR-651-3p则抑制该升高趋势;敲低lnc RNA-atb使YY1蛋白量下降,同时敲低miR-651-3p则抑制该下

关键词：子痫前期螺旋动脉重铸滋养细胞脐静脉内皮细胞 lncrna-atb MiR-651-3p YY1